Validasi Metode Analisis Penetapan Kadar (1)
1. Mahasiswa mampu menggunakan dengan
tepat dan menjelaskan secara rinci teknik
melakukan validasi metode analisis
2. Mahasiswa mampu menggunakannya
menurut kesesuain yang dimaksudkan
dalam validasi.
3. Mahasiswa mampu melakukan validasi metode
analisis mengikuti prosedur tetap yang telah baku.
4. Mahasiswa mampu membuat
laporan validasi metode analisis
sesuai prosedur yang ada.
Validasi metode dilakukan untuk
menjamin bahwa metode analisis akurat,
spesifik, reprodusibel, dan tahan pada
kisaran analit yang akan dianalisis.
United States Pharmacopeia (USP)
• Metode baru dikembangkan untuk mengatasi problem
anlisis tertentu.
• Metode yang sudah baku direvisi untuk menyesuaikan
perkembangan.
• Munculnya suatu problem yang mengarahkan bahwa
metode baku tersebut harus direvisi.
• Penjaminan mutu yang mengindikasikan bahwa metode
baku telah berubah seiring dengan berjalannya waktu.
KURVA BAKU
KURVA BAKU
C1 = 0,1%
C1 = 0,1%
V2 = 5 mL
V2 = 5 mL
KonsentrasiKonsentrasi
(x)
(x)
0,0004% 0,0004%
0,0005% 0,0005%
0,0006% 0,0006%
0,0007% 0,0007%
0,0008% 0,0008%
A = -0,0216
B = 992 A = -0,0216
r = 0,9881 B = 992
r = 0,9881
C1 x V2 = C2C1
x V2
x V2 = C2 x V2
AbsorbansiAbsorbansi
(y)
(y)
0,364
0,364
0,505
0,565
0,643
0,791
0,505
0,565
0,643
0,791
Y = 992x – 0,0216
Y = 992x – 0,0216
LINEARITAS
Kriteria keberterimaanyaadalahnilair lebihdari 0,98
Berat rata rataparacetamol tablet = = 0,59875 gram = 599 mg
Zataktif = 600 mg
Range
Berat Kertas
Berat PCT
70%
256,0 mg
423,7 mg
80%
250,6 mg
480,5 mg
90%
254,7 mg
539,0 mg
100%
255,7 mg
600,1 mg
110%
262,5 mg
660,4 mg
120%
261,8 mg
719,7 mg
130%
256,9 mg
778,8 mg
Data Linearitas Konsentrasi vs Absorbansi
Konsentrasi ( x )
Absorbansi ( y )
70%
1,14
0,543
80%
1,60
0,773
90%
1,88
0,442
100%
2,12
0,505
110%
2,28
0,544
120%
3,68
0,527
130%
2,15
0,300
A = 0,59114
B = -0,0339
r = - 0,1898
r < 0,98
Absorbansi
Kadar
( %b/v )
%b/b
mg/tablet
70%
0,543
1,14
67,26
403
80%
0,773
1,60
83,25
499
90%
0,442
1,88
87,12
523
100%
0,505
2,12
88,32
530
110%
0,544
2,28
86,31
518
120%
0,527
3,68
127,83
767
130%
0,300
2,15
69,02
414
RIPITABILITAS
Prosedur pelaksanaanyadenganmenimbangsejumlahsampel
sebanyaktujuh kali
Kriteriakeberterimaanyajikanilai RSD
Absorbansi
1
0,737
3
0,761
4
0,762
5
0,764
6
0,772
7
0,775
X
0,76
SD
0,0137
%RSD
1,806
0,746
RSD2 = x 100%
RSD < 2%
KESERAGAMAN KANDUNGAN
Sampel = tablet paracetamol
