Isolasi dan Identifikasi Oligosakarida Madu Hutan Gunung Tambora Sumbawa

LAMPIRAN

15

Lampiran 1 Alur kerja penelitian
Isolasi oligosakarida madu

Deteksi dan isolasi oligosakarida dengan KLT

Identifikasi isolat oligosakarida dengan LC-MS

16

Lampiran 2 Rendemen madu hutan Gunung Tambora Sumbawa
Sampel

B1

B0

% rendemen

S150

0,1159

5,02

2,308765

S250

0,0937

5,0057

1,871866

SI80

0,3923

5,0297

7,799670

S280

0,3776

5,0768

7,437756

Keterangan: B0 = bobot sebelum fraksinasi
B1 = bobot setelah fraksinasi

18

Lampiran 4 Pengkondi
kondisian alat untuk standar maltotriosa

19

Lampiran 5 Pengkondi
kondisian alat untuk standar maltotetraosa

Lampiran 6 Kromatogram hasil identifikasi standar glukosa, maltotriosa, dan maltotetraosa
Ulangan 1

Standar
Ulangan 2

Ulangan 3

20

Lampiran 7 Kromatogram hasil identifikasi glukosa, maltotriosa, dan maltotetraosa pada madu murni
Ulangan 1

Madu murni

Ulangan 2

Ulangan 3

21

Lampiran 8 Kromatogram hasil identifikasi glukosa, maltotriosa, dan maltotetraosa pada isolat oligosakarida
Ulangan 1

Isolat Madu
Ulangan 2

Ulangan 3

22

23

Lampiran 9 Rekapaitulasi data identifikasi oligosakarida madu menggunakan LCMS
Senyawa

Maltotriosa

tipe
Standar

Madu murni

Analit

Isolat

Analit

Senyawa
Maltotetraosa

tipe
Standar

Madu murni

Analit

Isolat

Analit

Senyawa
Glukosa

tipe
Standar

Madu murni

Analit

Isolat

Analit

[

]=

ulangan ke1
2
3
1
2
3
1
2
3

RT
2,26
2,26
2,26
2,24

2,24
2,24
2,23
2,24
2,23

Area
2932,514
2781,206
2586,791
69493,89
68857,38
66623,36
25661,38
26693,76
26522,78

Konsentrasi
10,6
10,05

9,35
251,17
248,87
240,79
92,75
96,48
95,86

Rata-rata
10

1
2
3
1
2
3
1
2
3

RT
2,24
2,24
2,23
2,22
2,22
2,22
2,12
2,11
2,11

Area
2.045
1799,042
1930,791
4682,381
4464,522
4291,054
22287,77

23133,91
23135

Konsentrasi
10,62
9,35
10,03
24,32
23,19
22,29
115,78
120,18
120,18

Rata-rata
10

1
2
3
1
2
3
1
2
3

RT
2,31
2,31
2,31
2,4
2,4
2,4
2,38
2,29
2,29

Area
10583,51
11094,92
11583,46
2438709
2426388
2395928
309484,1
307260,5
309075,6

Konsentrasi
9,55
10,01
10,45
2199,55
2188,35
2160,97
279,13
277,13
278,77

Rata-rata
10,00333

ulangan ke-

ulangan ke-

100%

[

]

246,9433

95,03

23,26667

118,7133

2182,957

278,3433

12

of honey. Tohoku Journal of
Agriculture Research 11: 101-108.

human serum samples. J Agric
Food Chem. 20: 3050-3055.

Astwood K, Lee B, Manley-Harris M. 1998.
Oligosaccharides in New Zealand
Honeydew Honey. J. Agric. Food
Chem.46: 4958-4962

Hernandez O, Ruiz-Matute AI, Olano A,
Moreno FJ, Sanz ML. 2009.
Comparison
of
fractionation
techniques to obtain prebiotic
galactooligosaccharides.
International Dairy Journal 19:
531-536.

