UJI SITOTOKSISITAS HASIL PARTISI DAUN SIRSAK (Annona muricataLinn.) PADA SEL HELA SECARA IN VITRO DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA BAGIAN TERAKTIF.
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS HASIL PARTISI DAUN SIRSAK
(Annona muricata Linn.) PADA SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA BAGIAN TERAKTIF
Skripsi
Untuk memenuhi sebagian persyaratan
guna memperoleh gelar Sarjana Sains
Oleh:
Eva Agustina Perwitasari
NIM :
M 0409019
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2013
commit to user
i
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya sendiri
dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan
di suatu perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis
atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu dalam naskah ini dan
disebutkan dalam daftar pustaka.
Apabila di kemudian hari dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka gelar
kesarjanaan yang telah diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.
Surakarta, 11 Juni 2013
Eva Agustina Perwitasari
NIM. M 0409019
commit to user
iii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS HASIL PARTISI DAUN SIRSAK
(Annona muricata Linn.) PADA SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA BAGIAN TERAKTIF
EVA AGUSTINA PERWITASARI
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta
ABSTRAK
Kanker serviks merupakan salah satu kanker penyebab kematian terbesar di
negara berkembang. Berbagai metode pengobatan penyakit kanker di bidang medis
telah dikembangkan, namun terapi yang digunakan dianggap belum efektif sebagai
antikanker karena banyak menimbulkan efek samping. Annona muricata Linn.
merupakan salah satu sumber senyawa-senyawa baru yang memiliki aktivitas
farmakologis.Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik hasil partisi
daun sirsak (Annona muricata Linn.) pada kultur sel HeLa secara in vitro dan profil
kandungan kimia bagian teraktif.
Penelitian diawali dengan ekstraksi menggunakan etanol 96 % dan partisi
dengan corong pisah menggunakan berbagai pelarut yaitu, etil asetat, kloroform, dan
n-heksana. Uji sitotoksisitas ditunjukkan dengan metode MTT(3-4(4,5-dimetil-diazol2-il)-2,5-dipheniltetrazolium bromid) menggunakan parameter LC50 (µg/ml), yaitu
konsentrasi senyawa uji yang dapat menghambat 50% pertumbuhan sel. Uji
sitotoksisitas dilakukan dengan menginkubasi sel HeLa kepadatan 2.104 dengan
perlakuan ekstrak kadar 15,625; 31,25; 62,5; 125; 250; 500; 1000; 2000 µg/ml selama
24 jam.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa bagian etil asetat memiliki aktivitas
sitotoksisitas paling tinggi terhadap kultur sel HeLa dengan nilai LC50 sebesar 3,810
µg/ml.Nilai LC50 bagian n-heksana, kloroform, dan etanol-aquades berturut-turut
12,67 µg/ml, 113,76 µg/ml, dan 26181,83 µg/ml. Profil kandungan kimia bagian
teraktif etil asetat terdeteksi adanya senyawa flavonoid, tanin, dan glikosida.
Kata Kunci: Annona muricata Linn., senyawa bioaktif, uji sitotoksik, sel HeLa,
Lethal Concentration50
commit to user
iv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
THE RESULT OF CYTOTOXICITY ASSAY PARTITION SOURSOP
LEAVES (Annona muricata Linn.) ON HELA CELL LINE BASED
ON THE IN VITRO AND THE ACTIVE PART OF CHEMICAL PROFILE
EVA AGUSTINA PERWITASARI
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Sebelas Maret University, Surakarta
ABSTRACT
Cervical cancer is one of the biggest causes of deaths in developing countries.
There are various methods of cancer treatment in the medical field have been
developed, but the therapy is ineffective because it has many side effects. Annona
muricata Linn. is the one source of new compounds with pharmacological activity.
The study aims to determine the cytotoxic effect of the partition result of soursop leaf
(Annona muricata Linn.) on HeLa cell line based on in vitro and the chemical profile
of active part.
The research was initiated by extraction using ethanol 96% and partition by
separating funnel using a various solvents such as ethyl acetate, chloroform, and nhexane. Cytotoxicity assay demonstrated with MTT method (3-4(4,5-dimetil-diazol2-il)-2,5-dipheniltetrazolium bromid) using parameters LC50 (µg/ml), the
concentration of compound test that can inhibite 50% cell growth. Cytotoxicity assay
demonstrated by incubating HeLa cell at a density of 2.104 with extract treatment
levels 15,625; 31,25; 62,5; 125; 250; 500; 1000; 2000 µg/ml for 24 hours.
