UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP Uji Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona Squamosa L.) Terhadap Sel T47D.
UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP
SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
CITA HANIF MUFLIHAH
K 100 080 083
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP
SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
CITA HANIF MUFLIHAH
K 100 080 083
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang
pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu
dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti,
Cita Hanif Muflihah
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Segala puji bagi Allah yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah
sehinga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang
berjudul: “UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D”
sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Strata 1 Farmasi
(S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Penulis banyak memperoleh bantuan, dukungan, dan bimbingan dari
berbagai pihak sehingga skripsi ini dapat selesai tepat waktu. Untuk itu penulis
menyampaikan ucapan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si.,Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta dan sebagai penguji.
2. Ibu Tanti Azizah, M.Si,Apt sebagai pembimbing akademik.
3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc. sebagai pembimbing utama.
4. Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt. sebagai pembimbing pendamping.
5. Ibu Rosita Melannisa, M.Si.,Apt sebagai penguji.
6. Bapak Sahlan Rosjidi dan Ibu Ponidah, kedua orangtuaku, serta kedua
kakakku Mbak Ida dan Mas Dian.
7. Tim Sitotoksik: Mbak Woro, Mbak Hefi, Mbak Umma, Mbak Indah, Mbak
Eva, Mas Wildan, Mas Desil, Mbak Mustika, Mbak Yennie, Mas Adi, dan
Mas Iwan.
8. Segenap pihak yang telah banyak membantu dan memberi dukungan yang
tidak dapat disebutkan satu persatu.
Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi siapa saja yang membacanya
dan muncul kritik dan saran untuk perbaikan penulis selanjutnya.
Wassalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
Cita Hanif Muflihah
iii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................
i
DEKLARASI ........................................................................................................ ii
KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ viii
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... x
INTISARI ............................................................................................................. xi
BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1
A. Latar Belakang ....................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ............................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................... 3
1. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 3
a. Sistematika Tanaman................................................................... 3
b. Nama Daerah ............................................................................... 3
c. Deskripsi Tanaman ...................................................................... 3
d. Khasiat Tanaman ......................................................................... 4
e. Kandungan Kimia ........................................................................ 4
f. Efek Farmakologi ........................................................................ 5
2. Kanker .............................................................................................. 5
a. Tinjauan Umum ........................................................................... 5
b. Penyebab Kanker ......................................................................... 6
c. Karakteristik Sel Kanker ............................................................. 6
d. Perkembangan Sel Kanker .......................................................... 7
3. Kanker Payudara .............................................................................. 8
4. Sel T47D .......................................................................................... 8
5. Uji Sitotoksik ................................................................................... 9
6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk Annona squamosa L ......... 9
iv
E. Landasan Teori ....................................................................................... 10
F. Hipotesis ................................................................................................ 11
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................ 12
A. Kategori Penelitian ................................................................................. 12
B. Variabel Penelitian ................................................................................. 12
1. Variabel Bebas ................................................................................. 12
2. Variabel Tergantung ........................................................................ 12
3. Variabel Terkendali.......................................................................... 12
C. Alat dan Bahan ....................................................................................... 12
1. Alat-alat yang digunakan ................................................................. 12
2. Bahan-bahan yang digunakan .......................................................... 13
D. Tempat Penelitian .................................................................................. 13
E. Jalannya Penelitian ................................................................................. 13
1. Determinasi Tanaman ...................................................................... 13
2. Penyiapan Bahan .............................................................................. 14
3. Ekstraksi ........................................................................................... 14
4. Fraksinasi ......................................................................................... 14
5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ............................................ 15
6. Uji Sitotoksik ................................................................................... 16
a) Sterilisasi alat ............................................................................. 16
b) Pembuatan media pertumbuhan ................................................. 16
c) Preparasi sampel ........................................................................ 16
d) Pemanenan sel ............................................................................ 16
e) Pembuatan larutan uji ................................................................ 17
f) Uji sitotoksik dengan MTT assay .............................................. 17
F. Analisis Data .......................................................................................... 17
1. Uji sitotoksik .................................................................................... 17
2. Analisis Kromatografi lapis Tipis .................................................... 18
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 19
A. Determinasi Tanaman Srikaya ............................................................... 19
B. Ekstraksi Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ................................. 19
v
C. Fraksinasi Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ....... 19
D. Uji Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap Sel T47D dengan MTT Assay............ 22
E. Analisis Kualitatif Kandungan Senyawa pada Fraksi Semipolar
Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona squamosa L.) ............... 24
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 29
A. Kesimpulan ............................................................................................ 29
B. Saran ...................................................................................................... 29
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 30
LAMPIRAN .......................................................................................................... 34
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Komposisi eluen yang digunakan untuk proses fraksinasi ................. 15
Tabel 2.
