Aktivitas antiangiogenesis ekstrak etanol buah mengkudu (Morinda citrifolia L.) terhadap chorioallantoic membrane yang diinduksi basic fibroblast growth factor - USD Repository

  

AKTIVITAS ANTIANGIOGENESIS EKSTRAK ETANOL BUAH

MENGKUDU ( Morinda citrifolia L.) TERHADAP CHORIOALLANTOIC

MEMBRANE YANG DIINDUKSI BASIC FIBROBLAST GROWTH

FACTOR

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Pande Putu Krisna Wedana NIM : 108114030

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2014

HALAMAN PERSEMBAHAN

  

Om Dewa suksma parama acintya ya namah swaha

Sarwa karya prasidhantam

Om santih santih santi Om

Akhir dari upaya terbaik kita adalah awal dari campur tangan Tuhan.

  

Maka bekerjalah sebaik mungkin, lalu bersabarlah seyakin mungkin.

  Ku persembahkan skripsi ini untuk :

Tuhan ku “Ida Sang Hyang Widhi Wasa”, sebagai pelindung dan sumber

kekuatanku . . .

  Papa dan Mama tercinta sebagai motivator terbesar dalam hidupku . . . Pande Made Bayu Wedayana, Pande Nyoman Wahyu Wedadana adikku dan keluarga besar yang selalu memberi dukungan dan doa . . .

  

Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt yang selalu membimbing dengan sabar .

  Sahabat dan teman-teman seperjuangan Nover, Stien dan Retno Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma . . .

  

PRAKATA

  Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat-Nya, penulis dapat menyelesaikan skripsi berjudul

  “Aktivitas Antiangiogenesis Ekstrak Etanol Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia L) terhadap CAM yang diinduksi bFGF

  “ dengan baik dan tepat waktu.

  Skripsi ini dibuat untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  Penulis menyadari bahwa dalam pelaksanaan dan penyusunan skripsi, tidak terlepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1.

  Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan rahmatnya selama ini.

  2. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  3. Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt., sebagai Dosen Pembimbing Utama skripsi ini atas segala kesabarannya telah memberikan bimbingan, pengarahan, tuntunan, dukungan dan motivasi selama penelitian dan penyusunan skripsi.

  4. Ibu, Bapak, Ninik, Bayu, Komang, Tante-tante, Om dan Keluarga Besar Pande tercinta yang tidak putus-putusnya mendoakan dan memberi dukungan hingga penulis bisa menyelesaikan skripsi dengan baik.

  5. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt, selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi.

  6. Agustina Setiawati, M.Sc., Apt, selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi.

  7. Ni Putu Cintya Maharani penyemangatku yang selalu setia menemani dan memberikan masukan positif.

  8. Teman-teman seperjuangan Nover, Stien dan Retno atas segala kerjasama, bantuan dan semangat yang selalu bergelora dalam penyusunan skripsi ini dari awal hingga akhir.

  9. Sahabat-sahabat sejati, Therezita S. L., Inggrid R. T., Angelina Pangala, Tirzayana A. T., Catharina A., Pricilla Diana V. V., dan Catharina S. atas bantuan, kerjasama dan motivasi yang diberikan.

  10. Seluruh warga FKK angkatan 2010 kelas C dan semua teman Farmasi USD atas semngat kebersamaan dan keceriaan selama menempuh S1 di Fakultas Farmasi Sanata Dharma.

  Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu peneliti menerima kritik dan saran yang membatu dan bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan, serta dapat menjadi acuan bagi penelitian- penelitian selanjutnya.

  Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL................................................................................................i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING......................................................ii HALAMAN PERSEMBAHAN........……………………………………….........iii PRAKATA..............................................................................................................iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA................................................................vi DAFTAR ISI..........................................................................................................vii DAFTAR TABEL...................................................................................................xi DAFTAR GAMBAR.............................................................................................xii DAFTAR LAMPIRAN.........................................................................................xiii

  INTI SARI.............................................................................................................xiv

  

ABSTRACT ............................................................................................................xvi

  BAB I. PENGANTAR......................................................................................... 1 A. LATAR BELAKANG................................................................................ 1 1. Perumusan masalah…………………………………………………...4 2. Keaslian penelitian…………………………………………………….4 3. Manfaat penelitian……………………………………………………..4 B. TUJUAN PENELITIAN………………………………………………….5 a. Tujuan umum ........................................................................................5 b. Tujuan khusus........................................................................................5

  BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA....................................................................6 A. Mengkudu…………………………………………………………………........6 1. Sistematika tumbuhan ………………………………….....………………6 2. Nama daerah ………...........………………………………………………..7 3. Deskripsi………………………………………………………………........7 4. Kandungan kimia dan manfaat .…...……………………….………............7 B. Ekstraksi ……………………………………………………………………….8 C. Kanker ………………………………………………………………………..10 1. Definisi kanker……………………………………………………… ……10 2. Penyebab kanker……………………………………………………….....11 3. Morfologi sel kanker……………………………………………………...12 4. Proses terjadinya kanker…………………………………………………..14 D. Angiogenesis………………………………………………………………….15 E. b-FGF…………………………………………………………………………18 1.

