VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)- DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT) “RHEUMAKUR

  

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)-

DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM

SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT)

“RHEUMAKUR

  ® ”

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  Andreas Suseno Wimbo Hapsoro NIM : 078114057

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2011

  

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)-

DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM

SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT)

“RHEUMAKUR

  ® ”

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  Andreas Suseno Wimbo Hapsoro NIM : 078114057

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2011

  

Karya ini kupersembahkan bagi

kedua orang tuaku, adikku,

teman-teman dan almamaterku

yang luar biasa

  

PRAKATA

  Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan yang penuh kasih, karena berkat dan kasih karunia-Nya maka skripsi berjudul “VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)-DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT) RHEUMAKUR

  ®

  ” ini dapat diselesaikan oleh penulis. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

  Selama penyusunan skripsi ini, banyak pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikannya, maka pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada:

  1. Ipang Djunarko, S.Si, Apt, M.Sc selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  2. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah banyak meluangkan waktunya dalam memberikan masukan, kritik, solusi, semangat baik selama penelitian, penyusunan skripsi maupun saat perkuliahan.

  3. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku Dosen Pembimbing Akademik dan Dosen Penguji yang telah banyak memberikan masukan dan semangat baik selama penyusunan skripsi maupun dalam perkuliahan.

  4. Jeffry Julianus, M.Si. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan saran, kritik dan semangat dalam penyusunan skripsi ini maupun dalam perkulihan.

  5. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. selaku dosen pengajar mata kuliah Validasi Metode Analisis sehingga sangat membantu dalam penyusunan skripsi, serta telah memberikan senyawa baku kurkumin kepada penulis sehingga sangat berguna dalam penelitian

  6. Dr.C.J. Soegihardjo, Apt. atas saran dan diskusi yang telah diberikan dalam penyusunan skripsi.

  7. Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang berharga sehingga berguna dalam proses penyusunan skripsi.

  8. Theresia Weliana Kosasih dan Lilis Dumaria Pasaribu selaku teman seperjuangan selama penelitian dan penyusunan skripsi.

  9. Eliz, Yunita, Venny, Katiti, Lala, Toro, Katarina, Benny, dan Dian selaku teman yang melakukan penelitian dalam satu tema yang sama, terima kasih atas dukungannya.

  10. Seluruh staf laboratorium kimia: Bimo, Kunto, Parlan, dan Wagiran yang telah membantu penulis selama penelitian di laboratorium.

  11. Cinthya, Yosafat, Edhi, Siska, Dika, Bella, Vivi, Robby, Tika, dan Puput selaku teman yang sering bekerja kelompok bersama penulis, terima kasih atas kerjasama, pengalaman, dan semangat yang luar biasa selama ini.

  12. Kak Dewi, Grace, Zi, dan Bayu, atas laporan dan saran yang sangat berguna bagi perkuliahan maupun penyusunan skripsi.

  13. Teman-teman FST angkatan 2007 dan kelompok KKN 23 angkatan XL atas pengalaman dan kebersamaannya.

  14. Semua pihak yang telah membantu penulis dan tidak tertulis di sini, terima kasih atas semua dukungan dan bantuannya.

  Penulis menyadari bahwa skripsi yang disusun ini masih banyak memiliki kekurangan. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran untuk perbaikan dan perkembangan selanjutnya. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat demi perkembangan ilmu pengetahuan.

  Yogyakarta, 11 Januari 2011 Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL................................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN................................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................................v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH.. vi PRAKATA............................................................................................................ vii DAFTAR ISI............................................................................................................x DAFTAR TABEL................................................................................................ xiv DAFTAR GAMBAR .............................................................................................xv DAFTAR LAMPIRAN....................................................................................... xvii

  INTISARI........................................................................................................... xviii

  

ABSTRACT ........................................................................................................... xix

  BAB I PENGANTAR ..............................................................................................1 A. Latar Belakang ...................................................................................................1

  1. Permumusan masalah...................................................................................3

  2. Keaslian penelitian .......................................................................................3

  3. Manfaat penelitian........................................................................................4

  B. Tujuan Penelitian ...............................................................................................5

  BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.......................................................................6 A. Kapsul Lunak Obat Herbal Terstandar ..............................................................6

  B. Standarisasi Ekstrak ...........................................................................................7

  C. Ekstrak Rimpang Kunyit....................................................................................9

  D. Kurkumin ...........................................................................................................9

  E. Kromatografi Lapis Tipis.................................................................................16

  1. Kromatografi lapis tipis (KLT) secara umum............................................16

  2. Jenis fase diam dan fase gerak KLT ..........................................................16

  3. Migrasi dan retensi solut ............................................................................17

  4. Pemisahan kromatografi lapis tipis ............................................................17

  5. Proses sorpsi-adsorpsi ................................................................................18

  6. Profil puncak dan pelebaran puncak ..........................................................21

  7. Puncak asimetri ..........................................................................................23

  8. Resolusi kromatogram ...............................................................................24

  9. Analisis kualitatif .......................................................................................25

  10. Analisis kuantitatif .....................................................................................26

  11. Aplikasi penotolan sampel .........................................................................27

  F. Densitometri.....................................................................................................28

  G. Validasi Metode Analisis .................................................................................32

  1. Parameter validasi metode .........................................................................32

  2. Kategori metode analisis ............................................................................38

  H. Landasan Teori.................................................................................................39

  I. Hipotesis...........................................................................................................40