Seri konsentrasi sampel uji yang digunakan dan persentase sel hidup
setelah perlakuan ................................................................................. 23
Tabel 3.
Hasil analisis kualitatif kandungan senyawa dengan KLT ................. 26
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Struktur umum asetogenin pada Annonaceae .................................. 4
Gambar 2. Profil KLT pendahuluan ekstrak untuk menentukan fase gerak
untuk fraksinansi. (i) Fase gerak heksana:etil asetat (9:1) (ii) Fase
gerak heksan:etil asetat (8:2) (iii) Fase gerak heksana:etil asetat
(7:3) (iv) Fase gerak heksana:etil asetat (6:4) .................................. 20
Gambar 3. Profil kromatografi hasil tiga kali proses fraksinasi ekstrak dengan
metode KCV menggunakan silika gel F 254 dan fase gerak
heksana:etil asetat (8:2).................................................................... 21
Gambar 4. Pengelompokan fraksi berdasarkan profil kromatografi yang mirip
dari ketiga hasil fraksinasi. A-R delapan belas bercak yang
diperoleh dari tiga kali proses fraksinasi. (1) Fraksi nonpolar, (2)
fraksi semipolar, dan (3) fraksi polar ............................................... 21
Gambar 5.
Reaksi reduksi garam MTT membentuk formazan .......................... 22
Gambar 6. Grafik hubungan antara Log Kadar vs Rata-rata % Sel hidup dan
persamaan regresi liniernya, menunjukkan semakin tinggi harga
log kadar semakin kecil % sel hidup................................................ 23
Gambar 7. Pengaruh perlakuan fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang
Srikaya terhadap sel T47D dengan konsentrasi sebesar 250 µg/mL
(i) dan 25 µg/mL (ii) (a) Sel T47D yang mati. (b) Sel T47D yang
hidup ................................................................................................ 24
Gambar 8. Hasil KLT fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya
dengan fase gerak heksana:etil asetat (7:3) dan fase diam silika
gel F 254 .......................................................................................... 25
Gambar 9.
Senyawa N-Nitrosoxylopine ............................................................. 27
viii
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KCV
Kromatografi Cair Vakum
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
nm
Nanometer
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation factor
ROS
Reactive Oxygen Species
UV
Ultraviolet
SDS
Sodium Dodecyl sulphate
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi ......................................................... 34
Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi fraksi semipolar ekstrak etanol kulit
batang srikaya ................................................................................. 35
Lampiran 3. Perhitungan kepadatan stok sel T47D ............................................ 37
Lampiran 4. Data uji sitotoksik dengan metode MTT ........................................ 38
Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT akibat Perlakuan Fraksi
Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................. 39
Lampiran 6. Perhitungan Presentase Sel Hidup akibat Perlakuan dengan Fraksi
Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................. 40
Lampiran 7. Perhitungan harga IC50 .................................................................... 42
Lampiran 8. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 43
Lampiran 9. ELISA reader .................................................................................. 44
x
INTISARI
Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa dalam daun dan biji
Srikaya memiliki aktivitas sitotoksik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
aktivitas sitotoksik fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona
squamosa L.) terhadap sel kanker T47D.
Fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa
L.) yang diujikan diperoleh dengan metode fraksinasi mmenggunakan
Kromatografi Cair Vakum (KCV) dengan eluen heksana:etil asetat (9:1, 8:2, 7:3,
dan 6:4). Uji sitotoksik dilakukan dengan metode MTT dengan menggunakan 5
seri konsentrasi, pada 250, 150, 100, 50, dan 25 µg/mL Potensi ketoksikan fraksi
semipolar ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) terhadap sel
kanker T47D dihitung berdasarkan persentase penghambatan sel hidup yang
selanjutnya ditentukan IC50nya. Analisa kandungan senyawa dalam fraksi
semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa L.) dilakukan
dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase diam silika
gel F254 dan fase gerak heksan:etil asetat (7:3) v/v. Deteksi bercak profil
kromatografi menggunakan lampu UV 254 nm dan 366 nm serta reagen
Dragendorff, sitroborat, dan FeCl3.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit
batang Srikaya (Annona squamosa L.) mempunyai aktivitas sitotoksik yang poten
terhadap sel kanker T47D dengan nilai IC50 sebesar 70,77 µg/mL. Hasil KLT
menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona
squamosa L.) megandung senyawa golongan flavonoid dan alkaloid.