  Basic fibroblast growth factor……………………………………………18 F. Chorioallantoic Membrane…………………………………………………...21 G.

  Landasan Teori………………………………………………………………..23 H. Hipotesis………………………………………………………………………24

  BAB III METODE PENELITIAN……………………………………………….25 A. Jenis dan Rancangan Penelitian……………………………………………….25 B. Variabel……………………………………………………………………….25 1. Variabel utama……………………………………………………………25 2. Variabel pengacau…………………………………………………….......26

  3. Definisi operasional ………………………………………………............26 C. Bahan Penelitian……………………………………………………………....27 D.

  Alat Penelitian………………………………………………………………...27 E. Tata Cara Penelitian ………………………………………………………….28 1.

  Determinasi tanaman …………………………………………………......28 2. Preparasi ekstrak etanol buah mengkudu………………………………....28 3. Sterilisasi alat……………………………………………………………...29 4. Pembuatan larutan uji basic fibroblast growth factor………………….....29 5. Uji angiogenesis…………………………………………………………..29 F. Analisis Data………………………………………………………………….31

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN………………………………………...33 A. Hasil Determinasi dan Ekstraksi Buah Mengkudu………………………33 B. Aktivitas Basic Fibroblast Growth Factor Dalam Menginduksi Angiogenesis……………………………………………………………..34 C. Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Buah Mengkudu Morinda Citrifolia L. Terhadap Angiogenesis Pada CAM Terinduksi bFGF …………………...38

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN………………………………………….46 A. Kesimpulan………………………………………………………………46 B. Saran………………………………………………………………….......46 DAFTAR PUSTAKA……………………………………………………………47 LAMPIRAN ……………………………………………………………………..54 BIOGRAFI PENULIS…………………………………………………………...70

  DAFTAR TABEL

  Tabel I Jumlah Pembuluh Darah Baru Kelompok Kontrol Paper Disc, Kontrol Pelarut, Kontrol bFGF + Pelarut dan Kelompok Perlakuan …….............................................................................. 37

  Tabel II Persentase Penghambatan Angiogenesis Dengan Varian Konsentrasi Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda citrifolia. L )

  ………….. ................................................................................39 Tabel III

  Matriks Signifikasi % Penghambatan Angiogenesis (P < 0,05)…41 Tabel IV Rata- rata dan Standar Deviasi Pembuluh Darah Baru…………...61 Tabel V

  Persentase Penghambatan Angiogenesis…………………………63

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar 1 Buah Mengkudu Morinda citrifolia, L.……………….………......6

  Gambar 2 Persentase penghambatan angiogenesis………………………......39

  Gambar 3 Diagram Batang Rata-Rata Perbandingan jumlah pembuluh darah antarkelompok kontrol dan perlakuan ekstrak etanol Morinda

  citrifolia

  L…………………….......................................................42

  

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Foto Buah Mengkudu Morinda citrifolia.

  L………..........55 Lampiran 2 Foto Serbuk Morinda citrifolia. L……………………….55

  Lampiran 3 Foto Ekstrak Kental Etanol Buah Mengkudu Morinda citrifolia.

  L………………………………………………..56 Lampiran 4 Foto Pembuatan larutan uji dan larutan basic Fibroblast

  Growth Factor (bFGF

  )…………………………………...56 Lampiran 5

  Foto Pembuatan Jendela Berukuran 1x1 cm……………..57 Lampiran 6 Data Perhitungan Rendemen Ekstrak Etanol Buah

  Mengkudu………………………………………………...57 Lampiran 7 Data Perhitungan Pengenceran bFGF

  …………………....58 Lampiran 8 Perhitungan Berat Eks trak dan Volume DMSO……….....59 Lampiran 9

  Persentase Penghambatan Angiogenesis…………………61 Lampiran 10 Foto Pengamatan makroskopik pembentukan pembuluh darah pada setiap kelompok……………………………....64 Lampiran 11

  Analisis uji statistik normalitas…………………………...65 Lampiran 12 Analisis uji statistik one way anova

  ………………………65 Lampiran 13

  Analisis uji statistik Tukey…………………...…………..67 Lampiran 14

  Hasil Determinasi………………………………………...69

  

INTISARI

  Salah satu strategi penghambatan perkembangan kanker adalah dengan menghambat proses angiogenesis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antiangiogenesis ekstrak etanol buah Morinda citrifolia. L menggunakan metode

  

chorioallantoic membrane (CAM). CAM telur ayam berembrio umur 8-9 hari

  diberi perlakuan bFGF (induktor angiogenesis) dan ekstrak etanol buah Morinda

  

citrifolia . L kemudian diinkubasi selama 3 hari untuk selanjutnya diamati respon

angiogenesisnya.

  Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan didapatkan hasil ekstrak etanol buah Morinda citrifolia. L mampu menghambat angiogenesis pada CAM. Penelitian ini menunjukkan bahwa kandungan ekstrak etanol buah mengkudu memiliki aktivitas antiangiogenesis. Kemampuan penghambatan angiogenesis ekstrak etanol buah Morinda citrifolia. L adalah pada konsentrasi 100 µg/ml, ekstrak mempunyai kemampuan menghambat sebesar 12,86% ; konsentrasi 150 µg/ml sebesar 37,17% ; konsentrasi 225 µg/ml sebesar 50,03%.

  

Kata kunci : Morinda citrifolia L., angiogenesis, Chorioallantoic Membrane

(CAM), bFGF.

  ABSRACT

  One strategy is the inhibition of the progression of cancer by inhibiting angiogenesis process. This study aims to determine the antiangiogenesis effects of ethanol extract of Morinda citrifolia. L fruit using the method of chorioallantoic membrane (CAM). CAM embryonated chicken eggs 8-9 days of age treated with bFGF (inductor angiogenesis) and ethanol extract of Morinda citrifolia. L fruit and then incubated for 3 days then observed the response to angiogenesis.

  Based on the results of research conducted showed ethanol extract of

  

Morinda citrifolia . L fruit was able to inhibit angiogenesis in CAM. This study

  shows that the content of the ethanol extract of noni fruit has a antiangiogenesis activity. Angiogenesis inhibition ability of ethanol extract of Morinda citrifolia. L fruit is at a concentration of 100 ug / ml, the extract has the ability to inhibit by 12.86%; concentration of 150 ug / ml was 37.17%; concentration of 225 ug / ml was 50.03%.

  

Kata kunci : Morinda citrifolia L., angiogenesis, Chorioallantoic Membrane

(CAM), bFGF.

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Menurut Organisasi Kesehatan Dunia setiap tahun penderita kanker di

  

dunia bertambah 6,25 juta orang. Di Indonesia diperkirakan setiap tahun terdapat

100 penderita baru dari setiap 100.000 penduduk. Penyakit kanker menduduki

urutan ketiga penyebab kematian di Indonesia (Nugroho dkk, 2000).

  Banyaknya usaha dilakukan untuk mencegah dan mengobati penyakit

kanker. Pengobatan medis seperti kemoterapi, pembedahan, dan penyinaran

bukanlah pilihan yang diminati pasien karena biaya obat dan perawatan yang

mahal dan menimbulkan efek samping setelah terapi yang tidak diinginkan seperti

daya tahan tubuh menurun, rambut rontok, kulit dan gigi menjadi rusak (Nafrialdi

& Gan 1982). Oleh karena itu perlu adanya alternatif pencegahan dan pengobatan

kanker yang aman dan mudah tersedia dengan memanfaatkan dan mengkonsumsi

bahan alami yang terdapat dan tumbuh di daerah yang terjangkau pada penderita

kanker.

  Penggunaan tanaman obat dalam pengobatan dan pencegahan penyakit sudah lama dikenal masyarakat. Saat ini tanaman obat yang sering digunakan oleh masyarakat adalah mengkudu. Mengkudu (Morinda citrifolia) merupakan tanaman liar yang banyak tumbuh di tepi pantai di seluruh Nusantara. Buah mengkudu merupakan tanaman obat yang cukup potensial untuk dikembangkan. Hampir semua tanaman mengkudu mengandung berbagai senyawa yang berguna

  2 untuk pengobatan maupun menjaga kesehatan tubuh (Bestari, 2005). Menurut Will Mcclatchey, (2002) (dalam jurnal Aruma, et al., 2013), menyebutkan bahwa buah mengkudu mengandung berbagai komponen seperti vitamin C, vitamin A, terpenoid, alkaloid, antrakuinon (damnachantal, mirindon, rubiadin-1-metil eter), rutin, alizarin, asam kapirat, kumarin, skopoletin dan flavonoid.

  Pada penelitian (Hiramatsu dkk., 1993) menyebutkan bahwa buah mengkudu dapat menghambat pertumbuhan tumor dengan merangsang sistem imun yang melibatkan makrofag atau limfosit. Buah mengkudu memiliki aktivitas adaptogen, yang artinya bahwa buah mengkudu termasuk salah satu nutrisi yang dapat mengembalikan fungsi sel yang abnormal menjadi normal.

