Efek Ekstrak Etanol Biji Petai (Parkia speciosa Hassk.) Sebagai Antimutagenik Pada Mencit Jantan (Mus musculus) Yang Diinduksi Dengan Siklofosfamid

Lampiran 3. Gambar Tumbuhan Petai

a. Pohon Petai

c. Penampang Melintang satu papan petai

e. Simplisia Biji Petai

Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji Petai Perbesaran 10x

Keterangan: 1. Parenkim

2. Amylum (Butir Pati) 3. Fragmen Perisperm

4. Berkas Pembuluh (Xylem)

1

4 2

Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Biji Petai 1. Perhitungan Penetapan Kadar Air

% Kadar air =

(g) sampel berat (ml) air volume x 100%

a. Berat sampel = 5,010 g Volume air = 0,3 ml % Kadar air =

g 5,010

ml 0,3

x 100% = 5,98%

b. Berat sampel = 5,013 g Volume air = 0,275 ml

% Kadar air =

g 5,013

ml 0,275

x 100% = 5,48%

c. Berat sampel = 5,020 g Volume air = 0,235 ml

% Kadar air =

g 5,020

ml 0,235

x 100% = 4,68%

% Kadar air rata-rata =

3

4,68% 5,48%

5,98%+ +

= 5,38%

2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

% Kadar sari larut dalam air = 100%

20 100 x (g) simplisia Berat (g) sari Berat

a. Berat sampel = 5,0550 g Berat sari = 0,1900 g

Lampiran 5. (Lanjutan)

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 18,79% 20 100 x g 5,055 g 0,19 ₌

b. Berat sampel = 5,0600 g Berat sari = 0,2100 g

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 20,75% 20 100 x g 5,060 g 0,21 ₌

c. Berat sampel = 5,0460 g Berat sari = 0,2520 g

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 24,9% 20 100 x g 5,0460 g 0,2520 ₌

% Kadar sari larut dalam air rata-rata =

3

24,90% 20,75%

18,97%+ +

= 21,48%

3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 20 100 x (g) simplisia Berat (g) sari Berat

a. Berat sampel = 5,015 g Berat sari = 0,088 g

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 8,77% 20 100 x g 5,015 g 0,088 ₌

b. Berat sampel = 5,011 g Berat sari = 0,095 g Lampiran 5. (Lanjutan)

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 9,47% 20 100 x g 5,011 0,095 ₌ c. Berat sampel = 5,009 g

Berat sari = 0,128 g

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 12,77% 20 100 x g 5,009 g 0,128 ₌

% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =

3

12,77% %

9,47

8,77%+ +

= 10,33% 4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total

% Kadar abu total = x 100%

(g) simplisia Berat (g) abu Berat

a. Berat sampel = 2,0018 g Berat abu = 0,018 g

% Kadar abu total = x 100% 0,89% 0018 , 2 018 , 0 ₌ g g

b. Berat sampel = 2,0015 g Berat abu = 0,019 g

% Kadar abu total = x 100% 0,94% 0015 , 2 019 , 0 ₌ g g

c. Berat sampel = 2,0016 g Berat abu = 0,020 g

% Kadar abu total = x 100% 0,99% 0187 , 2 1876 , 0 ₌ g g

% Kadar abu total rata-rata = 0,94% 3

0,99% 0,94%

0,89%+ + ₌

5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% (g) simplisia Berat (g) abu Berat

a. Berat sampel = 2,0015 g Berat abu = 0,013 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0015 g 013 , 0 = 0,64% b. Berat sampel = 2,0018 g

Berat abu = 0,016 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0018 g 016 , 0 = 0,79% c. Berat sampel = 2,0016 g

Berat abu = 0,016 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0016 g 016 , 0 = 0,79% Lampiran 5. (Lanjutan)

=

3

0,79% 0,79%

0,64%+ +

= 0,74 %

Lampiran 6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Etanol Biji Petai

% Kadar air = (g) ekstrak berat (ml) air volume x 100%

a. Berat sampel = 5,015 g Volume air = 0,25 ml % Kadar air =

g 5,015

ml 0,25

x 100% = 4,98%

b. Berat sampel = 5,018 g Volume air = 0,28 ml

% Kadar air =

g 5,018

ml 0,28

x 100% = 4,78%

c. Berat sampel = 5,013 g Volume air = 0,24 ml

% Kadar air =

g 5,013

ml 0,24

x 100% = 4,58%

% Kadar air rata-rata =

3

4,58% 4,78%

4,98%+ +

= 4,98%

2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

% Kadar sari larut dalam air = 100%

20 100 x (g) ekstrak Berat (g) sari Berat

a. Berat sampel = 5,0240 g Berat sari = 0,2570 g Lampiran 6. (Lanjutan)

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 25,60% 20 100 x 5,0240g g 0,2570 =

b. Berat sampel = 5,0239 g Berat sari = 0,2572 g

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 25,60% 20 100 x g 5,0239 g 0,2572 = c. Berat sampel = 5,0242 g

Berat sari = 0,2577 g

% Kadar sari larut dalam air = x 100% 25,63% 20 100 x g 5,0242 g 0,2577 ₌

% Kadar sari larut dalam air rata-rata =

3

25,63% 25,60%

25,60%+ +

= 25,61%

3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 20 100 x (g) ekstrak Berat (g) sari Berat

a. Berat sampel = 5,0012 g Berat sari = 0,3418 g

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 34,24% 20 100 x g 5,0012 g 0,3418 ₌

b. Berat sampel = 5,0020 g Berat sari = 0,3414 g

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 34,23% 20 100 x g 5,0020 0,3414 ₌

c. Berat sampel = 5,0018 g Lampiran 6. (Lanjutan)

Berat sari = 0,3420 g

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 34,25% 20 100 x 5,0018g g 0,3420 =

% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =

3

34,25% %

34,23

34,24%+ +

= 34,25% 4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total

% Kadar abu total = x 100% (g) ekstrak Berat (g) abu Berat

a. Berat sampel = 2,0022 g Berat abu = 0,017 g

% Kadar abu total = x 100% 0,85% 0022 , 2 017 , 0 = g g

b. Berat sampel = 2,0023 g Berat abu = 0,016 g

% Kadar abu total = x 100% 0,80% 0023 , 2 016 , 0 ₌ g g

c. Berat sampel = 2,0026 g Berat abu = 0,019 g

% Kadar abu total = x 100% 0,95% 0026 , 2 019 , 0 ₌ g g

% Kadar abu total rata-rata = 0,87% 3

0,95% 0,80%

0,85%+ + ₌

Lampiran 6. (Lanjutan)

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% (g) ekstrak Berat (g) abu Berat

a. Berat sampel = 2,0022 g Berat abu = 0,012 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0022 g 012 , 0 = 0,60% b. Berat sampel = 2,0023 g

Berat abu = 0,013 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0023 g 013 , 0 = 0,64% c. Berat sampel = 2,0026 g

Berat abu = 0,012 g

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% g 2,0026 g 012 , 0 = 0,60% % Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata =

3

0,60% 0,64%

0,60%+ +

= 0,62 %

Lampiran 7. Bagan Alur Penelitian

Dipisahkan dari kulit luarnya Dibersihkan dari pengotor

Dicuci sampai bersih, ditiriskan dan ditimbang

Dikeringkan pada lemari pengering

Dihaluskan Ditimbang

Lampiran 7. (Lanjutan)

Berat kering 954,9 g

946,08 g serbuk simplisia Berat basah 3,8 kg

Karakterisasi simplisia a. Pemeriksaan makroskopik b. Pemeriksaan mikroskopik c. Penetapan kadar air

d. Penetapan kadar sari larut dalam air e. Penetapan kadar sari larut dalam etanol f. Penetapan kadar abu total

g. Penetapan kadar abu tidak larut asam

Skrining fitokimia:

a. Pemeriksaan alkaloida b. Pemeriksaan flavonoida c. Pemeriksaan tanin d. Pemeriksaan saponin e. Pemeriksaan

steroida/triterpenoida f. Pemeriksaan glikosida

Dimaserasi menggunakan etanol 96% yang telah didestilasi

Maserat Ampas

Ekstrak kental 123,1 g

Diuapkan menggunakan rotavapor

Dikentalkan dengan menggunakan waterbath

Hasil + Hasil

(alkaloid, flavonoid, saponin, steroid/triterpenoid,

glikosida)

Lampiran 8. Alat-alat

a. Velocity 18R refrigerated centrifuge

Lampiran 8. (Lanjutan) b. Pinset dan gunting bedah

Lampiran 9. Hewan percobaan a. Mencit Jantan Putih

Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis

Contoh perhitungan dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang diberikan secara oral pada mencit

- Dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang dibuat adalah 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 800 mg/kg bb

a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etanol biji petai :

Timbang 200 mg, 400 mg dan 800 mg ekstrak etanol biji petai (EEBP), masing-masing dilarutkan dalam suspensi CMC

b. Berapa volume suspensi ekstrak etanol biji petai yang akan diberikan secara oral pada mencit ? Larutan induk baku (LIB) EEBP 5 g/100 ml = 50 mg/ml dan misal BB Mencit = 28 g

Jumlah EEBP dosis 200 mg/kg bb = 28 g 1000g

x 200 mg = 5,6 mg/mencit LIB EEBP yang dipipet 1 ml ad 5 ml = 50 mg/5 ml = 10 mg/ml

Volume larutan yang diberi = 5,6 mg 10 mg

x 1 ml = 0,56 ml Jumlah EEBP dosis 400 mg/kg bb = 28 g

1000g

x 400 mg = 11,2 mg/mencit LIB EEBP yang dipipet 2 ml ad 5 ml = 100 mg/5 ml = 20 mg/ml

Volume larutan yang diberi = 11,2 mg 20 mg

x 1 ml = 0,56 ml Jumlah EEBP dosis 800 mg/kg bb = 28 g

1000 g

x 800 mg = 22,4 mg LIB EEBP yang dipipet 4 ml ad 5 ml = 200 mg/5 ml = 40 mgl/ml Volume larutan yang diberi = 22,4 mg

40 mg

Lampiran 10. (Lanjutan)

1. Volume maksimal larutan sediaan uji yang diberikan pada berbagai hewan Jenis

hewan uji

Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian

i.v. i.m. i.p. s.c. p.o.