Balasubramanyam MV. 2011. Role of
invertase enzyme in ripening of
honey of indigenous hive honeybee
apis cerana indica. J Chem Bio
Phys 1: 322-327
Biedrzycka, Bielecka M. 2004. Prebiotic
effectiveness of fructans different
degrees polymerization. Trends in
Food Sci & Tech 15: 170-175.
Bogdanov S, Jurendic T, Sieber R,Gallmann
P. 2008. Honey for Nutrition and
Health: a Review. J Am Coll Nutr.
27: 677-689
Bogdanov S. 2009. The Book of Honey
Chapter 5: Honey Composition.
Bee Product Science [terhubung
berkala]. www.bee-hexagon.net. [20
November 2011].
Bradbear N. 2009. Bees and Their Role in
Forest Livelihoods. Roma: FAO.
Dwisaputri NZ. 2009. Uji potensi antibakteri
madu dari lebah Apis mellifera
terhadap Pseudomonas aeruginosa
in vitri [Skripsi]. Yogyakarta:
Fakultas Kedokteran, Universitas
Islam Indonesia.
[FAO] Food Agriculture Organization. 2007.
FAO Technical Meeting on
Prebiotics. Roma: FAO.

Joshi

et

al. 2000. Physico-chemical
characteristics of Apis dorsata, A.
cerana and A. mellifera honey from
Chitwan district, central Nepal.
Apidologie. 31: 367-375.

Kim UT et al. 1995. Purification and
Characterization
of
a
Maltotetraose-Forming Alkaline aAmylase from an Alkalophilic
Bacillus Strain, GM8901. Appled
and Environtmental Microbiology.
61: 3105-3112.
Karimah U. 2010. Isolasi Oligosakarida Madu
Lokal dan Analisis Aktivitas
Prebiotiknya. [skripsi]. Bogor.
Fakultas matematika dan Ilmu
Pengetahuan
Alam,
Institut
Pertanian Bogor.
Morales V, Sanz ML, Olano A, Corzo N.
2006.
Rapid
Separation on
Activated Charcoal of High
Oligosccharides
in
Honey.
Chromatographia. 64: 233-238
Mort AJ, Pierce MC. 2002.Preparation of
carbohydrates for analysis by
modern
chromatography
and
electrophoresis.
Journal
of
Chromatography Library 66: 3-35.

Fauzan A. 2002. Perancangan Penurun Kadar
Air Madu (Honey Dehydrator).
Research Report from JIPTUMM
[terhubung
berkala].
http://digitlib.itb.ac.id/index.php.[2
6 September 2009].

Nanda V. Sarkar BC, Sharma HK, Bawa AS.
2003. Physico-chemical properties
and estimation of mineral content
in honey produced from different
plants in Northern India. Journal of
Food Composition and Analysis 16:
613-619.

Gheldof N, Engeseth NJ. 2002. Antioxidant
capacity of honeys from various
floral sources based on the
determination of oxygen radical
absorbance capacity and inhibition
of in vitro lipoprotein oxidation in

Nelson DL, Cox MM. 2004. Lehninger
Principles of Biochemistry Fourth
Edition. New York: WH Freeman
and Company.