  BAB III METODE PENELITIAN.........................................................................41 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .......................................................................41

  B. Variabel dan Definisi Operasional ...................................................................41

  1. Klasifikasi variabel.....................................................................................41

  2. Definisi operasional ...................................................................................42

  C. Bahan................................................................................................................42

  D. Alat...................................................................................................................43

  E. Cara Penelitian .................................................................................................43

  1. Pembuatan metanol pH 4 ...........................................................................43

  2. Pengaktifan silika gel G 60 ........................................................................43

  3. Pembuatan dan penjenuhan fase gerak ......................................................43

  4. Penetapan panjang gelombang serapan maksimum...................................44

  5. Penentuan kurva baku kurkumin................................................................44

  6. Penetapan perolehan kembali (recovery) dan koefisien variasi (KV) baku kurkumin ...........................................................................................45

  7. Penentuan selektivitas kurkumin dalam sampel serta akurasi dan presisi baku yang ditambahkan ke dalam sampel ......................................46 F. Analisis Hasil ...................................................................................................47

  1. Selektivitas .................................................................................................47

  2. Linearitas dan rentang ................................................................................48

  3. Akurasi baku kurkumin..............................................................................48

  4. Presisi baku kurkumin................................................................................49

  5. Akurasi baku kurkumin yang ditambahkan ke dalam sampel ...................49

  6. Presisi baku kurkumin yang ditambahkan ke dalam sampel .....................49

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ...............................................................51

  A. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Kurkumin .....................52

  B. Pengamatan Profil Kromatogram Baku Kurkumin..........................................55

  C. Preparasi Sampel dan Pengamatan Profil Kromatogram Kurkumin dalam Sampel..............................................................................................................59

  D. Pembuatan Kurva Baku....................................................................................63

  E. Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri ...............................65

  1. Selektivitas .................................................................................................65

  2. Linearitas dan rentang ................................................................................67

  3. Akurasi .......................................................................................................68

  4. Presisi .........................................................................................................69

  F. Penentuan Akurasi dan Presisi Baku Kurkumin dalam Sampel ......................69

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.................................................................72 A. Kesimpulan ......................................................................................................72 B. Saran.................................................................................................................72 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................73 LAMPIRAN...........................................................................................................77 BIOGRAFI PENULIS .........................................................................................103

  

DAFTAR TABEL

  Tabel I. Daftar fase gerak ...............................................................................16 Tabel II. Parameter-parameter aplikasi penotolan yang direkomendasikan....27 Tabel III. Rentang kesalahan perolehan kembali yang diperbolehkan .............35 Tabel IV. Kriteria yang diperbolehkan untuk presisi pada kadar analit yang berbeda .....................................................................................36 Tabel V. Kategori Analisis Kimia ...................................................................39 Tabel VI. Data pengukuran panjang gelombang serapan maksimum kurkumin...........................................................................................54 Tabel VII. Data nilai R f baku dan sampel ..........................................................60 Tabel VIII. Data kurva baku kurkumin ...............................................................63 Tabel IX. Resolusi puncak kurkumin dengan puncak senyawa 2.....................67 Tabel X. Hasil penentuan perolehan kembali (recovery) kurkumin baku .......68 Tabel XI. Hasil penentuan KV kurkumin baku ................................................69 Tabel XII. Perolehan kembali dan KV baku kurkumin dalam sampel...............70 Tabel XIII. Perbandingan AUC kurkumin dalam sampel dan kurkumin dalam sampel yang ditambah baku ...................................................70 Tabel XIV. Perbandingan tinggi puncak kurkumin dalam sampel dan kurkumin dalam sampel yang ditambah baku ..................................71

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar 1. Logo Obat Herbal Terstandar (OHT) .................................................7 Gambar 2. Seyawa Kurkumin, Demetoksi Kurkumin, dan Bis-demetoksi kurkumin...........................................................................................10 Gambar 3. Isomer geometrik cis-trans dari kurkumin .......................................10 Gambar 4. Tautomerisasi bentuk keto-enol senyawa kurkuminoid ...................12 Gambar 5. Strukutur kimia kurkumin dalam berbagai pH .................................13 Gambar 6. Produk degradasi kurkumin pada pH alkali......................................14 Gambar 7. Struktur trans-6-(4-hydroxy-3- methoxyphenyl )-2,4-dioxo-5-

  hexenal ..............................................................................................15

  Gambar 8. Produk fotodegradasi kurkumin........................................................15 Gambar 9. Cara penentuan harga R f ...................................................................18 Gambar 10. Interaksi antara analit dengan fase diam silika gel ...........................19 Gambar 11. Keadaan simetris dan pelebaran puncak kromatogram ....................22 Gambar 12. Ilustrasi 3 prinsip utama yang menggambarkan puncak; (a).