Mencit

(20-30 g) 0,5 0,005 1,0 0,5-1,0 1,0

Tikus

(100 g) 1,0 0,1 2,5 2,5 5,0

Hamster

(50 g) - 0,1 1-2 2,5 2,5

Marmot

(250 g) - 0,25 2-5 5,0 10,0

Merpati

(300 g) 2,0 0,5 2,0 2,0 10,0

Kelinci

(2,5 kg) 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0

Kucing

(3 kg) 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0

Anjing

(5 kg) 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0

(Suhardjono, 1995) 2. Perbandingan luas permukaan tubuh hewan percobaan untuk konversi dosis

Mencit 20 g Tikus 200 g Marmot 400 g Kelinci 1,5 kg Kucing 2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit

20 g 1,0 7,01 12,29 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9

Tikus

200 g 0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,2 17,8 56,0

Marmot

400 g 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5

Kelinci

1,5 kg 0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,5 14,2

Kucing

2 kg 0,03 0,23 0,42 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0

Kera

4 kg 0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1

Anjing

12 kg 0,008 0,06 0,10 0,022 0,24 0,52 1,0 3,1

Manusia

70 kg 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,013 0,16 0,32 1,0

Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis Penginduksi (Siklofosfamid) Dosis 50 mg/kg BB = 3500 mg/70 kg BB

= 3500 mg x 0,0026 = 9,1 mg/20 g (mencit) = 9,1 mg/20 g x 28 g = 12,74 mg/mencit Konsentrasi Siklofosfamid 2 % = 20 mg/ml Volume (ml) = 12,74 mg/20 mg/ml x 1 ml

Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Menggunakan SPSS 16 a. Uji Deskriptif

b. Uji ANOVA Satu Arah (One Way ANOVA)

ANOVA

Jumlahmikronukleus

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 49442.240 4 12360.560 995.214 .000

Within Groups 248.400 20 12.420

Total 49690.640 24

Descriptives

Jumlahmikronukleus

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

Kontrol

normal 5 32.800 2.3875 1.0677 29.836 35.764 30.0 36.0

Kontrol

positif 5 154.000 3.0822 1.3784 150.173 157.827 150.0 158.0 EEBP 200

mg/kg bb 5 96.800 1.3038 .5831 95.181 98.419 95.0 98.0

EEBP 400

mg/kg bb 5 68.000 5.0498 2.2583 61.730 74.270 61.0 74.0 EEBP 800

mg/kg bb 5 37.800 4.4385 1.9849 32.289 43.311 32.0 43.0

c. Uji Post Hoc Tukey Multiple Comparisons Jumlahmikronukleus Tukey HSD (I) perlaku

an (J) perlakuan

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound Kontrol Normal

Kontrol Positif -121.2000* 2.2289 .000 -127.870 -114.530

EEBP 200 mg/kg BB -64.0000* 2.2289 .000 -70.670 -57.330

EEBP 400 mg/kg BB -35.2000* 2.2289 .000 -41.870 -28.530

EEBP 800 mg/kg BB -5.0000 2.2289 .205 -11.670 1.670

Kontrol Positif

Kontrol Normal 121.2000* 2.2289 .000 114.530 127.870

EEBP 200 mg/kg BB 57.2000* 2.2289 .000 50.530 63.870

EEBP 400 mg/kg BB 86.0000* 2.2289 .000 79.330 92.670

EEBP 800 mg/kg BB 116.2000* 2.2289 .000 109.530 122.870

EEBP 200 mg/kg BB

Kontrol Normal 64.0000* 2.2289 .000 57.330 70.670

Kontrol Positif -57.2000* 2.2289 .000 -63.870 -50.530

EEBP 400 mg/kg BB 28.8000* 2.2289 .000 22.130 35.470

EEBP 800 mg/kg BB 59.0000* 2.2289 .000 52.330 65.670

EEBP 400 mg/kg BB

Kontrol Normal 35.2000* 2.2289 .000 28.530 41.870

Kontrol Positif -86.0000* 2.2289 .000 -92.670 -79.330

EEBP 200 mg/kg BB -28.8000* 2.2289 .000 -35.470 -22.130

EEBP 800 mg/kg BB 30.2000* 2.2289 .000 23.530 36.870

EEBP 800 mg/kg BB

Kontrol Normal 5.0000 2.2289 .205 -1.670 11.670

Kontrol Positif -116.2000* 2.2289 .000 -122.870 -109.530

EEBP 200 mg/kg BB -59.0000* 2.2289 .000 -65.670 -52.330

EEBP 400 mg/kg BB -30.2000* 2.2289 .000 -36.870 -23.530

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

d. Uji Homogeneous

Jumlahmikronukleus

Tukey HSD

Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3 4

Kontrol Normal 5 32.800

EEBP 800 mg/kg BB 5 37.800

EEBP 400 mg/kg BB 5 68.000

EEBP 200 mg/kg BB 5 96.800

Kontrol Positif 5 154.000

Sig. .205 1.000 1.000 1.000

DAFTAR PUSTAKA

Aisha, A.F.A., Abu, S.K.M., Alrokayan, S.A., Ismail, Z., Majid, A.M.S.A. (2012). Evaluation of Antiangiogenic and Antioxidant Properties of Parkia speciosa Hassk Extracts. Pak J Pharm Sci. 25(1): 7 - 14.

Amelia, G. (2006). Potensi rumput mutiara (Hedyotis corimbosa Lam.) sebagai antioksidan alami. Skripsi. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.

Anonim. (1996). Health Effects Test Guidelines OPPTS 870.5395 Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test. United States Environmental Protection Agency. Halaman 6.

Anonim. (2004). Antioksidan, Resep Sehat dan Umur Panjang.

Anonim. (2006). Buku Cempaka Edisi XVII Bab II Tinjauan Pustaka Tanaman

Petai. Diacu dalam PDF Suhartadig

Anonim. (2014). Bebas Kanker itu Mudah. Jakarta: Agromedia Pustaka. Halaman 49 - 52.

Anonim. (2012). OECD Guideline For The Testing of Chemical Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test. Halaman 1. htpp://www.oecd-ilibrary.org/ docserver/download/fulltext/9747401e.pdf. Diakses tanggal 5 Juli 2012.

Anonim. (2010). Penyakit Degeneratif [terhubung berkala]. 2010].

Apriyantono. (1989). Analisis Pangan. Bogor: IPB Press. Halaman 42.

Arifin, A.S. (1986). Materi Pokok Kimia Organik Bahan Alam. Jakarta: Penerbit Karunia. Halaman 15.

Campanella, L., Martini, E., Rita, G., dan Tomasseti, M. (2006). Antioxidant Capacity of Dry Extracts Checked By Voltammetric Method. J Food Agric Environ 4: 135 - 144.

Cook, N.C., dan Samman, S. (1996). Flavonoid and Chemistry, Metabolism, Cardioprotective Effect, and Dietary Sources. Journal of Nutritional Biochemistry.7: 66 - 67.

Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 33, 28 - 29,47.

Ditjen POM. (1985). Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 51 - 54.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 969 - 971,1033.

Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Ditjen POM. Halaman 17, 31 - 32.

Durling, L. (2008). The Effect on Chromosomal Stability of some Dietary Constituents. Dissertation Uppsala: Uppsala Universited. Halaman 21, 23. Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.

Journal of Pharmaceutical Sciences. 55(3): 263.

Gaman, P.M., dan Sherrington, K.B. (1992). Ilmu Pangan: Pengantar Ilmu Pangan dan Nutrisi Mikrobiologi. Yogyakarta: UGM Press. Halaman 128. Ghaskadbi, S., Rajmachikar, S., Agate, C., Kapadi, A.H., dan Vaidya, V.G.

(1992). Modulation of Cyclophosphamide Mutagebicity by Vitamin C In Vivo Rodent Micronucleus Assay. Teratogenesis, Carcinog. Mutagen. 12: 11 - 13.

Gardner, E.J., dan Snustad, D.P. (1984). Principles of Genetics. Edisi ketujuh. New York: John Willey & Sons. Halaman 274, 298, 299.

Gupta, S.S. (1999). Prospect and Prospectives of Natural Plants Product in Medicine. Indian Journal of Pharmacology. Buletin Penelitian Tanaman Perkebunan. 31(3): 166 - 175.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Terjemahan Kosasih Padmawinata. Edisi II. Bandung: ITB Press. Halaman 147.

Heddle, J.A. (1973). A rapid In Vivo test for chromosomal damage. Mutation. Res. 18: 187 - 190.

Hernani dan Rahardjo. (2005). Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Jakarta: Penebar Swadaya. Halaman 1 - 3.

Ishaq, G.M., Shah, M.Y., dan Tanki, S.A. (2003). Cancer Chemoprevention Through Natural Antimutagenic Agents. JK-Practioner. 2(10): 101.

Jamaluddin, F., dan Mohamed, S. (1993). Hypoglycemic Effect of Extract of Petai Papan (Parkia speciosa, Hassk). Pertanika J. Trop. Agric. Sci. 16(3): 161-165.

Kamisah, Y., Othman, F., Qodriyah, M.S., dan Jaarin, K. (2013). Parkia speciosa Hassk.: A Potential Phytomedicine. Kuala Lumpur: Departemen Farmakologi dan Anatomi, Fakultas Obat. Halaman 1 - 6.

Krishna, G., dan Hayashi, M. (2000). In Vivo Rodent Micronucleus Assay: Protocol, Conduct and Data Interpretation. Mutation Res. 455: 155 - 166. Kumalaningsih, S. (2007). Antioksidan Alami. Surabaya: Trubus Agrisarana.

Halaman 69.

Macdonald, F., Ford, C.H.J., dan Casson, A.G. (2004). Molecular Biology of Cancer. Edisi kedua. London: Garland Science/BIOS Scientific Publishers. Halaman 1.

Orwa, C., Mutua, A., Kindt, R., Jamnadass, R., dan Simons, A. (2009). Agroforestree Database: a Tree Reference and Selection Guide Version 4.0. [diunduh 2012 Apr 12]. Tersedia pada:

Percival, M. (1998). Antioxidants. Clinical Nutrition Insight. 1(96): 1 - 4.

Postlethwait, J.H., dan Hopson, J.L. (2006). Modern Biology. New York: Holt, Rinehart and Winston. Halaman 225, 226, 321.

Prakasih, A. (2001). Antioxidant Activity Medallion Laboratoner Analitical Progress. Minnesota. 19(2): 1 - 2.

Purwadiwarsa, D.J., Subarnas, A., Hadiansyah C., dan Supriyatna (2000). Aktivitas Antimutagenik dan Antioksidan Daun Puspa (Schima wallichii Kort.). Cermin Dunia Kedokteran. 127(1): 18 - 20.

Rahman, N.N.N.A., Zhari, S., Sarker, M.Z.I., Ferdosh S., Yunus, M.A.C., dan Kadir, M.O.A. (2011). Profile of Parkia speciosa Hassk Metabolites Extracted With SFE Using FTIR- PCA Method. J Chin Chem Soc. 58(6): 1-9.

Ramu, K., Perry, C.S., Ahmed, T., Pakenham, G., dan Kehrer, J.P. (1996). Studies on the Basis For The Toxicity of Acrolein Mercapturates. Toxicol. Appl. Pharmacol. 140(2): 487 - 498.

Ruddon, R.W. (2007). Cancer Biology. Edisi keempat. New York: Oxford University Press Inc. Halaman 62, 82, 92, 493.