13

Pontoh J. 2001. Isolation, Purification, and
Characterization of Glucosidases
From Three Honey Bee Species
(Apis mellifera, A. Cerana, A.
Dorsata).
[Thesis].
Kanada:
Departement
of
Applied
Microbiology and Food Science,
University of Saskatchewan.
Pontoh J, Low NH. 2002. Purification and
characterization of betaglucosidase
from honey bees (Apis mellifera).
Insect Biochemistry and Molecular
Biology 32: 679-690.
Prihartini I. 2000. Program Penerapan IPTEK
untuk Pengembangan Usaha Kecil
dan
Menengahdalam Memicu
Ekspor Non Migas. [Skripsi].
Malang: Fakultas Pertanian dan
Peternakan,
Univesitas
Muhamdiyah Malang.
Refiyanti E. 2011. 70% Produk RI Dipasok
Produk Impor. [terhubung berkala].
www.bisnis.com/articles/
70percent-kebutuhan-madu-ridipasok-produk-impor. [12 Juli
2011].
Rittig F. 2001. Chemische und Enzymatische
Herstellung von Oligosacchariden,
Deren Isolierung Charakteriserung
und Prufung auf Funktionelle
Eigenschaften.
Bayreuth
University.
Roberfroid M. 2007. Prebiotics: the concept
revisited. J Nut 137:830-837.
Ruiz-Matute AI, Brokl M, Soria AC, Sanz
ML, Matinez-Castro. 2010. Gas
chromatographic-mass
spectrometric 13haracterization of
tri- and tetrasaccharides in honey.
Food Chem 120: 637-642.
Schneider P, Ralton JE, McConville MJ,
Ferguson
MAJ.
1993.
Characterization of glycoinositol
phospholipids in the amastigote
stage of the protozoan parasite
Leishmania major. Anal Biochem.
210: 106-112.
Soga T. 2002. Analysis of carbohydrates in
food and bevarages by HPLC and

CE. Journal of Chromatography
Library 66: 483-502.
Vazquez C, Perez Coello MS, Cabezudo MD.
2003.
Analysis
of
volatile
compounds of rosemary honey:
comparison of different extraction
techniques Chromatographia 57:
227-233.
Vergara CMAC, Honorato TL, Maia GA,
Rodrigues S. 2010. Prebiotic effect
of fermented cashew apple
(Anacardium occidentale L) juice.
Food Science and Technology 43:
141-145.
Wetzel

DLB, Charalombus G. 1998.
Instrumental Methods in Food and
Beverage Analysis. Amsterdam:
Elsevier.

Weston RJ, Brockleblank LK. 1999. The
oligosaccharide composition of
some New Zealand honeys. Food
Chem 64: 33-37.
Whistler

RL,
Durso
DF.
1950.
Chromatographic Separation of
Sugars on Charcoal. J Am Chem
Soc 72: 677-679.

Wichienchot S, Jatupornpipat M, Rastall RA.
2010. Oligosaccharides of pitaya
(dragon fruit) flesh and their
probiotic properties. Food Chem
120: 850-857.
Yao et al. 2003. Flavonoids, phenolic acids
and abscisic acid in Australian and
New
Zealand
Leptospermum
honeys. Food Chem 81: 159-168.

ISOLASI DAN
N IDENTIFIKASI OLIGOSAKARID
IDA MADU
HUTA
TAN GUNUNG TAMBORA SUMBAWA
WA

YOGI NUR ANGGOWO

DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MA
UAN ALAM
ATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHU
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012

ABSTRAK
YOGI NUR ANGGOWO. Isolasi dan Identifikasi Oligosakarida Madu Hutan
Gunung Tambora Sumbawa. Dibimbing oleh SYAMSUL FALAH dan WARAS
NURCHOLIS.
Isolat oligosakarida madu hutan Gunung Tambora Sumbawa telah terbukti
memiliki aktivitas prebiotik. Aktivitas prebiotik tersebut diyakini berasal dari
oligosakarida dengan DP 3-4. Namun, kandungan oligosakarida madu hutan
Gunung Tambora Sumbawa belum pernah diteliti sebelumnya. Tujuan penelitian
ini adalah mengisolasi dan mengidentifikasi oligosakarida madu dengan DP 3-4
serta mendapatkan optimasi metode dalam prosesnya. Preparasi sampel dilakukan
dengan adsorpsi arang aktif dan pengadukan dalam etanol 10% untuk
menghilangkan monosakarida serta etanol 50% untuk pemulihan oligosakarida.
Deteksi dan isolasi oligosakarida dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis
(KLT) menggunakan campuran eluen butanol: asam asetat: air (3:1:1 v/v) dengan
glukosa (DP 1) serta maltosa (DP 2) sebagai standar. Identifikasi dilakukan
menggunakan Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) dengan
glukosa, maltotriosa (DP 3), dan maltotetraosa (DP 4) sebagai standar. Preparasi
oligoskarida menghasilkan 2.09% rendemen. Isolasi oligosakarida menghasilkan
3 spot dengan Rf berturut-turut: 0.38 (DP 1), 0.31 (DP 2), dan 0.22 (DP>2). Hasil
identifikasi menunjukkan bahwa madu murni mengandung karbohidrat DP 1, DP
3, dan DP 4 berturut-turut 2182.96, 246.94, dan 118.71 (µg/mL) sedangkan isolat
oligosakarida mengandung karbohidrat DP 1, DP 3, dan DP 4 berturut-turut
278.34, 95.03, dan 118.71 (µg/mL).