  Pengaruh lintasan ganda (multiple-path effect); (b). Pengaruh difusi longitudinal; (c). Pengaruh transfer massa .............................22 Gambar 13. Isoterm sorpsi serta profil-profil puncak yang dihasilkan. (a).

  Isoterm linier (b). Puncak tailing dan (c). Puncak fronting ..............23 Gambar 14. Ilustrasi resolusi pada KLT: (a) kromatogram; (b) profil kromatografi masing-masing bercak ................................................24 Gambar 15. Pengukuran resolusi 2 puncak yang berdekatan ...............................25

  Gambar 16. Pemantulan sinar...............................................................................29 Gambar 17. Gugus kromofor dan auksokrom pada struktur kurkumin................53 Gambar 18. Kromatogram panjang gelombang maksimum kurkumin ................54 Gambar 19. Kromatogram baku kurkumin 260 ppm............................................56 Gambar 20. Gugus polar dan gugus non polar pada kurkumin ............................56 Gambar 21. Interaksi hidrogen antara kurkumin dengan fase diam .....................57 Gambar 22. Interaksi kurkumin dengan fase gerak ..............................................57 Gambar 23. Interaksi antara asam asetat glasial dengan silika gel.......................58 Gambar 24. Perbandingan kromatogram sampel (A) dan kromatogram baku kurkumin (B).....................................................................................60 Gambar 25. Ilustrasi keadaan kesetimbangan pada pemisahan senyawa A

  (kurkumin) dengan senyawa lainnya ................................................61 Gambar 26. Hubungan antara konsentrasi kurkumin dengan AUC/50

  ( replikasi I).......................................................................................65 Gambar 27. Nilai Rs puncak kurkumin sampel dan kesamaan R baku

  f

  dengan puncak kurkumin pada sampel .............................................66

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Sertifikat analisis baku kurkumin...................................................78 Lampiran 2. Hasil uji pH stabilitas kurkumin.....................................................79 Lampiran 3. Hasil kromatogram pengukuran panjang gelombang serapan maksimum ......................................................................................81 Lampiran 4. Sistem KLT-Densitometri yang digunakan....................................84 Lampiran 5. Kromatogram kurva baku kurkumin ..............................................86 Lampiran 6. Penimbangan baku dan contoh perhitungan kadar baku ................88 Lampiran 7. Kromatogram hasil validasi metode...............................................90 Lampiran 8. Data penimbangan dan contoh perhitungan recovery ....................93 Lampiran 9. Contoh perhitungan SD dan CV .....................................................95 Lampiran 10. Kromatogram penentuan akurasi dan presisi baku dalam sampel..96 Lampiran 11. Data perhitungan nilai resolusi antara puncak kurkumin dengan puncak senyawa 2 dan contoh perhitungannya ............................100 Lampiran 12. Data dan contoh perhitungan nilai recovery dan CV baku dalam matriks sampel..............................................................................101

  

INTISARI

  Kurkumin merupakan senyawa polifenol yang memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi namun tidak stabil terhadap pH di atas 7 dan paparan cahaya. Kandungan kurkumin dalam ekstrak kunyit dimanfaatkan dalam produksi sediaan kapsul lunak Obat Herbal Terstandar (OHT). Oleh karena itu, stabilitas kadar kurkumin pada saat distribusi dan penyimpanan sediaan OHT penting untuk diketahui.

  Metode penetapan kadar kurkumin dalam sediaan kapsul lunak OHT dilakukan secara KLT-Densitometri. Sistem KLT-Densitometri yang digunakan adalah fase normal dengan fase gerak kloroform : asam asetat glasial : heksana (85 : 10 :5) v/v dan fase diam silika gel G 60 yang diukur pada 425 nm.

  Parameter validasi metode yang ditentukan adalah selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan rentang. Hasil penelitian validasi baku menunjukkan metode KLT-Densitometri memiliki selektivitas yang baik dengan nilai resolusi pada pemisahan sampel adalah 2,2399. Metode ini memiliki linearitas yang baik pada konsentrasi kurkumin 100 – 500 ppm (r = 0,9996) dan rentang 260 - 500 ppm. Perolehan kembali dan KV untuk kadar rendah, sedang dan tinggi berturut-turut adalah 104,07%, 2,72%; 99,28%, 0,34%; dan 100,11%, 0,79%. Hasil validasi baku dalam matriks sampel memiliki perolehan kembali dan KV berturut-turut yaitu 102,07% dan 3,64%.

  Kata kunci : kurkumin, kapsul lunak OHT, KLT-densitometri

  

ABSTRACT

  Curcumin is a polyphenol compound which has activity as an anti- inflammatory but not stable to pH above neutral and light exposure. The content of curcumin in turmeric extract used in the production of Scientific Based Herbal Medicine (SBHM) soft capsule. Therefore, the stability of curcumin content during distribution and storage of SBHM dosage form important to know.