Pelarut = metanol
Larutanstok = 0,1%
Real bobot tablet rata-rata = = 596,79 mg
Faktorpengenceran ( Fp ) = = = 200 kali
Y = 992x – 0,0216
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Bobot
Tablet
Perikiraan
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
Bobot
Sampel
Perkiraan
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
Real
Real
Bobot
Bobot
Tablet
Pengambilan
603,5 mg
100,3 mg
604,6 mg
100,1 mg
604,5 mg
100,5 mg
588,3 mg
100,4 mg
600,2 mg
100,3 mg
589,0 mg
100,7 mg
590,6 mg
100,5 mg
595,9 mg
100,3 mg
597,9 mg
100,5 mg
593,4 mg
100,5 mg
Absorbansi
% Kadar
% Klaim
0,424
0,414
0,337
0,306
0,320
0,374
0,304
0,343
0,437
0,368
0,09
0,088
0,072
0,066
0,0688
0,08
0,066
0,074
0,092
0,0785
26,77
26,23
21,37
19,61
20,46
23,70
19,59
22,0
27,30
23,31
N0
% Klaim
1
26,77
2
26,23
3
21,37
4
19,61
5
20,46
6
23,70
7
19,59
8
22,0
9
27,30
10
23,31
x
23,034
SD
2,92
% RSD = x 100%
= x 100%
= 12,67 %
Teori % RSD < 6%
%Klaim
Jadi, % RSD dan
%Klaimtidaksesuaidengante
ori ( TIDAK MEMENUHI )
AKURASI
RSD < 1%
% Recovery 98 – 102 %
Dari data
kadardiperoleh :
X = 0,1238
SD = 0,0165
RSD = x 100%
= x 100%
= 13,33 %
Metode
Spektrofotometri
UV tidak akurat
karena
%recovery < 98%
dan >120% serta
nilai RSD > 1%
Konsentrasi
Absorbansi
0,0004%
0,364
0,0005%
0,505
0,0006%
0,565
0,0007%
0,643
0,0008%
0,791
kesimpulan
•Parameter validasi metode yang
diterima pada spektrofotometri UV
adalah ripitabilitas
•Parameter validasi metode yang tidak
diterima pada spektrofotometri UV
adalah linieritas, akurasi dan
keseragaman kandungan
tepat dan menjelaskan secara rinci teknik
melakukan validasi metode analisis
2. Mahasiswa mampu menggunakannya
menurut kesesuain yang dimaksudkan
dalam validasi.
3. Mahasiswa mampu melakukan validasi metode
analisis mengikuti prosedur tetap yang telah baku.
4. Mahasiswa mampu membuat
laporan validasi metode analisis
sesuai prosedur yang ada.
Validasi metode dilakukan untuk
menjamin bahwa metode analisis akurat,
spesifik, reprodusibel, dan tahan pada
kisaran analit yang akan dianalisis.
United States Pharmacopeia (USP)
• Metode baru dikembangkan untuk mengatasi problem
anlisis tertentu.
• Metode yang sudah baku direvisi untuk menyesuaikan
perkembangan.
• Munculnya suatu problem yang mengarahkan bahwa
metode baku tersebut harus direvisi.
• Penjaminan mutu yang mengindikasikan bahwa metode
baku telah berubah seiring dengan berjalannya waktu.
