UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI DAUN SIRSAK (Annona muricataL.) TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO DAN PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF.
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO DAN
PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF
Skripsi
Untuk memenuhi sebagian persyaratan
guna memperoleh gelar Sarjana Sains
Oleh:
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2013
commit to user
i
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya
sendiri dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar
kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu
dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Apabila di kemudian hari
dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka gelar kesarjanaan yang telah
diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.
Surakarta, Juni 2013
Meutia Srikandi Fitria
NIM. M 0409037
commit to user
iii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO DAN
PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta
ABSTRAK
Kanker serviks adalah salah satu jenis kanker yang memiliki potensi
penyebab kematian besar. Penggunaan obat-obat kemoterapi lebih banyak
menimbulkan efek samping bagi penderita kanker. Penggunaan obat bahan alam
merupakan salah satu alternatif untuk penyakit kanker, salah satunya adalah daun
sirsak (Annona muricata L.). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek
sitotoksisitas, nilai LC50 fraksi aktif daun sirsak (A. muricata L.), dan mengetahui
profil kandungan kimia fraksi teraktif daun sirsak (A. muricata L.) terhadap sel
HeLa secara in vitro.
Daun A. muricata L. diekstraksi dengan n-heksan, kloroform, etil asetat,
dan etanol 96 %. Setiap ekstrak diuji sitotoksik terhadap sel HeLa dengan metode
MTT {3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide} Assay.
Ekstrak teraktif difraksinasi menggunakan Vacum Liquid Chromatography (VLC)
dengan pelarut n-heksan dan etil asetat yaitu fraksi F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, dan
F8. Setiap fraksi diuji sitotoksisitasnya terhadap sel HeLa dengan metode MTT.
Ekstrak teraktif dan fraksi teraktif ditentukan kandungan senyawa kimianya
menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Hasil dari penelitian menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan merupakan
ekstrak teraktif dengan nilai LC50 terendah yaitu 0,436 µg/mL. Fraksi yang paling
aktif menghambat pertumbuhan sel HeLa adalah F6 dengan nilai LC50 terendah
yaitu 0,687 µg/mL. Berdasarkan nilai LC50 disimpulkan bahwa fraksi daun sirsak
bersifat sitotoksik terhadap sel HeLa.
Kata kunci: Kanker serviks, Annona muricata L., sel HeLa, VLC, MTT Assay,
KLT.
commit to user
iv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
CYTOTOXICITY ASSAY OF SOURSOP LEAVES (Annona muricata L.)
FRACTION ON HELA CELL LINE IN VITRO AND THEIR ACTIVE
FRACTION CHEMICAL PROFILE
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Sebelas Maret University, Surakarta
ABSTRACT
Cervical cancer is one type of cancer that has great potential death. The
use of chemotherapeutic drugs cause more side effects for cancer patients. The use
of natural ingredients drugs is an alternative for cancer, which one is leaves of
soursop (Annona muricata L). This study aimed to determine the effect of
cytotoxicity, the active fraction LC50 value soursop leaves (A. muricata L.), and
determine the fraction of active chemical constituents profile soursop leaves
(A. muricata L.) against HeLa cells in vitro.
A. muricata L. leaves were extracted in n-hexane, chloroform, ethyl
acetate, and ethanol 96%. Each extract was tested cytotoxic on HeLa cells using
MTT method {3 (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide}
assay. Active extracts were fractionated using Vacuum Liquid Chromatography
(VLC) in n-hexane and ethyl acetate solvent. The fractions are F1, F2, F3, F4, F5,
F6, F7, and F8. Cytoxicity test of each fraction was carried out on HeLa Cells
using MTT method. Chemical content of active extracts and fractions were
determined using Thin Layer Chromatography (TLC).
The study resulted that soursoup leaves extracted in the n-hexane solvent
is the most active extract. Its lowest LC50 value is 0.436 µg/mL. F6 is the most
active fraction that inhibited HeLa Cells growth. Its lowest LC50 level is
0.687 µg/mL, thus the soursop leaf fraction is cytotoxic on HeLa Cells.
