Uji Kuantitatif Bakteri Koliformpada Air Bersih dengan Metode MPN (Most Probable Number) di Kecamatan Sei Bamban
Lampiran 1.Flowsheet
Pembuatan Media Lactose Broth Double
Ditimbang seksama media Lactose Broth Double sebanyak 52 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 5 mL dalam 5 tabung.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
24
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Lactose Broth Single
Ditimbang seksama media Lactose Broth Single sebanyak 13 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 10 mL dalam 10 tabung.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
25
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth
Ditimbang seksama media
Brilliant Green Lactose Broth
sebanyak 40 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 10 mL.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
26
Universitas Sumatera Utara
Uji Penduga (Presumtif Test)
Pada tes penduga digunakan media Lactose Broth. Tes penduga
dilakukan dengan 2 cara, yaitu single dan double.
Single: 13 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest.
Caranya: Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan
masing-masing 10 mL media.
Double: 52 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest.
Caranya: Siapkan 5 buah tabung reaksi yang telah
diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan
masing-masing 10 mL media.
Hasil
27
Universitas Sumatera Utara
Sampel
Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam
masing-masing tabung media Lactose Broth, lalu goyang rak tabung
supaya sampel air dan media bercampur rata.
Inkubasikan pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam, jika
positif akan terbentuk gas atau asam.
Inkubasikan dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas atau
asam. Bila tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji
penduga dinyatakan negatif.
Tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke uji penegasan.
Hasil
28
Universitas Sumatera Utara
Uji Penegasan (Confirmed Test)
Setiap tabung yang positif pada uji penduga dikocok agar merata.
Kemudian dipindahkan dengan jarum ose ke dalam media
Brilliant Green Lactose Broth (BGLB).
Inkubasi pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam. Reaksi
dinyatakan positif bila terbentuk gas atau asam dalam tabung.
Inkubasi dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas. Bila
tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji penegasan
dinyatakan negatif.
Hitung MPN total koliform dengan menggunakan tabel MPN dari
jumlah tabung Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) yang
positif.
Hasil
29
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Tabel nilai MPN
Nilai jumlah perkiraan terdekat (MPN) koliform untuk kombinasi bila digunakan
5 buah tabung dari 10 mL, 5 buah tabung dari 1 mL, dan 5 buah tabung dari 0,1
mL dengan 95% batas kepercayaan.
Jumlah tabung yang positif
5 tabung 5 tabung
5 tabung
10 mL
1 mL
0,1 mL
MPN /
100 mL
95%Batas kepercayaan
Lebih rendah
Lebih tinggi
0
0
0
0
1
1
0
0
1
2
0
0
0
1
0
0
0
1
1600
15
11
16
21
17
23
28
25
31
37
44
35
43
57
90
117
68
118
180
303
635
700
114
93
120
154
126
168
219
187
263
343
503
302
486
698
849
999
754
1005
1405
3222
5805
-
31
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Tabel Baku Mutu Mikrobiologi Air
Nomor: 416/MENKES/PER/IX/1990
Tanggal: 3 September 1990
No
Jenis
Satuan
parameter
1.
Kadar maksimal
Keterangan
yang diperbolehkan
Total
Jumlah per 100
koliform
mL sampel
50
Bukan Air
Perpipaan
10
Air Perpipaan
32
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Alat Percobaan
Timbangan Analitik
Hot Plate
Inkubator
Oven
33
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Media Percobaan
Media BGLB
Media LB
Media Lactose Borth (double strength – single strength)
yang telah diencerkan
34
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Hasil Uji Bakteri Koliform
Hasil Uji Pendugaan
Hasil Uji Penegasan dan Media BGLB
35
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Lactose Broth Double
Ditimbang seksama media Lactose Broth Double sebanyak 52 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 5 mL dalam 5 tabung.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
24
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Lactose Broth Single
Ditimbang seksama media Lactose Broth Single sebanyak 13 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 10 mL dalam 10 tabung.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
25
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan Media Brilliant Green Lactose Broth
Ditimbang seksama media
Brilliant Green Lactose Broth
sebanyak 40 gr.