  Berdasarkan hasil penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya menunjukkan bahwa buah mengkudu diketahui mempunyai efek antikanker.

  Penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efek antikanker dari ekstrak etanol buah mengkudu, termasuk efek antiangiogeniknya, yang sangat menarik dan penting untuk dilakukan. Hal ini didukung oleh hasil-hasil penelitian sebelumnya yang telah menyatakan bahwa kandungan-kandungan senyawa aktif buah mengkudu memiliki efek antikanker.

  Metode CAM merupakan salah satu media yang paling umum digunakan untuk mempelajari respon angiogenesis. Ini karena CAM merupakan suatu membran yang kaya akan pembuluh darah (Ribatti dkk., 1998), sehingga pengamatan terhadap respon angiogenesis akan lebih mudah diamati. Keunggulan metode CAM itu sendiri yaitu telur ayam berembrio mudah didapat, relatif murah dan mudah dikerjakan dilaboratorium (Vu dkk., 1985 cit Kirchner dkk, 1996).

  3 Selain itu di dalam telur berembrio memiliki lingkungan yang tertutup dan terlindung oleh cangkang telur, sehingga aman, mudah dipegang dan dipelihara selama inkubasi di laboratorium (Evans, 1991).

  Menurut (Hirazumi, 1999) menyatakan bahwa buah mengkudu mengandung substansi polysaccharide-rich yang mempunyai aktivitas anti tumor.

  Berdasarkan hasil penelitiannya terbukti bahwa ekstrak etanol buah mengkudu mampu mengatasi kanker dan infeksi. Pernyataan serupa dikemukakan oleh (Wang, 2001), mengkudu mengandung senyawa yang mampu memperbaiki kerusakan DNA. Pernyataan tersebut didukung oleh (Hiramatsu dkk., 1993) bahwa mengkudu mengandung zat anti tumor yang dapat meningkatkan respon sel-sel T dan makrofag.

  Penelitian ini dilakukan dengan penentuan dosis dan pemberian ekstrak etanol buah mengkudu (Morinda citrifolia. L). Menurut Thararat nualsnit et al., (2012), mengatakan bahwa ekstrak mengkudu mengandung sebuah antrakuinon (damnachantal). Adanya kandungan antrakuinon pada ekstrak buah mengkudu yang memiliki aktivitas dalam mengubah fungsi sel yang abnormal menjadi normal dan juga berpotensi sebagai antikanker karena sifatnya sebagai antiangiogenesis (menghambat pembentukan pembuluh darah baru pada sel kanker). Penelitian buah mengkudu dengan menggunakan metode CAM belum pernah dilakukan di Indonesia, terutama terkait dengan efek antiangiogenesis.

  Oleh karena itu, penelitian untuk membuktikan efek antiangiogenesis ekstrak etanol buah mengkudu yang diinduksi bFGF (Basic Fibroblast Growth Factor) perlu dilakukan.

  4

  1. Perumusan masalah a.

  Apakah ekstrak etanol buah mengkudu memiliki aktivitas antiangiogenesis pada CAM embrio ayam yang diinduksi bFGF ? b.

  Adakah hubungan antara konsentrasi ekstrak etanol buah mengkudu dengan aktivitas antiangiogenesis pada CAM embrio ayam yang diinduksi bFGF ?

  2. Keaslian penelitian

  Sejauh pengamatan penulis, penelitian tentang uji angiogenesis buah mengkudu pernah dilakukan oleh Hornick, et al, 2003 melakukan penelitian tentang Penghambatan inisiasi angiogenik dan gangguan pembuluh darah baru dengan jus dari mengkudu. Perbedaan penelitian ini dengan penelitian sebelumnya adalah buah mengkudu yang digunakan didapat dari Bangli, Bali, yang kemudian diolah menjadi simplisia di Bantul, Yogyakarta. Model uji antiangiogenesis yang digunakan adalah metode CAM dengan membran

  

chorioallantoic embrio ayam yang telah diinduksi bFGF. Perbedaan juga terletak

  pada konsentrasi ekstrak buah mengkudu yang akan di gunakan. Sepengetahuan penulis, penelitian uji antiangiogenesis buah mengkudu dengan metode CAM menggunakan chorioallantoic membrane embrio ayam yang diinduksi bFGF belum pernah dilakukan.

  3. Manfaat penelitian a.

  Manfaat teoritis Dapat memperkaya ilmu pengetahuan mengenai adanya aktivitas antiangiogenesis pada buah mengkudu.

  5 b.

  Manfaat metodologi Dapat memberikan pengetahuan mengenai tata cara pengujian aktivitas anti-angiogenesis ekstrak etanolik buah mengkudu mengunakan metode

  CAM pada embrio ayam yang diinduksi bFGF.

  c.