ABSTRACT
YOGI NUR ANGGOWO. Isolation and Identification of Oligosaccharides from
Forest Honey of Mount Tambora Sumbawa. Under the direction of SYAMSUL
FALAH and WARAS NURCHOLIS.
Prebiotic activity of oligosaccharides isolated from the honey of Mount
Tambora’s forests in Sumbawa has been studied. This activity were strongly
believed occured because of the oligosaccharides with DP 3 - 4. However, the
oligosaccharides compounds of Mount Tambora’s forests in Sumbawa have never
been studied yet. The objectives of this study are to isolate and identify
oligosaccharides with DP 3 and 4, and to obtain the optimum method of the
process. The preparation of sample has been carried out through the activated
charcoal separation by stirring process within 10% ethanol solution to remove the
monosaccharides, and 50% ethanol solution to recover the oligosaccharides
compounds. Detection and isolation process of oligosaccharides were carried out
by using Thin Layer Chromatography (TLC) with buthanol: acetic acid: water
(3:1:1 v/v) as an eluen solvent. Glucose (DP 1) and maltose (DP 2) were used as
standards. Honey and isolated oligosaccharides samples were identified by using
Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) with glucose, maltotriose
(DP 3), and maltotetraose (DP 4) as a standard. Preparation of samples resulted in
2.09 % yields. Isolated oligosaccharides resulted in 3 spots with retention factors
of 0.38 (DP 1), 0.31 (DP 2), and 0.22 (DP>2) respectively. Identified
oligosaccharides showed that carbohydrates with DP 1, DP 3, and DP 4 are
present in honey and Isolated oligosaccharides samples, respectively 2182.96,
246.94, dan 118.71 (µg/mL) in honey, and 278.34, 95.03, and 118.71 (µg/mL) in
isolated oligosaccharides samples.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI OLIGOSAKARIDA MADU
HUTAN GUNUNG TAMBORA SUMBAWA

YOGI NUR ANGGOWO

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012

Judul skripsi : Isolasi dan Identifikasi Oligosakarida Madu Hutan Gunung
Tambora Sumbawa
Nama
: Yogi Nur Anggowo
NIM
: G84061557

Disetujui
Komisi Pembimbing

Dr. Syamsul Falah, S.Hut, M.Si.
Ketua

Waras Nurcholis, M.Si.
Anggota

Diketahui

Dr. I Made Artika, M.App.Sc.
Ketua Departemen Biokimia
Tanggal lulus:

PRAKATA
Alhamdulillah, puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas
segala nikmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian
ini. Penelitian ini berjudul Isolasi dan Identifikasi Oligosakarida Madu Hutan
Gunung Tambora Sumbawa. Kegiatan ini merupakan bagian dari pelaksanaan
Program Kreativitas Mahasiswa Bidang Penelitian (PKM-P) yang didanai oleh
Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi (DIKTI). Kegiatan penelitian sudah
dilaksanakan di Laboratorium Penelitian Departemen Biokimia, FMIPA, IPB, dari
bulan Juli 2010 hingga Maret 2011.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Dr. Syamsul Falah, S.Hut,
M.Si. selaku pembimbing utama, dan Bapak Waras Nurcholis, M.Si. selaku
anggota yang telah memberikan saran, kritik, dan bimbingannya. Terima kasih
kepada keluarga besar Biokimia atas semua kerja samanya, serta teman-teman di
Biokimia angkatan 43 yang selalu memotivasi penulis, khususnya kepada Umul
Karimah sebagai rekan seperjuangan yang sangat luar biasa peranannya dalam
proses perencanaan, pengerjaan di Lab, serta penyusunan karya ilmiah ini.
Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada orang tua, kakak
penulis, serta Emmi Kustianti beserta keluarga untuk semua dukungan dan doanya
yang sangat berarti bagi penulis. Semoga seluruh bagian penelitian ini dapat
memberikan manfaat bagi semua orang yang membacanya.

Bogor, Januari 2012

Yogi Nur Anggowo

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 29 November 1988 dari Ayah
Mukadji dan Ibu Maryatun. Penulis merupakan anak ke-4 dari 4 bersaudara.
Tahun 2006 penulis lulus dari SMAN 89 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui Seleksi Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB).
Penulis memilih Mayor Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis juga aktif dalam kegiatan-kegiatan
organisasi kemahasiswaan selama beberapa periode (CREBs periode 2007/2008).
Penulis juga aktif mengikuti beberapa acara kepanitiaan di IPB seperti masa
pengenalan departemen Biokimia 2008/2009. Penulis melakukan Praktik Lapang
di Laboratorium Fisiologi Stress Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia, Jalan Raya Bogor Km 46 Cibinong Bogor dengan judul
Analisis Pertumbuhan Batang dan Kadar Klorofil Daun Tiga Jenis Tanaman
Penghijauan untuk Penyerap Karbondioksida.

11

contoh, merupakan hasil dari transfer satu unit
molekul glukosa dari sukrosa ke gugus 4hidroksil di glukosa dalam satu molekul
sukrosa.
β-Glukosidase juga telah ditemukan di
dalam madu. Enzim ini dihasilkan di kelenjar
hipoparingeal lebah yang disekresikan ke
dalam proboskis pada saat pemberian pakan
larva lebah, ditransfer ke dalam sarang lebah,
dan selanjutnya sampailah ke dalam madu
(Pontoh dan Low 2002). Enzim tersebut
bekerja pada ikatan β-(1-4), menghidrolisis βD-glukosidase menjadi glukosa, dan juga
mengkatalisis pemindahan D-glukosa ke
molekul akseptor yang sesuai (molekul
glukosa lain atau molekul glukosa tersubtitusi)
(Pontoh 2001).
Invertase ragi terdapat di dalam madu.
Enzim ini berasal dari ragi yang terbawa
bersama serbuk sari tumbuhan penghasil
nektar. Enzim ini merupakan enzim
fruktosidase yang mengkatalisis pemindahan
D-kelompok fruktofuranosil ke gula lain,
membentuk oligosakarida yang mengandung
D-fruktosa (Balasubramanyam 2011).
Oligosakarida pada madu memiliki potensi
sebagai prebiotik. Karimah (2010) telah
melakukan uji aktivitas prebiotik dari madu
hutan Gunung Tambora Sumbawa. Dalam
studinya, Karimah (2010) membandingkan
aktivitas stimulasi bakteri usus besar yang
dihasilkan oleh isolat oligosakarida madu
tersebut dengan oligosakarida komersil yang
telah banyak digunakan yaitu inulin. Hasil
studinya
menyatakan
bahwa
isolat
oligosakarida madu hutan Gunung Tambora
Sumbawa memberikan stimulasi pertumbuhan
bakteri
probiotik
yang
lebih
baik
dibandingkan prebiotik sintetik inulin.
Oligosakarida pada madu umumnya memiliki
DP 2-6. Jika dibandingkan dengan Inulin yang
memiliki DP 10-60, oligosakarida madu yang
larut air, berantai pendek, dan tanpa
percabangan akan lebih mudah dimanfaatkan
oleh bakteri probiotik. Biedrzycka & Bielecka
(2004) tersebut telah membandingkan
aktivitas
prebiotik
dari
inulin
dan
fruktooligosakrida (FOS) yang memiliki DP
rata-rata 3.7.
Fruktooligosakarida
(FOS)
dan
Galaktooligosakarida
(GOS)
merupakan
prebiotik sintetik yang telah banyak
digunakan dalam industri pangan. FOS
diperoleh dari sukrosa dengan bantuan enzim
transfruktosilase atau hidrolisis enzimatik
terkontrol dari ekstrak alami. GOS diperoleh
dari laktosa melalui proses transglikosilasi
(Roberfroid 2000). Produksi FOS ataupun