Keyword: Cervical cancer, Annona muricata L., HeLa Cell, VLC, MTT Assay,
TLC.
commit to user
v
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
MOTTO
”Menghargai orang lain, sama dengan menghargai diri sendiri”
” Berusahalah untuk tidak menjadi manusia yang berhasil tapi berusahalah
menjadi manusia yang berguna. ~ Einstein”
“Kita harus percaya tidak ada yang sia-sia dari apa yang kita lakukan dalam
proses pencapaian tujuan”
commit to user
vi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERSEMBAHAN
Skripsi ini kupersembahkan untuk:
Allah SWT atas segala rahmat-Nya
Bapak dan Ibu atas doa dan kasih sayang yang tidak
terhingga
Adik-adikku Bima, Shinta, dan Arjuna yang senantiasa
member semangat dan doa
Andi yang selalu memberi motivasi dan doa
Kawanku Eva Agustina P. yang berbagi suka dan duka
selama penelitian
Sahabat-sahabatku Lilis, Ratna, Isna, Sovia, Nat, Ida,
Siti, dan Puput
Teman seperjuangan di Jurusan Biologi FMIPA UNS
Almamater tercinta
commit to user
vii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberi limpahan rahmat
dan hidayah sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi yang berjudul “Uji Sitotoksisitas Fraksi Daun Sirsak (Annona muricata
L.) Terhadap Sel Hela secara In Vitro dan Profil Kandungan Kimia Fraksi
Teraktif”. Penyusunan skripsi ini merupakan suatu syarat untuk memperoleh
gelar kesarjanaan strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Dalam melakukan penelitian maupun penyusunan skripsi ini, penulis telah
mendapatkan saran, bantuan, dan bimbingan dari berbagai pihak yang sangat
berguna dan bermanfaat secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu,
pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
Prof. Ir. Ari Handoko Ramelan, M.Sc. (Hons)., Ph.D., selaku Dekan
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret,
Surakarta yang telah memberikan dukungan dan dorongan.
Hibah Penelitian Unggulan DIKTI 2012 atas kesempatan dan fasilitas
yang diberikan sehingga penelitian ini dapat berjalan hingga selesainya penyusunan
skripsi.
Dr. Agung Budiharjo, M. Si., selaku Ketua Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta
yang telah memberikan izin dan dukungannya selama penelitian.
commit to user
viii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Prof. Dr. Okid Parama Astirin, M. S selaku dosen pembimbing I yang
telah memberikan proyek penelitian, bimbingan, dan dukungan baik secara moril
maupun materiil.
Estu Retnaningtyas N., S.TP, M.Si selaku dosen pembimbing II yang telah
memberikan saran, bimbingan, dan semangat dari awal penelitian hingga
terselesaikannya penyusunan skripsi.
Dra. Marti Harini, M. Si selaku dosen penelaah I yang telah memberikan
saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.
Dr. Tetri Widiyani, M. Si selaku dosen penelaah II yang telah memberikan
saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.
Widya Mudyantini, M.Si selaku dosen pembimbing akademik dan seluruh
dosen Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret Surakarta yang telah memberi dukungan dan
bimbingan selama masa perkuliahan.
Anif Nur Artanti, S. Farm., Apt, selaku dosen pembimbing lapangan yang
telah membimbing dan memberikan saran selama penelitian berlangsung.
Ibu Istini, Ibu Haryati, dan Bapak Anif Usman selaku teknisi di
Laboratorium Pusat Penelitian Terpadu, Universitas Gajah Mada yang membantu
dalam penelitian.
Eva Agustina Perwitasari selaku teman seperjuangan dalam penelitian ini
yang saling membantu dan memberi semangat selama penelitian berlangsung.