  Manfaat praktis Dapat memberikan informasi mengenai adanya aktivitas antiangiogenesis pada buah mengkudu.

B. Tujuan Penelitian 1.

  Tujuan umum : Untuk memberikan informasi kepada masyarakat tentang ekstrak buah mengkudu sebagai obat antikanker.

  2. Tujuan khusus : Untuk mengetahui aktivitas antiangiogenesis dari ekstrak buah mengkudu dan untuk mengetahui hubungan antara konsentrasi ekstrak buah mengkudu dengan aktivitas antiangiogenesis.

  BAB II PENELAHAAN PUSTAKA A. Mengkudu 1. Sistematika tumbuhan Berikut sistematika tumbuhan mengkudu : Dunia : Plantae Divisi : Spermatophyta Sub Divisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledonae Bangsa : Rubiales Suku : Rubiaceae Marga : Morinda Jenis : Morinda citrifolia L. (Backer & Brink, 1965). Gambar 1. Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia, L.) (Backer & Brink, 1965).

  7

  2. Nama daerah Morinda citrifolia L. mempunyai nama daerah ; Pace (Jawa), Cangkudu

  (Pasundan), Kodhuk (Madura), Bakudu (Sumatra), Wangkudu (Kalimantan), Bakulu (Nusa Tenggara) (Suryowinoto, 1997).

  3. Deskripsi

  Mengkudu termasuk jenis tanaman pohon dan berbatang bengkok, ketinggian dapat mencapai 3-8 m. Daun tunggal dengan ujung dan pangkal kebanyakan runcing. Buahnya termasuk buah bongkol, benjol-benjol tidak teratur, berdaging, jika masak daging buah berair. Buah masak berwarna kuning kotor atau putih kekuning-kuningan dengan panjang 5-10 cm, lebar 3-6 cm (Suryowinoto, 1997).

  Tanaman mengkudu berbuah sepanjang tahun. Mudah tumbuh pada berbagai tipe lahan, dengan daerah penyebaran dari dataran rendah hingga ketinggian 1500 dpl. Ukuran dan bentuk buahnya bervariasi, pada umumnya mengandung banyak biji, dalam satu buah terdapat

  ≥ 300 biji, namun ada juga tipe buah mengkudu yang memiliki sedikit biji. Bijinya dibungkus oleh suatu lapisan atau kantong biji, sehingga daya simpannya lama dan daya tumbuhnya tinggi. Dengan demikian, perbanyakan mengkudu dengan biji sangat mudah dilakukan (Djauhariya dkk., 2006).

  4. Kandungan kimia dan manfaat

  Buah mengkudu mengandung scopoletin, sebagai analgesik, antiradang, antibakteri. Antrakuinon (damnachantal), sebagai antibakteri, antikanker, imunostimulan. Alizarin, Acubin, L. Asperuloside, dan flavonoid sebagai

  8 antibakteri. Vitamin C, sebagai antioksidan (Peter, 2005; Waha, 2000; Winarti, 2005).

  Di dalam buah mengkudu terkandung zat-zat berkaitan dengan kesehatan dan telah dibuktikan hanya terdapat di dalam mengkudu. Tanaman mengkudu mengandung berbagai vitamin, mineral, enzim alkaloid, proxeronin yang dapat dibentuk menjadi xeronin, ko-faktor dan sterol tumbuhan yang terbentuk secara alamiah (Waha, 2001).

  Mengkudu mengandung zat antikanker yang dinamakan damnacanthal adalah sebuah antrakuinon (Hiramatsu et al., 1993). Zat tersebut paling efektif untuk melawan sel-sel abnormal dibanding zat-zat antikanker yang terdapat dalam tumbuhan lainnya. Senyawa scopoletin dalam buah mengkudu ditemukan pada tahun 1993 oleh para peneliti di Universitas Hawaii (Waha, 2001). Selanjutnya, ditemukan bahwa scopoletin dapat memperlebar saluran pembuluh darah yang menyempit dan melancarkan peredaran darah. Selain itu, juga scopoletin juga dapat membunuh beberapa tipe bakteri dan bersifat fungisida terhadap bakteri

  Pythium sp dan bersifat anti peradangan dan alergi (Waha, 2001).

B. Ekstraksi

  Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari bagian tanaman obat, hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota laut. Zat-zat aktif terdapat di dalam sel, namun sel tanaman dan hewan berbeda demikian pula ketebalannya, sehingga diperlukan metode ekstraksi dengan pelarut tertentu dalam mengekstraksinya. Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen

  9 kimia yang terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini didasarkan pada prinsip perpindahan massa komponen zat ke dalam pelarut, yang menyebabkan perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut (Harborne, 1996). Menurut (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010) ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang dibuat dengan menyari simplisia, diluar cahaya matahari langsung. Ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk. Cairan penyari yang dapat digunakan dalam pembuatan ekstrak yaitu air, etanol, eter atau campuran etanol dan air.

