VALIDASI METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE TERBALIK PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR MEREK RHEUMAKUR

  

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE

TERBALIK PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM

SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR MEREK

RHEUMAKUR ®

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi oleh: Benny Nugroho

  NIM: 078114027

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

  

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE

TERBALIK PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM

SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR MEREK

RHEUMAKUR

®

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi oleh: Benny Nugroho

  NIM: 078114027

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

HALAMAN PERSEMBAHAN

  

Perjalanan Jauh Ribuan Mil

Dimulai Dari Langkah Pertama

  Sebuah hasil perjuangan dan semangat...

  Kupersembahkan untuk Keluargaku

  Sahabat dan almamaterku

  

PRAKATA

  Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik Pada Penetapan Kadar Kurkumin Dalam Sediaan Kapsul Lunak Obat Herbal

  ®

  Terstandar Merek Rheumakur yang disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Dalam serangkain proses skripsi yang telah dijalani, penulis mendapatkan bantuan dari banyak pihak. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih kepada:

  1. Mama tercinta yang telah memberikan doa dan semangat semoga cepat selesai skripsi dan kuliahnya.

  2. Ipang Djunarko, S.Si., Apt., M.Sc. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dan sekaligus sebagai dosen pembimbing akademik atas perhatian dan semangat yang diberikan kepada penulis selama menjalani serangkaian proses skripsi.

  3. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing atas segala perhatian, dukungan, sentilan, dan semangat yang terus memotivasi penulis dari proses kerja awal hingga proses akhir penyusunan skripsi ini.

  4. Jeffry Julianus, M.Si. selaku dosen penguji atas saran dan kritik yang diberikan

  5. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen penguji atas saran dan kritik yang membangun.

  6. Rini Dwi Astuti, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah memberikan izin kepada penulis untuk melakukan penelitian di laboratorium.

  7. Prof. Dr. Sudibyo, M.S., Apt. yang telah memberikan senyawa baku kurkumin untuk penelitian yang dilakukan oleh penulis.

  8. Mas Bimo, Pak Timbol, Mas Kunto, Mas Parlan atas segala canda dan bantuannya selama peneliti bekerja di laboratorium Kimia Analisis Instrumental.

  9. Segenap dosen pengajar, staf kesekretariatan, staf keamanan, dan laboran Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas dukungan dan bantuannya dalam menyelesaikan skripsi ini.

  10. Dian Prahara Florentino Wara dan Katarina Kusmiyanti sebagai rekan kerja satu tim penulis, atas segala kerja sama sebelum penelitian, selama penelitian, dan dalam proses penyusunan naskah skripsi atas kebersamaannya di saat senang dan susah.

  11. Lala, Toro, Katitik, Seno, Tere, Eliz, Yunita, Venny, dan Lilis sebagai bagian dari tim besar penulis, atas segala kebersamaan sebelum proses penelitian, selama proses penelitian, dan masukan serta ilmu pengetahuan yang sangat berarti dalam proses penyusunan naskah skripsi.

  12. Dika, Wawan, Yudhi, Ius atas bimbingan, bantuan, dorongan, hiburan, dan

  13. Teman-teman seperjuangan penulis selama proses penelitian: Wicak, Siwi, Sere atas segala canda, dan semangat kepada penulis.

  14. Lia Natalia Setiomulyo yang telah memberikan segenap rasa percaya, dorongan, dan semangat kepada penulis.

  15. Teman-teman FST 2007 atas kebersamaan bersama yang selalu mengenang di hati penulis.

  16. Semua orang yang telah membantu penulis dan tidak dapat disebutkan satu per satu, terima kasih atas segala bentuk perhatian dan bantuan yang diberikan.

  Penulis menyadari bahwa skripsi ini belumlah sempurna, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari para pembaca yang diharapkan dapat menyempurnakan skripsi ini. Akhir kata, semoga Tuhan Yang Maha Esa memberikan berkat-Nya kepada semua pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan. Ad Maiorem Dei Gloriam.

  Yogyakarta, Maret 2011 Penulis

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL.................................................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.......................................... iii HALAMAN PENGESAHAN..................................................................... iv HALAMAN PERSEMBAHAN.................................................................. v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA..................................................... vi PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH....................... vii PRAKATA.................................................................................................. viii DAFTAR ISI............................................................................................... xi DAFTAR TABEL....................................................................................... xv DAFTAR GAMBAR.................................................................................. xvi DAFTAR LAMPIRAN............................................................................... xviii

  INTISARI................................................................................................... xix .................................................................................................. xx

  ABSTRACT BAB I. PENGANTAR................................................................................

  1 A. Latar Belakang.........................................................................

  1 1. Permasalahan.......................................................................

  4 2. Keaslian penelitian..............................................................

  4 3. Manfaat penelitian..............................................................

  5 B. Tujuan Penelitian.....................................................................

  5 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA........................................................