GOS tentu saja memerlukan biaya serta waktu
yang tidak sedikit. Biaya serta waktu tersebut
dapat dihemat dengan cara mengkonsumsi
madu yang tersedia melimpah di alam, yang
dapat memenuhi kebutuhan prebiotik serta
memiliki berbagai manfaat lainnya bagi
tubuh.

SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Oligoskarida DP 3-4 dapat diisolasi dan
diidentifikasi dari madu hutan Gunung
Tambora Sumbawa. Oligosakarida DP 3-4
dapat diisolasi menggunakan metode arang
aktif dengan penambahan etanol 10% untuk
penghilangan monosakarida dan 50% untuk
pemulihan oligosakarida. Campuran eluen
KLT butanol: asam asetat: air (3:1:1 v/v)
memberikan
keterpisahan
lebih
baik
dibanding butanol: etanol: air (4:3:3 v/v).
Kandungan glukosa (DP 1), maltotriosa (DP
3), dan maltotetraosa (DP 4) madu murni
masing-masing 2182.96, 246.94, dan 23.27
(µg/mL), sedangkan di dalam isolat
oligosakarida,
kadarnya
masing-masing
278.34, 95.03, dan 118. 71 (µg/mL). Adanya
glukosa
dan
penurunan
konsentrasi
maltotriosa pada isolat madu menunjukkan
bahwa masih diperlukan optimasi metode
yang digunakan dalam penelitian ini.
Saran
Optimasi metode isolasi oligosakarida
masih diperlukan untuk dapat mengurangi
atau meniadakan kandungan monosakarida
pada isolat oligosakarida madu dan
meningkatkan
konsentrasi
perolehan
oligosakarida dengan ≥DP 3. Optimasi dapat
dilakukan melalui pengujian beberapa
konsentrasi larutan etanol pada saat fraksinasi.
Selanjutnya optimasi KLT dapat dilakukan
dengan penggunaan plat KLT amina atau plat
KLT C-18 sebagai pengganti plat KLT silika
untuk memperbaiki proses pemisahan.
Identifikasi perlu dilakukan pada isolat hasil
perolehan oligosakarida yang menggunakan
etanol 80%, dan akan lebih baik jika
digunakan standar karbohidrat tambahan
dengan DP 5-7.