KURVA BAKU
KURVA BAKU
C1 = 0,1%
C1 = 0,1%
V2 = 5 mL
V2 = 5 mL
KonsentrasiKonsentrasi
(x)
(x)
0,0004% 0,0004%
0,0005% 0,0005%
0,0006% 0,0006%
0,0007% 0,0007%
0,0008% 0,0008%
A = -0,0216
B = 992 A = -0,0216
r = 0,9881 B = 992
r = 0,9881
C1 x V2 = C2C1
x V2
x V2 = C2 x V2
AbsorbansiAbsorbansi
(y)
(y)
0,364
0,364
0,505
0,565
0,643
0,791
0,505
0,565
0,643
0,791
Y = 992x – 0,0216
Y = 992x – 0,0216
LINEARITAS
Kriteria keberterimaanyaadalahnilair lebihdari 0,98
Berat rata rataparacetamol tablet = = 0,59875 gram = 599 mg
Zataktif = 600 mg
Range
Berat Kertas
Berat PCT
70%
256,0 mg
423,7 mg
80%
250,6 mg
480,5 mg
90%
254,7 mg
539,0 mg
100%
255,7 mg
600,1 mg
110%
262,5 mg
660,4 mg
120%
261,8 mg
719,7 mg
130%
256,9 mg
778,8 mg
Data Linearitas Konsentrasi vs Absorbansi
Konsentrasi ( x )
Absorbansi ( y )
70%
1,14
0,543
80%
1,60
0,773
90%
1,88
0,442
100%
2,12
0,505
110%
2,28
0,544
120%
3,68
0,527
130%
2,15
0,300
A = 0,59114
B = -0,0339
r = - 0,1898
r < 0,98
Absorbansi
Kadar
( %b/v )
%b/b
mg/tablet
70%
0,543
1,14
67,26
403
80%
0,773
1,60
83,25
499
90%
0,442
1,88
87,12
523
100%
0,505
2,12
88,32
530
110%
0,544
2,28
86,31
518
120%
0,527
3,68
127,83
767
130%
0,300
2,15
69,02
414
RIPITABILITAS
Prosedur pelaksanaanyadenganmenimbangsejumlahsampel
sebanyaktujuh kali
Kriteriakeberterimaanyajikanilai RSD
Absorbansi
1
0,737
3
0,761
4
0,762
5
0,764
6
0,772
7
0,775
X
0,76
SD
0,0137
%RSD
1,806
0,746
RSD2 = x 100%
RSD < 2%
KESERAGAMAN KANDUNGAN
Sampel = tablet paracetamol
Pelarut = metanol
Larutanstok = 0,1%
Real bobot tablet rata-rata = = 596,79 mg
Faktorpengenceran ( Fp ) = = = 200 kali
Y = 992x – 0,0216
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Bobot
Tablet
Perikiraan
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
600 mg
Bobot
Sampel
Perkiraan
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
100 mg
Real
Real
Bobot
Bobot
Tablet
Pengambilan
603,5 mg
100,3 mg
604,6 mg
100,1 mg
604,5 mg
100,5 mg
588,3 mg
100,4 mg
600,2 mg
100,3 mg
589,0 mg
100,7 mg
590,6 mg
100,5 mg
595,9 mg
100,3 mg
597,9 mg
100,5 mg
593,4 mg
100,5 mg
Absorbansi
% Kadar
% Klaim
0,424
0,414
0,337
0,306
0,320
0,374
0,304
0,343
0,437
0,368
0,09
0,088
0,072
0,066
0,0688
0,08
0,066
0,074
0,092
0,0785
26,77
26,23
21,37
19,61
20,46
23,70
19,59
22,0
27,30
23,31
N0
% Klaim
1
26,77
2
26,23
3
21,37
4
19,61
5
20,46
6
23,70
7
19,59
8
22,0
9
27,30
10
23,31
x
23,034
SD
2,92
% RSD = x 100%
= x 100%
= 12,67 %
Teori % RSD < 6%
%Klaim
Jadi, % RSD dan
%Klaimtidaksesuaidengante
ori ( TIDAK MEMENUHI )
AKURASI
RSD < 1%
% Recovery 98 – 102 %
Dari data
kadardiperoleh :
X = 0,1238
SD = 0,0165
RSD = x 100%
= x 100%
= 13,33 %
Metode
Spektrofotometri
UV tidak akurat
karena
%recovery < 98%
dan >120% serta
nilai RSD > 1%
Konsentrasi
Absorbansi
0,0004%
0,364
0,0005%
0,505
0,0006%
0,565
0,0007%
0,643
0,0008%
0,791
kesimpulan
•Parameter validasi metode yang
diterima pada spektrofotometri UV
adalah ripitabilitas
•Parameter validasi metode yang tidak
diterima pada spektrofotometri UV
adalah linieritas, akurasi dan
keseragaman kandungan