Teman-teman seperjuangan di Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta atas doa dan
commit to user
ix
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
dukungan selama masa perkuliahan serta semua pihak yang tidak dapat
disebutkan satu per satu yang telah memberikan bantuannya.
Penulis menyadari bahwa dalam melakukan penelitian dan penyusunan
skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, masukan yang berupa saran
dan kritik yang membangun dari pembaca akan sangat membantu. Semoga skripsi
ini bisa bermanfaat bagi kita semua dan pihak-pihak yang terkait.
Surakarta,
Juni 2013
Penyusun
commit to user
x
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ...................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................... iii
ABSTRAK .................................................................................................... iv
ABSTRACT ..................................................................................................... v
HALAMAN MOTTO ...................................................................................... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... vii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... viii
DAFTAR ISI ................................................................................................. xi
DAFTAR TABEL ......................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xv
DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................ 1
A. Latar Belakang Masalah ............................................................... 1
B. Perumusan Masalah ...................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian .......................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian........................................................................ 4
BAB II. LANDASAN TEORI ...................................................................... 6
A. Tinjauan pustaka ........................................................................ 6
1. Sirsak (Annona muricata L.)
6
6
a. Klasifikasi
b. Definisi
7
c. Kandungan senyawa aktif
8
2. Kanker
10
3. Kanker Serviks
11
4. Human Papilloma Virus (HPV)
12
5. Sel HeLa
14
6. Apoptosis
15
7. Siklus Sel
17
8. Sitotoksik
19
9. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
20
B. Kerangka Pemikiran ................................................................... 22
C. Hipotesis ..................................................................................... 25
BAB III. METODE PENELITIAN .............................................................. 26
A. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................... 26
B. Alat dan Bahan .......................................................................... 26
C. Cara Kerja.................................................................................. 28
D. Analisis Data ............................................................................. 35
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 37
A. Ekstraksi .................................................................................... 37
B. Uji Sitotoksisitas ........................................................................ 37
C. Deteksi Kandungan Senyawa Ekstrak Teraktif ......................... 46
commit to user
xi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
D. Fraksinasi dan Uji Sitotoksisitas Fraksi ....................................
E. Deteksi Kandungan Senyawa Fraksi Teraktif ...........................
BAB V. PENUTUP......................................................................................
A. Kesimpulan................................................................................
B. Saran ..........................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................
LAMPIRAN ..................................................................................................
RIWAYAT HIDUP PENULIS .....................................................................
commit to user
xii
53
61
67
67
67
68
75
94
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Tabel 1.
Halaman
Hasil uji KLT ekstrak n-heksan hasil ekstraksi dengan
49
berbagai pereaksi semprot (uji)
Tabel 2.
Fase gerak yang digunakan dalam fraksinasi ekstrak
n-heksan daun sirsak dengan metode VLC dan berat kering
fraksi yang diperoleh
54
Tabel 3.
Hasil uji sitotoksisitas fraksi aktif (F1 - F4) daun sirsak
terhadap sel HeLa
57
Tabel 4.
Hasil uji sitotoksisitas fraksi aktif (F5 - F8 dan DMSO)
daun sirsak terhadap sel HeLa.
57
Tabel 5.
Hasil uji KLT fraksi aktif
semprot.
dengan berbagai pereaksi
63
Tabel 6.
Hasil uji KLT fraksi teraktif (5 – 6) dengan berbagai
pereaksi semprot
64
commit to user
xiii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GAMBAR
Halaman
7
Gambar 1.
Tanaman Sirsak (A. muricata L.)
Gambar 2.
Struktur dasar steroida dan sistem penomorannya
9
Gambar 3.
Struktur kimia dari acetogenin Annonaceae
10
Gambar 4.
Morfologi Human Papilloma Virus
13
Gambar 5.
Tahap-tahap apoptosis sel kanker
16
Gambar 6.
Siklus Sel
18
Gambar 7.
Bagan alur kerangka pemikiran
24
Gambar 8.
Perubahan MTT menjadi formazan dalam mitokondria
sel hidup
39
Gambar 9.