DAFTAR PUSTAKA
Aso K, Watanabe T, Yamao K. 1960. Studies
on honey: on the sugar composition

4

Tabel 1 Hasil analisis oligosakarida madu menggunakan GC-MS (Ruiz-Matute et al. 2010)
Oligosakarida
Sampel madu (mg/ 100g)
maksimum minimum
Rafinosa
209.7
0.0
6-kestosa
148.9
11.7
1-kestosa+neo-kestosa
845.3
23.2
Erlosa
1214.8
30.8
Planteosa
70.4
0.0
Melezitosa
246.5
21.5
Teanderosa
301.3
33.6
Glc-(11)-Glc-(1x)-Glc (x=3 atau 4)
29.9
8.4
Glc-Glc-Glc
134.7
15.2
Glc-Glc-Glc
113.5
14.7
Glc-(1x)-Glc-(12)-Glc+Fru-(2x)-Glc-(13)-Fru
58.9
Tr
Fru-(2x)-Glc-(13)-Fru
60.5
0.0
Fru-(2x)-Glc-(13)-Fru
120.4
0.0
Maltotriosa
124.2
0.0
Glc-Glc-Glc
23.2
0.0
α-3’-Glukosil-isomaltosa
291.4
0.0
α-glc-(1x)-α-Glc-(11)-Fru,1+α-Glc-(16)-α-Glc-(12)-Glc E
810.8
19.8
α-glc-(1x)-α-Glc-(11)-Fru,2
407.4
6.1
Cincin pereduksi tersubtitusi pada C6 turunan dari isomaltosa
127.9
0.0
Panosa
863.2
17.4
Glc-(1x)-Glc-(16)-Glc (x=3 atau 4)
142.7
0.0
Glc-Glc-Glc
152.6
0.0
α-Glc-(16)-α-Glc-(12)-Glc Z
58.8
0.0
Isomaltotriosa
534.3
0.0
Nistosa
166.8
0.0
Turunan sukrosa
47.5
0.0
Turunan sukrosa
23.9
0.0
Turunan sukrosa
16.0
0.0
Turunan sukrosa
27.1
0.0
Tetrasakarida
28.4
0.0
Turunan sukrosa
230.0
0.0
Tetrasakarida
24.2
0.0
Turunan sukrosa
27.2
0.0
Kromatografi gas (GC) memberikan hasil
yang paling baik untuk analisis kualitatif.
Pada kromatografi gas, oligosakarida yang
akan dianalis dibuat senyawa turunannya. Dua
jenis cara membuat senyawa turunan
oligosakarida, yang pertama yaitu dengan
trimetilsilil (TMS). Senyawa turunannya
berasal langsung dari senyawa oligosakarida.
Metode yang kedua adalah alditol asetat.
Semua karbohidrat direduksi menjadi alditol
dengan natrium borohidrida (Wetzel &
Charalombous 1998).
Perkembangan penggunaan GC dalam
analisis madu dilakukan oleh Ruiz-Matute et
al.(2010). Dalam studinya dilakukan analisis
kandungan enam madu asal Spanyol dan
enam madu asal Selandia Baru menggunakan
Kromatografi Gas-Spektroskopi Massa (GCMS. Hasil analisis ditemukan bahwa erlosa
dan panosa sebagai komponen trisakarida

terbesar. Keseluruhan hasil yang didapat
ditampilkan pada Tabel 1.

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini antara lain adalah sampel madu yang
berasal dari Hutan Kampung Bukit Gunung
Tambora, Bima, Pulau Sumbawa. Bahan yang
digunakan dalam isolasi dan deteksi
oligosakarida adalah arang aktif, etanol 10%,
50%, dan 80%, air deioinisasi, millipore 0.22
μ m, lempeng KLT Whatman K6F silika
250μ m (Merck), lempeng KLT PLC silika gel
60 F254r 0.5mm (Merck), akuades, N*(1-naftil)
etilendiamina
dihidroklorida
(Merck),
metanol, n-butanol, asam sulfat, piridin, asam
asetat, glukosa, fruktosa, dan standar