  6

  B. Kapsul Lunak............................................................................

  7 C. Kurkumin..................................................................................

  8 D. Spektrofotometri Visibel..........................................................

  10

  1. Definisi spektrofotometri visibel dan konsep dasar radiasi elektromagnetik...................................................................

  10 2. Tipe transisi elektron...........................................................

  11

  3. Analisis kualitatif dan kuantitatif spektrofotometri visibel..................................................................................

  13 E. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).............................

  14 1. Definisi dan tinjauan umum KCKT....................................

  14 2. Variabel-variabel dalam KCKT..........................................

  16 3. Kromatografi partisi............................................................

  20 4. Waktu retensi......................................................................

  21 5. Pemisahan puncak dalam kromatografi..............................

  22 6. Analisis kualitatif dan analisis kuantitatif...........................

  23 F. Validasi Metode Analisis Instrumental...................................

  24 1. Tinjauan umum validasi metode analisis instrumental.......

  24 2. Parameter validasi metode analisis instrumental................

  25 G. Landasan Teori........................................................................

  29 H. Hipotesis..................................................................................

  30 BAB III. METODE PENELITIAN.............................................................

  31 A. Jenis dan Rancangan Penelitian................................................

  31

  C. Definisi Operasional.................................................................

  31 D. Bahan-bahan Penelitian............................................................

  32 E. Alat-alat penelitian...................................................................

  32 F. Tata Cara Penelitian.................................................................

  33 1. Pembuatan fase gerak..........................................................

  33 2. Pembuatan pelarut metanol pH 4.........................................

  33 3. Pembuatan larutan baku kurkumin......................................

  34

  4. Penetapan panjang gelombang

  34 (λ) maksimum kurkumin...

  5. Preparasi sampel.................................................................

  35 6. Validasi metode analisis......................................................

  35 G. Analisis Hasil...........................................................................

  37 1. Selektivitas..........................................................................

  37 2. Linearitas.............................................................................

  38 3. Akurasi................................................................................

  38 4. Presisi...................................................................................

  38 5. Rentang................................................................................

  39 BAB IV. PEMBAHASAN.........................................................................

  40 A. Pembuatan Fase Gerak KCKT.................................................

  40 B. Pembuatan Pelarut dan Stabilitas Kurkumin...........................

  41 C. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin.......................................

  42 D. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kurkumin..........

  42 E. Analisis Kualitatif Berdasarkan Waktu Retensi (t R )

  F. Pembuatan Kurva Baku Kurkumin...........................................

  48 G. Validasi Metode Analisis..........................................................

  51 1. Selektivitas..........................................................................

  52 2. Linearitas.............................................................................

  54 3. Akurasi................................................................................

  54 4. Presisi..................................................................................

  57 5. Rentang...............................................................................

  58 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN...................................................

  59 A. Kesimpulan.............................................................................

  59 B. Saran........................................................................................

  59 DAFTAR PUSTAKA................................................................................

  60 LAMPIRAN...............................................................................................

  64 BIOGRAFI PENULIS...............................................................................

  91

  

DAFTAR TABEL

  Halaman Tabel I. Nilai indeks polaritas pelarut................................................

  17 Tabel II. Kategori metode pengujian validitas data.............................

  24 Tabel III. Parameter validasi yang dipersyaratkan untuk validasi metode

  25 analisis..................................................................................

  Tabel IV. Kriteria penerimaan akurasi pada konsentrasi analit yang

  27 berbeda.................................................................................

  Tabel V. Kriteria penerimaan presisi berdasar kadar analit................

  29 Tabel VI. Penentuan kurva baku kurkumin.........................................

  49 Tabel VII. Penentuan kurva baku kurkumin hasil modifikasi...............

  50 Tabel VIII. Hasil penetapan recovery (%) baku kurkumin....................

  55 Tabel IX. Hasil perhitungan nilai recovery (%) dengan standard addition method ....................................................................

  56 Tabel X. Hasil pengukuran coefficient of variation larutan baku kurkumin..............................................................................

  57 Tabel XI. Hasil pengukuran coefficient of variation dengan standard addition method ....................................................................

  58

  

DAFTAR GAMBAR

  41 Gambar 10. Gugus metilen aktif pada kurkumin.......................................

  48 Gambar 17. Kurva baku kurkumin..............................................................

  47 Gambar 16. Kromatogram baku kurkumin (a) dan kurkumin dalam sampel (b)..............................................................................

  47 Gambar 15. Interaksi kurkumin dengan fase diam oktadesilsilan..............

  46 Gambar 14. Interaksi hidrogen antara kurkumin dengan fase gerak metanol : asam asetat glasial 2% (95:5)................................................

  44 Gambar 13. Gugus polar dan non polar pada struktur kurkumin...............

  44 Gambar 12. Spektra panjang gelombang maksimum kurkumin...............

  42 Gambar 11. Gugus kromofor dan auksokrom pada struktur kurkumin.....

  

18

pada pH asam ≤ 2.....................

  Halaman Gambar 1. Logo Obat Herbal Terstandar.................................................