Sel yang hidup membentuk kristal formazan
39
Gambar 10.
(a) sel HeLa sebelum diberi tripsin, (b) sel HeLa setelah
diberi tripsin pada perbesaran 100 kali.
40
Gambar 11.
Morfologi sel HeLa pada saat perhitungan dengan
hemocytometer pada mikroskop cahaya dengan
perbesaran 100 kali.
41
Gambar 12.
Morfologi sel HeLa setelah penambahan ekstrak pada
perbesaran 100x dengan konsentrasi 2000 µg/mL.
42
Gambar 13.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi sampel.
44
Gambar 14.
Profil kromatogram ekstrak n-heksan daun sirsak
dengan berbagai metode kromatografi lapis tipis untuk
masing-masing senyawa.
47
Gambar 15.
Profil kromatogram ekstrak n-heksan daun sirsak
dengan berbagai metode kromatografi lapis tipis untuk
masing-masing senyawa.
48
Gambar 16.
Profil kromatogram penggabungan fraksi
fraksinasi dari ekstrak n-heksan daun sirsak
hasil
55
Gambar 17.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi fraksi aktif (F1 - F4) daun sirsak (A.
muricata L.).
59
Gambar 18.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi fraksi aktif (F5 – F8 dan DMSO) daun
sirsak (A. muricata L.)
60
Gambar 19.
Profil kromatogram fraksi 6 daun sirsak dengan
berbagai pereaksi semprot
63
commit to user
xiv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
75
Lampiran 1.
Komposisi media RPMI 1640 dari SIGMAALDIRICH
Lampiran 2.
Morfologi sel HeLa pada Uji Sitotoksisitas dengan
pemberian ekstrak etil asetat, etanol 96%, n-heksan,
dan kloroform pada konsentrasi: A. 2000; B. 1000; C.
500; D. 250; E. 125; F. 62,5; G. 31,25; H.
15,625µg/mL.
76
Lampiran 3.
Data absorbansi perlakuan setiap ekstrak pada sel
HeLa
81
Lampiran 4.
Hasil perhitungan % kematian ekstrak daun sirsak
pada sel HeLa
82
Lampiran 5.
Perhitungan nilai LC50 ekstrak terhadap sel HeLa
82
Lampiran 6.
Morfologi sel HeLa pada Uji Sitotoksisitas dengan
pemberian Fraksi 1, Fraksi 2, Fraksi 3, Fraksi 4, Fraksi
5, Fraksi 6, Fraksi7, dan Fraksi 8 pada konsentrasi : A.
2000; B. 1000; C. 500; D. 250; E. 125; F. 62,5 µg/mL.
84
Lampiran 7.
Data absorbansi perlakuan setiap fraksi pada sel HeLa
91
Lampiran 8.
Perhitungan nilai LC50 fraksi aktif daun sirsak
terhadap sel HeLa.
92
commit to user
xv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR SINGKATAN
Singkatan
Kepanjangan
DMSO
Dimethyl Sulfoxide
FBS
Fetal Bovine Serum
HPV
Human Papillomavirus
IHC
Immunohistochemistry
LC
Lethal Concentration
MTT
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide
NADP
Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate
PBS
Phosphate Buffer Saline
PCD
Programmed Cell Death
rpm
revolution per menit
RPMI
Rf
Roswell Park Memorial Institute
Refarandum factor
SDS
Sodium Dodecyl Sulfate
TNF
Tumor Necrosis Factor
TNFR
UV
WST-1
Tumor Necrosis Factor Receptor
Ultraviolet
4-[3-[4-iodofenil]-2-[4-nitro-fenil-2H-5-tetrazolio]1,3-benzendisulfonat]
commit to user
xvi
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO DAN
PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF
Skripsi
Untuk memenuhi sebagian persyaratan
guna memperoleh gelar Sarjana Sains
Oleh:
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2013
commit to user
i
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil penelitian saya
sendiri dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar
kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu
dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Apabila di kemudian hari
dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka gelar kesarjanaan yang telah
diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.
