Uji daya antioksidan menggunakan radikal 1.1-Difenil-2-Pikrilhidrazil dan penetapan kandungan fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ( Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle) - USD Repository

  

UJI DAYA ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN RADIKAL 1,1-DIFENIL-2-

PIKRILHIDRAZIL DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL

FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL KULIT JERUK NIPIS

(Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle)

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh :

  Febrin Nessy Triana NIM : 098114130

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

  

UJI DAYA ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN RADIKAL 1,1-DIFENIL-2-

PIKRILHIDRAZIL DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL

FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL KULIT JERUK NIPIS

(Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle)

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh :

  Febrin Nessy Triana NIM : 098114130

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

HALAMAN PERSEMBAHAN

  Skripsiku ini kupersembahkan kepada : Tuhan Yesus Kristus Ayah, ibu, kakak dan seluruh keluarga besar Sahabat-sahabat dan

  

PRAKATA

  Puji dan syukur kepada Tuhan Yesus Kristus atas segala berkat dan bimbingan-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul

  

“Uji Daya Antioksidan Menggunakan Radikal 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil

Dan Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol

Kulit Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle)

  ” dengan baik

  sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari segala doa, bantuan dan dukungan dari semua pihak baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, melalui kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

  1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si selaku Dosen Pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan, arahan, petunjuk dan motivasi dengan sabar dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

  3. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. Sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

  4. Ibu Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si. sebagai Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

  5. Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas segala ilmu dan pengetahuan yang telah dibagikan.

  6. Segenap laboran Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, terutama Mas Wagiran selaku laboran Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia dan juga Mas Bimo selaku laboran Laboratorium Kimia Analisis Instumental atas segala bantuan dan bimbingannya selama penulis melakukan penelitian.

  7. Sahabat seperjuangan Putut Wibisono, Wisnu Brahmana Putra, dan my

  special one Augustinus Teti yang telah berjuang bersama dalam melakukan dan menyelesaikan misi ini.

  8. My Besties Anta, Lisu, Selvia, terima kasih atas segala kebersamaan kita selama empat tahun di Farmasi Sanata Dharma. Sahabat tercinta Victor, Agnes, Novia, Neti, Jo, Ina, Topan, Leo, Jimmy, Metri, dan Sashya yang telah menemani dan baerbagi laboratorium dengan penulis.

  9. Teman-teman Farmasi angkatan 2009, khususnya kelas C dan FST B terima kasih atas segala cerita dan kebersaan kita.

  10. Keluarga besar Wisma Sri Widodo (the babikers) yang telah setia menemani dan memberi dukungan setiap saat.

  11. Semua pribadi yang telah memberi dukungan dan semangat yang tak dapat disebutkan satu per satu.

  12. Terima kasih terutama kepada kedua orang tua penulis yang selalu percaya akan keberhasilan penulis.

  Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih memilki banyak kekurangan dan jauh dari sempurna. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati penulis menerima kritik dan saran yang membangun dalam penyempurnaan skripsi ini. Semoga hasil penelitian ini bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan dan mampu memberi sumbangan kecil bagi perkembangan ilmu pengetahuan.

  Yogyakarta, Juli 2013 Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL .................................................................................. i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................ ii HALAMAN PENGESAHAN........................................................................ iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ iv LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...................................................... v HALAMAN PERSEMBAHAN..................................................................... vi PRAKATA ................................................................................................... vii DAFTAR ISI ................................................................................................. x DAFTAR TABEL ......................................................................................... xiv DAFTAR GAMBAR..................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN.................................................................................. xvii

  INTISARI ..................................................................................................... xviii ABSTRACT ................................................................................................. xix BAB I PENGANTAR ..................................................................................

  1 A. Latar Belakang ...................................................................................... 1 1.

  Permasalahan .................................................................................. 3 2. Keaslian penelitian ......................................................................... 3 3. Manfaat penelitian .......................................................................... 4 B. Tujuan Penelitian .................................................................................. 4 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ...........................................................

  6 A. Jeruk Nipis ............................................................................................. 6 1.

  Keterangan botani ........................................................................... 6

  3. Kandungan kimia ............................................................................. 7 4.

  Manfaat tanaman .............................................................................. 8 B. SENYAWA RADIKAL BEBAS ............................................................ 8 C. SENYAWA ANTIOKSIDAN ................................................................ 10 D. FENOL DAN FLAVONOID .................................................................. 12 E. PENYARIAN .......................................................................................... 12 F. METODE DPPH ..................................................................................... 14 G. SPEKTROFOTOMETER VISIBEL ...................................................... 16 H. LANDASAN TEORI .............................................................................. 17 I. HIPOTESIS ............................................................................................. 18