  26 Gambar 9. Reaksi degradasi kolom C

  25 Gambar 8. Linearitas dengan koefisien korelasi (r) > 0,999...................

  23 Gambar 7. Kromatogram respon analit dalam campuran multikomponen.......................................................................

  21 Gambar 6. Kromatogram pemisahan dua senyawa secara KCKT............

  15 Gambar 5. Reaksi silanasi........................................................................

  12 Gambar 4. Ilustrasi instrumen KCKT.......................................................

  9 Gambar 3. Diagram tingkat energi elektronik..........................................

  7 Gambar 2. Struktur dari kurkumin............................................................

  51

  ®

  merek Rheumakur pada konsentrasi tinggi (6,5ppm)...................................................................................

  53 Gambar 19. Respon sampel sebelum diadisi (kiri) dan sampel setelah diadisi (kanan)..........................................................................

  56 Gambar 20. Respon baku kurkumin pada konsentrasi tinggi (6,5ppm)...................................................................................

  56

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Halaman Lampiran 1. Pernyataan jaminan keaslian senyawa kurkumin standar hasil sintesis....................................................................

  65 Lampiran 2. Data penimbangan bahan................................................

  66 Lampiran 3. Skema pembuatan larutan baku kurkumin dan contoh perhitungan kadar larutan baku yang digunakan............

  67 Lampiran 4. Optimasi stabilitas larutan baku kurkumin berdasar pH....................................................................

  68 Lampiran 5. Spektra panjang gelombang maksimum kurkumin.........

  68 Lampiran 6. Kromatogram baku kurkumin untuk kurva baku............

  69 Lampiran 7. Data penentuan kurva baku kurkumin............................

  72 Lampiran 8. Persamaan dan gambar kurva baku kurkumin................

  73 Lampiran 9. Kromatogram baku kurkumin untuk validasi metode....

  74 Lampiran 10. Perolehan nilai AUC untuk validasi metode dan contoh perhitungan konsentrasi terukur baku kurkumin ...........

  81 Lampiran 11. Contoh perhitungan persen perolehan kembali (recovery) dan coefficient of varriation (CV) baku kurkumin..........

  82 Lampiran 12. Kromatogram sampel dan sampel adisi..........................

  84 Lampiran 13. Perolehan nilai AUC sampel dan sampel adisi, contoh perhitungan konsentrasi terukur, perhitungan recovery, dan coefficient of variation baku kurkumin adisi.............

  89

  

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE

TERBALIK PADA PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM

SEDIAAN KAPSUL LUNAK OBAT HERBAL TERSTANDAR MEREK

® RHEUMAKUR

  

INTISARI

  Kurkumin merupakan senyawa yang memiliki aktifitas farmakologis sebagai antiinflamasi dan salah satunya terkandung dalam Obat Herbal Terstandar

  ®

  (OHT) merek Rheumakur . Aktifitas farmakologi kurkumin tergantung pada ketepatan dan keseragaman dosis. Untuk menjamin ketepatan dosis OHT diperlukan metode penjaminan kualitas kandungan zat aktif.

  Penelitian yang dilakukan bersifat non eksperimental deskriptif. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik dapat digunakan sebagai metode penjaminan kualitas kandungan kurkumin dalam OHT. Validasi metode KCKT fase terbalik menggunakan sistem yang optimal dengan fase diam oktadesilsilan (C ), fase gerak metanol p.a. : asam asetat glasial 2% (95:5 v/v),

  18

  kecepatan alir 1,0 ml/menit dengan detektor visibel pada panjang gelombang 432 nm.

  Parameter validitas metode yang digunakan adalah selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan rentang. Hasil penelitian menunjukkan bahwa metode KCKT fase terbalik memiliki selektifitas yang baik dengan adanya pemisahan sempurna dari peak sampel dan linearitas yang baik dengan nilai koefisien korelasi 0,9996 pada konsentrasi 1,5-6,5 ppm. Nilai recovery dan CV untuk baku kurkumin pada konsentrasi 1,5 ppm; 3,5 ppm; dan 6,5 ppm berturut-turut adalah 94,3922- 97,9863% dan 0,7088%; 86,3053-91,5140% dan 0,6414%; dan 98,7074- 102,9929% dan 0,3687%, sedangkan untuk recovery standard addition method adalah 98,4635-102,2448% dan 1,6705%. Berdasarkan hasil tersebut, metode KCKT fase terbalik pada penetapan kadar kurkumin dalam sediaan kapsul lunak

  ® OHT merek Rheumakur memenuhi parameter validitas yang baik.

  Kata kunci: kurkumin, KCKT, OHT, validasi

  

VALIDATION OF HIGH PERFORMANCE LIQUID

CHROMATOGRAPHY REVERSE PHASE IN CURCUMIN

QUANTIFICATION IN SOFT CAPSULE OF SCIENTIFIC BASED

® HERBAL MEDICINE RHEUMAKUR

  

ABSTRACT

  Curcumin is a compound that has pharmacological activity as anti inflammantory and are found mainly in Scientific Based Herbal Medicine (SBHM). Curcumin pharmacology's activity depends on the accuracy and uniformity of the dose. To guarantee that SBHM's dose is accuracy, it required assurance method which is qualified active substance.