Surakarta, Juni 2013
Meutia Srikandi Fitria
NIM. M 0409037
commit to user
iii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
UJI SITOTOKSISITAS FRAKSI DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
TERHADAP SEL HELA SECARA IN VITRO DAN
PROFIL KANDUNGAN KIMIA FRAKSI TERAKTIF
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta
ABSTRAK
Kanker serviks adalah salah satu jenis kanker yang memiliki potensi
penyebab kematian besar. Penggunaan obat-obat kemoterapi lebih banyak
menimbulkan efek samping bagi penderita kanker. Penggunaan obat bahan alam
merupakan salah satu alternatif untuk penyakit kanker, salah satunya adalah daun
sirsak (Annona muricata L.). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek
sitotoksisitas, nilai LC50 fraksi aktif daun sirsak (A. muricata L.), dan mengetahui
profil kandungan kimia fraksi teraktif daun sirsak (A. muricata L.) terhadap sel
HeLa secara in vitro.
Daun A. muricata L. diekstraksi dengan n-heksan, kloroform, etil asetat,
dan etanol 96 %. Setiap ekstrak diuji sitotoksik terhadap sel HeLa dengan metode
MTT {3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide} Assay.
Ekstrak teraktif difraksinasi menggunakan Vacum Liquid Chromatography (VLC)
dengan pelarut n-heksan dan etil asetat yaitu fraksi F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, dan
F8. Setiap fraksi diuji sitotoksisitasnya terhadap sel HeLa dengan metode MTT.
Ekstrak teraktif dan fraksi teraktif ditentukan kandungan senyawa kimianya
menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Hasil dari penelitian menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan merupakan
ekstrak teraktif dengan nilai LC50 terendah yaitu 0,436 µg/mL. Fraksi yang paling
aktif menghambat pertumbuhan sel HeLa adalah F6 dengan nilai LC50 terendah
yaitu 0,687 µg/mL. Berdasarkan nilai LC50 disimpulkan bahwa fraksi daun sirsak
bersifat sitotoksik terhadap sel HeLa.
Kata kunci: Kanker serviks, Annona muricata L., sel HeLa, VLC, MTT Assay,
KLT.
commit to user
iv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
CYTOTOXICITY ASSAY OF SOURSOP LEAVES (Annona muricata L.)
FRACTION ON HELA CELL LINE IN VITRO AND THEIR ACTIVE
FRACTION CHEMICAL PROFILE
Meutia Srikandi Fitria
M0409037
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Sebelas Maret University, Surakarta
ABSTRACT
Cervical cancer is one type of cancer that has great potential death. The
use of chemotherapeutic drugs cause more side effects for cancer patients. The use
of natural ingredients drugs is an alternative for cancer, which one is leaves of
soursop (Annona muricata L). This study aimed to determine the effect of
cytotoxicity, the active fraction LC50 value soursop leaves (A. muricata L.), and
determine the fraction of active chemical constituents profile soursop leaves
(A. muricata L.) against HeLa cells in vitro.
A. muricata L. leaves were extracted in n-hexane, chloroform, ethyl
acetate, and ethanol 96%. Each extract was tested cytotoxic on HeLa cells using
MTT method {3 (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide}
assay. Active extracts were fractionated using Vacuum Liquid Chromatography
(VLC) in n-hexane and ethyl acetate solvent. The fractions are F1, F2, F3, F4, F5,
F6, F7, and F8. Cytoxicity test of each fraction was carried out on HeLa Cells
using MTT method. Chemical content of active extracts and fractions were
determined using Thin Layer Chromatography (TLC).
The study resulted that soursoup leaves extracted in the n-hexane solvent
is the most active extract. Its lowest LC50 value is 0.436 µg/mL. F6 is the most
active fraction that inhibited HeLa Cells growth. Its lowest LC50 level is
0.687 µg/mL, thus the soursop leaf fraction is cytotoxic on HeLa Cells.