  Curcumin content determination method performed by TLC- Densitometry. TLC-Densitometry system used is a normal phase with mobile phase chloroform: glacial acetic acid: hexane (85: 10: 5) v/v and stationary phase silica gel G 60 that was measured at 425 nm.

  Specified validation parameters are selectivity, linearity, accuracy, precision, and range. The results show the validation of raw-Densitometry TLC method has good selectivity with the resolution of the separation of the sample is 2.2399. This method has good linearity of concentrations of curcumin from 100 to 500 ppm (r = 0.9996) and range about 260 – 500 ppm. The recoveries and CV for low, medium and high concentration respectively is 104.07%, 2.72%, 99.28%, 0.34%, and 100.11%, 0.79%. The validation raw material in the sample matrix had the recovery and CV, respectively, are 102.07% and 3.63%.

  Key words: curcumin, SBHM soft capsule, TLC-densitometry

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Kurkumin merupakan senyawa polifenol berwarna kuning oranye yang

  berkhasiat sebagai analgesik-antiinflamasi. Kurkumin yang terkandung dalam ekstrak simplisia rimpang kunyit (Curcumae domesticae Rhizoma) ditemukan bersama kedua turunannya yaitu demetoksi kurkumin dan bis-demetoksi kurkumin. Beberapa perusahaan telah mempergunakan kunyit sebagai bahan dasar pembuatan Obat Herbal Terstandar (OHT) (Usia, 2010).

  Dalam dua dasawarsa terakhir penggunaan obat tradisional mengalami perkembangan yang sangat pesat (Usia, 2010). Minat masyarakat terhadap sediaan obat tradisional meningkat karena sediaan obat tradisonal diyakini sebagai obat alam yang memiliki akses hingga seluruh lapisan masyarakat, selain itu harganya terjangkau bagi seluruh lapisan masyarakat. Oleh karena itu, Badan Pengawas Obat dan Makanan melakukan peningkatan mutu obat tradisional melalui standarisasi bahan baku dan uji praklinik menjadi produk OHT (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 1994).

  Salah satu produk OHT yang mengandung kurkumin sebagai senyawa

  ® ®

  aktif dominan adalah Rheumakur . Rheumakur mengandung kurkuminoid (10

  ®

  mg) dan minyak atsiri dari ekstrak kunyit dan temulawak (100 mg). Rheumakur merupakan salah satu obat tradisional dalam sediaan kapsul lunak.

  2 Senyawa aktif yang diteliti pada penelitian ini adalah kurkumin. Kurkumin memiliki stabilitas yang rendah terhadap pH dan paparan cahaya (Stankovic, 2004). Hal ini mempengaruhi mutu sediaan karena kurkumin menjadi tidak stabil dalam proses distribusi dan penyimpanan sehingga dimungkinkan kadar kurkumin menjadi berkurang. Kadar kurkumin yang berkurang akan berpengaruh terhadap besarnya efek antiinflamasi yang ditimbulkan. Mutu sediaan OHT akan terjamin apabila jumlah dan kadar senyawa aktif pada setiap sediaan yang didistribusikan seragam dan sesuai dengan yang tertera pada kemasan. Untuk itu diperlukan penetapan kadar kurkumin dalam kapsul lunak

  ®

  OHT merk Rheumakur pada nomor batch yang sama namun berbeda apotek untuk mengetahui stabilitas kurkumin dalam penyimpanan.

  Penelitian ini merupakan serangkaian proses yaitu optimasi, validasi metode dan penetapan kadar kurkumin. Metode yang dilakukan pada penelitian analisis kurkumin ini adalah KLT-densitometri. Sistem KLT yang digunakan merupakan fase normal dengan fase diam silika gel G 60 dan fase gerak kloroform : asam asetat glasial : heksana (85 : 10 : 5) yang merupakan hasil optimasi. Metode yang digunakan adalah KLT-densitometri karena memiliki kelebihan yaitu dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif secara simultan.

  Validasi metode diperlukan untuk membuktikan bahwa parameter

  

metode analisis yang dilakukan memenuhi persyaratan sesuai dengan yang

diharapkan. Parameter-parameter yang harus dipenuhi meliputi akurasi, presisi,

  selektivitas, linearitas dan rentang. Nilai yang baik untuk akurasi baku kurkumin

  3 ditentukan melalui perhitungan perolehan kembali (98-102%), presisi baku kurkumin ditentukan melalui perhitungan koefisien variasi (<2%), selektivitas ditentukan melalui nilai resolusi (>1,5) dan kesamaan faktor retardasi sampel dan baku, serta linearitas dengan nilai r >0,999. Sedangkan akurasi dan presisi baku kurkumin dengan kadar 0,01% dalam matriks sampel yang baik secara berturut- turut ditunjukkan melalui nilai perolehan kembali 90-107% dan KV < 5,3% (Harmita, 2004; United States Pharmacopeial Convention, 1995; Yuwono dan Indrayatno, 2005).

  1. Perumusan masalah

  Berdasarkan latar belakang, maka diperoleh permasalahan sebagai berikut: Apakah metode KLT-Densitometri yang digunakan pada penetapan kadar

  ®

  kurkumin dalam sediaan kapsul lunak OHT “Rheumakur ” memenuhi parameter validasi meliputi selektivitas, linearitas, rentang , akurasi, dan presisi?