This result showed that the ethyl acetate part has high cytotoxic activity to
HeLa cell line with LC50 values of 3,810 µg/ml. The LC50 value parts of n-hexane,
chloroform, and ethanol-aquades respectively 12,67 µg/ml, 113,76 µg/ml, and
26181,83 µg/ml. The profile of the chemical constituents in the ethyl acetate part
detects flavonoids, tannins, and glycosides.
Keywords: Annona muricata Linn., bioactive compound, cytotoxic assay, HeLa cell
line, Lethal Concentration50
commit to user
v
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
MOTTO
Bagi orang-orang yang sabar, pahit getir di awal, insya Allah lezat membahagiakan
diujungnya.
(Darwis Tere Liye)
Anda tidak harus kaya untuk mencapai potensi anda.
(Barrack Obama)
Ketergesaan dalam setiap usaha membawa kegagalan.
(Herodotus)
Learn from yesterday, Live for today, Hope for tomorrow.
Failure isn’t an option, it’s a choice.
(Tidy Giwangkara Dyaksa)
Allah selalu bersama kita.
commit to user
vi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERSEMBAHAN
Semakin tua raga...
Semakin ringkih rasa...
Semakin sunyi tawa...
Semakin dingin terasa...
Senyum kita bangkitkan mereka
Genggaman kita kuatkan mereka
Pelukan kita hangatkan mereka
Mereka yang tercinta....
Dengan haru dan bangga, kupersembahkan tulisan ini kepada:
Allah SWT, Sang Maha Pengasih dan Penyayang
Bapak dan Ibu tercinta, terimakasih atas pelukan, dorongan, dan doa yang tak
pernah hilang dihapus masa
Adikku tercinta, semoga kita bisa tetap membanggakan dan sukses bersama
Tidy Giwangkara, atas tangis, tawa, dan peluh yang selalu kita bagi berdua
Sahabat-sahabatku MIPA BIOLOGI UNS 2009, i will miss you guys, keep
istiqomah ☺
Serta para pihak yang senantiasa membantu kelancaran penulisan skripsi ini.
“Lemah teles, Gusti Allah ingkang mbales”
commit to user
vii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim...
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas semua nikmat dan
rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi
yang berjudul: “Uji Sitotoksisitas Hasil Partisi Daun Sirsak (Annona muricata
Linn.) pada Sel HeLa secara In Vitro dan Profil Kandungan Kimia Bagian
Teraktif”. Shalawat dan salam senantiasa tercurah kepada Rasulullah Muhammad
SAW. Penyusunan skripsi ini merupakan suatu syarat untuk memperoleh gelar
kesarjanaan strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Penulis menyadari bahwa dalam penelitian maupun penyusunan skripsi ini
penulis telah mendapatkan banyak masukan, bantuan baik secara moril, material, dan
bimbingan dari berbagai pihak yang sangat berguna dan bermanfaat baik secara
langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
Prof. Ir. Ari Handono Ramelan, M.Sc.(Hons)., Ph.D., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta yang
telah memberikan dukungan dan dorongan.
HIBAH UNGGULAN DIKTI 2012 atas kesempatan dan fasilitas yang
diberikan sehingga penelitian ini dapat berjalan hingga selesainya penyusunan
skripsi.
commit to user
viii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Dr. Agung Budiharjo, M.Si., selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta yang
telah memberikan izin dan dukungannya selama penelitian.
Dra. Noor Soesanti Handajani, M.Si., selaku Dosen Pembimbing I yang telah
membimbing, memberi saran dan mendukung penulis selama penelitian sampai
selesainya penyusunan skripsi ini.
Prof. Dr. Okid Parama Astirin, M.S., selaku Pembimbing II yang telah
memberikan proyek penelitian, bimbingan, saran, dan mendukung penulis selama
penelitian sampai selesainya penyusunan skripsi ini.
Estu Retnaningtyas N, S.TP.,M.Si., selaku Penguji I yang telah memberikan
bimbingan dan petunjuknya hingga terselesaikannya penyusunan skripsi ini.