Saleh, J., dan Ahmad, K. (2010). Clastogenic Studies on Tandaha Dam Water in Asser. J. Black Sea/ Mediterranean Environment. [diakses 28 April

2011]16(1):33. Diambil dari: URL: HYPERLINK.

Salmon, S.E., dan Alan, C.S. (1998). Kemoterapi kanker. Dalam: Farmakologi

Dasar dan Klinik. Edisi keempat. Editor Bertram G. Katzung. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran ECG. Halaman 860 - 861, 865.

Santella, R.M. (2002). Mechanisms and Biological Markers of Carcinogenesis. Dalam buku Cancer Precursors epidemiology, detection, and prevention . Editor: Eduardo L. Franco and Thomas E. Rohan. New York: Springer-Verlag. Halaman 7.

Schmid, W. (1975). The Micronukleus Test. Mutation Res. 31: 9-15.

Shahrim, Z., Baharuddin, P.J.N.M., Yahya, N.A., Muhammad, H., Bakar, R.A., dan Ismail, Z. (2006). The In Vivo Rodent Micronucleus Assay of Kacip Fatimah (Labisia pumila) Extract. Tropical Biomedicine. 23(2): 214-219. Sofyan, R., Sumpena, Y., Lukita, M., dan Fitrisari, A. (2005). The Use of

Micronucleus Assay on Swiss-Webster Mice (Mus musculus) Bone Marrow for Mutagenicity Test of γ-Irradiation. Halaman 103 - 104.

Stansfield, W.D., Colome, J.S., dan Cano, R.J. (2003). Molecular and Cell Biology. New York: McGraw-Hill Companies Inc. Halaman 60 dan 63. Sudiana, I.K. (2008). Patobiologi Molekuler Kanker. Jakarta: Penerbit Salemba

Medika. Halaman 1, 52.

Suhardjono. (1995). Percobaan Hewan Laboratorium. Yogyakarta: Penerbit Gajah Mada. University Press. Halaman 207.

Sunanto, H. (1992). Budidaya Petai dan Aspek Ekonominya. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 9 - 14.

Sutanto. (2009). Awas 7 Penyakit Degeneratif. Yogyakarta: Paradigma Indonesia. Halaman 95.

Surh, Y.J. (2003). Cancer Chemoprevention With Dietary Phytochemicals. Seoul: Seoul National University. Halaman 768.

Suvachittanont, W., Iamsupanimit, K., Singhaveerasamorn, W., dan Rattanapanya, A. (1983). Preliminary Studies of Some Biological Compounds From Parkia speciosa seeds. Bangkok (TH): Funny Pr. Halaman 4055.

Suvachittanont, W., dan Peutpaiboon, A. (1992). Lectin from Parkia speciosa seeds. Phytochemistry. 31: 4065-4070.

Vimala, S. (1999). Medicinal Plants: Quality Herbal Products for Healthy Living. Dalam: Wikipedia 2007. Petai, Si Bau yang Berkhasiat Besar. Februari 2012.

Voight, R. (1994). Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Halaman 563-564.

Warianto, C. (2011). Mutasi. Surabaya: Universitas Airlangga. Halaman 1-2. World Health Organization. (1998). Quality Control Methods For Medicinal

Plant Materials. Hongkong: Printed in England. Halaman 36.

Yaza, N. (2004). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Pisang Mas (Musa paradisiaca sapientum L.). Skripsi. Palembang: Jurusan Kimia Fakultas MIPA UNSRI. Halaman 13, 27-28.

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan penelitan yaitu penyiapan sampel, pembuatan larutan pereaksi, skrining fitokimia, karakteristik simplisia, pembuatan ekstrak etanol biji petai, penyiapan hewan uji, pengujian efek antimutagenik pada mencit, dan pengolahan data. Data hasil penelitian dianalisis secara ANAVA (analisis variansi) dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 16.

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini telah dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara pada bulan Maret sampai Mei 2014.

3.2 Bahan-bahan 3.2.1 Sampel

Sampel yang digunakan adalah biji petai. 3.2.2 Pereaksi

Pereaksi yang digunakan antara lain siklofosfamid (NOVELL) dan bahan kimia berkualitas pro analisis seperti asam asetat anhidrat, asam klorida pekat, asam nitrat, asam sulfat pekat, besi (III) klorida, bismut nitrat, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, kloralhidrat, larutan giemsa, merkuri (II) klorida, metanol, natrium hidroksida, serbuk magnesium, serbuk seng, timbal (II) asetat, toluena, n-heksan dan alpha naftol, eter minyak tanah, air suling, etanol

96%, etil asetat, carboxy metyl cellulosa (CMC), minyak immersi, HCl 2 N, dan serum darah sapi.

3.3 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas laboratorium, aluminium foil, blender (Miyako), lemari pengering, oven listrik, neraca kasar (OHAUS), neraca listrik (Boeco), seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, desikator, stopwatch, mortir dan stamfer, objek glass, rotary evaporator (Heidolph VV-300), neraca hewan (Presica), spuit ukuran 1 ml (Terumo), oral sonde, alat bedah (wells spencer), mikroskop (Boeco), sentrifugator (Velocity 18R), politube dan mikrotube, kamera digital MDCE-5A, mistar, spidol dan papan fibrasi mencit.

3.4 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah mencit jantan (Mus musculus) dengan berat 25 - 35 gram berumur 2 - 3 bulan yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara (USU). Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara terlebih dahulu selama kurang lebih dua minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanannya.

3.5 Pembuatan Pereaksi 3.5.1 Pereaksi Mayer

Sebanyak 5 g kalium iodida dalam 10 ml air suling kemudian ditambahkan larutan 1,36 g merkuri (II) klorida dalam 60 ml air suling. Larutan dikocok dan ditambahkan air suling hingga 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.5.2 Pereaksi Dragendorff

Sebanyak 8 g bismut (III) nitrat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam 20 ml asam nitrat pekat, pada wadah lain ditimbang sebanyak 27,2 g kalium iodida lalu dilarutkan dalam 50 ml air suling, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan yang jernih diambil dan diencerkan dengan air suling hingga volume larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995). 3.5.3 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling secukupnya, lalu ditambahkan 2 g iodium kemudian ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.5.4 Pereaksi Molish

Sebanyak 3 g α-naftol ditimbang, kemudian dilarutkan dalam asam nitrat

0,5 N hingga diperoleh larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995). 3.5.5 Pereaksi Liebermann-Burchard

Sebanyak 2 bagian asam asetat pekat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat (Harborne, 1987).

3.5.6 Pereaksi besi (III) klorida 1%

Sebanyak 1 g besi (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air secukupnya hingga diperoleh larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.5.7 Pereaksi timbal (II) asetat

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling bebas karbon dioksida sebanyak 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.5.8 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N

Sebanyak 8 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dengan air suling sebanyak 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.5.9 Pereaksi Asam Klorida 2 N

Sebanyak 17 ml larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Ditjen POM, 1995).

3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Penyiapan Sampel

Penyiapan sampel meliputi pengambilan sampel, identifikasi sampel dan pengolahan sampel.

3.6.1.1 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan sampel yang sama dari daerah lain. Sampel diperoleh dari Pasar Tradisional (Pajak Sore Padang Bulan), Jalan Jamin Ginting Medan, Provinsi Sumatera Utara.

3.6.1.2 Identifikasi Sampel

Identifikasi sampel dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi-LIPI, Bogor, Jawa Barat.

3.6.1.3 Pengolahan Sampel

Sampel biji petai dicuci bersih kemudian ditiriskan dan ditimbang beratnya 3,8 kg sebagai berat basah. Selanjutnya biji dikeringkan hingga berwarna hijau kecoklatan, kemudian ditimbang lagi sebagai berat kering 954,9 g, selanjutnya diblender dan ditimbang sebagai berat serbuk simplisia. 946,08 g Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam kantong plastik, diberi etiket dan disimpan di tempat kering.

3.6.2 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia

Pemeriksaan karakterisasi simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, pemeriksaan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut

dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam (Ditjen POM, 1995; WHO, 1998).

3.6.2.1 Pemeriksaan Makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan memperhatikan bentuk, ukuran dan warna simplisia biji petai.

3.6.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia biji petai,dengan cara menaruh serbuk simplisia secukupnya ke atas kaca objek. Kemudian diteteskan dengan 1 - 2 tetes larutan kloralhidrat, lalu ditutup dengan kaca penutup, diamati di bawah mikroskop.

3.6.2.3 Penetapan kadar air simplisia

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluena) (WHO, 1992). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung dan pendingin, tabung penyambung dan penerima 10 ml.

Cara kerja :

Dimasukkan 200 ml toluen dan 2 ml air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluena dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml. Kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan

mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen.

3.6.2.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air

Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml air - kloroform (2,5 ml kloroform dalam air sampai 1 liter) menggunakan labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Saring, 20 ml filtrat dipipet, diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.6.2.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml etanol 96% menggunakan labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Saring, 20 ml filtrat dipipet, diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam etanol dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.6.2.6 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 gram serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu total dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.6.2.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dipijarkan sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu tidak larut dalam asam dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.7 Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia

Skirining fitokimia meliputi pemeriksaan senyawa golongan alkaloida, glikosida, flavonoid, steroid/triterpenoid, saponin dan tannin.

3.7.1 Pemeriksaan alkaloid

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditimbang, ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring, filtrat dipakai untuk uji alkaloida. Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalam masing-masing tabung reaksi dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada tabung I : ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer, akan terbentuk endapan

menggumpal berwarna putih atau kuning

Pada tabung II i:ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan terbentuk endapan berwarna coklat atau jingga kecoklatan.

Pada tabung III : ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna coklat sampai kehitaman.

Alkaloid disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua atau tiga dari percobaan di atas (Ditjen POM, 1995).

3.7.2 Pemeriksaan flavonoid Larutan Percobaan:

Sebanyak 0,5 g sampel disari dengan 10 ml metanol lalu direfluks selama 10 menit, disaring panas-panas melalui kertas saring berlipat, filtrat diencerkan dengan 10 ml air suling. Setelah dingin ditambah 5 ml eter minyak tanah, dikocok hati-hati, didiamkan. Lapisan metanol diambil, diuapkan pada temperatur 40°C. Sisa dilarutkan dalam 5 ml etil asetat, disaring.

Cara Percobaan:

a. Satu ml larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisanya dilarutkan dalam 1-2 ml etanol 96%, ditambahkan 0,5 g serbuk seng dan 2 ml asam klorida2 N, didiamkan selama satu menit. Ditambahkan 10 ml asam klorida pekat, jika dalam waktu 2-5 menitter jadi warna merah intensif menunjukkan adanya flavonoida (glikosida-3-flavonol).

b. Satu ml larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisanya dilarutkan dalam 1 ml etanol 96%, ditambahkan 0,1 g magnesium dan 10 ml asam klorida pekat, terjadi warna merah jingga sampai merah ungu menunjukkan adanya flavonoida (Ditjen POM, 1995).

