26
3.4.2 Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober sampai November 2015.
3.5 Variabel Penelitian
3.5.1 Variabel Bebas Variabel bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi ekstrak etanol daun
cincau hijau 0,29 mgml; 0,33 mgml; 0,40 mgml; 0,50 mgml; dan 0,67 mgml.
3.5.2 Variabel Terikat Variabel terikat dalam penelitian ini adalah OD
570nm
biofilm E.coli.
3.5.3 Variabel Terkendali a. Pembuatan biakan bakteri E.coli 0157:H7, pembuatan ekstrak daun cincau hijau,
inkubator, H
2
O
2
dan aquades steril. b. Suhu pengeraman inkubasi E.coli 37
C selama 24 jam. c. Metode pengamatan pada Microplate Reader.
d. Prosedur penelitian
3.6 Definisi Operasional
Definisi operasional pada penelitian ini adalah:
a.
Ekstrak daun cincau hijau hasil ekstraksi daun cincau hijau dengan menggunakan pelarut etanol 96. Ekstrak didapatkan dari 2 kg daun cincau hijau kering yang
kemudian dilakukan ekstraksi maserasi dengan dilarutkan dalam pelarut etanol 96 1000mL. Ekstrak lalu ditimbang secara manual untuk mendapatkan
konsentrasi yang diinginkan.
b.
E.coli 0157:H7 adalah bakteri Gram negatif yang didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.
c.
Biofilm adalah matriks Extracellular Polymeric Substances EPS yang tumbuh diatas suatu permukaan dan menutupi mikroorganisme Park et al, 2014
27
d.
Penghambatan pembentukan biofilm secara kuantitatif dilihat melalui microplate reader dengan adanya penurunan nilai absorbansi atau Optical Dencity OD
pada panjang gelombang 570nm Loresta et al., 2014.
3.7 Alat dan Bahan
3.7.1 Alat Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini sterilisator, inkubator, pipet
mikro, vakum rotary rotavapor, maserasi, centrifuge, saringan, microplate reader, neraca analitik, penangas air.
3.7.2 Bahan Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah suspensi E.coli
0157:H7, microplate flexible U-bottom PVC 96-well, aquades steril, Mueller Hinton Broth MHB, H
2
O
2
, ekstrak etanol 96 daun cincau hijau, larutan DMSO.
3.8 Prosedur Penelitian
Kategori