Dra. Marti Harini, M.Si., selaku Penguji II, yang telah memberikan bimbingan
dan petunjuknya hingga terselesaikannya penyusunan skripsi ini.
Prof. Dr. Sugiyarto, M.Si., selaku Pembimbing Akademik atas segala
perhatian, dukungan, saran, dan semangat yang selalu diberikan kepada penulis.
Dosen-dosen di Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta atas ilmu pengetahuan dan dukungan
yang telah diberikan kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
Anif Nur Artanti, selaku Pembimbing Lapangan yang telah menyediakan
waktu, tenaga, tempat tinggal, dan memberikan bimbingan selama pelaksanaan
penelitian skripsi ini.
commit to user
ix
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Istini, Haryati, dan Anif Usman selaku Pembimbing Penelitian di LPPT
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta yang telah memberikan izin penelitian, beserta
sarana, prasarana dan bantuan dalam mendapatkan data maupun ilmu yang sangat
bermanfaat bagi penulis.
Meutia Srikandi Fitriya, sahabat penelitian penulis, atas semangat, do’a,
dukungan, suka, duka, dan kerjasama yang membuat penulis pantang menyerah.
Teman-teman Biologi 2009, adalah inspirasi bagi penulis yang telah memberikan
semangat, do’a, dukungan, dan keceriaan yang telah mewarnai hidup penulis.
Semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian skripsi ini yang tidak
dapat disebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa dalam melakukan penelitian dan penyusunan skripsi
ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan masukan yang
berupa saran dan kritik yang bersifat membangun. Semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi kita semua dan pihak-pihak yang terkait.
Surakarta, Juni 2013
Penyusun
commit to user
x
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ...................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ...................................................................... iii
ABSTRAK ................................................................................................... iv
ABSTRACT ................................................................................................. v
HALAMAN MOTTO ................................................................................... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................... vii
KATA PENGANTAR .................................................................................. viii
DAFTAR ISI .................................................................................................
xi
DAFTAR TABEL ......................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xv
DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................ 1
A. Latar Belakang Masalah .......................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................. 4
C. Tujuan Penelitian ..................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ................................................................... 5
BAB II. LANDASAN TEORI ...................................................................... 6
A. Tinjauan pustaka ...................................................................... 6
1. Uji sitotoksisitas................................................................. 6
2. Sirsak (Annona muricata Linn.)
a. Deskripsi .................................................................... 8
b. Klasifikasi .................................................................... 9
c. Kandungan Senyawa Bioaktif ..................................... 10
d. Kegunaan ..................................................................... 14
commit to user
xi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
3. Kanker ................................................................................ 14
a. Definisi Kanker ............................................................ 14
b. Kanker Serviks ............................................................. 16
c. HPV ............................................................................. 17
d. Sel HeLa ...................................................................... 18
e. Apoptosis ..................................................................... 19
f. Siklus Sel ..................................................................... 21
4. Kromatografi Lapis Tipis................................................... 23
B. Kerangka Pemikiran ................................................................ 24
C. Hipotesis .................................................................................. 27
BAB III. METODE PENELITIAN ............................................................... 28
A. Waktu dan Tempat Penelitian .................................................. 28
B. Bahan dan Alat ........................................................................ 28
C. Cara Kerja ................................................................................ 29
D. Analisis Data ............................................................................ 40
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 42
A. Hasil ........................................................................................ 42
B. Pembahasan ............................................................................ 42
1. Uji Sitotoksisitas ............................................................... 43
2. Uji Kualitatif Kandungan Kimia ...................................... 58
3. Mekanisme Penghambatan Bagian Teraktif ..................... 62
BAB V. PENUTUP ...................................................................................... 69
A. Kesimpulan .............................................................................. 69
B. Saran ........................................................................................ 69
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 70
LAMPIRAN .................................................................................................. 80
RIWAYAT HIDUP PENULIS ..................................................................... 94
commit to user
xii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Halaman
TABEL 1.Tipe genital HPV ........................................................................ 17
TABEL 2. Jenis fase gerak dan pereaksi warna berbagai senyawa .............. 39
TABEL 3. Data susut pengeringan daun A. muricata................................... 42
TABEL 4. Data hasil partisi daun A. muricata ............................................. 42
TABEL 5. Prosentase kematian sel HeLa setelah perlakuan dengan empat
bagian partisi daun A. muricata dan kontrol pelarut (DMSO)
inkubasi 24 jam .......................................................................... 49
TABEL 6. Nilai LC50 empat bagian partisi daun A. muricata dan kontrol
DMSO terhadap sel HeLa inkubasi 24 jam ............................... 54
TABEL 7. Hasil deteksi kandungan senyawa kimia empat bagian partisi
daun A. muricata ......................................................................... 59
TABEL 8. Perbedaan Apoptosis dan Nekrosis ............................................. 63
commit to user
xiii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Halaman
Morfologi Annona muricata Linn. ................................................ 8
Gambar 2.