  2. Keaslian penelitian

  Sejauh pengetahuan penulis, penelitian validasi penetapan kadar kurkumin secara KLT-densitometri yang sudah pernah dilakukan, antara lain: Penentuan kadar kurkumin secara kromatografi lapis tipis-densitometri (Martono, 1996) dalam serbuk rhizoma Curcuma longa L. dengan fase gerak kloroform : etanol : air suling (25 : 0,96 : 0,04), Simultaneous determination of curcuminoids

  

in curcuma samples using high performance thin layer chromatography (Gupta,

  Gupta, Kumar, 1999) dengan fase gerak kloroform : metanol (95 : 5),

  

Quantitative Analysis of Curcumin, Demethoxycurcumin and

Bisdemethoxycurcumin in the Crude Curcuminoid Extract from Curcuma longa in

  4

  Thailand by TLC-Densitometry (Pothitirat, Gritsanapan, 2005) dan Occurrence of

curcuminoids in curcuma longa: a quality standardization by HPTLC

  (Paramasivam, Aktar, Poi, Banerjee, Bandyopadhyay, 2008) dengan fase gerak kloroform : metanol (48 : 2).

  Penelitian yang dilakukan penulis memiliki perbedaan terhadap penelitian yang tercantum di atas. Penulis lebih menekankan pada penjaminan mutu obat tradisional khususnya stabilitas kadar kurkumin dalam sediaan kapsul Obat Herbal Terstandar, bukan dalam simplisia maupun ekstrak. Parameter lain yang membedakan dengan penelitian sebelumnya adalam sistem fase gerak yang digunakan penulis yaitu kloroform : asam asetat glasial : heksana (85 : 10 : 5) v/v.

3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat metodologis. Penelitian ini diharapkan mampu memberikan metode baru karena digunakan sistem fase gerak yang belum dilakukan pada penelitian sebelumnya. Selain itu, penelitian ini juga diharapkan dapat memberikan pemahaman mengenai parameter validasi antara lain selektivitas, linearitas, rentang, akurasi, dan presisi pada validasi metode penetapan kadar kurkumin secara Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri b. Manfaat praktis. Hasil dari penelitian ini diharapkan mampu memberikan suatu informasi bahwa metode KLT-Densitometri dapat digunakan untuk penetapan kadar kurkumin dalam sediaan OHT.

  5

B. Tujuan Penelitian

  Tujuan dari penelitian ini secara umum adalah untuk melakukan penjaminan mutu pada sediaan obat tradisional. Penjaminan mutu dilakukan melalui penetapan kadar kurkumin. Untuk itu, tujuan penelitian ini secara khusus adalah untuk mengetahui bahwa validasi metode KLT-Densitometri pada

  ®

  penetapan kadar kurkumin dalam kapsul lunak OHT Rheumakur memenuhi parameter validasi yang baik meliputi selektivitas, linearitas, rentang, akurasi, dan presisi.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Kapsul Lunak Obat Herbal Terstandar Kapsul adalah sediaan padat yang terdiri dari obat dalam cangkang keras atau lunak yang dapat larut. Kapsul cangkang lunak umumnya terbuat dari gelatin. Cangkang gelatin lunak umumnya mengandung 6% hingga 13% air. Umumnya

  kapsul cangkang lunak diisi dengan cairan. Khususnya bahan aktif dilarutkan atau disuspensikan dalam bahan pembawa cair. Digunakan pula bahan pembawa minyak seperti minyak nabati. Keunggulan kapsul cangkang lunak adalah keseragaman kandungan dan disolusi obatnya lebih baik daripada kapsul berisi serbuk kering. Namun, kontak antara cangkang lunak atau keras dengan isi zat cair lebih besar dibandingkan dengan kapsul berisi serbuk kering (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

  Teknik pembuatan kapsul lunak yang berisi suspensi telah banyak dilakukan pada produk obat maupun nutraceutical . Formulasi suspensi membutuhkan agen pensuspensi untuk mencegah pengendapan padatan dan menjaga homogenitas dalam kapsul. Agen pensuspensi yang banyak digunakan dengan basis minyak adalah wax, contohnya adalah beeswax, sedangkan polietilen glikol untuk basis tidak berminyak. Pada industri kapsul lunak, ekstrak kering biasa dikombinasikan dengan minyak kedelai sebagai pembawa, beeswax kuning sebagai agen pensuspensi dan pengental, dan lesitin sebagai lubrikan. Jumlah

  7 ekstrak dan bahan lain bergantung pada dosis ekstrak yang hendak diadministrasikan (Naguib, 2000).

  

Gambar 1. Logo Obat Herbal Terstandar (OHT)

  Berdasarkan PERMENKES No.246/MENKES/PER/V/1990 obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik atau campuran dan bahan-bahan tersebut, yang secara tradisional telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman. Sedangkan kapsul lunak Obat Herbal Terstandar adalah sediaan kapsul lunak obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik dan bahan bakunya telah distandarisasi (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 1990).