  BAB III METODOLOGI PENELITIAN ...................................................... 19 A. Jenis dan rancangan penelitian ................................................................ 19 B. Variabel penelitian ................................................................................. 19 C. Definisi operasional ................................................................................ 20 D. Bahan dan alat penelitian ........................................................................ 20 1. Bahan penelitian .............................................................................. 20 2. Alat penelitian ................................................................................. 20 E. Tata Cara Penelitian ............................................................................... 21 1. Determinasi tanaman ...................................................................... 21 2. Pemilihan dan pengumpulan bahan ................................................ 21 3. Preparasi simplisia .......................................................................... 21 4. Ekstraksi simplisia .......................................................................... 21

  6. Pembuatan Larutan pembanding, baku dan uji ................................ 22 7.

  Uji pendahuluan ............................................................................... 23 8. Uji aktivitas antioksidan .................................................................. 24 9. Penetapan kandungan fenolik total .................................................. 26

  BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 28 A. Determinasi tanaman .............................................................................. 28 B. Pengumpulan bahan ................................................................................ 28 C. Preparasi sampel ..................................................................................... 28 D. Ekstraksi sampel ...................................................................................... 29 E. Uji pendahuluan ...................................................................................... 32 1. Uji pendahuluan fenolik total .......................................................... 32 2. Uji pendahuluan aktiviras antioksidan ........................................... 33 F. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan .............................................. 35 1. Penentuan λ

  maks metode uji aktivitas antioksidan ............................ 35 2.

  Penentuan operating time metode uji aktivitas antioksidan ........... 37 G. Validasi metode uji aktivitas antioksidan ............................................... 39 1.

  Linieritas .......................................................................................... 41 2. Presisi .............................................................................................. 42 3. Spesifitas .......................................................................................... 43 H. Penentuan aktivitas antioksidan dengan radikal bebas ........................... 43 I. Optimasi metode penetapan kandungan fenolik total ............................. 51 1.

  Penentuan operating time penetapan kandungan fenolik total ........ 51

  J.

  Validasi metode penetapan kandungan fenolik total .............................. 54 1.

  Linieritas .......................................................................................... 55 2. Presisi ............................................................................................... 56 3. Spesifitas .......................................................................................... 56 K. Penetapan kandungan fenolik total ......................................................... 57

  BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 61 A. Kesimpulan .............................................................................................. 61 B. Saran ........................................................................................................ 61 DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 62 LAMPIRAN ................................................................................................... 66 BIOGRAFI PENULIS .................................................................................... 83

  

DAFTAR TABEL

Tabel I. Persamaan regresi linier kurva baku rutin ...............................

  41 Tabel II. Persamaan regresi linier kurva fraksi etil asetat kulit jeruk nipis .........................................................................................

  42 Tabel III. Hasil % CV uji aktivitas antioksidan rutin & fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................................

  43 Tabel IV. Hasil % IC rutin menggunakan radikal DPPH ........................

  45 Tabel V. Hasil % IC fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis menggunakan radikal DPPH ...................................................

  46 Tabel VI. Hasil perhitungan IC

  50 rutin dan fraski etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis .............................................................

  47 Tabel VII. Tingkat kekuatan antioksidan senyawa uji dengan metode DPPH (Ariyanto, 2011) ...........................................................

  48 Tabel VIII. Hasil % CV uji penetapan kandungan asam galat ...................

  56 Tabel IX. Hasil pengukuran absorbansi seri baku asam gala ..................

  58 Tabel X. Hasil penetapan kandungan fenolat total fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................................

  59

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar 1. Perubahan warna larutan pada reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan (Witt, Lalk, Hager, dan Voigt, 2010) ...................

  15 Gambar 2. Skema alat spektrofotometer UV-Vis .....................................

  17 Gambar 3. Hasil uji pendahuluan fenolik (A = reagen Folin-Ciocalteu + larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis, B = kontrol positif [reagen Folin-Ciocalteu + asam galat], C = blanko [reagen Folin-ciocalteu + natrium karbonat]) ...................................................................................................

  33 Gambar 4. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan (A = larutan DPPH + larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis, B = kontrol negatif [larutan DPPH], C = kontrol positif [larutan DPPH + larutan rutin]) ..............................................

  34 Gambar 5. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan (A = larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis + metanol, B = larutan rutin + metanol) .......................................................

  35 Gambar 6. Gugus kromofor dan auksokrom DPPH .................................

  36 Gambar 7. Hasil grafik penentuan operating time rutin ...........................

  38 Gambar 8. Hasil grafik penentuan operating time fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................................

  38 Gambar 9. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan rutin......

  40

  Gambar 10. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................