Struktur Acetogenin ...................................................................... 11
Gambar 3.
Morfologi Sel HeLa ..................................................................... 19
Gambar 4.
Siklus Sel ..................................................................................... 22
Gambar 5.
Bagan alir kerangka pemikiran..................................................... 26
Gambar 6.
Reaksi MTT menjadi formazan . .................................................. 45
Gambar 7.
Morfologi sel HeLa sebelum dansesudah diberi tripsin-EDTA.
Perbesaran 100x ............................................................................ 46
Gambar 8.
Morfologi Sel HeLa denganpenambahan tryphan blue ............... 48
Gambar 9.
Grafik hubungan prosentase kematian sel HeLa terhadap variasi
konsentrasi pada empat bagian daun A. muricata ......................... 50
Gambar 10. Persamaan regresi linear
antara log konsentrasi dengan
prosentase
kematian
bagian
kloroform,
n-heksana daun A. muricata terhadap sel HeLa. ..... 53
Gambar 11. Persamaan regresi linear
etanol-aquades,
etil
asetat,
antara log konsentrasi dengan
prosentase kematian DMSOterhadap sel HeLa. ........................... 53
Gambar 12. Morfologi sel HeLa terhadap empat bagian partisi daun A.
muricata dan kontrol DMSO pada konsentrasi 2000 µg/ml.
Perbesaran 100x. ........................................................................... 56
Gambar 13. Morfologi sel HeLa terhadap kontrol sel. Perbesaran 100x.......... 58
Gambar 14. Profil kromatografi lapis tipis deteksi glikosida........................... 60
Gambar 15. Profil kromatografi lapis tipis deteksi flavonoid.. ........................ 61
Gambar 16. Profil kromatografi lapis tipis deteksi tanin.. ............................... 62
Gambar 17. Struktur umum flavonoid . ........................................................... 64
commit to user
xiv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Komposisi media RPMI 1640 dari SIGMA-ALDIRICH. ............ 80
Lampiran 2. Data absorbansi perlakuan bagian partisi daun A. muricata pada
sel HeLa ........................................................................................ 82
Lampiran 3. Table probit .................................................................................. 84
Lampiran 4. Hasil perhitungan probit LC50 pada sel HeLa .............................. 85
Lampiran 5. Morfologi sel HeLa pada uji sitotoksik dengan pemberian empat
bagian A. muricata dan DMSO pada perbesaran 100x ................. 87
commit to user
xv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR SINGKATAN
Singkatan
Kepanjangan
BSLT
Brine Shrimp Lethality Test
CAK
Cdk-ActivatingKinase
DMSO
DNA
Dimethyl Sulfoxide
Deoxyribosa Nucleic Acid
EB-AO
Etidium Bromide-Acrydine Orange
EGCG
Epigallochatecin 3-Gallate
EGF-R
Epidermal Growth Factor Receptor
FBS
Fetal Bovine Serum
GTP
Guanosin Triphosphat
IC
Inhibitor Concentration
LBS
Location Based Service
LC
Lethal Concentration
LDL
Low Density Lipoprotein
MTT
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide
PBS
PDGF- Rβ
PMN neutrofil
rpm
RPMI
Phosphate Buffer Saline
Platelet-Drived Growth Factor Receptor
Polymorphonuclear neutrofil
revolution per menit
Roswell Park Memorial Institute
Rf
Retardaction Factor
hRf
hundred Retardaction Factor
ROS
Reactive Oxygen Species
SDS
Sodium Dodecyl Sulfate
SOD
Super Oksida Dismutase
commit to user
xvi
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS HASIL PARTISI DAUN SIRSAK
(Annona muricata Linn.) PADA SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA BAGIAN TERAKTIF
Skripsi
Untuk memenuhi sebagian persyaratan
guna memperoleh gelar Sarjana Sains
Oleh:
Eva Agustina Perwitasari
NIM :
M 0409019
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2013
commit to user
i
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya sendiri
dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan
di suatu perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis
atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu dalam naskah ini dan
disebutkan dalam daftar pustaka.