3.7.3 Pemeriksaaan tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditimbang, disari dengan 10 ml air suling lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).

3.7.4 Pemeriksaan glikosida

Sebanyak 3 g serbuk simplisia ditimbang, disari dengan 30 ml campuran dari 7 bagian etanol 95% dengan 3 bagian air suling (7:3) dan 10 ml asam klorida 2N. Kemudiaan direfluks selama 10 menit, didinginkan, lalu disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3), perlakuan ini diulangi sebanyak 3 kali. Sari air dikumpulkan dan ditambahkan Na2SO4 anhidrat, disaring, kemudiaan diuapkan pada

temperatur tidak lebih dari 500

3.7.5 Pemeriksaan saponin

C, sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut, 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes larutan perekasi Molish, lalu ditambahkan dengan perlahan-lahan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (glikon) atau glikosida (Ditjen POM, 1995).

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditimbang, dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan, kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Saponin positif jika terbentuk busa yang stabil tidak kurang dari 10 menit setinggi 1 sampai 10 cm dan dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang (Ditjen POM, 1995).

3.7.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid

Sebanyak 1 g sebuk simplisia ditimbang, dimaserasi dengan 20 ml n -heksan selama 2 jam, disaring, lalu filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 20 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat

pereaksi Lieberman-burchard), timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroida, sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Petai

Serbuk simplisia diekstraksi dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut etanol. Menurut Farmakope Indonesia Edisi III (1979), caranya adalah sebagai berikut:

Masukkan 10 bagian (796,08 gram) simplisia dengan derajat halus yang cocok dalam bejana, dituangi dengan 75 bagian cairan penyari etanol 96% (5 liter), ditutup dan dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas, dan diremaserasi ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian (7 liter), maserat dipindahkan ke dalam bejana tertutup cuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 7 liter. Pindahkan ke dalam bejana tertutup, biarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya, selama 2 hari. Enap tuangkan atau saring. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan alat rotary evaporator pada suhu 40○C , selanjutnya diuapkan di waterbath pada suhu 40○

3.9 Pengujian Efek Antimutagenik

C sampai diperoleh ekstrak kental sebanyak 123, 1 gram.

Pengujian efek antimutagenik meliputi penyiapan hewan percobaan, penyiapan suspensi CMC 5 mg/mencit, penyiapan suspensi ekstrak etanol biji petai, penyiapan larutan siklofosfamid, penyiapan serum darah sapi, pengujian pada mencit, pembuatan preparat apusan sumsum tulang femur dan pengamatan apusan pada mikroskop.

3.9.1 Penyiapan Hewan Percobaan

Hewan yang digunakan adalah mencit dengan berat 25 - 35 g dibagi 5 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 5 ekor mencit.

Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara terlebih dahulu selama kurang lebih dua minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanannya.

3.9.2 Penyiapan Suspensi CMC 0,5%

Pembuatan suspensi CMC 0,5% (b/v) dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 0,5 g CMC ditaburkan ke dalam lumpang yang berisi air suling panas sebanyak 10 ml. Didiamkan selama 15 menit hingga diperoleh masa yang transparan, digerus hingga berbentuk gel dan diencerkan dengan sedikit air, kemudian dituang ke dalam labu tentukur 100 ml, ditambahkan air suling sampai batas tanda.

3.9.3 Penyiapan Suspensi Ekstrak Etanol Biji Petai (EEBP)

Pembuatan suspensi EEBP dilakukan sebagai berikut: sebanyak 5 gram EEBP dimasukkan ke dalam lumpang. Ditambahkan CMC 0,5%, kemudian digerus sampai homogen. Dituangkan ke dalam labu tentukur 100 ml, dan dicukupkan sampai batas tanda. Maka diperoleh suspensi 5%.

3.9.4 Penyiapan Larutan Siklofosfamid 0,01% (b/v)

Pembuatan Larutan Siklofosfamid (LS) dilakukan dengan cara sebagai berikut: ditimbang sebanyak 50 mg siklofosfamid (serbuk) kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, ditambahkan larutan fisiologis [NaCl 0,9% (b/v)] sampai batas tanda.

Serum diperoleh dari darah sapi segar yang ditampung menggunakan beaker glass dari tempat pemotongan hewan. Sebanyak 10 ml darah sapi segar dimasukkan ke dalam glass ukur selanjutnya dimasukkan ke dalam vakum tube. Vakum tube ditutup dan didiamkan lebih kurang 30 menit, kemudian disentrifuge dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit. Diambil cairan yang berwarna bening kekuning-kuningan (bagian atas) yang merupakan serumnya. Hasil serum yang didapatkan sebanyak 5 ml.

3.9.6 Pengujian Pada Mencit

Pengujian aktivitas antimutagenik dilakukan dengan cara uji mikronukleus dengan modifikasi. Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 ekor hewan percobaan.

Kelompok tersebut adalah:

- Kelompok I : kelompok normal, diberikan suspensi CMC 5 mg/mencit secara oral, selama tujuh hari.

- Kelompok II :kontrol positif, dengan pemberian suspensi CMC 5 mg/mencit secara oral selama tujuh hari dan hari ke delapan diberikan siklofosfamid 50 mg/kg bb secara intraperitonial.

Kelompok III :perlakuan ketiga, dengan pemberian suspensi EEBP dengan dosis 200 mg/kg bb secara oral selama tujuh hari dan hari ke delapan diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb secara intraperitonial.

Kelompok IV :perlakuan keempat, dengan pemberian suspensi EEBP dengan dosis 400 mg/kg bb secara oral selama tujuh hari

dan hari ke delapan diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb secara intraperitonial.

Kelompok V :perlakuan kelima, dengan pemberian suspensi EEBP dengan dosis 800 mg/kg bb secara oral selama tujuh hari dan hari ke delapan diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb secara intraperitonial.

Setelah 30 jam pemberian siklofosfamid, hewan dibunuh dengan cara dislokasi leher dan diambil sumsum tulang femurnya dengan cara disempritkan dengan spuit yang berisi SDS sebanyak 0,3 ml dan ditampung di dalam mikrotube (Khrisna dan Hayashi, 2000).

3.9.7 Pembuatan Preparat Apusan Sumsum Tulang Femur

Campuran sumsum tulang dan SDS dalam mikrotube diputar (disentrifuge) dengan kecepatan 1200 rpm selama 5 menit, kemudian supernatannya dibuang. Endapannya disuspensikan kembali dengan dua tetes SDS, kemudian satu tetes suspensi sel diambil dan diletakkan ke atas objek glass, dengan menggunakan objek glass, dengan menggunakan objek glass yang lain, sel dihapuskan menjadi preparat apusan. Kemudian slide dikeringkan, difiksasi dengan metanol selama metanol selama 10 menit. Kemudian diberikan pewarna giemsa dibiarkan 30 menit, dibuang zat warna dengan dibilas menggunakan air yang mengalir kemudian apusan dikeringkan (Khrisna, 2000; Sofyan, 2005). 3.9.8 Pengamatan Apusan

Data pengamatan masing-masing hewan harus dipresentasikan dalam bentuk tabel. Jumlah eritrosit polikromatik bermikronukleus maupun tidak bermikronukleus dihitung paling tidak sebanyak 200 sel (dalam penelitian ini dihitung 200 sel) (Anonim, 1996). Pengamatan dilakukan menggunakan

mikroskop dengan perbesaran 40x dengan bantuan minyak immersi (Khrisna, 2000; Sofyan, 2005).

3.10. Analisis Data

Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan program SPSS 16. Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis dengan menggunakan uji ANOVA satu arah dengan nilai signifikansi, p < 0,05 dianggap signifikan. Kemudian dilakukan uji lanjutan Post Hoc Tukey untuk mengetahui melihat perbedaan jumlah rata-rata kritis mikronukleus antar kelompok perlakuan.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Simplisia dan Ekstrak

Tumbuhan yang diteliti telah diidentifikasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Pusat Penelitian Biologi Bogor. Hasil identifikasi tumbuhan, yaitu Parkia speciosa Hassk. (Fabaceae). Surat hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 51.

Hasil pemeriksaan makroskopik, biji petai berwarna hijau muda dan panjang kira-kira 2 - 2,5 cm dan rasanya agak pahit. Simplisia biji petai berwarna hijau kecoklatan dan berbau khas.

Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia biji petai adalah terdapat parenkim, amylum, berkas pembuluh (xylem) dan fragmen perisperm. Gambar hasil pemeriksaan mikroskopik dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 57.

Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia biji petai yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 4.1 berikut:

Tabel 4.1. Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak Biji Petai

No. Parameter Hasil (%)

Simplisia Ekstrak

1. Kadar air 5,38 4,98

2. Kadar sari larut dalam air 21,48 25,61

3. Kadar sari larut dalam etanol 10,33 34,25

4. Kadar abu total 0,94 0,87

Berdasarkan Tabel 4.1 menunjukkan bahwa kadar air dari simplisia biji petai sudah memenuhi persyaratan secara umum tidak lebih dari 10% (Depkes RI, 1978). Kadar air simplisia biji petai yaitu 5,38% sedangkan kadar air ekstrak biji petai 4,98%. Dengan kadar air tersebut, simplisia dan ekstrak dalam penyimpanannya sebagian sampel sudah terbebas dari mikroorganisme yang terdapat dalam lingkungannya yang mengandung air lebih dari 10%.

Kadar sari yang terlarut dalam air atau etanol untuk mengetahui adanya zat berkhasiat yang dapat terlarut dalam pelarut yang digunakan. Semakin tinggi kadar yang dihasilkan berarti semakin tinggi pula kadar zat berkhasiatnya (Gaman dan Sherrington, 1992). Ada beberapa faktor yang mempengaruhi kandungan zat berkhasiat, terutama faktor agronomis seperti ketinggian tempat, kelembaban, suhu dan jenis tanah (Gupta, 1999). Nilai kadar sari larut dalam air simplisia yaitu sebesar 21,48%, sedangkan kadar sari larut dalam etanol simplisia yaitu sebesar 10,33%, meskipun belum ada standarisasi mengenai karakterisasi tumbuhan petai (Parkia speciosa Hassk.).

Hal ini menunjukkan bahwa nilai kadar sari larut dalam air yang lebih besar dibandingkan dengan kadar sari larut dalam etanol, karena zat-zat berkhasiat yang berada di dalam biji petai dapat larut dengan baik di dalam air daripada etanol. Air sebagai pelarut dapat menarik lendir, amina, vitamin, asam organik, asam anorganik, ataupun bahan pengotor.