B. Standarisasi Ekstrak

  Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Ekstrak tumbuhan obat yang dibuat dari simplisia nabati dapat digunakan sebagai bahan awal, bahan antara, atau bahan produk jadi.

  Ekstrak sebagai bahan awal dianalogkan dengan komoditi bahan baku obat yang dengan teknologi fitofarmasi diproses menjadi produk jadi. Sedangkan ekstrak sebagai bahan antara merupakan bahan yang dapat diproses lagi menjadi fraksi-

  8 fraksi, isolat senyawa tunggal ataupun tetap sebagai campuran dengan ekstrak lain (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

  Adapun jika sebagai produk jadi berarti ekstrak yang berada dalam sediaan obat jadi siap digunakan. Ekstrak tersebut bisa dalam bentuk ekstrak kering, ekstrak kental dan ekstrak cair yang proses pembuatannya disesuaikan dengan bahan aktif yang dikandung serta maksud penggunaannya, apakah akan dibuat menjadi sediaan dalam bentuk kapsul, tablet, cairan obat dalam, pil, dan lainnya (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

  Terpenuhinya standar mutu produk atau bahan ekstrak tidak terlepas dari pengendalian proses, artinya bahwa proses yang terstandar dapat menjamin produk yang terstandar tanpa penerapan pengujian atau pemeriksaan. Untuk menjaga kualitas bahan baku obat alam perlu dilakukan usaha budidaya dan standarisasi terhadap bahan baku tersebut, baik yang berupa simplisia maupun yang berbentuk ekstrak atau sediaan galenik (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

  Persyaratan mutu ekstrak terdiri dari berbagai parameter standar umum dan parameter standar spesifik. Pengertian standardisasi juga berarti proses menjamin bahwa produk akhir mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih dahulu (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

  Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid, fenolik, dan lain-lain.

  Struktur kimia yang berbeda-beda akan mempengaruhi kelarutan serta stabilitas

  9 senyawa-senyawa tersebut terhadap pemanasan , udara, cahaya, logam berat dan derajat keasaman (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

C. Ekstrak Rimpang Kunyit

  Curcumae domesticae Rhizoma (rimpang kunyit) adalah rimpang

Curcuma domestica Val. Pemerian yang dimiliki yaitu berbau khas aromatik, rasa

  agak pahit, agak pedas, dan lama kelamaan menimbulkan rasa tebal. Dosis lazim rimpang Kunyit yang diperbolehkan adalah 8 mg/kg (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1977).

  Ekstrak kental rimpang kunyit adalah ekstrak yang dibuat dari rimpang tumbuhan Curcuma domestica Val., mengandung minyak atsiri ≥ 3,2% dan kurkuminoid

  ≥ 33,9% (Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2004). Kandungan dari ekstrak rimpang Kunyit antara lain kurkuminoid, minyak atsiri, lemak 1 -3 %, karbohidrat 3%, protein 30%, pati 8%, vitamin C 45-55%, dan garam-garam mineral (Rukmana, 1994). Dalam kurkuminoid, kandungan kurkumin sebesar 77 %, demetoksi kurkumin 17 % dan bis-demetoksi kurkumin 3% (Anggarwal, 1995).

D. Kurkumin

  Kurkumin adalah senyawa aktif polifenol dengan rumus kimia C

21 H

  20 O 6 . Kurkumin memiliki nilai log P = 2,56 dan merupakan zat warna

  kuning utama (0,5 –6%) yang terdapat dalam rhizoma Curcuma longa L atau

  

Curcuma domestica Val.. Kurkumin bersama turunan demetoksinya yaitu

  10 demetoksi kurkumin (log P = 2,69) dan bis-demetoksi kurkumin (log P = 2,81) dikenal dengan nama kurkuminoid (Martono, 1996). Kurkumin memiliki panjang gelombang serapan maksimum pada 430 nm dalam pelarut metanol dan 425 nm dalam pelarut etanol (Anggarwal, 1995). Kurkumin larut dalam alkohol dan asam asetat glasial, tetapi tidak dapat larut dalam air dan eter (Windholz, 1981). Struktur kurkumin ditampilkan sebagai berikut :

  

R R

_{1 2} O O OH OH R = -OCH dan R = -OCH (Kurkumin) _{1 3 2}

₃

R = -H dan R = -OCH (Demetoksi kurkumin) _{1 2 3} R = -H dan R = -H (Bis-demetoksi kurkumin) _{1 2} Gambar 2. Seyawa Kurkumin, Demetoksi Kurkumin, dan bis-demetoksi kurkumin

  

(Anggarwal, 1995)

  Selain konstituen mayor (kurkumin, demetoksi kurkumin, dan bis demetoksi kurkumin), konstituen minor juga dapat diisolasi yang memiliki bentuk isomer geometrikal dari senyawa 1-3 (Gambar 2). Satu dari antaranya berbentuk isomer geometrik cis-trans (Gambar 3) memiliki titik lebur, stabilitas dalam larutan dan cahaya yang lebih rendah (Stankovic, 2004).