Apabila di kemudian hari dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka gelar
kesarjanaan yang telah diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.
Surakarta, 11 Juni 2013
Eva Agustina Perwitasari
NIM. M 0409019
commit to user
iii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS HASIL PARTISI DAUN SIRSAK
(Annona muricata Linn.) PADA SEL HELA SECARA IN VITRO
DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA BAGIAN TERAKTIF
EVA AGUSTINA PERWITASARI
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta
ABSTRAK
Kanker serviks merupakan salah satu kanker penyebab kematian terbesar di
negara berkembang. Berbagai metode pengobatan penyakit kanker di bidang medis
telah dikembangkan, namun terapi yang digunakan dianggap belum efektif sebagai
antikanker karena banyak menimbulkan efek samping. Annona muricata Linn.
merupakan salah satu sumber senyawa-senyawa baru yang memiliki aktivitas
farmakologis.Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik hasil partisi
daun sirsak (Annona muricata Linn.) pada kultur sel HeLa secara in vitro dan profil
kandungan kimia bagian teraktif.
Penelitian diawali dengan ekstraksi menggunakan etanol 96 % dan partisi
dengan corong pisah menggunakan berbagai pelarut yaitu, etil asetat, kloroform, dan
n-heksana. Uji sitotoksisitas ditunjukkan dengan metode MTT(3-4(4,5-dimetil-diazol2-il)-2,5-dipheniltetrazolium bromid) menggunakan parameter LC50 (µg/ml), yaitu
konsentrasi senyawa uji yang dapat menghambat 50% pertumbuhan sel. Uji
sitotoksisitas dilakukan dengan menginkubasi sel HeLa kepadatan 2.104 dengan
perlakuan ekstrak kadar 15,625; 31,25; 62,5; 125; 250; 500; 1000; 2000 µg/ml selama
24 jam.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa bagian etil asetat memiliki aktivitas
sitotoksisitas paling tinggi terhadap kultur sel HeLa dengan nilai LC50 sebesar 3,810
µg/ml.Nilai LC50 bagian n-heksana, kloroform, dan etanol-aquades berturut-turut
12,67 µg/ml, 113,76 µg/ml, dan 26181,83 µg/ml. Profil kandungan kimia bagian
teraktif etil asetat terdeteksi adanya senyawa flavonoid, tanin, dan glikosida.
Kata Kunci: Annona muricata Linn., senyawa bioaktif, uji sitotoksik, sel HeLa,
Lethal Concentration50
commit to user
iv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
THE RESULT OF CYTOTOXICITY ASSAY PARTITION SOURSOP
LEAVES (Annona muricata Linn.) ON HELA CELL LINE BASED
ON THE IN VITRO AND THE ACTIVE PART OF CHEMICAL PROFILE
EVA AGUSTINA PERWITASARI
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Sebelas Maret University, Surakarta
ABSTRACT
Cervical cancer is one of the biggest causes of deaths in developing countries.
There are various methods of cancer treatment in the medical field have been
developed, but the therapy is ineffective because it has many side effects. Annona
muricata Linn. is the one source of new compounds with pharmacological activity.
The study aims to determine the cytotoxic effect of the partition result of soursop leaf
(Annona muricata Linn.) on HeLa cell line based on in vitro and the chemical profile
of active part.
The research was initiated by extraction using ethanol 96% and partition by
separating funnel using a various solvents such as ethyl acetate, chloroform, and nhexane. Cytotoxicity assay demonstrated with MTT method (3-4(4,5-dimetil-diazol2-il)-2,5-dipheniltetrazolium bromid) using parameters LC50 (µg/ml), the
concentration of compound test that can inhibite 50% cell growth. Cytotoxicity assay
demonstrated by incubating HeLa cell at a density of 2.104 with extract treatment
levels 15,625; 31,25; 62,5; 125; 250; 500; 1000; 2000 µg/ml for 24 hours.