Kata kunci : Uji sitotoksik, srikaya (Annona squamosa L.), sel T47D, IC50 , fraksi
semipolar
xi
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP
SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
CITA HANIF MUFLIHAH
K 100 080 083
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP
SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
CITA HANIF MUFLIHAH
K 100 080 083
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang
pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu
dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti,
Cita Hanif Muflihah
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Segala puji bagi Allah yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah
sehinga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang
berjudul: “UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D”
sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Strata 1 Farmasi
(S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Penulis banyak memperoleh bantuan, dukungan, dan bimbingan dari
berbagai pihak sehingga skripsi ini dapat selesai tepat waktu. Untuk itu penulis
menyampaikan ucapan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si.,Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta dan sebagai penguji.
2. Ibu Tanti Azizah, M.Si,Apt sebagai pembimbing akademik.
3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc. sebagai pembimbing utama.
4. Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt. sebagai pembimbing pendamping.
5. Ibu Rosita Melannisa, M.Si.,Apt sebagai penguji.
6. Bapak Sahlan Rosjidi dan Ibu Ponidah, kedua orangtuaku, serta kedua
kakakku Mbak Ida dan Mas Dian.
7. Tim Sitotoksik: Mbak Woro, Mbak Hefi, Mbak Umma, Mbak Indah, Mbak
Eva, Mas Wildan, Mas Desil, Mbak Mustika, Mbak Yennie, Mas Adi, dan
Mas Iwan.
8. Segenap pihak yang telah banyak membantu dan memberi dukungan yang
tidak dapat disebutkan satu persatu.
Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi siapa saja yang membacanya
dan muncul kritik dan saran untuk perbaikan penulis selanjutnya.
Wassalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
Cita Hanif Muflihah
iii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................
i
DEKLARASI ........................................................................................................ ii
KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ viii
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... x
INTISARI ............................................................................................................. xi
BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1
A. Latar Belakang ....................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ............................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................... 3
1. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 3
a. Sistematika Tanaman................................................................... 3
b. Nama Daerah ............................................................................... 3
c. Deskripsi Tanaman ...................................................................... 3
d. Khasiat Tanaman ......................................................................... 4
e. Kandungan Kimia ........................................................................ 4
f. Efek Farmakologi ........................................................................ 5
2. Kanker .............................................................................................. 5
a. Tinjauan Umum ........................................................................... 5
b. Penyebab Kanker ......................................................................... 6
c. Karakteristik Sel Kanker ............................................................. 6
d. Perkembangan Sel Kanker .......................................................... 7
3. Kanker Payudara .............................................................................. 8
4. Sel T47D .......................................................................................... 8
5. Uji Sitotoksik ................................................................................... 9
6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk Annona squamosa L ......... 9
iv
E. Landasan Teori ....................................................................................... 10
F. Hipotesis ................................................................................................ 11
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................ 12
A. Kategori Penelitian ................................................................................. 12
B. Variabel Penelitian ................................................................................. 12
1. Variabel Bebas ................................................................................. 12
2. Variabel Tergantung ........................................................................ 12
3. Variabel Terkendali.......................................................................... 12
C. Alat dan Bahan ....................................................................................... 12
1. Alat-alat yang digunakan ................................................................. 12
2. Bahan-bahan yang digunakan .......................................................... 13
D. Tempat Penelitian .................................................................................. 13
E. Jalannya Penelitian ................................................................................. 13
1. Determinasi Tanaman ...................................................................... 13
2. Penyiapan Bahan .............................................................................. 14
3. Ekstraksi ........................................................................................... 14
4. Fraksinasi ......................................................................................... 14
5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ............................................ 15
6. Uji Sitotoksik ................................................................................... 16
a) Sterilisasi alat ............................................................................. 16
b) Pembuatan media pertumbuhan ................................................. 16
c) Preparasi sampel ........................................................................ 16
d) Pemanenan sel ............................................................................ 16
e) Pembuatan larutan uji ................................................................ 17
f) Uji sitotoksik dengan MTT assay .............................................. 17
F. Analisis Data .......................................................................................... 17
1. Uji sitotoksik .................................................................................... 17
2. Analisis Kromatografi lapis Tipis .................................................... 18
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 19
A. Determinasi Tanaman Srikaya ............................................................... 19
B. Ekstraksi Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ................................. 19
v
C. Fraksinasi Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ....... 19
D. Uji Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap Sel T47D dengan MTT Assay............ 22
E. Analisis Kualitatif Kandungan Senyawa pada Fraksi Semipolar
Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona squamosa L.) ............... 24
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 29
A. Kesimpulan ............................................................................................ 29
B. Saran ...................................................................................................... 29
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 30
LAMPIRAN .......................................................................................................... 34
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Komposisi eluen yang digunakan untuk proses fraksinasi ................. 15
Tabel 2.