  

Gambar 3. Isomer geometrik cis-trans dari kurkumin (Stankovic, 2004)

  11 Kurkumin memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi pada penyakit osteoartritis. Osteoartritis adalah penyakit reumatik dengan prevalensi yang terus meningkat sesuai dengan pertambahan usia. Secara klinis osteoartritis ditandai oleh nyeri, deformitas, pembesaran sendi, hambatan gerak; disamping itu juga terjadi inflamasi tingkat ringan sampai berat (Kalim, 1996; Rahardjo, 1994).

  Ekstrak rimpang kunyit dengan kadar kurkuminoid 3,66 ± 0,65 % b/b dan 25 mL minyak atsiri rimpang temulawak yang mengandung kamfora, kamfen, kurkumen, bergamoten, germakren B, kurserenon, germakron dan xanthorrhizol mampu menurunkan angka leukosit di dalam cairan sinovial penderita osteoartritis. Sehingga produksi sitokin yang menyebabkan inflamasi menjadi berkurang (Kertia, Sudarsono, Imono, Mufrod, Catur, Rahardjo, dkk, 2005).

  Kurkuminoid mempunyai aktivitas anti inflamasi yang menarik meliputi penghambatan lipid peroksidase (anti oksidan) serta penghambatan aktivitas enzim siklooksigenase dan lipooksigenase (Timmerman, 1995; Kohli, Ali, Ansari, dan Raheman, 2005). Kurkumin mempunyai aktivitas yang paling kuat (IC 50 = 0,05 цM) dibandingkan senyawa turunannya (Agnam dkk, 1995). Selain itu, jumlah kurkumin yang aman dikonsumsi oleh manusia adalah 100 mg/hari (Commandeur dan Vermeulen, 1996). Oleh sebab itu, ekstrak rimpang kunyit dimanfaatkan sebagai bahan dalam pembuatan obat tradisional (Anggarwal, 1995).

  Parameter yang harus diperhatikan dalam pemanfaatan kurkumin dalam pembuatan sediaan obat tradisional adalah stabilits kurkumin. Stabilitas kurkumin sangat dipengaruhi oleh pH lingkungan. Dalam larutan berair, kurkumin

  12 mengalami reaksi hidrolisis dan degradasi yang disebabkan oleh adanya gugus metilen aktif pada senyawa tersebut. Reaksi tersebut sangat dipengaruhi oleh pH lingkungannya (Tonnesen dan Karlsen, 1985a).

  Kurkumin di dalam larutan mengalami tautomerisasi menjadi bentuk keto-enol bergantung pada pelarut yang digunakan. Sembilan puluh lima persen berada dalam bentuk enol (Stankovic, 2004).

  

Gambar 4. Tautomerisasi bentuk keto-enol senyawa kurkuminoid (Stankovic, 2004)

  Kinetika reaksi degradasi hidrolisis dari senyawa cis-trans (Gambar 3) terjadi pada rentang pH 1-11 (Tonnesen dan Karlsen, 1985a). Pada pH <1, diferuloilmetan pada larutan berair berwarna merah yang diindikasikan terjadi protonasi dengan membentuk (H4A+). Pada pH 1-7, sebagian besar diferuloilmetan berada dalam bentuk netral (H3A). Pada pH ini kelarutannya dalam air sangat rendah dan larutan berwarna kuning. Pada pH>7,5 warna berubah menjadi merah. Nilai pKa untuk disosiasi 3 proton asam pada senyawa kurkumin (bentuk H2A-, HA2-, dan A3-) secara berturut-turut adalah 7,8;8,5; dan 9,0 (Stankovic, 2004).

  13 _{HO O +}

  H H A _{4 H CO 3 OH OH OCH 3} HO ^OH H A _{3 H CO 3 O OH OCH 3 -} HO ^O H A _{2 H CO 3 O OH OCH 3 2-} O ^O HA _{H 3 CO O OH OCH 3 3-} O ^O A _{H CO 3 O O OCH 3} Gambar 5. Strukutur kimia kurkumin dalam berbagai pH (Stankovic, 2004)

  Prinsipnya kurkumin relatif stabil pada pH asam, tetapi akan terdekomposisi secara cepat pada pH di atas netral. Pada penelitian degradasi kimia pada pH basa terhadap senyawa kurkumin (Tonnesen dan Karlsen, 1985), produk dekomposisi pada pH 7-10 ditentukan secara HPLC. Produk degradasi terbentuk setelah 5 menit dan kromatogram diperoleh setelah 28 jam pada pH 8,5 menunjukkan degradasi alkali sehingga terbentuk asam ferulat dan feruloilmetan.

  Feruloilmetan secara cepat membentuk produk kondensasi warna (kuning sampai kuning kecoklatan). Produk degradasi yang terbentuk dari hidrolisis feruloilmetan

  14 adalah vanilin dan aseton serta jumlahnya meningkat seiring bertambahnya waktu (Stankovic, 2004).