  Metode maserasi merupakan salah satu metode ekstraksi sederhana yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada temperatur kamar dan terlindung dari cahaya sambil diaduk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010). Dengan metode maserasi, cairan penyarian masuk ke dalam sel melewati dinding sel sehingga isi sel akan larut akibat perbedaan konsentrasi antara larutan dalam sel dan di luar sel. Larutan dengan konsentrasi tinggi akan terdesak keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan konsentrasi rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut akan terjadi secara berulang-ulang hingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Selanjutnya, endapan dipisahkan dan filtrat dipekatkan (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1986). Pada proses akhir ekstraksi semua atau hampir pelarut diuapkan dan serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

  10

C. Kanker 1. Definisi kanker

  Sel kanker merupakan the outlaw cell karena tumbuh secara tidak teratur, melanggar kaidah normal, tidak peduli akan kontrol dalam perbanyakan, dan menggunakan agendanya sendiri (Sofyan, 2000). Artinya sel tersebut mampu memanipulasi lingkungan dan faktor-faktor yang dapat mendukung pertumbuhannya. Sel kanker mampu berproliferasi secara cepat dan tidak terkontrol pada satu sisi yang lain, ia juga mempunyai kemampuan untuk tidak mengalami apoptosis (program bunuh diri sel). Sel kanker juga dapat mencegah dirinya untuk tidak mengalami diferensiasi atau melakukan diferensiasi agar dapat terus tumbuh. Sel kanker juga kehilangan inhibisi kontak dengan sel yang lain atau dengan matriks ekstraseluler, sifat yang pada sel normal dapat mencegah pertumbuhan tidak terkendali. Untuk memperbesar masa selnya, sel kanker dapat membentuk pembuluh darah (angiogenesis) yang akan menyuplai oksigen, nutrisi dan protein-protein yang berguna untuk pertumbuhannya. Adanya pembuluh darah ini juga kemungkinan sel kanker untuk menginvasi jaringan lain dan bermetastasis (King, 2000 ; Hanalan dan Weinberg, 2000; Mulyadi, 1996), dan membentuk masa pada daerah baru di dalam tubuh (Sofyan, 2000).

  Menurut WHO, kanker adalah istilah umum untuk satu kelompok besar penyakit yang dapat mempengaruhi setiap bagian dari tubuh. Istilah lain yang digunakan adalah tumor ganas dan neoplasma. Kanker juga dapat didefinisikan sebagai pertumbuhan sel-sel baru secara abnormal yang tumbuh melampaui batas normal, dan yang kemudian dapat menyerang bagian tubuh dan menyebar ke

  11 organ lain. Proses ini disebut metastasis. Metastasis merupakan penyebab utama kematian akibat kanker (WHO, 2009).

  Terjadinya kanker disebabkan oleh sel abnormal jaringan tubuh yang tumbuh dan berkembang dengan cepat dan tak terkendali. Sel abnormal akan menyusup ke jaringan di sekitarnya (invasif) dan terus menyebar melalui jaringan ikat dan darah serta menyerang organ-organ penting dan sel saraf tulang belakang.

  Saat sel abnormal tersebut menumpuk, mendesak, serta merusak jaringan dan organ yang ditempatinya barulah proses ini disebut tumor ganas atau kanker ( Zuhud, 2011).

2. Penyebab kanker

  Secara pasti penyebab kanker yang menimbulkan pertumbuhan sel yang terus menerus, menembus batas normal yang akhirnya dapat menginvasi jaringan yang lain belum diketahui. Meski gelap, namun ada indikasi cukup kuat bahwa ada tiga agen yang menyebabkan kanker, yaitu agen kimia, fisika dan biologik (Sinardi & Yuswanto, 2000).

  Kelainan kongenital akan menyebabkan tubuh kehilangan kemampuan menetralisir karsinogen yang masuk tubuh, mereparasi kerusakan gen, menjaga imunitas tubuh dan mematikan sel kanker yang baru tumbuh. Karsinogenesis adalah bahan, zat atau organisme yang menyebabkan kanker. Karsinogen inilah yang mempunyai peran terbesar sebagai penyebab kanker (Schneider, 1997).