  The research that has conducted is non experimental descriptive. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) reverse phase can be used as a method of quality assurance content of curcumin in SBHM. Validation of HPLC reverse phase with optimal system conditions using the optimal stationary phase octadecylsylane (C ), mobile phase methanol p.a.: glacial acetic acid 2% (95:5

  18 v/v), flow rate 1,0 ml/min with visible detector at wavelength 432 nm.

  Parameter validity of the method used is the selectivity, linearity, accuracy, precision, and range. The results showed that the reverse phase HPLC method has good selectivity in the presence of a perfect separation of the peak sample and a good linearity with coefficient of corelation of 0,9996 at concentration of 1,5 to 6,5 ppm. Recovery and Coefficient of Variations values for raw curcumin at a concentration of 1,5; 3,5; and 6,5 ppm respectively is 94,3922 to 97,9863% and 0,7088%; 86,3053 to 91,5140% and 0,6414%; and 98,7074 to 102,9929% and 0,3687%, while the standard addition method for recovery is 98,4635 to 102,2448% and 1,6705%. Based on these results, reverse phase HPLC method on the determination of curcumin in soft capsule dosage

  ® SBHM Rheumakur meets good validity parameters.

  Key words: curcumin, HPLC, SBHM, validation

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Kecenderungan gaya hidup back to nature menyebabkan sebagian besar

  masyarakat mulai beralih dari penggunaan obat moderen ke penggunaan obat tradisional untuk menunjang kesehatan tubuh. Pertimbangan berdasarkan pada aspek ekonomi dan keamanan bagi kesehatan bisa menjadi dua alasan mendasar di mana masyarakat mulai beralih ke penggunaan obat tradisional. Persentase penggunaan obat tradisional dari tahun ke tahun terus mengalami peningkatan, baik di negara berkembang maupun negara maju. World Health Organization (WHO) menyebutkan bahwa hingga 80% dari penduduk negara-negara di Asia dan Afrika telah menggunakan pengobatan tradisional sebagai pengobatan utama (WHO, 2008).

  Salah satu golongan obat tradisional yang digunakan adalah Obat Herbal Terstandar (OHT) yang mengandung kurkumin. Obat Herbal Terstandar (OHT) merupakan golongan obat tradisional yang khasiat dan keamanannya telah terbukti secara ilmiah melalui uji praklinik dan bahan bakunya telah mengalami standarisasi. Kurkumin merupakan senyawa aktif yang salah satunya berasal dari tanaman Curcuma longa L. Kurkumin merupakan salah satu komponen kurkuminoid dengan persentase terbesar. Kurkumin memiliki aktifitas antiinflamasi, antioksidan, antimikrobia, dan menghambat pertumbuhan sel kanker. Salah satu contoh OHT mengandung kurkumin yang beredar di pasaran

  ® yaitu kapsul lunak Rheumakur yang berkhasiat sebagai anti rheumatik.

  Aktifitas farmakologi kurkumin tergantung pada ketepatan dan keseragaman dosis. Untuk menjamin ketepatan dosis suatu sediaan obat herbal tradisional diperlukan penjaminan kualitas kandungan zat aktif dalam sediaan obat herbal tradisional jenis OHT. Jaminan kualitas terhadap produk obat herbal tradisional sangat dibutuhkan seiring dengan meningkatnya permintaan terhadap produk obat herbal tradisional jenis OHT yang mengandung kurkumin dalam

  ®

  bentuk sediaan padat, khususnya Rheumakur . Tujuan dari penjaminan kualitas adalah terciptanya produk yang berkhasiat dan aman pada obat herbal tradisional khususnya OHT yang mengandung kurkumin, di mana ditunjukkan oleh ketepatan dan keseragaman dosis setiap proses produksinya.

  Penjaminan kualitas pada sediaan OHT yang mengandung kurkumin memerlukan metode yang tervalidasi dengan nilai selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan rentang yang baik (United States Pharmacopeial Convention, 2007). Pemilihan metode penetapan kadar yang akan digunakan untuk analisis kuantitatif sangat penting, karena akan mempengaruhi validitas dari hasil yang diperoleh.

  Validasi metode merupakan proses yang dilakukan melalui penelitian laboratorium untuk membuktikan bahwa karakteristik kinerja metode itu memenuhi persyaratan aplikasi analitik yang dimaksudkan. Tujuan dilakukan validasi metode adalah untuk membuktikan dan menjamin bahwa metode analisis yang digunakan memiliki validitas yang baik sehingga hasilnya dapat dipercaya.