  40 Gambar 11. Struktur DPPH dan DPPH-H (Molyneux, 2004) ....................

  44 Gambar 12. Struktur rutin (Sidney X. Dos Santos, Luiz H. Mazo, Eder T.

  G. Cavalheiro, 2008) ................................................................

  47 Gambar 13. Hasil uji normalitas rutin .........................................................

  48 Gambar 14. Hasil uji normalitas fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis .........................................................................................

  49 Gambar 15. Hasil uji varian rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................................................................

  50 Gambar 16. Hasil T tidak berpasangan varian rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ................................................

  50 Gambar 17. Grafik penentuan operating time asam galat ..........................

  52 Gambar 18. Grafik penentuan operating time fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis .............................................................

  53 Gambar 19. Kurva persamaan regresi linear asam galat .............................

  54 Gambar 20. Reaksi senyawa fenol dengan reagen folin-Ciocalteu ............

  58 Gambar 21. Struktur asam galat ..................................................................

  58

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Gambar tanaman jeruk nipis dari Purwokerto, Jawa Tengah ..............................................................................

  66 Lampiran 2. Bobot fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis......

  66 Lampiran 3. Data penimbangan uji aktivitas antioksidan .....................

  67 Lampiran 4. Data perhitungan konsentrasi larutan DPPH, larutan pembanding rutin, dan larutan uji ....................................

  68 Lampiran 5. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan .......................

  69 Lampiran 6. Uji akitivitas antioksidan dengan menggunakan radikal DPPH ...............................................................................

  72 Lampiran 7. Perhitungan nilai IC50 rutin dan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis ......................................................

  73 Lampiran 8. Data penimbangan penetapan kandungan fenolik total ...

  75 Lampiran 9. Optimasi penetapan kandungan fenolik total ...................

  76 Lampiran 10. Penetapan Kandungan fenolik total .................................

  78 Lampiran 11. Scanning pengkoreksi ......................................................

  79

  

INTISARI

  Tanpa kita sadari, di dalam tubuh kita telah terbentuk radikal bebas secara terus-menerus, baik dari proses metabolisme sel normal, peradangan, juga akibat respon terhadap pengaruh dari luar tubuh. Antioksidan adalah senyawa yang mampu menetralisasi radikal bebas tersebut. Antioksidan memiliki berbagai manfaat, seperti terhindar dari penyakit degeneratif, kanker dan juga sebagai anti- aging. Oleh karena itu, peneliti merasa perlu untuk mengeksplor tanaman yang memiliki kemampuan daya antioksidan. Salah satu tanaman yang ingin dieksplor oleh peneliti, yaitu kulit jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle).

  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) dan menetapkan kadar fenolat total menggunakan metode Folin-Ciocalteu dari fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis. Hasil uji aktivitas antioksidan dinyatakan dengan nilai IC , yaitu nilai konsentrasi fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis

  50

  yang menghasilkan penangkapan 50% radikal DPPH. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis memiliki nilai IC

  50 sebesar 382,650 ±

  6,721 μg/mL yang termasuk golongan aktivitas antioksidan lemah. Kadar fenolat total sebesar 4,625 ± 0,020 mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis.

  

Kata kunci: fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis, (Citrus aurantifolia

  (Christm.) Swingle), antioksidan, DPPH, kadar fenolik total

  

ABSTRAK

  Without us knowing it, in our body have formed free radicals continuously, both from the normal cell metabolism, inflammation, also due to the response to influences from outside the body. Antioxidants are compounds that can neutralize these free radicals. Antioxidants have a variety of benefits, such as to avoid degenerative diseases, cancer as well as anti-aging. Therefore, researchers feel the need to explore the power plants that have antioxidant capabilities. One of the plants that want to be explored by researchers, the lime peel (Citrus aurantuifolia).

  The purpose of this study was to test the antioxidant activity using DPPH radical (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) and set the total phenolic content using the Folin-Ciocalteu method of ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime peel. The results of this antioxidant activity assay expressed with IC

  50 , that is the

  concentration of ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime peel to capture 50% DPPH radicals. The results showed that the ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime peel have IC

  50 values of 382.65 ± 6.721 mg / mL has a weak

  antioxidant activity. Content of total phenolics was 4.62 ± 0.020 mg gallic acid equivalents per gram of ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime peel.

  

Keywords: ethyl acetate fraction of ethanol extract of lime peel, (Citrus

aurantifolia (Christm.) Swingle), antioxidants, DPPH, total phenolic content

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang sangat reaktif

  dengan elektron yang tidak memiliki pasangan. Radikal bebas mencari reaksi- reaksi agar dapat memperoleh kembali elektron pasangannya (Corwin, 2009).

  Senyawa radikal sangat aktif menyerang molekul penting yang berada di sekelilingnya, baik itu senyawa lipid, protein, lipoprotein, maupun karbohidrat.