Keyword: Cervical cancer, Annona muricata L., HeLa Cell, VLC, MTT Assay,
TLC.
commit to user
v
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
MOTTO
”Menghargai orang lain, sama dengan menghargai diri sendiri”
” Berusahalah untuk tidak menjadi manusia yang berhasil tapi berusahalah
menjadi manusia yang berguna. ~ Einstein”
“Kita harus percaya tidak ada yang sia-sia dari apa yang kita lakukan dalam
proses pencapaian tujuan”
commit to user
vi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PERSEMBAHAN
Skripsi ini kupersembahkan untuk:
Allah SWT atas segala rahmat-Nya
Bapak dan Ibu atas doa dan kasih sayang yang tidak
terhingga
Adik-adikku Bima, Shinta, dan Arjuna yang senantiasa
member semangat dan doa
Andi yang selalu memberi motivasi dan doa
Kawanku Eva Agustina P. yang berbagi suka dan duka
selama penelitian
Sahabat-sahabatku Lilis, Ratna, Isna, Sovia, Nat, Ida,
Siti, dan Puput
Teman seperjuangan di Jurusan Biologi FMIPA UNS
Almamater tercinta
commit to user
vii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberi limpahan rahmat
dan hidayah sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi yang berjudul “Uji Sitotoksisitas Fraksi Daun Sirsak (Annona muricata
L.) Terhadap Sel Hela secara In Vitro dan Profil Kandungan Kimia Fraksi
Teraktif”. Penyusunan skripsi ini merupakan suatu syarat untuk memperoleh
gelar kesarjanaan strata 1 (S1) pada Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Dalam melakukan penelitian maupun penyusunan skripsi ini, penulis telah
mendapatkan saran, bantuan, dan bimbingan dari berbagai pihak yang sangat
berguna dan bermanfaat secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu,
pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
Prof. Ir. Ari Handoko Ramelan, M.Sc. (Hons)., Ph.D., selaku Dekan
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret,
Surakarta yang telah memberikan dukungan dan dorongan.
Hibah Penelitian Unggulan DIKTI 2012 atas kesempatan dan fasilitas
yang diberikan sehingga penelitian ini dapat berjalan hingga selesainya penyusunan
skripsi.
Dr. Agung Budiharjo, M. Si., selaku Ketua Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta
yang telah memberikan izin dan dukungannya selama penelitian.
commit to user
viii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Prof. Dr. Okid Parama Astirin, M. S selaku dosen pembimbing I yang
telah memberikan proyek penelitian, bimbingan, dan dukungan baik secara moril
maupun materiil.
Estu Retnaningtyas N., S.TP, M.Si selaku dosen pembimbing II yang telah
memberikan saran, bimbingan, dan semangat dari awal penelitian hingga
terselesaikannya penyusunan skripsi.
Dra. Marti Harini, M. Si selaku dosen penelaah I yang telah memberikan
saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.
Dr. Tetri Widiyani, M. Si selaku dosen penelaah II yang telah memberikan
saran dan masukan hingga terselesaikannya penyusunan skripsi.
Widya Mudyantini, M.Si selaku dosen pembimbing akademik dan seluruh
dosen Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sebelas Maret Surakarta yang telah memberi dukungan dan
bimbingan selama masa perkuliahan.
Anif Nur Artanti, S. Farm., Apt, selaku dosen pembimbing lapangan yang
telah membimbing dan memberikan saran selama penelitian berlangsung.
Ibu Istini, Ibu Haryati, dan Bapak Anif Usman selaku teknisi di
Laboratorium Pusat Penelitian Terpadu, Universitas Gajah Mada yang membantu
dalam penelitian.
Eva Agustina Perwitasari selaku teman seperjuangan dalam penelitian ini
yang saling membantu dan memberi semangat selama penelitian berlangsung.