  Beberapa penelitian mengenai analisis kurkumin secara KCKT yang telah dilakukan antara lain menggunakan fase diam C

  18 dan fase gerak metanol :

  asam asetat glasial 2% (90:10 v/v) dengan detektor visibel (Widjaja, 2011), fase diam amino bonded dan fase gerak etanol absolut dengan detektor visibel (Sumule, 2007). Hal utama yang membedakan penelitian ini dengan penelitian sebelumnya terletak pada komposisi fase gerak dan kecepatan alir yang digunakan.

  Berdasarkan penelusuran pustaka yang dilakukan oleh peneliti, validasi metode KCKT untuk penetapan kadar pada sediaan kapsul lunak OHT merek

  ®

  Rheumakur yang mengandung kurkumin belum pernah dilakukan. Pemilihan metode KCKT fase terbalik didasarkan pada selektivitas metode tersebut dimana memiliki kemampuan untuk memisahkan suatu senyawa dari campuran sampel yang multikomponen dalam kadar yang kecil.

  Pada penelitian ini dilakukan proses validasi terhadap sistem KCKT fase terbalik hasil optimasi dalam rangkaian penelitian penetapan kadar kurkumin

  ®

  dalam sediaan kapsul lunak OHT merek Rheumakur , yaitu: optimasi, validasi, dan penetapan kadar. Berdasarkan hasil optimasi diperoleh kondisi optimal sistem KCKT fase terbalik menggunakan fase diam C dan fase gerak metanol : asam

  18

  asetat glasial 2% (95:5 v/v) dengan kecepatan alir 1,0 ml/menit yang selanjutnya digunakan sebagai sistem acuan pada proses validasi ini.

  Metode KCKT fase terbalik yang akan digunakan oleh peneliti diharapkan mampu memberikan selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan untuk menetapkan kadar kurkumin dalam sediaan kapsul lunak OHT merek

  ® Rheumakur .

  1. Permasalahan

  Berdasarkan latar belakang tersebut, maka permasalahan yang muncul adalah apakah metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik menggunakan sistem yang sudah dioptimasi pada penetapan kadar kurkumin dalam sediaan

  ®

  kapsul lunak Obat Herbal Terstandar merek Rheumakur memenuhi persyaratan validitas seperti: selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan rentang?

  2. Keaslian penelitian

  Penelitian mengenai kurkumin yang telah dilakukan adalah kurkumin dalam sediaan farmasi (tablet, serbuk, dan kapsul), serbuk hasil sintesis, ekstrak, dan cairan tubuh secara kromatografi lapis tipis (Tonnesen dan Karlsen , 1986), validasi metode penetapan kadar kurkumin secara kromatografi cair kinerja tinggi dan aplikasinya dalam sediaan sirup (Sumule, 2007), serta validasi metode penetapan kadar kurkumin dalam sediaan cair Obat Herbal Terstandar Merek

  ® Kiranti Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik (Widjaja, 2011).

  Sejauh penelusuran pustaka yang telah dilakukan oleh peneliti, penelitian tentang validasi metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik pada penetapan kadar kurkumin dalam sediaan kapsul lunak Obat Herbal Terstandar merek

  ® Rheumakur belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat metodologis. Hasil penelitian ini memberikan satu alternatif metode baru yang memiliki validitas yang baik dalam menetapkan kadar

  ®

  kurkumin dalam sediaan kapsul lunak Obat Herbal Terstandar merek Rheumakur menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik menggunakan sistem optimal dengan validitas yang baik.

  b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan dapat digunakan untuk menetapkan kadar kurkumin dalam sediaan Obat Herbal Terstandar bentuk kapsul

  ® lunak merek Rheumakur yang beredar di pasaran.

B. Tujuan Penelitian

  Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik memenuhi parameter validitas, yaitu: selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan rentang pada penetapan kadar

  ®

  kurkumin dalam sediaan kapsul lunak Obat Herbal Terstandar merek Rheumakur menggunakan sistem yang sudah dioptimasi.

  

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA A. Obat Herbal Terstandar (OHT) Menurut Undang-Undang No.23 tahun 1992 tentang kesehatan bab I

  pasal I ayat (10) obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan cairan (galenik) atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun temurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman.

  Berdasarkan Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) Republik Indonesia nomor: HK.00.05.4.2411, penggolongan obat bahan alam Indonesia berdasarkan cara pembuatan serta jenis klaim penggunaan dan tingkat pembuktian khasiat, dikelompokkan menjadi jamu, Obat Herbal Terstandar (OHT), dan fitofarmaka.

  Obat Herbal Terstandar adalah sediaan obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik dan bahan bakunya telah distandarisasi. Standarisasi merupakan serangkaian parameter, prosedur, dan cara pengukuran yang hasilnya berupa paradigma mutu sesuai standar dan jaminan stabilitas produk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).