  

Gambar 6. Produk degradasi kurkumin pada pH alkali (Stankovic, 2004)

  Penelitian lain (Wang dkk, 1997) kurkumin diinkubasi pada 0,1 M buffer fosfat; pH 7,2 pada 37 ºC; dan sejumlah 90% terdekomposisi tidak kurang dari 30 menit. Trans-6-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2,4-dioxo-5-hexenal diprediksi sebagai produk degradasi terbanyak sedang vanilin, asam ferulat, dan feruloilmetan diidentifikasi sebagai produk degradasi minor. Pada bentuk netral, kurkumin tidak stabil pada larutan berair dengan pH >7 (Stankovic, 2004).

  15

  HO _{O O} O O

Gambar 7. Struktur trans-6-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2,4-dioxo-5-hexenal(Stankovic,

2004)

  Instabilitas kurkumin juga dipengaruhi oleh adanya cahaya yang menyebabkan terjadinya degradasi fotokimia senyawa tersebut (Van der Goot, 1997). Prinsipnya, kurkumin tidak stabil terhadap cahaya, terutama dalam bentuk larutan. Setelah mengalami foto-iradiasi, akan terdeteksi produk siklisasi, sama halnya dengan produk dekomposisi asam vanilat, vanilin, dan asam ferulat (Sasaki, Sat, Abe, Sugimoto, dan Maitani, 1998).

  

Gambar 8. Produk fotodegradasi kurkumin (Stankovic, 2004)

  16

E. Kromatografi Lapis Tipis

  1. Kromatografi lapis tipis (KLT) secara umum

  Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan metode pemisahan komponen-komponen berdasarkan perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah gerakan pelarut pengembang atau pelarut pengembang campur (Mulja dan Suharman, 1995). KLT dapat dipakai untuk dua tujuan, yaitu sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, dan preparatif. Tujuan kedua yaitu dipakai untuk menjajaki sistem pelarut dan sistem penyangga (Gritter, Bobit, dan Schwarting, 1991).

  2. Jenis fase diam dan fase gerak KLT

  Fase diam yang banyak terpilih adalah silika gel. Silika gel G adalah silika gel yang dicampur perekat CaSO

  4 lebih kurang 13% (Jork, Funk, Fischer,

  dan Wimmer, 1990). Fase gerak dalam mediun KLT merupakan medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa bahan pelarut yang bergerak di dalam fase diam, karena ada gaya kapiler (Stahl, 1985). Berikut ini merupakan daftar fase gerak beserta indeks polaritasnya:

  

Tabel I. Daftar fase gerak

Eluotropic Polarity Viscosity Density Refractive Boiling Value (e°) Index (cP, 25°C) (g/ml) Index Point

  (on silica) (p’) (25°) (°C) Heksana

  0.00

  0.06 0.30 0.659 1.372

  69 Kloroform

  0.31

  4.40 0.53 1.483 1.443

  61 Asam >0.73

  6.20 1.10 1.049 1.370 118 Asetat

  Glasial Metanol

  0.73

  6.60 0.54 0.791 1.326

  65 (Stahl, 1985)

  17

  3. Migrasi dan retensi solut

  Kecepatan migrasi solut melalui fase diam ditentukan oleh perbandingan distribusinya (D), dan besarnya D ditentukan oleh afinitas relatif solut pada pada kedua fase (fase diam dan fase gerak). Dalam konteks kromatografi, nilai D didefinisikan sebagai perbandingan konsentrasi solut dalam fase diam (Cs) dan dalam fase gerak (Cm) (Gandjar dan Rohman, 2007).

  (1) Jadi semakin besar nilai D maka migrasi solut semakin lambat; dan semakin kecil nilai D maka migrasi solut semakin cepat. Solut akan terelusi menurut perbandingan distribusinya. Jika perbedaan perbandingan distribusi solut cukup besar maka campuran-campuran solut akan mudah dan cepat dipisahkan (Gandjar dan Rohman, 2007).

  4. Pemisahan kromatografi lapis tipis

  Pemisahan kromatografi planar ini pada umumnya dihentikan sebelum semua fase gerak melewati seluruh permukaan fase diam. Solut pada kedua kromatografi ini dikarakterisasi dengan jarak migrasi solut terhadap jarak ujung fase geraknya. Faktor retardasi solut (R f ) didefinisikan sebagai:

  (2) (Gandjar dan Rohman, 2007)

  18 Gambaran untuk menghitung R f terdapat dalam gambar berikut ini:

  

Gambar 9. Cara penentuan harga R (Gandjar dan Rohman, 2007)

_f

  Nilai R f dihitung dengan menggunakan perbandingan sebagaimana dalam persamaan berikut: (3)

  (Gandjar dan Rohman, 2007) Nilai maksimum R f adalah 1 dan ini dicapai ketika solut mempunyai perbandingan distribusi (D) dan faktor retensi (k’) sama dengan 0 yang berarti solut bermigrasi dengan kecepatan yang sama dengan fase gerak. Nilai minimum R adalah 0 dan ini teramati jika solut tertahan pada posisi titik awal di

  f permukaan fase diam (Gandjar dan Rohman, 2007).