  Meski demikian, keberadaan radikal bebas juga bermanfaat bagi tubuh (Winarsi, 2007). Tanpa kita sadari, di dalam tubuh kita telah terbentuk radikal bebas secara terus-menerus, baik dari proses metabolisme sel normal, peradangan, juga akibat respon terhadap pengaruh dari luar tubuh, seperti polusi lingkungan, ultraviolet, dan lain-lain. Oleh karena itu, yang perlu dilakukan adalah mengontrol dan mengatur potensi radikal bebas. Pada tubuh manusia memiliki sistem penangkap radikal bebas yang biasa kita sebut dengan antioksidan. Antioksidan dalam bentuk enzim tersedia di dalam tubuh dan untuk mempertahankannya diperlukan antioksidan sekunder yang berasal dari bahan makanan.

  Antioksidan adalah zat yang mampu menetralisasi radikal bebas, sehingga atom dan elektron yang tidak berpasangan mendapat pasangan dan menjadi stabil. Antioksidan memiliki sangat banyak manfaat bagi tubuh, seperti penetralisir radikal bebas, dan juga dapat mencegah kanker. Oleh sebab itu, minat bebas dan memperlambat progres penyakit kronik pun semakin meningkat (Prior, 2003). Selain itu, antioksidan alami ternyata lebih aman jika dibandingkan dengan antioksidan sintetis yang justru dapat menyebabkan penyakit berbahaya.

  Antioksidan juga semakin digemari karena manfaatnya yang beragam, seperti terhindar dari penyakit degeneratif, kanker dan juga sebagai anti-aging (Tapan, 2005).

  Flavonoid merupakan salah satu golongan fenolik yang bersifat sebagai antioksidan. Flavonoid mencakup banyak pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh tumbuhan mulai dari fungus sampai angiospermae. Pada flavonoid golongan flavon, flavanon, flavonol dan isoflavon banyak tersebar luas pada pigmen tumbuhan berwarna kuning (Robinson, 1991). Hal ini yang menarik minat peneliti untuk ikut mengeksplorasi dan meneliti senyawa antioksidan alami dari kulit jeruk nipis. Berdasarkan penelitian sebelumnya telah diketahui adanya kandungan flavonoid naringin dan hesperidin pada buah jeruk, kulit, maupun biji (Tripoli, E., M. Guardia, S. Giammanco, D. Majo, dan M. Giamanco, 2007). Selain itu pada penelitian, kandungan kimia yang terdapat pada ekstrak kulit jeruk nipis antara lain karbohidrat, asam amino, flavonoid, seperti rutin, hesperidin, myrecetin, senyawa kumarin, seperti psoralene, bergapten, isopimpinellin, imperatorin (Shalaby, Abd-Alla, Ahmeddan Basoudan, 2011). Oleh karena itu, peneliti ingin meneliti seberapa besar kemampuan senyawa dalam kulit jeruk nipis meredam aktivitas radikal bebas DPPH.

  Dasar pemilihan kulit jeruk nipis dimaksudkan agar didapatkan informasi jeruk, sehingga pemanfaatan tidak hanya minyak atsirinya sebagai pemberi aroma tetapi juga memberikan manfaat yang lebih banyak. Selain itu, diharapkan dapat meningkatkan pemanfaatan limbah menjadi sesuatu yang lebih memiliki nilai.

1. Permasalahan a.

  Berapa kadar/kandungan fenolik total fraksi etil asetat ekstrak kulit jeruk nipis yang dinyatakan dengan massa ekivalen asam galat? b.

  Berapa nilai aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan

  IC 50 ? 2.

   Keaslian penelitian

  Uji aktivitas antioksidan kulit jeruk nipis yang dilakukan pada penelitian ini sudah pernah dilakukan sebelumnya oleh Rafaela Guimaraes, Lillian Barros, Joao C.M. Barreira, Mª Joao Sousa, Ana Maria Carvalho, Isabel C.F.R. Ferreira pada tahun 2010 dengan judul penelitian Targeting Excessive Free Radicals with

  

Peels and Juices of Citrus Fruits: Grapefruit, Lemon, Lime and Orange . Akan

  tetapi penelitian yang dilakukan oleh peneliti berbeda dari penelitian yang sudah ada. Perbedaan ini terletak pada metode pengeringan sampel uji dan pelarut yang digunakan oleh peneliti, dimana pada penelitian sebelumnya menggunakan metode liofilisasi dengan pelarut metanol, sedangkan pada penelitian ini digunakan teknik pengeringan dengan oven dan cairan penyari berupa etanol. Sehingga melalui penelitian yang dilakukan ini diharapkan mampu memberikan dilakukan uji antioksidan serta penetapan kandungan fenolik total pada kulit jeruk nipis ini.