Abu secara umum didefinisikan sebagai residu anorganik dari pembakaran bahan-bahan organik. Komponen-komponen yang umum terdapat pada senyawa anorganik alami adalah silikat, kalium, natrium, kalsium, magnesium, mangan, besi, dan lain-lain. Kadar abu merupakan parameter yang menunjukkan banyaknya bahan anorganik yang ada di dalam produk (Apriyantono, 1989). Abu

yang terbakar sempurna adalah abu yang sudah berwarna putih keabuan. Dari hasil analisis diketahui bahwa kadar abu dari simplisia biji petai yaitu sebesar 0,94%. Berarti sedikit kandungan bahan anorganik seperti kandungan mineral pada lahan tanam atau karena proses pemupukan pada petai.

Pengujian kadar abu tidak larut dalam asam dilakukan untuk melihat adanya kandungan mineral yang tidak larut dalam asam kuat (HCl). Dari hasil pengujian diketahui bahwa kadar abu tidak larut asam simplisia yaitu sebesar 0,74%. Nilai ini relatif kecil, menunjukkan bahwa pada proses pencucian dengan air pada simplisia tersebut sehingga mineral menjadi berkurang. Menurut Voight (1994) proses pendahuluan seperti pencucian dengan air secara berulang-ulang pada suatu bahan akan menyebabkan terlarutnya kandungan mineral dalam bahan tersebut oleh air pencuci sehingga kandungan mineralnya menjadi berkurang. Menurut Kamisah, dkk., (2013) kandungan mineral pada biji petai antara lain besi, kalsium, kalium, magnesium, mangan, tembaga dan zink.

Hasil pemeriksaan skrining fitokimia pada simplisia dan ekstrak biji petai dapat dilihat pada Tabel 4.2 di bawah ini.

Tabel 4.2. Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan Ekstrak Etanol Biji Petai

No. Golongan Senyawa Hasil

Simplisia Ekstrak

1. Alkaloida + +

2. Flavonoida + +

3. Tanin - -

4. Steroida/Triterpenoida + +

5. Saponin + +

6. Glikosida + +

Keterangan: ( + ) = Positif, (-) = Negatif

Berdasarkan hasil pada Tabel 4.2 dapat dilihat bahwa golongan senyawa yang terdapat pada serbuk simplisia dan ekstrak biji petai yaitu golongan senyawa alkaloida, flavonoida, saponin, glikosida dan steroida-triterpenoida kecuali tanin.

Menurut penelitian Kamisah, dkk., (2013), hasil skrining fitokimia biji petai yang positif golongan senyawanya yaitu alkaloid, terpenoid, fenol dan flavonoid, kecuali saponin dan tanin.

Adanya senyawa flavonoida, senyawa polifenol, lupeol, vitamin C dan tokoferol yang terkandung dalam biji petai menunjukkan bahwa biji petai memiliki aktivitas antioksidan yang dapat digunakan sebagai antimutagenik

4.2 Pengujian Efek Antimutagenik

Pengujian efek antimutagenik dari biji petai dilakukan secara invivo menggunakan mencit jantan (Mus musculus) dengan metode mikronukleus. Metode mikronukleus yang digunakan untuk melihat pengaruh ekstrak etanol biji petai terhadap penghambatan pembentukan sel mikronukleus. Sel mikronukleus merupakan hasil mutasi dari kromosom utuh yang patah dan kemudian tampak sebagai nukleus berukuran kecil di dalam suatu sel (Schmid, 1975).

Adanya peningkatan jumlah sel mikronukleus menunjukkan bahwa telah terjadi kerusakan kromosom yang disebabkan oleh agen penginduksi (siklofosfamid) (Krishna dan Makoto, 2000). Dosis siklofosfamid yang diberikan 50 mg/kg bb yang diberikan secara intraperitonial sebagai penginduksi genotoksik/mutagen. Berdasarkan hasil orientasi yang dilakukan dengan menggunakan dosis ekstrak secara oral dari 50, 100, 200, 400, dan 800 mg/kg bb. Semua dosis memberikan efek sebagai antimutagenik. Dosis efektif yang menurunkan sel eritrosit polikromatik bermikronukleus adalah dosis 200, 400, dan 800 mg/kg bb. Hasil pengamatan apusan mikronukleus menggunakan mikroskop dengan perbesaran 40x dapat dilihat pada Gambar 4.2 sel-sel yang tampak pada apusan sumsum tulang mencit.

1 2 3

Gambar 4.1 Hasil Pengamatan Apusan Mikronukleus Menggunakan Mikroskop perbesaran 40x.

Keterangan:

1 : sel eritrosit polikromatik tidak bermikronukleus 2 : sel eritrosit polikromatik bermikronukleus 3 : sel eritrosit dewasa

Perhitungan jumlah sel mikronukleus dilakukan sebanyak 2 kali pada tiap apusan sumsum tulang femur mencit untuk mengurangi kesalahan pada perhitungan. Penghitungan dalam 200 sel atas dasar bahwa untuk sumsum tulang dihitung paling sedikitnya 200 sel (Anonim, 2012). Adapun hasil perhitungan jumlah sel mikronukleus dalam penelitian ini dapat dilihat dari Tabel 4.3 berikut:

Tabel 4.3 Jumlah Mikronukleus Dalam 200 Sel Eritrosit Polikromatik

Mencit Jumlah sel yang bermikronukleus yang diinduksi siklofosfamid Kontrol

Normal CMC

5 mg/mencit

Kontrol Positif

CMC 5 mg/mencit

EEBP 200

mg/kg bb

400 mg/kg bb

800 mg/kg bb

1 30 156 96 74 43

2 34 153 98 70 41

3 31 150 95 70 35

4 36 153 97 65 38

5 33 158 98 61 32

N 5 5 5 5 5

∑ 164 770 484 340 189

Rata-rata 32,8 154 96,8 68 37,8

SD ±2,3875 ±3,0822 ±1,3038 ±5,0497 ±4,4384

Dari Tabel 4.3 terlihat jumlah mikronukleus yang paling banyak terbentuk pada kelompok kontrol positif yang diberi suspensi CMC 5 mg/mencit selama 7 hari dan hari ke-8 diinduksi dengan siklofosfamid sedangkan pada kelompok dosis 800 mg/kg bb terjadi penurunan drastis jumlah sel eritrosit polikromatik yang bermikronukleus.

Gambar 4.3 Grafik jumlah sel mikronukleus dalam tiap 200 sel mencit pada berbagai perlakuan

Keterangan:

1 = pemberian CMC 5 mg/mencit (Blanko)

2 = pemberian CMC 5 mg/mencit, kemudian diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb (Mutagen)

3 = pemberian suspensi EEBP dosis 200 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb

4 = pemberian suspensi EEBP dosis 400 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb

5 = pemberian suspensi EEBP dosis 800 mg/kg bb, kemudian diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb

Pada Gambar 4.3 terlihat jelas perbedaan dari perlakuan satu sampai lima terhadap jumlah sel mikronukleus (sel eritrosit polikromatik). Di mana perlakuan 1 hanya diberikan suspensi CMC 5 mg/mencit tanpa diinduksi siklofosfamid, jumlah mikronukleusnya 32,8 ± 2,3875 sedangkan perlakuan 2 sampai 5 yang diinduksi siklofosfamid sebagai mutagen, jumlah mikronukleusnya berturut-turut adalah 154 ± 3,0822; 96,8 ± 1,3038; 68 ± 5,0497; dan 37,8 ± 4,4384 sel.

Dari hasil terlihat bahwa pemberian dosis 800 mg/kg bb terjadi penurunan jumlah mikronukleus yang paling kuat dibandingkan dengan dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb. Jumlah mikronukleus ini lebih sedikit jika dibandingkan

32,8 ± 2,3874

154 ± 3,0822

96,8 ± 1,30384

68 ± 5,0497

37,8 ± 4,4384

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

1 2 3 4 5

Ju m lah s el ya n g be rm ikr o n ukl e u s Perlakuan

dengan kelompok kontrol positif yang diberikan suspensi CMC 5 mg/mencit kemudian diinduksikan dengan siklofosfamid (mutagen), yang jumlah rata-ratanya 154 ± 3,0822.

Untuk melihat ada tidaknya perbedaan dari setiap perlakuan pada tiap kelompok hewan coba, dilakukan analisis variansi (ANAVA) menggunakan program SPSS versi 16 terhadap jumlah sel mikronukleus. Dari hasil ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan terhadap jumlah sel mikronukleus yang terbentuk dengan nilai signifikan p<0,05.

Hasil analisis Post Hoc Tukey menunjukkan bahwa pemberian CMC 5 mg/mencit dan pemberian ekstrak etanol biji petai (EEBP) dosis 800 mg/kg bb terdapat dalam satu kolom yang sama, sehingga tidak berbeda secara signifikan secara statistik jumlah mikronukleusnya dengan pemberian CMC 5 mg/mencit (p>0,05).

Hal ini menunjukkan juga bahwa suspensi EEBP dosis 800 mg/kg bb dapat menurunkan pembentukan sel mikronukleus yang diinduksi dengan siklofosfamid 50 mg/kg bb paling kuat karena dapat menyamai jumlah mikronukleus pada kelompok perlakuan yang hanya diberi suspensi CMC 5 mg/mencit tanpa diinduksi oleh siklofosfamid. Efek penghambatan terbentuknya sel eritrosit polikromatik yang bermikronukleus ini ada hubungannya dengan senyawa yang terkandung dalam biji petai yakni keberadaan senyawa fenolik yaitu flavonoid.

Sel eritrosit adalah salah satu jenis sel yang paling cocok untuk dilakukan pengukuran pada penginduksian mikronukleus, karena hilangnya inti utama sel tersebut selama pematangan eritoblas. Selain itu, pada sumsum eritrosit dibentuk terus-menerus dari eritoblas (Durling, 2008).

Siklofosfamid merupakan salah satu agen kemoterapi yang bersifat sitotoksik yang akan bekerja langsung pada Ribosa Nucleic Acid (RNA) atau Deoxyribosa Nucleic Acid (DNA) dan menyebabkan terjadinya peristiwa pindah silang (cross linking) DNA, yang pada akhirnya akan menyebabkan terjadinya patahan kromosom dan dapat terlihat sebagai mikronukleus (Santella, 2002; Puwardiwarsa, dkk., 2000).

Metabolisme siklofosfamid juga dilaporkan menyebabkan peningkatan radikal anion superoksida dan hidroksil yang mungkin ikut berperan dalam menginduksi pembentukan mikronukleus (Ramu, et al., 1996).