  12

3. Morfologi sel kanker Sifat fisiologis sel kanker sendiri meliputi enam perubahan esensial berikut ini.

  1) Kemampuan sel dalam mencukupi kebutuhan signal pertumbuhannya sendiri

  Sel memerlukan signal pertumbuhan mitogenik sebelum mereka berpindah dari fase istirahat menuju fase aktif proliferatif. Ketergantungan pada signal pertumbuhan ini tampak ketika sel normal mengalami propagasi dalam kultur, di mana ploriferasi (memperbanyak diri) hanya terjadi ketika ditambah dengan faktor mitogenik yang cukup dan terintegrasi di dalam sel. Sebaliknya sel tumor akan melakukan regenerasi tergantung pada signal pertumbuhannya sendiri (Hanahan & Weinberg, 2000). 2)

  Ketidakpekaan sel terhadap signal anti pertumbuhan Signal anti pertumbuhan dapat menghentikan proliferasi (memperbanyak diri) sel dengan dua mekanisme yaitu sel dipaksa keluar jalur aktif proliferasi menuju fase istirahat atau sel akan diinduksi yang kemudian akan melepaskan potensi proliferasi secara permanen menuju fase akhir pembelahan (post mitotic). Sel kanker harus dapat menghindari signal anti proliferatif ini, jika mereka ingin terus tumbuh (Hanahan & Weinberg, 2000). 3)

  Kemampuan sel untuk mencegah apoptosis Apoptosis merupakan program kematian sel. Pada keadaan ini, membran sel dirusak, sitoplasma dan skeleton inti pecah, sitosol terlepas, kromosom mengalami degradasi, sehingga akhirnya sel tersebut dimakan sel tetangga

  13 dan hilang. Sel kanker mempunyai kemampuan untuk mencegah apoptosis. Resistensi terhadap apoptosis ini diperoleh sel kanker melalui beberapa cara, yang paling umum adalah melalui sebuah mutasi yang melibatkan tumor supresor p53. Dengan adanya p53 yang abnormal, maka akan membiarkan sel yang mengandung DNA yang rusak untuk tetap bertahan dan melakukan replikasi yang diteruskan dengan proliferasi. Kemampuan sel dalam melakukan replikasi diperlukan untuk perkembangan sel kanker menjadi sel malignan (Hanahan & Weinberg, 2000). 4)

  Kemampuan sel melakuan replikasi potensial secara terbatas Pada jaringan dewasa yang normal, sel-sel tetap terpelihara dalam jumlah tetap. Pada beberapa jaringan, misalnya tulang, keadaan ini diatur oleh tingginya kecepatan pembelahan sel yang diimbangi dengan hilangnya sel dengan kecepatan yang sama (Thurston & Lobo), 1988). Yang terjadi pada sel kanker, tidaklah demikian, mereka terus tumbuh dan tidak mati. Hal ini ditunjukkan dengan adanya potensial replikasi yang terbatas, yang diperlukan oleh sel kanker selama masa perkembangannya sampai mejadi tumor ganas (Hanahan & Weinberg, 2000).

  5) Kemampuan sel dalam menopang angiogenesis

  Oksigen dan nutrisi yang disuplai oleh pembuluh darah sangat penting artinya bagi kelangsungan hidup sel. Tingginya ketergantungan sel terhadap pembuluh darah kapiler untuk mensuplai kedua kebutuhan di atas, menyebabkan sel-sel ini kemudian membentuk pembuluh darah baru. Hal inilah yang dilakukan oleh sel kanker untuk memperbesar ukurannya, agar

  14 mereka dapat melakukan ekspansi ke jaringan lain. Oleh karena itu, sel kanker terus mengembangkan kemampuan angiogenesisnya (Hanahan & Weinberg, 2000). 6)

  Kemampuan sel malakukan metastasis dan invasi Dalam masa perkembangannya, cepat atau lambat sebagian besar jenis kanker manusia, massa tumor primernya dapat melahirkan sel-sel sekunder.

  Sel-sel sekunder tersebut dapat berpindah tempat ke jaringan lain, menginvasi jaringan darah dan berhenti pada tempat-tempat tertentu, kemudian sel akan tumbuh dan berkembang membentuk koloni baru (Hanahan & Weinberg, 2000).

4. Proses terjadinya kanker

  Kanker terjadi sebagai akibat dari perubahan sel sehingga sel terlepas dari mekanisme pengaturan pertumbuhan normal. Perubahan sel ini dikenal dengan istilah transformasi. Sebagai dasar transformasi adalah kelainan (mutasi) di dalam gen dari kanker, sehingga kanker dikatakan sebagai suatu gangguan atau kelainan genetik. Tingkat perubahan sel pada pertumbuhan kanker adalah sebagai berikut :

  Hiperplasi, yaitu perkembangan organ tubuh akibat pertumbuhan sel-sel baru yang abnormal karena hilangnya kontrol pertumbuhan. Metaplasia, yaitu perubahan epitel suatu jenis jaringan dewasa menjadi jaringan lain yang juga dewasa. Displasi, yaitu perubahan sel dewasa ke arah kemunduran dalam hal bentuk, besar orientasinya. Masih bersifat reversibel. Anaplasi, yaitu perubahan

  15 serupa displasi yang menyimpang lebih jauh dari normal. Merupakan suatu ciri tumor ganas yang bersifat irreversibel. Karsinoma insitu yaitu gambaran sel menjadi sangat atipik namun belum terdapat pertumbuhan infiltratif. Invasi, yaitu sel kanker telah menembus lapisan basal jaringan (Sinardi & Yuswanto, 2000).