3. Manfaat penelitian a.

  Manfaat teoritis. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat memberikan tambahan pengetahuan mengenai aktivitas antioksidan pada ekstrak kulit jeruk nipis.

  b.

  Manfaat metodologis. Hasil penelitian ini dapat dijadikan acuan metode untuk uji aktivitas antioksidan menggunakan radikal bebas DPPH dan penentuan kandungan fenolik total pada tumbuhan.

  c.

  Manfaat praktis. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bagi penelitian lebih lanjut maupun masyarakat luas mengenai potensi ekstrak kulit jeruk nipis sebagai salah satu sumber antioksidan alami.

B. Tujuan Penelitian 1. Khusus a.

  Mengetahui kadar kandungan fenolik total fraksi etil asetat ekstrak kulit jeruk nipis yang dinyatakan dengan massa ekivalen asam galat.

  b.

  Mengetahui nilai aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis menggunakan radikal DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) yang dinyatakan dengan IC 50.

2. Umum

  Memberi informasi tambahan baru tentang antioksidan alami pada kulit jeruk nipis dan ikut berpartisipasi dalam memberi sumbangsih dalam dunia penelitian.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Jeruk Nipis 1. Keterangan botani Jeruk nipis ini memiliki klasifikasi ilmiah sebagai berikut. Kingdom : Plantae Subkingdom : Tracheobionta Superdivision : Spermatophyta Division : Magnoliophyta Class : Magnoliopsida Subclass : Rosidae Order : Sapindales Family : Rutaceae Genus : Citrus Species : Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle Jeruk nipis memiliki beberapa nama umum, seperti jeruk nipis / jeruk pecel (Indonesia), dayap (Philipina), manao (Thailand).

  (United States Department of Agriculture, 2013) 2. Morfologi tanaman

  Jeruk nipis termasuk salah satu jenis Citrus. Jeruk nipis termasuk jenis tumbuhan perdu yang banyak memiliki dahan dan ranting. Tingginya sekitar 0,5- luarnya berwarna tua dan kusam. Daunnya majemuk, berbentuk ellips dengan pangkal membulat, ujung tumpul, dan tepi beringgit. Panjang daunya mencapai 2,5-9 cm dan lebarnya 2-5 cm, sedangkan tulang daunnya menyirip dengan tangkai bersayap, hijau dan lebar 5-25 mm. Bunganya berukuran majemuk/tunggal yang tumbuh di ketiak daun atau di ujung batang dengan diameter 1,5-2,5 cm. Kelopak bunga berbentuk seperti mangkok berbagi 4-5 dengan diameter 0,4-0,7 cm berwama putih kekuningan dan tangkai putik silindris putih kekuningan. Daun mahkota berjumlah 4-5, berbentuk bulat telur atau lanset

  a

  dengan panjang 0,7-1,25 cm dan lebar 0,25-0,5 cm berwarna putih (Anonim , 2013) Tanaman jeruk nipis pada umur 2 1/2 tahun sudah mulai berbuah.

  Buahnya berbentuk bulat sebesar bola pingpong dengan diameter 3,5-5 cm berwarna (kulit luar) hijau atau kekuning-kuningan. Tanaman jeruk nipis mempunyai akar tunggang. Buah jeruk nipis yang sudah tua rasanya asam

  a (Anonim , 2013).

3. Kandungan kimia

  Genus Citrus kaya akan sumber senyawa, seperti minyak atsiri, steroid, limonoid, flavonoid, kumarin dan pektin (Tripoli, 2007). Berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan, kandungan kimia yang terdapat pada ekstrak kulit jeruk nipis antara lain karbohidrat, asam amino, flavonoid, seperti rutin, hesperidin, myrecetin, senyawa kumarin, seperti psoralene, bergapten, isopimpinellin, bergapten, isopimpinellin, imperatorin, isobergapten, kaempferol, myricetin, rutin, β-sitosterol (Shalaby, 2011).

4. Manfaat tanaman

  Jeruk nipis ini sering digunakan masyarakat, baik untuk kesehatan maupun kecantikan, antara lain digunakan sebagai obat batuk, mengobati sembelit, ambeien, suara serak, menambah nafsu makan, mencegah rambut rontok, ketombe, amandel dan juga mimisan (Nala, 2003).

  Selain itu Citrus aurantifolia memiliki manfaat lain, seperti ekstrak kulit dan daun dari kulit jeruk nipis bermanfaat sebagai antifungal karena adanya kandungan senyawa alkaloid dan fenolik yang tinggi (Okwu, Awurum, dan Okoronkwo, 2007).