Menurut Kamisah, dkk., (2013) di dalam biji petai terpenoid yang dideteksi dengan menggunakan kromatografi gas antara lain beta-sitosterol, stigmasterol, lupeol, campesterol dan skualene. Lupeol juga ditemukan berkhasiat sebagai antikarsinogenik (antikanker), antinosiseptif (antinyeri), dan antiinflamasi. Di samping ada senyawa fenolik di dalam petai yakni flavonoid, lupeol betindak sebagai antikanker dalam menghambat pembentukan jumlah sel yang bermikronukleus. Senyawa yang bertanggung jawab dalam bau dan rasa pada biji petai antara lain polisulfida siklik, hexathionine, tetrathiane, trithiolane, pentathiopane, pentathiocane dan tetrathiepane, dimana kehadiran asam jengkolat dalam biji petai akan menyebabkan blokade pada ureter sehingga konsumsi biji petai harus berada dalam dosis yang efektif yaitu 200, 400 dan 800 mg/kg bb.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa:

a. Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia biji petai diperoleh kadar air simplisia 5,38%, kadar sari larut dalam air simplisia 21,48%, kadar sari larut dalam etanol simplisia 10,33%, kadar abu total simplisia 0,94%, dan kadar abu tidak larut dalam asam simplisia 0,74%.

Hasil pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol biji petai diperoleh kadar air ekstrak 4,98%, kadar sari larut dalam air ekstrak 25,61%, kadar sari larut dalam etanol ekstrak 34,25%, kadar abu total ekstrak 0,87% dan kadar abu tidak larut dalam asam ekstrak 0,62%.

b. Simplisia dan ekstrak etanol biji petai mengandung senyawa alkaloida, flavonoid, saponin, glikosida, dan steroida/triterpenoida.

c. Ekstrak etanol biji petai mempunyai efek sebagai antimutagenik dengan metode mikronukleus secara in vivo. Pemberian dosis 800 mg/kg bb memberikan efek antimutagenik lebih banyak dalam menurunkan jumlah mikronukleus yaitu 37,8 ± 4,4384 daripada dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb jumlah mikronukleusnya 96,8 ± 1,3038 dan 68 ± 5,0497. Dosis 800 mg/kg bb memberikan efek antimutagenik yang sama dengan kontrol normal (p < 0,05) dalam penurunan jumlah sel eritrosit polikromatik yang bermikronukleus.

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan fraksinasi dengan beberapa pelarut dari ekstrak etanol biji petai seperti menggunakan pelarut n-heksan atau etil asetat untuk mengetahui fraksi yang paling baik digunakan untuk uji secara in-vivo pada efek antimutagenik dengan metode mikronukleus.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1Uraian Tumbuhan

Uraian tumbuhan meliputi klasifikasi tumbuhan, deskripsi tumbuhan, nama daerah, jenis-jenis petai, kandungan gizi dan manfaat petai.

2.1.1 Klasifikasi Tumbuhan

Petai (Parkia speciosa Hassk.) termasuk suku Fabaceae. Dengan klasifikasi sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnolipsida Bangsa : Fabales

Suku : Fabaceae

Marga : Parkia

Jenis : Parkia speciosa Hassk. (Susilo, 2012) 2.1.2 Deskripsi Tumbuhan

a. Habitus

Petai termasuk tanaman pohon tahunan tropika dari suku polong-polongan (Fabaceae). Tanaman ini tersebar luas di Nusantara bagian Barat.

b. Batang

Tinggi batang mencapai 5 - 25 m dan bercabang banyak, kulit batang berwarna coklat kemerah-merahan.

c. Daun

Daunnya menyirip ganda, majemuk dan tersusun sejajar. d. Bunga

Bunga muncul biasanya di dekat ujung ranting. Bunganya ketika masih muda (belum tumbuh benang-benang sari dan putik-putiknya) berwarna hijau, keras, dan berbentuk bongkol, bunga ini setelah dewasa penuh ditumbuhi benang-benang sari dan putik-putik berwarna kuning sehingga ukurannya membesar dan empuk seperti spon, dalam bahasa Jawa disebut : “Pendul”. Bunga petai termasuk bunga jenis hermafrodit, dimana bunganya mengandung benang sari dan putik secara bersama-sama.

e. Buah

Bentuk buahnya berpolong, besar, memanjang dan berisi biji-biji, dan biji tersebut agak lunak ketika masih muda, dan agak keras setelah menjadi tua. Dalam satu buah terdapat hingga 20 biji, yang berwarna hijau ketika muda dan terbalut oleh selaput agak tebal berwarna coklat terang (Sunanto, 1992).

2.1.3 Nama Daerah

Di berbagai daerah Indonesia, ternyata mempunyai nama-nama yang berlainan untuk menyebut petai. Di daerah Batok Karo disebut Parira, di daerah Batak Toba disebut Palia, di daerah Ambon disebut Pateh, di Padang di sebut Patai, di Lampung disebut Petar, di daerah Sunda disebut Peuteuy, di Jawa Tengah dan di Jawa Timur disebut Pete, di Madura disebut Peteh, di Sumba disebut Puti, dan di pulau Buru disebut Faopatu. Namun secara umum di Indonesia disebut Petai (Sunanto, 1992)

2.1.4 Jenis-jenis Petai

Jenis tanaman petai, yakni jika di Jawa adalah: a. Tanaman Petai Jenis Gajah

Tanaman jenis ini menghasilkan buah petai yang setiap buahnya dapat berisi petai sebanyak 15 - 18 biji. Panjang buahnya dapat mencapai 25 - 30 cm. b. Tanaman Petai Jenis Kacang

Tanaman jenis ini menghasilkan buah petai yang setiap buahnya hanya mengandung 10 - 12 biji. Panjang buah hanya sekitar 20 cm, dan ukuran bijinya lebih kecil bila dibandingkan biji jenis gajah (Sunanto, 1992).

2.1.5 Kandungan Gizi

Bagian yang paling penting untuk dimanfaatkan adalah biji buah petai. Biji buah petai berbau menusuk mengandung sistina dan dilapisi kulit tipis berwarna keputih-putihan waktu masih muda, dilapisi kulit agak tebal dan agak berwarna kekuning-kuningan sering ditumbuhi cendawan putih pada waktu kelewat tua. Kulit biji petai itu sendiri berwarna hijau ketika masih muda dan menjadi hitam setelah tua benar (Sunanto, 1992).

Biji petai mempunyai kandungan mineral yang kaya kalori dan gizi di samping vitamin-vitamin sebagaimana tercantum dalam Tabel 2.1 berikut:

Tabel 2.1 Nilai Nutrisi Biji Parkia speciosa Hassk.

No Komponen Komposisi (dalam 100 g biji petai segar)

1 Abu (g) 1,2 -4,6

2 Protein (g) 6,0 – 27,5

3 Lemak (g) 1,6 – 13,3

5 Serat Kasar (g) 1,7 – 2,0

6 Energi (kkal) 91,0 – 441,5

7 Kalsium (mg) 108,0 -265,1

8 Besi (mg) 2,2 -2,7

9 Fosfor (mg) 115,0

10 Natrium (mg) 341,0

11 Magnesium (mg) 29,0

12 Mangan (ppm) 42,0

13 Tembaga (ppm) 36,7

14 Zink (ppm) 8,2

15 Vitamin C (mg) 19,3

16 α – tokoferol (mg) 4,15

17 Thiamin (mg) 0,28

Sumber : Kamisah, dkk. (2013) 2.1.6 Manfaat Petai

Menurut Aminudin dari Departement of Physiologi Medical Faculty of University Kebangsaan Malaysia, Kuala Lumpur bahwa petai dapat digunakan sebagai obat anemia, gigitan nyamuk, stress, sindroma pramenstruasi, depresi, sakit perut, liver, diabetes, cacingan, dan beberapa gangguan kesehatan lainnya. Menurut riset dalam “The New England Jurnal of Medicine”, makan petai sebagai bagian dari makanan sehari-hari akan berpengaruh sangat baik bagi pencernaan karena teksturnya yang lembut dan halus dan mampu menetralkan asam lambung dan mengurangi iritasi dengan melapisi permukaan dalam lambung. Kombinasi sukrosa, fruktosa, glukosa, dan serat mampu memberikan dorongan tenaga yang instant yang cukup lama dan cukup besar efeknya. Sedangkan kandungan zat besi

yang dapat mampu membantu menstimulasi produksi sel darah merah dan membantu apabila terjadi anemia (Anonim, 2006).

2.2 Senyawa Flavonoid

Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman hijau, kecuali alga. Flavonoid yang lazim ditemukan pada tumbuhan tingkat tinggi (Angiospermae) adalah flavon dan flavonol dengan C- dan O- glikosida, isoflavon C- dan O-glikosida, flavanon C- dan O-glikosida, kalkon dengan C- dan O-glikosida dan dihidrokalkon, proantosianidin dan antosianin, auron O-glikosida dan dihidroflavonol O-glikosida (Arifin, 1986).

Flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktifitas sebagai obat. Senyawa- senyawa ini dapat ditemukan pada batang, daun, bunga, dan buah. Flavonoid dalam tubuh manusia berfungsi sebagai antioksidan sehingga sangat baik untuk pencegahan kanker. Manfaat flavonoid antara lain adalah untuk melindungi struktur sel, meningkatkan efektivitas vitamin C, antiinflamasi, mencegah keropos tulang, mengurangi resiko penyakit kardiovaskuler dan penangkapan radikal bebas (Arifin, 1986).

2.3Ekstraksi

2.3.1 Definisi Ekstraksi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Ditjen POM, 2000). Hasil dari ekstraksi disebut dengan ekstrak, yaitu sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, diluar pengaruh cahaya matahari langsung. Ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk. (Ditjen POM, 1979).

2.3.2 Metode-Metode Ekstraksi

Menurut Ditjen POM (2000), ada beberapa metode ekstraksi: a. Cara dingin

Ekstraksi dengan cara dingin terdiri dari: 1. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya.

2. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umunya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1 - 5 kali bahan.

b. Cara Panas

Ekstraksi dengan cara panas terdiri dari: 1. Refluks

Refluks adalah ektraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

2. Sokletasi

Sokletasi adalah ekstraksi kontinu menggunakan alat soklet, di mana pelarut akan terkondensasi dari labu menuju pendingin, kemudian jatuh membasahi sampel dan mengisi bagian tengah alat soklet. Tabung sifon juga terisi

dengan larutan ekstraksi dan ketika mencapai bagian atas tabung sifon, larutan tersebut akan kembali ke dalam labu.

3. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40 - 50o

4. Infundasi

C.

Infundasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (menggunakan bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur 90o

5. Dekoktasi

C selama 15 - 20 menit.

Dekoktasi adalah infus pada waktu yang lebih lama (30 menit) pada suhu 90oC - 98o

2.4 Siklofosfamid

C menggunakan pelarut air.