This result showed that the ethyl acetate part has high cytotoxic activity to
HeLa cell line with LC50 values of 3,810 µg/ml. The LC50 value parts of n-hexane,
chloroform, and ethanol-aquades respectively 12,67 µg/ml, 113,76 µg/ml, and
26181,83 µg/ml. The profile of the chemical constituents in the ethyl acetate part
detects flavonoids, tannins, and glycosides.
Keywords: Annona muricata Linn., bioactive compound, cytotoxic assay, HeLa cell
line, Lethal Concentration50
commit to user
v
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
MOTTO
Bagi orang-orang yang sabar, pahit getir di awal, insya Allah lezat membahagiakan
diujungnya.
(Darwis Tere Liye)
Anda tidak harus kaya untuk mencapai potensi anda.
(Barrack Obama)
Ketergesaan dalam setiap usaha membawa kegagalan.
(Herodotus)
Learn from yesterday, Live for today, Hope for tomorrow.
Failure isn’t an option, it’s a choice.
(Tidy Giwangkara Dyaksa)
Allah selalu bersama kita.
commit to user
vi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERSEMBAHAN
Semakin tua raga...
Semakin ringkih rasa...
Semakin sunyi tawa...
Semakin dingin terasa...
Senyum kita bangkitkan mereka
Genggaman kita kuatkan mereka
Pelukan kita hangatkan mereka
Mereka yang tercinta....
Dengan haru dan bangga, kupersembahkan tulisan ini kepada:
Allah SWT, Sang Maha Pengasih dan Penyayang
Bapak dan Ibu tercinta, terimakasih atas pelukan, dorongan, dan doa yang tak
pernah hilang dihapus masa
Adikku tercinta, semoga kita bisa tetap membanggakan dan sukses bersama
Tidy Giwangkara, atas tangis, tawa, dan peluh yang selalu kita bagi berdua
Sahabat-sahabatku MIPA BIOLOGI UNS 2009, i will miss you guys, keep
istiqomah ☺
Serta para pihak yang senantiasa membantu kelancaran penulisan skripsi ini.
“Lemah teles, Gusti Allah ingkang mbales”
commit to user
vii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim...
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas semua nikmat dan
rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi
yang berjudul: “Uji Sitotoksisitas Hasil Partisi Daun Sirsak (Annona muricata
Linn.) pada Sel HeLa secara In Vitro dan Profil Kandungan Kimia Bagian
Teraktif”. Shalawat dan salam senantiasa tercurah kepada Rasulullah Muhammad
SAW. Penyusunan skripsi ini merupakan suatu syarat untuk memperoleh gelar
kesarjanaan strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Penulis menyadari bahwa dalam penelitian maupun penyusunan skripsi ini
penulis telah mendapatkan banyak masukan, bantuan baik secara moril, material, dan
bimbingan dari berbagai pihak yang sangat berguna dan bermanfaat baik secara
langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
Prof. Ir. Ari Handono Ramelan, M.Sc.(Hons)., Ph.D., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta yang
telah memberikan dukungan dan dorongan.
HIBAH UNGGULAN DIKTI 2012 atas kesempatan dan fasilitas yang
diberikan sehingga penelitian ini dapat berjalan hingga selesainya penyusunan
skripsi.
commit to user
viii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Dr. Agung Budiharjo, M.Si., selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta yang
telah memberikan izin dan dukungannya selama penelitian.
Dra. Noor Soesanti Handajani, M.Si., selaku Dosen Pembimbing I yang telah
membimbing, memberi saran dan mendukung penulis selama penelitian sampai
selesainya penyusunan skripsi ini.
Prof. Dr. Okid Parama Astirin, M.S., selaku Pembimbing II yang telah
memberikan proyek penelitian, bimbingan, saran, dan mendukung penulis selama
penelitian sampai selesainya penyusunan skripsi ini.
Estu Retnaningtyas N, S.TP.,M.Si., selaku Penguji I yang telah memberikan
bimbingan dan petunjuknya hingga terselesaikannya penyusunan skripsi ini.