B. Radikal Bebas

  Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang sangat reaktif dengan elektron yang tidak memiliki pasangan. Radikal bebas mencari reaksi-reaksi agar dapat memperoleh kembali elektron pasangannya. Setelah itu radikal bebas dapat mengalami tubrukan dengan molekul lain dan merusak ikatan di dalam molekul tersebut. Pada akhirnya radikal dapat merusak membran sel, retikulum endoplasma, atau DNA sel yang rentan (Corwin, 2009).

  Senyawa radikal sangat aktif menyerang molekul penting yang berada di sekelilingnya, baik itu senyawa lipid, protein, lipoprotein, maupun karbohidrat.

  Meskipun demikian, keberadaan radikal bebas juga bermanfaat bagi tubuh, dinding sel, detoksifikasi bahan kimia xenobiotik, dan sistem pertahanan tubuh terhadap patogen. Oleh karena itu, perlu dikontrol dan diatur potensi radikal bebas tersebut (Winarsi, 2007). Radikal dapat terbentuk secara endogen (terbentuk dalam tubuh melalui proses metabolisme normal) dan juga secara eksogen (berasal dari bahan pencemar yang masuk ke tubuh) (Subeki, 1998).

1. Tahap inisiasi, yaitu awal pembentukan radikal bebas, misalnya :

• H
• OH

• -

  + •OH

  1

  Secara umum, tahapan reaksi pembentukan radikal bebas mirip dengan rancidity oxidative, yaitu melalui 3 tahapan reaksi berikut.

  Fe

  2+

  2 O 2  Fe 3+

  (1) R

  1

  R

• H
• H + •OH 

2 O (2) 2.

  Tahap propagasi, yaitu pemanjangan rantai radikal R

• 
• R
• 
• R

  R

  (Winarsi, 2007)

  2 -R 2 dst (7)

  2

  2

  R

  2 -R 1 (6)

  R

  1

  2

  R

  1 -R 1 (5)

  1

  2 -H + R

  1

  R

  Tahap terminasi, yaitu bereaksinya senyawa radikal dengan radikal lain atau dengan penangkap radikal, sehingga potensi propagasinya rendah.

  2 -H (4) 3.

  3

  2

  3 -H + R

  R

  1 -H (3)

  2

  R

  1

  R

• R
• 
• R
• 
• R
•  R

C. Senyawa Antioksidan

  Antioksidan biasa didefinisikan sebagai suatu senyawa yang mampu memperlambat, menunda bahkan menghambat reaksi oksidasi dan memegang peranan penting dalam sistem pertahanan tubuh terhadap adanya radikal bebas yang sangat berbahaya, di mana radikal bebas telah diketahui dapat menginduksi penyakit kanker, arteriosklerosis dan penuaan disebabkan oleh kerusakan jaringan (Triana, 2010). Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron (electron

  

donor) atau reduktan. Senyawa ini memiliki berat molekul kecil, tetapi mampu

  menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi, dengan cara mencegah terbentuknya radikal. Antioksidan mampu menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif sehingga dapat menghambat kerusakan sel (Winarsi, 2007).

  Fungsi antoksidan adalah menetralisasi radikal bebas, sehingga tubuh terlindungi dari berbagai macam penyakit degeneratif dan kanker. Fungsi lain antioksidan adalah membantu menekan proses penuaan / antiaging. Para ahli menemukan bahwa di antara semua makhluk hidup yang ada di dunia, kadar antioksidan manusia tercatat yang paling tinggi. Antioksidan merupakan zat yang mampu menetralisasi radikal bebas, sehingga atom danelektron yang tidak berpasangan mendapat pasangan dan menjadi tidak reaktif lagi atau stabil. Radikal bebas sendiri merupakan atom atau molekul yang sifatnya sangat tidak stabil. Ketidakstabilan ini disebabkan atom tersebut memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan (Tapan, 2005). Antioksidan dapat dibagi ke dalam dua golongan, yaitu chain breaking

  antioxidant dan preventative antioxidant. Mekanisme chain breaking : ● ●

  L (8)

• AH → LH + A

  ● ●

  LO (9)

• AH → LOH + A

  ● ●

  LOO (10)

• AH → LOOH + A Dengan demikian, tahap inisiasi dan propagasi pada senyawa radikal dihambat. Di sisi lain, preventative antioksidan memperlambat laju oksidasi, misalnya transisi-metal ion pengkhelat mampu menghambat reaksi Fenton yang menghasilkan radikal hidroksil. Adapun reaksi fenton adalah sebagai berikut.