Siklofosfamid sebagai agen alkilasi bekerja lewat timbulnya efek sitotoksik melalui pemindahan gugusan alkilnya ke berbagai unsur sel. Alkilasi DNA di dalam nukleus merupakan interaksi utama yang menyebabkan kematian sel. Tempat alkilasi utama di dalam DNA adalah posisi N7 guanin. Sistem

sitokrom P450 mixed function axidase mikrosoma hati mengubah siklofosfamid

menjadi 4-hidroksisiklofosfamid yang seimbang dengan aldofosfamid. Metabolit-metabolit aktif ini dibawa aliran darah ke jaringan tumor dan jaringan sehat, dimana pemecahan non enzimatik dari aldofosfamid menjadi bentuk sitotoksik fosforamid mustard dan akrolein. Hati terlindung oleh adanya pembentukan 4-ketosiklofosfamid dan karboksifosfamid, metabolit inaktif yang terbentuk secara enzimatik (Salmon dan Sartorelli, 1998).

2.5 Mutasi

2.5.1 Definisi Mutasi

Mutasi merupakan perubahan turun temurun pada materi genetik yang menimbulkan berbagai bentuk kelainan gen. Secara garis besar terdapat dua tipe mutasi yaitu yang mempengaruhi gen dan mempengaruhi seluruh kromosom (menyebabkan kerusakan kromosom). Mutasi dapat terjadi secara spontan maupun memalui induksi (Gardner, et al., 1984). Mutasi sebenarnya terjadi pada sel secara terus menerus, namun frekuensinya sangat rendah dalam kondisi normal, dan banyak mutasi yang berbahaya namun beberapa tidak menyebabkan pengaruh apa-apa pada sel (Postlethwait, et al., 2006). Kesalahan pada saat replikasi gen pada molekul Deoxyribo Nucleic Acid (DNA) dapat menyebabkan terjadinya insersi (penyisipan), delesi (penghapusan), dan substitusi (penggantian) satu atau lebih basa akan menimbulkan mutasi (Stansfield, et al., 2003).

2.5.2 Jenis-jenis mutasi A. Menurut Kejadiannya

Mutasi dapat terjadi secara spontan (alamiah) dan juga dapat terjadi secara buatan. 1. Mutasi spontan adalah perubahan yang terjadi secara alamiah atau dengan

sendirinya, diduga faktor penyebabnya adalah panas, radiasi sinar kosmis, sinar ultraviolet matahari, radiasi dan ionisasi internal mikroorganisme serta kesalahan DNA dalam metabolisme.

2. Mutasi buatan adalah mutasi yang disebabkan oleh usaha manusia antara lain karena faktor fisika, kimia dan biologi.

B. Berdasarkan Sel yang Bermutasi

Berdasarkan jenis sel yang mengalami mutasi, mutasi dibedakan atas mutasi somatik dan mutasi gametik atau germinal.

1. Mutasi somatik adalah mutasi yang terjadi pada sel-sel somatik. Mutasi jenis ini dapat diturunkan dan dapat pula tidak diturunkan.

2. Mutasi gametik atau germinal adalah mutasi yang terjadi pada sel gamet. Karena terjadinya di sel gamet, maka akan diwariskan oleh keturunannya (Warianto, 2011).

C. Berdasarkan Bagian yang Bermutasi

Berdasarkan bagian yang bermutasi, mutasi dibedakan menjadi mutasi DNA, mutasi gen dan mutasi kromosom.

1. Mutasi DNA

a. Mutasi transisi, yaitu suatu pergantian basa purin dengan basa purin lain atau pergantian basa pirimidin dengan basa pirimidin lain.

b. Mutasi tranversi, yaitu suatu pergantian antara purin dengan pirimidin pada posisi yang sama.

c. Insersi, yaitu penambahan satu atau lebih pasangan nukleotida pada suatu gen.

d. Delesi, yaitu pengurangan satu atau lebih pasangan nukleotida pada suatu gen

2. Mutasi Gen

Mutasi gen adalah mutasi yang terjadi dalam lingkup gen. Peristiwa yang terjadi pada mutasi gen adalah perubahan urutan-urutan DNA dan disebut juga mutasi titik. Mutasi titik (point mutation) merupakan perubahan kimiawi pada satu atau beberapa pasangan basa dalam satu gen. Adapun jenis-jenis mutasi gen adalah sebagai berikut:

a. Mutasi salah arti (missens mutation), yaitu perubahan suatu kode genetik (umumnya pada posisi 1 dan 2 pada kodon) sehingga menyebabkan asam

amino terkait (pada polipeptida) berubah. Perubahan pada asam amino dapat menghasilkan fenotip mutan apabila asam amino yang berubah merupakan asam amino esensial bagi protein tersebut. Jenis mutasi ini dapat disebabkan oleh peristiwa transisi dan tranversi.

b. Mutasi diam (silent mutation), yaitu perubahan suatu pasangan basa dalam gen (pada posisi 3 kodon) yang menimbulkan perubahan satu kode genetik tetapi tidak mengakibatkan perubahan atau pergantian asam amino yang dikode. Mutasi diam biasanya disebabkan karena terjadinya mutasi transisi dan tranversi.

c. Mutasi tanpa arti (nonsense mutation), yaitu perubahan kodon asam amino ter tentu menjadi kodon stop. Hampir semua mutasi tanpa arti mengarah pada inaktifnya suatu protein sehingga menghasilkan fenotip mutan. Mutasi ini dapat terjadi baik oleh tranversi, transisi, delesi, maupun insersi.

d. Mutasi perubahan rangka baca (frameshift mutation), yaitu mutasi yang terjadi karena delesi atau insersi satu atau lebih pasang basa dalam satu gen sehingga ribosom membaca kodon tidak lengkap. Akibatnya akan menghasilkan fenotip mutan.

3. Mutasi kromosom

Mutasi kromosom yaitu mutasi yang disebabkan karena perubahan struktur kromosom atau perubahan jumlah kromosom. Mutasi kromosom sering terjadi karena kesalahan pada meiosis maupun pada mitosis (Warianto, 2011). 2.6 Mutagen

Mutagen yaitu agen yang dapat menyebabkan terjadinya mutasi dalam sel (Postlethwait, et al., 2006). Agen mutagen tersebut dapat berupa fisika, kimia, radiasi-pengion, sinar uv dan obat-obatan (Stansfield, et al., 2003). Mutagen yang

pertama kali ditemukan yaitu gas mustard yang dikenal sebagai agen pengalkilasi (Gardner, et al., 1984). Beberapa tahun yang lalu, hampir seluruh mutagen kuat diketahui sebagai karsinogen yang dapat menyebabkan kanker (Yuwono, 2010). Ruddon, 2007; Gardner, et al., 1984).

Mutagen dapat menimbulkan kerusakan DNA sel. Kerusakan DNA dalam sel telur atau sperma manusia dapat menurunkan kesuburan, aborsi spontan, cacat lahir, dan penyakit keturunan, selain itu mutagen juga dapat menyebabkan tumor baik pada hewan maupun manusia (Wisaksono, 2002; Macdonald, et al., 2004).

2.7 Metode Uji Pendahuluan Antikanker 2.7.1 Metode Ames

Untuk menentukan sifat karsinogenik dari suatu zat kimia secara tidak

langsung dapat dilakukan uji mutagenisitas. Ames telah membuktikan bahwa 80 -

90% senyawa yang bersifat karsinogenik juga bersifat sebagai mutagenic. Uji Ames

menggunakan bakteri Salmonella thyphimirium yang mengandung gen mutasi untuk

meningkatkan kepekaan bakteri terhadap senyawa mutagenik (Ames et al., 1975).

Selain itu juga digunakan Escherichia coli WP2 yang mengandung gen mutasi uvrA

(Brusick, 1980).

2.7.2 Metode Habig

Uji ini melibatkan glutation-S-transferase yang merupakan sekelompok

enzim yang memiliki peran utama sebagai katalis enzimatik pada detoksifikasi

senyawa elektrofilik melalui konjugasi dengan glutation (GSH) (Mannervik dan

Danielson, 1988). Glutation S-transferase adalah keluarga enzim multifungsi

bersifat reaktif secara biologi (Griscelli dkk., 2004), yang dapat diukur dengan

menggunakan spektrofotometri.

2.7.3 Metode Mikronukleus

Sel mikronukleus merupakan hasil mutasi dari kromosom utuh yang patah dan kemudian tampak sebagai nukleus berukuran kecil di dalam suatu sel (Schmid, 1975). Pada hewan pengerat baik sumsum tulang dan limpa merupakan organ hematopoietik, dimana dalam stem sel terbentuk dari eritropoiesis dengan tahapan proliferasi dan maturasi. Selama proliferasi, sel yang terus-menerus membelah jika diberikan suatu agen, akan menyebabkan kerusakan kromosom, seperti hancur atau terjadi pertukaran, dan dapat juga bertindak pada makromolekul yang berhubungan dengan fungsi kerusakan kromatid, seperti tubulin yang menyebabkan kegagalan spindel, proses ini tergantung pada mekanisme aksi agen yang diberikan. Kelainan ini bisa menyebabkan gangguan pada sel selama pembelahan dan sel tidak bisa berintegrasi menjadi daughter nuclei, yang akhirnya akan membentuk mikronukleus, yang dapat dilihat di dalam sitoplasma (Khrisna dan Hayashi, 2000).

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Radikal bebas berperan dalam terjadinya berbagai penyakit. Radikal bebas sebagai pengganggu sistem kekebalan tubuh, merupakan pemicu beberapa penyakit degeneratif seperti kanker, katarak, aterosklerosis, diabetes mellitus dan penyakit jantung koroner. Data WHO (World Health Organization) tahun 2005 menunjukkan bahwa, penyakit degeneratif telah menyebabkan kematian hampir 17 juta orang di seluruh dunia. Data WHO menyatakan sekitar satu milyar orang di seluruh dunia, saat ini menderita resiko penyakit degeneratif dan diperkirakan akan naik menjadi 1,5 milyar pada tahun 2015 (Anonim, 2010). Salah satu penyakit degeneratif yang cukup banyak diderita manusia adalah kanker.

Menurut laporan terbaru oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), saat ini terdapat lebih dari 10 juta kasus kanker per tahun di seluruh dunia (Surh, 2003). Hingga tahun 2012, WHO International Agency for Research on Cancer (IARC) telah mengidentifikasi lebih dari 100 jenis penyebab kanker (karsinogen) berasal dari unsur kimia, fisika dan biologis. Data statistik kanker dunia tahun 2012 yang dikeluarkan oleh International Agency for Research on Cancer GLOBOCAN menyatakan bahwa pada tahun 2012 terdapat 14,1 juta kasus kanker di seluruh dunia. Bahkan, kasus baru kejadian kanker akan diprediksi lebih dari 19,3 juta kasus pada tahun 2023. Hal ini merupakan suatu jumlah kenaikan yang cukup besar (Anonim, 2014).