Teman-teman seperjuangan di Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret Surakarta atas doa dan
commit to user
ix
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
dukungan selama masa perkuliahan serta semua pihak yang tidak dapat
disebutkan satu per satu yang telah memberikan bantuannya.
Penulis menyadari bahwa dalam melakukan penelitian dan penyusunan
skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, masukan yang berupa saran
dan kritik yang membangun dari pembaca akan sangat membantu. Semoga skripsi
ini bisa bermanfaat bagi kita semua dan pihak-pihak yang terkait.
Surakarta,
Juni 2013
Penyusun
commit to user
x
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ...................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................... iii
ABSTRAK .................................................................................................... iv
ABSTRACT ..................................................................................................... v
HALAMAN MOTTO ...................................................................................... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... vii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... viii
DAFTAR ISI ................................................................................................. xi
DAFTAR TABEL ......................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xv
DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................ 1
A. Latar Belakang Masalah ............................................................... 1
B. Perumusan Masalah ...................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian .......................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian........................................................................ 4
BAB II. LANDASAN TEORI ...................................................................... 6
A. Tinjauan pustaka ........................................................................ 6
1. Sirsak (Annona muricata L.)
6
6
a. Klasifikasi
b. Definisi
7
c. Kandungan senyawa aktif
8
2. Kanker
10
3. Kanker Serviks
11
4. Human Papilloma Virus (HPV)
12
5. Sel HeLa
14
6. Apoptosis
15
7. Siklus Sel
17
8. Sitotoksik
19
9. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
20
B. Kerangka Pemikiran ................................................................... 22
C. Hipotesis ..................................................................................... 25
BAB III. METODE PENELITIAN .............................................................. 26
A. Waktu dan Tempat Penelitian ................................................... 26
B. Alat dan Bahan .......................................................................... 26
C. Cara Kerja.................................................................................. 28
D. Analisis Data ............................................................................. 35
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 37
A. Ekstraksi .................................................................................... 37
B. Uji Sitotoksisitas ........................................................................ 37
C. Deteksi Kandungan Senyawa Ekstrak Teraktif ......................... 46
commit to user
xi
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
D. Fraksinasi dan Uji Sitotoksisitas Fraksi ....................................
E. Deteksi Kandungan Senyawa Fraksi Teraktif ...........................
BAB V. PENUTUP......................................................................................
A. Kesimpulan................................................................................
B. Saran ..........................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................
LAMPIRAN ..................................................................................................
RIWAYAT HIDUP PENULIS .....................................................................
commit to user
xii
53
61
67
67
67
68
75
94
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Tabel 1.
Halaman
Hasil uji KLT ekstrak n-heksan hasil ekstraksi dengan
49
berbagai pereaksi semprot (uji)
Tabel 2.
Fase gerak yang digunakan dalam fraksinasi ekstrak
n-heksan daun sirsak dengan metode VLC dan berat kering
fraksi yang diperoleh
54
Tabel 3.
Hasil uji sitotoksisitas fraksi aktif (F1 - F4) daun sirsak
terhadap sel HeLa
57
Tabel 4.
Hasil uji sitotoksisitas fraksi aktif (F5 - F8 dan DMSO)
daun sirsak terhadap sel HeLa.
57
Tabel 5.
Hasil uji KLT fraksi aktif
semprot.
dengan berbagai pereaksi
63
Tabel 6.
Hasil uji KLT fraksi teraktif (5 – 6) dengan berbagai
pereaksi semprot
64
commit to user
xiii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GAMBAR
Halaman
7
Gambar 1.
Tanaman Sirsak (A. muricata L.)
Gambar 2.
Struktur dasar steroida dan sistem penomorannya
9
Gambar 3.
Struktur kimia dari acetogenin Annonaceae
10
Gambar 4.
Morfologi Human Papilloma Virus
13
Gambar 5.
Tahap-tahap apoptosis sel kanker
16
Gambar 6.
Siklus Sel
18
Gambar 7.