Dra. Marti Harini, M.Si., selaku Penguji II, yang telah memberikan bimbingan
dan petunjuknya hingga terselesaikannya penyusunan skripsi ini.
Prof. Dr. Sugiyarto, M.Si., selaku Pembimbing Akademik atas segala
perhatian, dukungan, saran, dan semangat yang selalu diberikan kepada penulis.
Dosen-dosen di Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta atas ilmu pengetahuan dan dukungan
yang telah diberikan kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
Anif Nur Artanti, selaku Pembimbing Lapangan yang telah menyediakan
waktu, tenaga, tempat tinggal, dan memberikan bimbingan selama pelaksanaan
penelitian skripsi ini.
commit to user
ix
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Istini, Haryati, dan Anif Usman selaku Pembimbing Penelitian di LPPT
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta yang telah memberikan izin penelitian, beserta
sarana, prasarana dan bantuan dalam mendapatkan data maupun ilmu yang sangat
bermanfaat bagi penulis.
Meutia Srikandi Fitriya, sahabat penelitian penulis, atas semangat, do’a,
dukungan, suka, duka, dan kerjasama yang membuat penulis pantang menyerah.
Teman-teman Biologi 2009, adalah inspirasi bagi penulis yang telah memberikan
semangat, do’a, dukungan, dan keceriaan yang telah mewarnai hidup penulis.
Semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian skripsi ini yang tidak
dapat disebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa dalam melakukan penelitian dan penyusunan skripsi
ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan masukan yang
berupa saran dan kritik yang bersifat membangun. Semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi kita semua dan pihak-pihak yang terkait.
Surakarta, Juni 2013
Penyusun
commit to user
x
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ...................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ...................................................................... iii
ABSTRAK ................................................................................................... iv
ABSTRACT ................................................................................................. v
HALAMAN MOTTO ................................................................................... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................... vii
KATA PENGANTAR .................................................................................. viii
DAFTAR ISI .................................................................................................
xi
DAFTAR TABEL ......................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xv
DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................ 1
A. Latar Belakang Masalah .......................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................. 4
C. Tujuan Penelitian ..................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ................................................................... 5
BAB II. LANDASAN TEORI ...................................................................... 6
A. Tinjauan pustaka ...................................................................... 6
1. Uji sitotoksisitas................................................................. 6
2. Sirsak (Annona muricata Linn.)
a. Deskripsi .................................................................... 8
b. Klasifikasi .................................................................... 9
c. Kandungan Senyawa Bioaktif ..................................... 10
d. Kegunaan ..................................................................... 14
commit to user
xi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
3. Kanker ................................................................................ 14
a. Definisi Kanker ............................................................ 14
b. Kanker Serviks ............................................................. 16
c. HPV ............................................................................. 17
d. Sel HeLa ...................................................................... 18
e. Apoptosis ..................................................................... 19
f. Siklus Sel ..................................................................... 21
4. Kromatografi Lapis Tipis................................................... 23
B. Kerangka Pemikiran ................................................................ 24
C. Hipotesis .................................................................................. 27
BAB III. METODE PENELITIAN ............................................................... 28
A. Waktu dan Tempat Penelitian .................................................. 28
B. Bahan dan Alat ........................................................................ 28
C. Cara Kerja ................................................................................ 29
D. Analisis Data ............................................................................ 40
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 42
A. Hasil ........................................................................................ 42
B. Pembahasan ............................................................................ 42
1. Uji Sitotoksisitas ............................................................... 43
2. Uji Kualitatif Kandungan Kimia ...................................... 58
3. Mekanisme Penghambatan Bagian Teraktif ..................... 62
BAB V. PENUTUP ...................................................................................... 69
A. Kesimpulan .............................................................................. 69
B. Saran ........................................................................................ 69
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 70
LAMPIRAN .................................................................................................. 80
RIWAYAT HIDUP PENULIS ..................................................................... 94
commit to user
xii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Halaman
TABEL 1.Tipe genital HPV ........................................................................ 17
TABEL 2. Jenis fase gerak dan pereaksi warna berbagai senyawa .............. 39
TABEL 3. Data susut pengeringan daun A. muricata................................... 42
TABEL 4. Data hasil partisi daun A. muricata ............................................. 42
TABEL 5. Prosentase kematian sel HeLa setelah perlakuan dengan empat
bagian partisi daun A. muricata dan kontrol pelarut (DMSO)
inkubasi 24 jam .......................................................................... 49
TABEL 6. Nilai LC50 empat bagian partisi daun A. muricata dan kontrol
DMSO terhadap sel HeLa inkubasi 24 jam ............................... 54
TABEL 7. Hasil deteksi kandungan senyawa kimia empat bagian partisi
daun A. muricata ......................................................................... 59
TABEL 8. Perbedaan Apoptosis dan Nekrosis ............................................. 63
commit to user
xiii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Halaman
Morfologi Annona muricata Linn. ................................................ 8
Gambar 2.