Kanker adalah penyakit yang ditandai dengan pembelahan sel yang tidak terkendali dan kemampuan sel-sel tersebut untuk menyerang jaringan biologis

lainnya. Pertumbuhan langsung di jaringan yang bersebelahan atau dengan migrasi sel ke tempat yang jauh. Pertumbuhan yang tidak terkendali tersebut disebabkan kerusakan DNA, sehingga pembelahan sel tidak normal (Sutanto, 2009).

Mutasi yang terjadi pada beberapa gen disebabkan oleh induksi suatu mutagen, seperti bahan kimia, radiasi, radikal bebas maupun infeksi dari beberapa jenis virus (Sudiana, 2008). Sedangkan mutasi yang terjadi akibat adanya radikal bebas berawal dari teroksidasinya asam lemak tak jenuh pada lapisan lipid membran sel, reaksi ini mengawali terjadinya oksidasi lipid berantai yang menyebabkan kerusakan membran sel, oksidasi lebih jauh akan terjadi pada protein yang berakibat fatal dengan kerusakan DNA (Cook dan Samman, 1996).

Salah satu indikator terjadinya mutasi adalah adanya mikronukleus. Mikronukleus merupakan hasil mutasi dari kromosom utuh yang patah dan kemudian tampak sebagai nukleus berukuran kecil di dalam suatu sel (Schmid, 1975). Uji mikronukleus dikembangkan oleh Schmid (1975) dan Heddle (1973), merupakan suatu metode pemeriksaan yang secara luas digunakan untuk mendeteksi efek genotoksik dalam waktu singkat secara in vivo dan in vitro (Saleh dan Ahmad, 2010).

Mikronukleus yaitu badan-badan kromatin halus yang terbentuk di sitoplasma karena terjadinya kondensasi pada fragmen kromosom asentrik atau seluruh kromosom (Shahrim, et al., 2006). Mikronukleus memiliki ukuran sekitar 1/20 - 1/6 diameter inti sel itu sendiri, dan dapat jelas terlihat di bawah pemeriksaan mikroskop, adanya mikronukleus ini menjadi salah satu indikator terjadinya mutasi (Sofyan, et al., 2005; Schmid, 1975).

Dalam beberapa tahun ini, upaya mengatasi pembentukan radikal bebas dengan produk farmasi dan bahan pangan diatasi oleh antioksidan dari bahan alami (Campanella, et al., 2006). Beberapa laporan juga menyebutkan bahwa senyawa antioksidan dapat menetralkan radikal bebas dan selanjutnya dapat menghalangi terjadinya mutasi sel (Ghaskadbi, 1992; Shiraki, 1994; Rompelberg, 1995).

Salah satu tumbuhan bahan pangan yang telah diketahui memiliki khasiat sebagai antioksidan adalah petai (Parkia speciosa Hassk.), baik pada biji maupun kulit bagian luar dan dalamnya sehingga tergolong sebagai antioksidan kuat. Petai berasal dari suku Fabaceae yang banyak ditemukan di Asia Tenggara. Bijinya sering dikonsumsi masyarakat, baik dalam kondisi segar maupun diolah bersama bahan pangan lainnya. Biji petai memiliki khasiat untuk mengobati penyakit lever (hepatalgia), edema (oedema), radang ginjal (nefritis), diabetes, kanker, kolera dan cacingan (Jamaluddin, et al., 1995; Orwa, et al., 2009; Rahman, et al., 2011; Aisha, et al., 2012).

Menurut hasil penelitian Vimala (1999), petai merupakan salah satu tumbuhan bahan pangan yang terbukti kaya antioksidan dan memiliki aktivitas superoksida tinggi, yakni di atas 70%. Hasil penelitian lain menyatakan kandungan klorofil b dalam biji-biji petai berfungsi sebagai agen antioksidan yang baik untuk kulit, memastikan kesegaran tubuh, dan memperbaiki sistem peredaman radikal bebas.

Senyawa yang bersifat antimutagenik diantaranya adalah senyawa flavonoid dan polifenol (Ishaq, et al., 2003). Hampir di semua bagian tanaman petai mengandung senyawa kimia yang bermanfaat. Dalam penelitian ini digunakan

bagian biji dari tanaman petai. Di dalam biji petai mengandung alkaloid, terpenoid, fenol dan flavonoid. Selain itu biji petai mengandung vitamin C dan �-tokoferol (vitamin E). Senyawa fenol ada hampir di semua bagian tanaman petai. Senyawa lainnya yang terkandung pada biji petai antara lain lektin, sisteina, stigmast-4-en-on, polisulfida siklik (heksationana, tetratiana, tritiolana, tiazolidina-4-karboksilat) (Suvachittanont dan Peutpaiboon 1992; Jamaluddin, et al., 1995; Rahman, et al., 2011).

Menurut Kamisah, et al., (2013), telah dilakukan uji antimutagenik pada ekstrak metanol biji petai dengan menggunakan metode Ames, hasilnya negatif terhadap mutagen, yang artinya biji petai memiliki khasiat sebagai antimutagenik. Hal ini karena adanya senyawa lupeol yang ditemukan sebagai antikanker, antinyeri dan antiinflamasi.

Berdasarkan uraian di atas, peneliti tertarik untuk meneliti efek ekstrak etanol biji petai sebagai antimutagenik pada mencit jantan yang diinduksi dengan siklofosfamid secara in vivo dengan menggunakan metode lain yakni metode uji mikronukleus. Metode ini digunakan karena tekniknya mudah, waktu yang dibutuhkan singkat, tidak memerlukan alat dan biaya yang mahal serta metode ini paling umum digunakan (Krishna dan Hayashi, 2000). Serta dilakukan karakterisasi simplisia biji petai untuk mengetahui makroskopik dan mikroskopiknya karena belum terdapat dalam Materia Medika Indonesia dan pemeriksaan skrining fitokimianya.

1.2 Perumusan Masalah

Perumusan masalah dalam penelitian ini adalah:

a. Apakah karakteristik simplisia dan ekstrak etanol biji petai yang diteliti memenuhi persyaratan mutu simplisia dan ekstrak?

b. Apakah golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam simplisia biji petai?

c. Apakah ekstrak etanol biji petai memiliki aktivitas sebagai antimutagenik? 1.3 Hipotesis

Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis:

a. Karakterisasi simplisia dan ekstrak etanol biji petai dapat ketahui dan memenuhi standar.

b. Golongan senyawa yang terkandung dalam simplisia biji petai yaitu alkaloid, flavonoid, tanin, glikosida, saponin dan steroid/triterpenoid.

c. Ekstrak etanol biji petai memiliki efek antimutagenik pada mencit yang diinduksi oleh siklofosfamid sebagai mutagen.

1.4Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut:

a. Untuk memperoleh hasil karakterisasi simplisia dan ekstrak etanol biji petai.

b. Untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam simplisia biji petai.

c. Untuk mengetahui aktivitas antimutagenik ekstrak etanol biji petai pada mencit jantan yang diinduksi dengan siklofosfamid.

2.1.6 Manfaat Petai ... 10

2.2 Senyawa Flavonoid ... 11

2.3 Ekstraksi ... 11

2.3.1 Definisi Ekstraksi ... 11

2.3.2 Metode-Metode Ekstraksi ... 12

2.4 Siklofosfamid ... 13

2.5 Mutasi ... 14

2.5.1 Definisi Mutasi ... 14

2.5.2 Jenis-jenis Mutasi ... 14

2.6 Mutagen ... 17

2.7 Metode Uji Pendahuluan Antikanker ... 17

2.7.1 Metode Ames ... 17

2.7.2 Metode Habig ... 18

2.7.3 Metode Mikronukleus ... 18

BAB III METODE PENELITIAN ... 19

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ... 19

3.2 Bahan-bahan ... 19

3.2.1 Sampel ... 19

3.2.2 Pereaksi ... 19

3.3 Alat-alat ... 20

3.4 Hewan Percobaan ... 20

3.5 Pembuatan Larutan Pereaksi ... 20

3.5.1 Larutan Pereaksi Mayer ... 20

3.5.2 Larutan Pereaksi Dragendorff ... 21

3.5.4 Larutan Pereaksi Molish ... 21

3.5.5 Larutan Pereaksi Liebermann-Burchard ... 21

3.5.6 Larutan Pereaksi Besi (III) Klorida 1% ... 21

3.5.7 Larutan Pereaksi Timbal (II) Asetat ... 21

3.5.8 Larutan Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N ... 22

3.5.9 Larutan Pereaksi Asam Klorida 2 N ... 22

3.6 Prosedur Penelitian ... 22

3.6.1 Penyiapan Sampel ... 22

3.6.1.1 Pengambilan Sampel ... 22

3.6.1.2 Identifikasi Sampel ... 22

3.6.1.3 Pengolahan Sampel ... 22

3.6.2 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 23

3.6.2.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 23

3.6.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 23

3.6.2.3 Penetapan Kadar Air Simplisia ... 23

3.6.2.4 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air ... 24

3.6.2.5 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol ... 24

3.6.2.6 Penetapan Kadar Abu Total ... 25

3.6.2.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam ... 25

3.7 Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisia ... 25

3.7.1 Pemeriksaan Alkaloid ... 25

3.7.2 Pemeriksaan Flavonoid ... 26

3.7.3 Pemeriksaan Tanin ... 27

3.7.4 Pemeriksaan Glikosida ... 27

3.7.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ... 28

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Petai ... 28

3.9 Uji Efek Antimutagenik ... 29

3.9.1 Penyiapan Hewan Percobaan ... 29

3.9.2 Penyiapan Suspensi CMC 0,5% ... 29

3.9.3 Penyiapan Suspensi Ekstrak Etanol Biji Petai (EEBP) 29

3.9.4 Penyiapan Larutan siklofosfamid (LS) 0,01% ... 30

3.9.5 Pembuatan Serum Darah Sapi (SDS) ... 30

3.9.6 Pengujian Antimutagenik ... 30

3.9.7 Pembuatan Preparat Hapusan Sumsum Tulang Femur 31

3.10 Pengamatan Apusan ... 32

3.11 Analisis Data ... 32

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 33

4.1 Simplisia dan Ekstrak ... 33

4.2 Pengujian Antimutagenik ... 36

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN... 42

5.1 Kesimpulan ... 42

5.2 Saran ... 43

DAFTAR PUSTAKA ... 44

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Nilai Nutrisi Biji Petai ... 9

4.1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ... 33

4.2 Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ... 35

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Diagram Kerangka Pikir Penelitian ... 6 4.1 Hasil Pengamatan Apusan Mikronukleus ... 37 4.3 Grafik Jumlah sel mikronukleus dalam tiap 200 sel mencit ... 39

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Hasil Identifikasi Tanaman ... 49

2. Surat Etikal Klirens ... 50

3. Gambar Tumbuhan Petai ... 51

4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Biji Petai ... 55

5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ... 56

6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak ... 61

7. Bagan Alur Penelitian ... 65

8. Alat-Alat ... 67

9. Hewan Percobaan ... 69

10. Contoh Perhitungan Dosis ... 70