  3+ - 2+ ●

  2 O

  2 OH + OH (11)

• Fe + H → Fe (Resat Apak, Shela Gorinstein, Volker Bohm, Karen M. Schaich, Mustafa Ozyurek, dan Kubilay Guclu, 2013)

  Untuk mendeterminasi akitivitas antioksidan secara in vitro, metode yang paling umum digunakan antara lain :

  1. HAT (Hydrogen Atom Transfer) based assay HAT-based assay mengukur kapabilitas antioksidan dalam menghambat radikal dengan adanya donasi atom H. Mekanisme HAT dari aksi antioksidan ini dengan mentransfer atom hidrogen (H) pada phenol (Ar-

  ● OH) ke radikal ROO .

  2. ET (Electron Transfer) based assay Pada ET-based assay, antioksidan bereaksi dengan senyawa fluoresens kapasitas antioksidan dari reduksi senyawa oksidan, yang menyebabkan perubahan warna. Derajat perubahan warna memiliki korelasi dengan konsentrasi antioksidan dalam sampel (Resatet al., 2013) D.

   Fenolik dan Flavonoid

  Fenol merupakan produk alami senyawa aromatik yang paling banyak terdapat pada tumbuhan. Sangat banyak senyawa yang masuk dalam kategori fenol, seperti fenol sederhana, fenol eter, phenylpropanoids, flavonoid, tannin (Kauffman, Cseke, Weber, Duke, dan Brielmann, 1999). Flavonoid merupakan bahan antioksidan yang mampu menetralisir oksigen reaktif dan berkontribusi terhadap pencegahan penyakit kronis, seperti kanker. Flavonoid utama dalam jeruk ialah naringin, narirutin, dan hesperidin (Tripoli et al., 2007), sedangkan kandungan flavonoid utama pada kulit jeruk nipis adalah rutin, hesperidin, dan myrecetin (Shalaby et al., 2011)

E. Penyarian

  Penyarian adalah kegiatan penarikan zat yang dapat larut dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Sebagai cairan penyari digunakan air, eter, atau campuran etanol air. Penyarian dengan etanol dan air dilakukan dengan maserasi atau perkolasi (Anonim, 1986).

  Secara umum, cara penyarian dapat dibedakan menjadi :

  1. Infundasi Infundasi adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Sari yang dihasilkan tidak stabil dan mudah tercemari oleh kapang dan kuman. Oleh karena itu, sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24

  o

  jam. Infundasi dibuat dengan cara menyari simpilisia pada suhu 90 C selama 15 menit (Anonim, 1986).

  2. Maserasi Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari sehingga cairan penyari akan menembus dinding sel yang mengandung zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel mengakibatkan pendesakan larutan terpekat dari dalam sel ke luar sel. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara di luar sel dan di dalam sel (Anonim, 1986).

  3. Perkolasi Cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah terbasahi. Cairan penyari akan mengalir dari atas ke bawah melalui serbuk simplisia kemudian cairan akan melarutkan zat aktif di dalam sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh. Serbuk simplisia yang akan diperkolasi dibasahi terlebih dahulu dengan cairan penyari kemudian dimasukkan sedikit demi sedikit ke dalam alat perkolasi (Anonim, 1986).

4. Penyarian berkesinambungan

  Penyarian berkesinambungan merupakan gabungan antara proses untuk menghasilkan ekstrak cair dan proses penguapan. Alat yang digunakan, misalnya soxhlet. Pada penyarian ini, cairan dipanaskan hingga mendidih, kemudian uap penyari akan naik ke atas kemudian akan mengembun karena didinginkan oleh pendingin balik. Embun akan turun melalui serbuk simplisia sambil melarutkan zat aktif serbuk simplisia (Anonim, 1986).

F. Metode DPPH

  DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) merupakan senyawa radikal nitrogen yang stabil, berwarna ungu, dan pada awalnya digunakan sebagai reagen kolorimetri. Karakter dari DPPH diantaranya, DPPH merupakan senyawa hidrofobik (tidak larut air), namun dapat berubah menjadi hidrofilik dengan melekatkan gugus CO maupun SO

  2 pada DPPH. DPPH merupakan senyawa radikal bebas yang stabil (Ionita, 2003).

  Prinsip metode uji antioksidan DPPH didasarkan pada reaksi penangkapan atom hidrogen oleh DPPH (reduksi DPPH) dari senyawa antioksidan. Reagen DPPH berperan sebagai radikal bebas yang diredam oleh senyawa antioksidan yang terkandung dalam sampel. Selanjutnya DPPH akan tereduksi menjadi senyawa diphenylpicrylhidrazine (DPPH-H). Reduksi DPPH menjadi DPPH-H menyebabkan perubahan warna pada reagen DPPH, dari ungu menjadi kuning molekul pendonor atom hidrogen, maka terjadi reaksi penangkapan atom hidrogen molekul AH olah radikal Z dengan reaksi umumnya sebagai berikut.