Bagan alur kerangka pemikiran
24
Gambar 8.
Perubahan MTT menjadi formazan dalam mitokondria
sel hidup
39
Gambar 9.
Sel yang hidup membentuk kristal formazan
39
Gambar 10.
(a) sel HeLa sebelum diberi tripsin, (b) sel HeLa setelah
diberi tripsin pada perbesaran 100 kali.
40
Gambar 11.
Morfologi sel HeLa pada saat perhitungan dengan
hemocytometer pada mikroskop cahaya dengan
perbesaran 100 kali.
41
Gambar 12.
Morfologi sel HeLa setelah penambahan ekstrak pada
perbesaran 100x dengan konsentrasi 2000 µg/mL.
42
Gambar 13.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi sampel.
44
Gambar 14.
Profil kromatogram ekstrak n-heksan daun sirsak
dengan berbagai metode kromatografi lapis tipis untuk
masing-masing senyawa.
47
Gambar 15.
Profil kromatogram ekstrak n-heksan daun sirsak
dengan berbagai metode kromatografi lapis tipis untuk
masing-masing senyawa.
48
Gambar 16.
Profil kromatogram penggabungan fraksi
fraksinasi dari ekstrak n-heksan daun sirsak
hasil
55
Gambar 17.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi fraksi aktif (F1 - F4) daun sirsak (A.
muricata L.).
59
Gambar 18.
Grafik hubungan antara presentase kematian dengan log
konsenstrasi fraksi aktif (F5 – F8 dan DMSO) daun
sirsak (A. muricata L.)
60
Gambar 19.
Profil kromatogram fraksi 6 daun sirsak dengan
berbagai pereaksi semprot
63
commit to user
xiv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
75
Lampiran 1.
Komposisi media RPMI 1640 dari SIGMAALDIRICH
Lampiran 2.
Morfologi sel HeLa pada Uji Sitotoksisitas dengan
pemberian ekstrak etil asetat, etanol 96%, n-heksan,
dan kloroform pada konsentrasi: A. 2000; B. 1000; C.
500; D. 250; E. 125; F. 62,5; G. 31,25; H.
15,625µg/mL.
76
Lampiran 3.
Data absorbansi perlakuan setiap ekstrak pada sel
HeLa
81
Lampiran 4.
Hasil perhitungan % kematian ekstrak daun sirsak
pada sel HeLa
82
Lampiran 5.
Perhitungan nilai LC50 ekstrak terhadap sel HeLa
82
Lampiran 6.
Morfologi sel HeLa pada Uji Sitotoksisitas dengan
pemberian Fraksi 1, Fraksi 2, Fraksi 3, Fraksi 4, Fraksi
5, Fraksi 6, Fraksi7, dan Fraksi 8 pada konsentrasi : A.
2000; B. 1000; C. 500; D. 250; E. 125; F. 62,5 µg/mL.
84
Lampiran 7.
Data absorbansi perlakuan setiap fraksi pada sel HeLa
91
Lampiran 8.
Perhitungan nilai LC50 fraksi aktif daun sirsak
terhadap sel HeLa.
92
commit to user
xv
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR SINGKATAN
Singkatan
Kepanjangan
DMSO
Dimethyl Sulfoxide
FBS
Fetal Bovine Serum
HPV
Human Papillomavirus
IHC
Immunohistochemistry
LC
Lethal Concentration
MTT
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide
NADP
Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate
PBS
Phosphate Buffer Saline
PCD
Programmed Cell Death
rpm
revolution per menit
RPMI
Rf
Roswell Park Memorial Institute
Refarandum factor
SDS
Sodium Dodecyl Sulfate
TNF
Tumor Necrosis Factor
TNFR
UV
WST-1
Tumor Necrosis Factor Receptor
Ultraviolet
4-[3-[4-iodofenil]-2-[4-nitro-fenil-2H-5-tetrazolio]1,3-benzendisulfonat]
commit to user
xvi