  Obat Herbal Terstandar mengandung ekstrak yang diperoleh dari proses standarisasi sehingga menjamin produk yang terstandar dengan kadar senyawa

  1. Aman sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan

  2. Klaim khasiat dibuktikan secara ilmiah atau pra klinik

  3. Telah dilakukan standarisasi terhadap bahan baku yang digunakan dalam produk jadi

  4. Memenuhi persyaratan mutu yang berlaku (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).

  

Gambar 1. Logo Obat Herbal Terstandar (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2004)

B.

   Kapsul Lunak

  Kapsul adalah sediaan padat yang terdiri dari obat dalam cangkang keras atau lunak yang dapat larut. Cangkang umumnya terbuat dari gelatin,tetapi dapat juga terbuat dari pati atau bahan lain yang sesuai. Cangkang gelatin lunak sedikit lebih tebal dibanding kapsul cangkang keras dan dapat diplastisasi dengan penambahan senyawa poliol. Umumnya kapsul cangkang lunak berisi cairan, khususnya bahan aktif di mana dilarutkan atau disuspensikan dalam bahan pembawa cair.

  Keseragaman bobot pada kapsul lunak yang berisi obat cair atau pasta yaitu timbang 10 kapsul, timbang lagi satu per satu. Keluarkan isi semua kapsul, cuci cangkang kapsul dengan eter. Buang cairan cucian, biarkan hingga tidak bobot rata-rata tiap isi kapsul. Perbedaan dalam persen bobot isi tiap kapsul terhadap bobot rata-rata tiap isi kapsul tidak lebih dari 7,5 % (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

C. Kurkumin

  Kurkumin merupakan salah satu jenis kandungan dalam kurkuminoid selain demetoksikurkumin, dan bis-demetoksikurkumin. Kurkumin secara kuantitas merupakan komponen terbesar dalam kurkuminoid yang memberikan warna kuning (Dandekar and Patravale, 2009).

  Dari ketiga senyawa kurkuminoid, kurkumin merupakan komponen terbesar. Kandungan kurkumin dalam kunyit mencapai 50-60% sedangkan demetoksikurkumin dan bis-demetoksikurkumin hanya terdapat dalam jumlah kecil sehingga seringkali kadar total kurkuminoid dihitung sebagai persen (%) kurkumin. Berdasarkan alasan tersebut, beberapa penelitian lebih ditekankan pada kurkumin (Parinussa dan Timotius, 2002).

  Hasil kajian pra klinik mengenai kurkumin menunjukkan khasiat yang nyata untuk mengatasi berbagai macam penyakit. Kurkumin dari rimpang kunyit memiliki khasiat sebagai anti bakteri broad spectrum, sehingga telah dimanfaatkan dalam ramuan jamu, Obat Herbal Terstandar dan fitofarmaka.

  Selain itu, hasil uji pra klinik pada tikus menunjukkan bahwa kurkumin dari kunyit mampu menghambat pertumbuhan dan perkembangbiakan sel kanker payudara yang telah resisten terhadap macam-macam obat, baik karena

  

independent ), menghambat perkembangbiakan sel kanker kolon in vitro, leukimia

  dan sel kanker kulit. Sebagai antivirus, kurkumin bekerja dengan cara menghambat enzim integrase HIV-1, protease HIV-1 sehingga menghambat transaktivasi HIV-1. Kurkumin juga memiliki aktivitas sebagai imunostimulan dengan kemampuannya meningkatkan sintesis antibodi IgG dan meningkatkan sitotoksisitas Natural Killer Cells. Kurkumin juga dikenal sebagai anti inflamasi, bekerja dengan cara menghambat aktivitas enzim lipooksigenase dan siklooksigenase (Bermawie, Rahardjo, Wahyuno, dan Ma’mun, 2006).

  Kurkumin sukar larut dalan air, heksan, dan petroleum eter, agak larut dalam benzen, kloroform, eter, tetapi larut dalam alkohol, aseton, dan asam asetat glasial (Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, 1996).

  

Gambar 2. Struktur dari kurkumin (Aggarwal et al., 2006)

  Stabilitas kurkumin dipengaruhi oleh pH dan cahaya. Dalam larutan beraquadestilata kurkumin mengalami reaksi hidrolisis degradatif yang bergantung pH lingkungan. Kecepatan degradasi pada pH kurang dari 7 lebih lambat dibanding pH lebih dari 7 (Dandekar and Patravale, 2009).

  Pada larutan pH asam, kurkumin berwarna kuning, dalam suasana basa kurkumin akan terdegradasi menjadi trans-6- (4’-hidroksi-3-metoksifenil)-2,3- berwarna coklat kemerahan yang pekat sampai warna kuning muda (Sharma et al. , 2005). Kurkumin bersifat tidak larut dalam air, tetapi larut dalam alkohol dan asam asetat glasial. Kurkumin akan terdegradasi pada pH di atas 7,2 dan oleh sinar ultra violet. Adanya cahaya dapat menyebabkan terjadinya degradasi fotokimia karena kurkumin memiliki gugus metilen aktif (-CH -) di antara dua

  2 gugus keton pada senyawa tersebut (Tonnesen dan Karlsen, 1985).