Dimasukkan ke dalam beaker gelas.
Dilarutkan dalam 1 liter aquadest.
Dimasukkan magnetic stirrer.
Dipanaskan di atas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham
masing-masing 10 mL.
Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121oC
selama 15 menit.
Setelah dingin disimpan di tempat yang bersih dan kering.
Hasil
26
Universitas Sumatera Utara
Uji Penduga (Presumtif Test)
Pada tes penduga digunakan media Lactose Broth. Tes penduga
dilakukan dengan 2 cara, yaitu single dan double.
Single: 13 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest.
Caranya: Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan
masing-masing 10 mL media.
Double: 52 gr Lactose Broth dalam 1 liter aquadest.
Caranya: Siapkan 5 buah tabung reaksi yang telah
diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 5 tabung diisi dengan
masing-masing 10 mL media.
Hasil
27
Universitas Sumatera Utara
Sampel
Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam
masing-masing tabung media Lactose Broth, lalu goyang rak tabung
supaya sampel air dan media bercampur rata.
Inkubasikan pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam, jika
positif akan terbentuk gas atau asam.
Inkubasikan dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas atau
asam. Bila tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji
penduga dinyatakan negatif.
Tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke uji penegasan.
Hasil
28
Universitas Sumatera Utara
Uji Penegasan (Confirmed Test)
Setiap tabung yang positif pada uji penduga dikocok agar merata.
Kemudian dipindahkan dengan jarum ose ke dalam media
Brilliant Green Lactose Broth (BGLB).
Inkubasi pada inkubator pada suhu 35oC selama 24 jam. Reaksi
dinyatakan positif bila terbentuk gas atau asam dalam tabung.
Inkubasi dilanjutkan sampai 48 jam bila tidak ada reaksi gas. Bila
tetap tidak terbentuk gas dalam waktu 48 jam, maka uji penegasan
dinyatakan negatif.
Hitung MPN total koliform dengan menggunakan tabel MPN dari
jumlah tabung Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) yang
positif.
Hasil
29
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Tabel nilai MPN
Nilai jumlah perkiraan terdekat (MPN) koliform untuk kombinasi bila digunakan
5 buah tabung dari 10 mL, 5 buah tabung dari 1 mL, dan 5 buah tabung dari 0,1
mL dengan 95% batas kepercayaan.
Jumlah tabung yang positif
5 tabung 5 tabung
5 tabung
10 mL
1 mL
0,1 mL
MPN /
100 mL
95%Batas kepercayaan
Lebih rendah
Lebih tinggi
0
0
0
0
1
1
0
0
1
2
0
0
0
1
0
0
0
1
1600
15
11
16
21
17
23
28
25
31
37
44
35
43
57
90
117
68
118
180
303
635
700
114
93
120
154
126
168
219
187
263
343
503
302
486
698
849
999
754
1005
1405
3222
5805
-
31
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Tabel Baku Mutu Mikrobiologi Air
Nomor: 416/MENKES/PER/IX/1990
Tanggal: 3 September 1990
No
Jenis
Satuan
parameter
1.
Kadar maksimal
Keterangan
yang diperbolehkan
Total
Jumlah per 100
koliform
mL sampel
50
Bukan Air
Perpipaan
10
Air Perpipaan
32
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Alat Percobaan
Timbangan Analitik
Hot Plate
Inkubator
Oven
33
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Media Percobaan
Media BGLB
Media LB
Media Lactose Borth (double strength – single strength)
yang telah diencerkan
34
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Hasil Uji Bakteri Koliform
Hasil Uji Pendugaan
Hasil Uji Penegasan dan Media BGLB
35
Universitas Sumatera Utara