D. Angiogenesis

  Angiogenesis adalah proses pembentukan pembuluh darah baru. Proses ini bermanfaat bagi keadaan fisiologi normal, seperti pada penyembuhan luka, mentruasi, proses reproduksi, perkembangan embrio, sebaliknya, juga menjadi faktor penting dalam pertumbuhan beberapa penyakit, termasuk kanker (Leahy, 2003; King, 2000; Folkman, 1996).

  Angiogenesis adalah rate elimiting step pada sel kanker yang menentukan terjadinya metastasis atau pertumbuhan menjadi ukuran yang lebih besar dari 1mm (King, 2000). Angiogenesis merupakan langkah yang krusial bagi tumor untuk berubah dari ukuran yang kecil dan tidak berbahaya menjadi besar, bersifat malignan, dan dapat menyebar ke organ yang lain (Folkman, 1996). Lebih dari 2500 Ilmuan melaporkan bahwa angiogenesis sangat berhubungan dengan pertumbuhan dan perkembangan tumor (Brem, 1999).

  Jika sel normal berubah menjadi sel kanker dan berfloriferasi dengan cepat, maka akan membentuk akumulasi sel. Semakin banyak sel membelah, maka sel- sel anakan tersebut akan semakin jauh dari kapiler. Sebelum menjadi angiogenesis, terjadi keadaan stady state, di mana ada keseimbangan antara sel-sel yang mati dan berfloriferasi. Matinya sel-sel dikarenakan kurang tersedianya

  16 nutrisi, oksigen, dan protein-protein growth factor yang didifusikan dari kapiler. Pada fase ini tumor disebut sebagai “tumor in situ” (Folkman, 1996).

  Seperti diketahui, transfer oksigen dari pembuluh darah ke sel-sel, termasuk sel tumor, dilakukan melalui mekanisme difusi. Proses dipengaruhi oleh jarak antara pembuluh darah dengan sel tersebut. Ada nilai limit di mana difusi itu tidak terjadi dan sel akhirnya mengalami hipoksia. Data dari angiogram menyatakan pada percobaan menggunakan Dunning rat prostate carcinoma xenograft nilai limit tersebut adalah 110 µm. Daerah yang mengalami hipoksia tersebut dapat mengalami nekrosis ( Kerbel & Folkman 2002).

  Angiogenesis diaktifkan oleh bermacam-macam pemicu fisiologi seperti gangguan sistem homeostatis oksigen dan diregulasi oleh sistem hormonal, serta dikontrol oleh keseimbangan antara faktor proangiogenik dan antiangiogenik (Keshet dan Sasson, 1999). Aktivator angiogenesis dapat dikategorikan menjadi tujuh, yaitu (1) faktor pertumbuhan, (2) protease, (3) trance elemen, (4) onkogen (5) molekul sinyal transduksi (6) cytokine dan (7) inducer endogen (Brem, 1999).

  Angiogenesis dapat terjadi pada ujung-ujung sel endotel diikuti oleh pembentukan tunas-tunas kapiler baru yang saling beranastomose membentuk putaran seperti jari-jari lingkaran. Pembentukan tunas pembuluh darah berlangsung terus menerus mencapai sumber stimulus. Tunas pembuluh darah ini terbentuk dari tunas mikrovaskuler, kebanyakan berasal dari venula dan kapiler (Schor & Schor, 1983). Warren dkk. (1972) melaporkan bahwa tunas pembuluh darah terutama berasal dari sel endotel kapiler, venula dan kadang-kadang dari arteriola.

  17 Pertumbuhan angiogenesis dapat terjadi melalui tiga fase, yaitu inisiasi oleh faktor pertumbuhan tumor melalui rute parakrin, stimulasi proliferasi dan invasi sel endotel, dan yang terakhir, yaitu maturasi dan diferensiasi sel endotel ( King, 2000). Fase-fase ini mencakup proses-proses seperti degradasi membran basalis, invasi stroma, morphogenesis pembuluh kapiler, penggabungan pembuluh darah kapiler menjadi pembuluh darah yang lebih besar, dan menambah pelindung sel periendhotelial (Keshet & Sasson, 1999).