  Secara spektrofotometri, absorbansi maksimum kurkumin ( max ) di λ metanol yaitu 430 nm. Kurkumin berwarna kuning pada pH 2,5 sampai 7 dan berwarna merah pada pH > 7. Fluoresensi dari kurkumin terjadi pada asetonitril

  = 549 nm), atau micellar solution = 557 nm),

  max max max

  (λ = 524 nm), etanol (λ (λ tetapi di tolue max = 460, 488 nm) (Aggarwal et al., 2006). n (λ

  Analisis kurkumin secara kuantitatif pada tahun 1983 dilakukan dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) menggunakan detektor fluorometer.

  Adanya gugus polar dan gugus kromofor pada kurkumin secara kuantitatif dapat dianalisis menggunakan KCKT fase terbalik dengan kolom oktadesilsilan dan detektor ultraviolet-visibel (Musfiroh, Indriyati, Susilawati, dan Percekawati, 2009).

D. Spektrofotometri Visibel

  

1. spektrofotometri visibel dan konsep dasar radiasi

Definisi elektromagnetik

  Spektrofotometri visibel adalah pengukuran suatu interaksi antara radiasi gelombang 380-780 nm (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

  Radiasi elektromagnetik pada daerah visibel dapat dianggap sebagai energi yang merambat dalam bentuk gelombang. Panjang gelombang merupakan jarak linier dari suatu titik pada satu gelombang ke titik yang bersebelahan pada gelombang yang berdekatan.

  Prinsip kerja spektrofotometri visibel berdasarkan interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan atom, ion, atau molekul. Serapan atom menyebabkan peralihan elektronik atau transisi elektronik, yaitu peningkatan energi elektron dari tingkat dasar (ground state) ke tingkat energi yang lebih tinggi (excited state).

  Transisi ini terjadi bila energi yang dihasilkan oleh radiasi sama dengan energi yang diperlukan untuk melakukan transisi (Rohman dan Gandjar, 2007).

2. Tipe transisi elektron

  Ada empat tipe transisi elektron yang dapat terjadi yaitu: σ  σ*, n 

  σ*, n  π*, dan π  π*. Transisi elektron (σ  σ*) pada suatu elektron di dalam orbital molekul bonding akan dieksitasikan ke orbital antibonding sehingga molekul berada dalam keadaan excited state

  (σ*). Untuk mengeksitasikan elektron yang ber ada pada suatu ikatan kovalen tunggal terikat kuat (orbital σ) diperlukan radiasi berenergi tinggi atau panjang gelombang pendek. Oleh karena itu, serapan maksimum yang disebabkan oleh transisi ini tidak pernah teramati pada daerah ultraviolet (Mulja dan Suharman, 1995). Transisi elektron (n  σ*) terjadi pada senyawa organik jenuh yang mengandung atom-atom yang memiliki elektron bukan ikatan (elektron n). Energi yang diperlukan untuk transisi jenis ini lebih kecil dibanding transisi

  σ  σ* sehingga sinar yang diserap pun mempunyai panjang gelombang lebih panjang, yaitu sekitar 150-250 nm (Rohman dan Gandjar, 2007).

  

Gambar 3. Diagram tingkat energi elektronik (Skoog et al, 1998)

  Transisi elektron n  π* dan π  π* merupakan transisi yang paling cocok untuk analisis sebab sesuai dengan panjang gelombang antara 200-700 nm.

  Secara teknis dapat diaplikasikan pada spektrofotometer. Untuk memungkinkan terjadinya jenis transisi ini, molekul organik harus mempunyai gugus fungsional yang tidak jenuh sehingga ikatan rangkap dalam gugus tersebut memberikan orbital

  π yang diperlukan (Rohman dan Gandjar, 2007). Kedua transisi ini membutuhkan adanya kromofor dan auksokrom dalam struktur molekulnya.

  Kromofor merupakan gugus fungsional tak jenuh yang menyediakan orbital π yang dapat menyerap pada daerah ultraviolet. Sedangkan auksokrom merupakan gugus jenuh yang bila terikat pada kromofor mengubah panjang gelombang dan intensitas serapan maksimum, cirinya adalah heteroatom yang langsung terikat pada kromofor (Sastrohamidjojo, 2002).

3. Analisis kualitatif dan kuantitatif spektrofotometri visibel

  Pada analisis kualitatif dengan metode spektrofotometri visibel yang dapat ditentukan ada dua yaitu: pemeriksaan kemurnian spektrum visibel dan penentuan panjang gelombang serapan maksimum (Mulja dan Suharman, 1995).

  Dalam analisis kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada cuplikan (larutan sampel) dan intensitas sinar radiasi yang diteruskan diukur besarnya.

  Radiasi yang diserap oleh cuplikan ditentukan dengan membandingkan intensitas sinar yang diteruskan dengan intensitas sinar yang diserap jika tidak ada jenis penyerap lainnya. Intensitas atau kekuatan radiasi cahaya sebanding dengan jumlah foton yang melalui satu satuan luas penampang perdetik.