Seri konsentrasi sampel uji yang digunakan dan persentase sel hidup
setelah perlakuan ................................................................................. 23
Tabel 3.
Hasil analisis kualitatif kandungan senyawa dengan KLT ................. 26
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Struktur umum asetogenin pada Annonaceae .................................. 4
Gambar 2. Profil KLT pendahuluan ekstrak untuk menentukan fase gerak
untuk fraksinansi. (i) Fase gerak heksana:etil asetat (9:1) (ii) Fase
gerak heksan:etil asetat (8:2) (iii) Fase gerak heksana:etil asetat
(7:3) (iv) Fase gerak heksana:etil asetat (6:4) .................................. 20
Gambar 3. Profil kromatografi hasil tiga kali proses fraksinasi ekstrak dengan
metode KCV menggunakan silika gel F 254 dan fase gerak
heksana:etil asetat (8:2).................................................................... 21
Gambar 4. Pengelompokan fraksi berdasarkan profil kromatografi yang mirip
dari ketiga hasil fraksinasi. A-R delapan belas bercak yang
diperoleh dari tiga kali proses fraksinasi. (1) Fraksi nonpolar, (2)
fraksi semipolar, dan (3) fraksi polar ............................................... 21
Gambar 5.
Reaksi reduksi garam MTT membentuk formazan .......................... 22
Gambar 6. Grafik hubungan antara Log Kadar vs Rata-rata % Sel hidup dan
persamaan regresi liniernya, menunjukkan semakin tinggi harga
log kadar semakin kecil % sel hidup................................................ 23
Gambar 7. Pengaruh perlakuan fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang
Srikaya terhadap sel T47D dengan konsentrasi sebesar 250 µg/mL
(i) dan 25 µg/mL (ii) (a) Sel T47D yang mati. (b) Sel T47D yang
hidup ................................................................................................ 24
Gambar 8. Hasil KLT fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya
dengan fase gerak heksana:etil asetat (7:3) dan fase diam silika
gel F 254 .......................................................................................... 25
Gambar 9.
Senyawa N-Nitrosoxylopine ............................................................. 27
viii
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KCV
Kromatografi Cair Vakum
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
nm
Nanometer
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation factor
ROS
Reactive Oxygen Species
UV
Ultraviolet
SDS
Sodium Dodecyl sulphate
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi ......................................................... 34
Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi fraksi semipolar ekstrak etanol kulit
batang srikaya ................................................................................. 35
Lampiran 3. Perhitungan kepadatan stok sel T47D ............................................ 37
Lampiran 4. Data uji sitotoksik dengan metode MTT ........................................ 38
Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT akibat Perlakuan Fraksi
Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................. 39
Lampiran 6. Perhitungan Presentase Sel Hidup akibat Perlakuan dengan Fraksi
Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona
squamosa L.) .................................................................................. 40
Lampiran 7. Perhitungan harga IC50 .................................................................... 42
Lampiran 8. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 43
Lampiran 9. ELISA reader .................................................................................. 44
x
INTISARI
Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa dalam daun dan biji
Srikaya memiliki aktivitas sitotoksik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
aktivitas sitotoksik fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona
squamosa L.) terhadap sel kanker T47D.
Fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa
L.) yang diujikan diperoleh dengan metode fraksinasi mmenggunakan
Kromatografi Cair Vakum (KCV) dengan eluen heksana:etil asetat (9:1, 8:2, 7:3,
dan 6:4). Uji sitotoksik dilakukan dengan metode MTT dengan menggunakan 5
seri konsentrasi, pada 250, 150, 100, 50, dan 25 µg/mL Potensi ketoksikan fraksi
semipolar ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) terhadap sel
kanker T47D dihitung berdasarkan persentase penghambatan sel hidup yang
selanjutnya ditentukan IC50nya. Analisa kandungan senyawa dalam fraksi
semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa L.) dilakukan
dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase diam silika
gel F254 dan fase gerak heksan:etil asetat (7:3) v/v. Deteksi bercak profil
kromatografi menggunakan lampu UV 254 nm dan 366 nm serta reagen
Dragendorff, sitroborat, dan FeCl3.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit
batang Srikaya (Annona squamosa L.) mempunyai aktivitas sitotoksik yang poten
terhadap sel kanker T47D dengan nilai IC50 sebesar 70,77 µg/mL. Hasil KLT
menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona
squamosa L.) megandung senyawa golongan flavonoid dan alkaloid.
Kata kunci : Uji sitotoksik, srikaya (Annona squamosa L.), sel T47D, IC50 , fraksi
semipolar
xi