Struktur Acetogenin ...................................................................... 11
Gambar 3.
Morfologi Sel HeLa ..................................................................... 19
Gambar 4.
Siklus Sel ..................................................................................... 22
Gambar 5.
Bagan alir kerangka pemikiran..................................................... 26
Gambar 6.
Reaksi MTT menjadi formazan . .................................................. 45
Gambar 7.
Morfologi sel HeLa sebelum dansesudah diberi tripsin-EDTA.
Perbesaran 100x ............................................................................ 46
Gambar 8.
Morfologi Sel HeLa denganpenambahan tryphan blue ............... 48
Gambar 9.
Grafik hubungan prosentase kematian sel HeLa terhadap variasi
konsentrasi pada empat bagian daun A. muricata ......................... 50
Gambar 10. Persamaan regresi linear
antara log konsentrasi dengan
prosentase
kematian
bagian
kloroform,
n-heksana daun A. muricata terhadap sel HeLa. ..... 53
Gambar 11. Persamaan regresi linear
etanol-aquades,
etil
asetat,
antara log konsentrasi dengan
prosentase kematian DMSOterhadap sel HeLa. ........................... 53
Gambar 12. Morfologi sel HeLa terhadap empat bagian partisi daun A.
muricata dan kontrol DMSO pada konsentrasi 2000 µg/ml.
Perbesaran 100x. ........................................................................... 56
Gambar 13. Morfologi sel HeLa terhadap kontrol sel. Perbesaran 100x.......... 58
Gambar 14. Profil kromatografi lapis tipis deteksi glikosida........................... 60
Gambar 15. Profil kromatografi lapis tipis deteksi flavonoid.. ........................ 61
Gambar 16. Profil kromatografi lapis tipis deteksi tanin.. ............................... 62
Gambar 17. Struktur umum flavonoid . ........................................................... 64
commit to user
xiv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Komposisi media RPMI 1640 dari SIGMA-ALDIRICH. ............ 80
Lampiran 2. Data absorbansi perlakuan bagian partisi daun A. muricata pada
sel HeLa ........................................................................................ 82
Lampiran 3. Table probit .................................................................................. 84
Lampiran 4. Hasil perhitungan probit LC50 pada sel HeLa .............................. 85
Lampiran 5. Morfologi sel HeLa pada uji sitotoksik dengan pemberian empat
bagian A. muricata dan DMSO pada perbesaran 100x ................. 87
commit to user
xv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR SINGKATAN
Singkatan
Kepanjangan
BSLT
Brine Shrimp Lethality Test
CAK
Cdk-ActivatingKinase
DMSO
DNA
Dimethyl Sulfoxide
Deoxyribosa Nucleic Acid
EB-AO
Etidium Bromide-Acrydine Orange
EGCG
Epigallochatecin 3-Gallate
EGF-R
Epidermal Growth Factor Receptor
FBS
Fetal Bovine Serum
GTP
Guanosin Triphosphat
IC
Inhibitor Concentration
LBS
Location Based Service
LC
Lethal Concentration
LDL
Low Density Lipoprotein
MTT
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide
PBS
PDGF- Rβ
PMN neutrofil
rpm
RPMI
Phosphate Buffer Saline
Platelet-Drived Growth Factor Receptor
Polymorphonuclear neutrofil
revolution per menit
Roswell Park Memorial Institute
Rf
Retardaction Factor
hRf
hundred Retardaction Factor
ROS
Reactive Oxygen Species
SDS
Sodium Dodecyl Sulfate
SOD
Super Oksida Dismutase
commit to user
xvi