  Serapan dapat terjadi jika radiasi yang mengenai cuplikan memiliki energi yang sama dengan energi yang dibutuhkan untuk menyebabkan terjadinya perubahan tenaga. Kekuatan radiasi juga mengalami penurunan dengan adanya penghamburan dan pemantulan cahaya, akan tetapi penurunan karena hal ini sangat kecil dibanding dengan proses penyerapan.

  Bouger, Lambert, dan Beer membuat formula secara matematik hubungan antara absorban terhadap intensitas radiasi atau konsentrasi zat yang dianalisis dan tebal larutan.

  I _t −ε.C.b

  (1) T= =10

  I _o

  Menurut Watson (1999), nilai daya serap (a) dapat dinyatakan sebagai sehingga persamaan hukum Lambert-Beer dapat ditulis menjadi:

  1 A= =

  ε.C.b (2)

  T

  Keterangan:

• 1

  T= persen transmitan C= konsentrasi larutan (mol L ) It= intensitas radiasi yang diteruskan b= tebal kuvet (cm) Io= intensitas radiasi yang datang A=serapan/absorbansi

• 1 -1

  cm ) ε= daya serap molar (L mol

  (Rohman dan Gandjar, 2007) Dalam hukum Lambert-Beer tersebut terdapat beberapa pembatasan, yaitu: sinar yang digunakan dianggap monokromatis, penyerapan terjadi dalam suatu volume yang mempunyai penampang luas yang sama, senyawa yang menyerap dalam larutan tidak tergantung terhadap senyawa lain dalam larutan tersebut, tidak terjadi peristiwa fluoresensi atau fosforesensi, dan indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan (Rohman dan Gandjar, 2007).

E. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) 1. Definisi dan tinjauan umum KCKT

  Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan salah satu metode kromatografi cair yang fase geraknya dialirkan secara cepat dengan bantuan tekanan dan hasilnya dideteksi dengan detektor. Pada alat ini diperlukan sistem pompa tekanan tinggi yang mengalirkan fase gerak dari bejana fase gerak ke kromatografi ini disebut High Pressure Liquid Chromatography (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Pada akhir tahun 1970, perkembangan instrumen ini dapat menghasilkan pemisahan yang baik atau menghasilkan penampilan peak yang baik sehingga sistem ini lebih dikenal dengan KCKT (Kromidas, 2000).

  KCKT merupakan teknik analisis yang paling banyak digunakan, karena sensitivitas dari metode ini menghasilkan determinasi kuantitatif yang akurat (Skoog, Holler, dan Nieman, 1998). Maksud dan tujuan analisis dengan KCKT hanya ada dua hal yaitu memperoleh pemisahan yang baik dalam proses yang relatif singkat (Mulja dan Suharman, 1995). Keterbatasan metode KCKT adalah jika analit yang akan dianalisis sangat kompleks maka resolusi yang baik sulit diperoleh (Rohman dan Gandjar, 2007). Peralatan KCKT dapat dilihat pada gambar:

  

Gambar 4. Ilustrasi instrumen KCKT (Lambertson, C., 2009)

2. Variabel-variabel dalam KCKT

  1. Fase gerak. KCKT dapat dikembangkan dengan pelarut tunggal maupun campuran pelarut. Pemisahan dengan fase gerak tunggal disebut elusi isokratik, sedangkan pemisahan dengan dua fase gerak dengan berbagai perubahan komposisi disebut elusi gradien. Fase gerak untuk pemisahan secara KCKT harus murni untuk mencegah adanya peak pengganggu yang dapat tumpang tindih dengan peak analit, tidak bereaksi dengan kemasan, dapat melarutkan cuplikan, viskositasnya rendah (tidak lebih dari 50cP), memungkinkan memperoleh kembali cuplikan dengan mudah bila diperlukan, tidak mudah terbakar, toksisitasnya rendah, dan memiliki harga yang wajar (Skoog, Holler, dan Nieman, 1985).

  Fase gerak KCKT harus bebas dari gas yang terlarut karena dapat mempengaruhi respon detektor sehingga memunculkan sinyal palsu dan akan mempengaruhi kolom (Gritter, Bobbit, Schwarting, 1991). Maka peralatan diperlukan untuk menghilangkan gas yang terlarut di dalam fase gerak

  degassing (Dean, 1995).

  Kepolaran pelarut merupakan ukuran kekuatan pelarut untuk mengelusi suatu senyawa. Kandungan utama fase gerak pada kromatografi fase terbalik adalah air. Kecenderungan air untuk melarutkan sampel dapat diubah dengan menambahkan garam untuk menimbulkan pengaruh penggaraman, asam, basa, dapar untuk melarutkan atau mengendapkan asam atau basa, pereaksi pengompleks untuk menimbulkan jenis pengaruh pelarutan yang khas untuk