  ●

  Z• + AH = ZH + A ZH merupakan bentuk tereduksi dari radikal DPPH dan A• adalah radikal bebas yang terbentuk dari reaksi pertama tersebut (Molyneux, 2004).

  

Gambar 1. Perubahan warna larutan pada reaksi DPPH dengan senyawa

antioksidan (Witt, Lalk, Hager, dan Voigt, 2010)

  Metode DPPH dapat memberikan informasi mengenai respon aktivitas senyawa yang diuji dengan suatu radikal bebas. Pengukuran serapan DPPH berkisar pada panjang gelombang 515-520 nm. Metode DPPH dapat digunakan untuk sampel padatan maupun larutan, dan tidak spesifik untuk komponen antioksidan partikular, tetapi dapat digunakan untuk pengukuran kapasitas antioksidan secara keseluruhan pada suatu sampel (Molyneux, 2004).

  Persentase DPPH yang tersisa dapat dihitung dengan rumus : % DPPH sisa = 100 x

  Persentase DPPH yang tersisa proporsional dengan konsentrasi antioksidan dan konsentrasi yang menyebabkan penurunan konsentrasi DPPH awal hingga 50 %.

  Keuntungan dari metode ini antara lain mudah, cepat, dan hanya memerlukan alat UV-vis spektrofotometer untuk melakukan pengukuran (Prior, 2005).

G. Spektrofotometer Visibel

  Spektrofotometri UV-VIS adalah salah satu teknik analisis fisika kimia yang mengamati tentang interaksi atom/molekul dengan radiasi elektromagnetik pada panjang gelombang 190-380 nm untuk ultraviolet dan 380-780 nm untuk sinar tampak dengan memakai instrumen spektrofotometer. Prinsip kerja spektrofotometri adalah berdasarkan atas interaksi antara radiasi elektromagnetik (salah satu jenis energi yang ditransmisikan dalam ruang dengan kecepatan tinggi) dengan materi (atom, ion/molekul) (Mulja dan Suharman, 1995).

  Kelebihan alat, seperti cepat, simpel, dan sensitive telah membuat spektrofotometer UV-VIS menjadi suatu metode analisis farmasetika yang sangat popular untuk pengukuran secara kuantitatif obat dan metabolit dalam sampel biologi. Identifikasi kualitatif dari obat atau metabolit menggunakan spektrofotometri UV

• –VIS berdasarkan pada panjang gelombang maksimum yang diabsorpsi (  max ). Pada absorpsi yang maksimum, sensitivitas optimum akan

gelombang, error diminimalkan. Hasilnya akurasi dan presisi yang baik didapatkan (Mulja dkk, 1995).

  Komponen-komponen pokok dari spektrofotometer meliputi : sumber tenaga radiasi yang stabil, sistem yang terdiri atas lensa-lensa, cermin, celah- celah, dan lain-lain, monokromator untuk mengubah radiasi, tempat cuplikan yang transparan, dan detektor radiasi yang dihubungkan dengan sistem meter atau pencatat (Sastrohamidjojo, 2001).

  

Gambar 2. Skema alat spektrofotometer UV-Vis

H.

   Landasan teori

  Antioksidan didefinisikan sebagai suatu senyawa yang mampu memperlambat, menunda bahkan menghambat reaksi oksidasi dan memegang peranan penting dalam sistem pertahanan tubuh terhadap adanya radikal bebas (Triana, 2010). Flavonoid merupakan bahan antioksidan yang mampu menetralisir hesperidin yang terdapat dalam kulit buah dan biji. Untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada kulit jeruk nipis, maka digunakan radikal bebas DPPH. Prinsip metode uji antioksidan DPPH didasarkan pada reaksi penangkapan atom hidrogen oleh DPPH (reduksi DPPH) dari senyawa antioksidan yang menyebabkan perubahan warna ungu larutan DPPH menjadi berwarna kuning. Reagen DPPH berperan sebagai radikal bebas yang dinetralisir oleh senyawa antioksidan yang terkandung dalam sampel (Molyneux, 2004). Besarnya aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC . Adanya aktivitas antioksidan dalam senyawa uji

  50

  berhubungan juga dengan kadar fenolik totalnya, maka besarnya fenolik total ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteu. Senyawa fenolik akan bereaksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu dan membentuk kompleks fosfotungstat fosfomolibdat berwarna biru, dimana intensitas warna yang dihasilkan sebanding dengan ion fenolat sampel.

I. Hipotesis

  Berdasarkan uraian di atas, dapat diperoleh hipotesis bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis memiliki daya antioksidan yang ditetapkan dengan metode DPPH dan kandungan fenolik total dapat ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteu.

BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis dan rancangan penelitian Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental dengan tahapan penelitian

  sebagai berikut : a.