5

karbohidrat DP 3 maltotriosa (AppliChem)
dan DP 4 maltotetraosa (AppliChem).
Alat yang digunakan dalam penelitian ini
adalah peralatan gelas, oven, neraca analitik
OHAUS GA 200, vakum, kertas alumunium,
pengering rambut, chamber KLT, botol
semprot, pipet mikro, pipet kapiler, pengaduk
magnetik, kertas saring Whatman No.1, dan
instrumen Liquid Chromatography-Mass
Spectrometry (LC-MS) Waters di PT Omega
Farma Medika Jakarta.
Metode
Preparasi oligosakarida madu hutan
Gunung Tambora Sumbawa melalui
adsorpsi arang aktif
dan pengadukan
dalam etanol (Morales et al. 2006)
Preparasi Oligosakarida. Preparasi
karbohidrat dengan perlakuan arang aktif
terbagi ke dalam dua proses yaitu pemisahan
mono- dan disakarida serta perolehan kembali
oligosakarida dengan menggunakan pelarut
etanol-air yang memiliki konsentrasi 50%.
Seluruh perlakuan dilakukan dengan dua kali
ulangan.
Eliminasi monosakarida. Sebanyak 5 g
sampel madu dilarutkan dalam 1000 mL
etanol 10% (v/v). Ke dalam larutan tersebut
ditambahkan 30 g arang aktif 100 mesh.
Larutan selanjutnya diaduk menggunakan
pengaduk magnetik dengan kecepatan 800
rpm selama 30 menit. Setelah itu, larutan
disaring menggunakan kertas saring Whatman
No.1 dalam kondisi vakum. Kemudian residu
dibilas menggunakan 250 mL pelarut yang
sama.
Pemulihan oligosakarida. Residu hasil
pemisahan mono- dan disakarida dilarutkan
kembali dengan 1000 mL pelarut etanol
dengan konsentrasi 50% (Morales et al. 2006)
dan 80% (Wichiencot et al. 2010). Larutan
diaduk menggunakan pengaduk magnetik
selama 30 menit dengan kecepatan 800 rpm.
Setelah itu larutan disaring menggunakan
kertas Whatman No.1 dalam keadaan vakum.
Filtrat yang didapatkan kemudian dievaporasi
dalam keadaan vakum pada suhu 400C.
Efektivitas konsentrasi etanol 50% dan 80%
diuji secara kualitatif dengan KLT
selanjutnya.
Proses preparasi dilakukan
sebanyak dua kali ulangan.
Deteksi dan isolasi oligosakarida dengan
Kromatografi
Lapis
Tipis
(KLT)
modifikasi metode Vergara et al. (2010)
serta Optimasi Eluen yang Digunakan.

Hasil preparasi sampel madu yang
diperoleh dideteksi dengan KLT Whatman
K6F lempeng silika dengan ketebalan 250μ m.
Jumlah spot yang terbentuk dapat digunakan
untuk membandingkan konsentrasi etanol
yang lebih baik dalam proses perolehan
kembali oligosakarida pada saat preparasi
sampel sebelumnya. Untuk proses deteksi
digunakan lempeng KLT ukuran panjang x
lebar 10 x 5 cm. Sebanyak 10μ L ditotolkan
ke lempeng KLT dengan jarak 0.5 cm dari
bagian bawah lempeng. Lempeng dielusi
dengan campuran pelarut yang terdiri atas
butanol: asam asetat: air (3:1:1 v/v) (Kim et
al. 1995) dan butanol: etanol: air (4:3:3 v/v)
(Schneider et al. 1993) (Campuran eluen yang
menghasilkan spot dengan keterpisahan yang
lebih baik yang akan digunakan pada tahap
KLT
preparatif).
Lempeng
kemudian
disemprot dengan larutan indikator yang berisi
0.3g/100 mL N*(1-naftil) etilendiamina
dihidroklorida pada suatu sistem pelarut yang
terdiri atas metanol: H2SO4 (97:3 v/v).
Lempeng dipanaskan pada oven dengan suhu
1200C hingga spot dapat terlihat yakni sekitar
8-10 menit. KLT juga dilakukan terhadap
sampel madu yang belum mengalami isolasi.
Isolasi
oligosakarida
selanjutnya
dilakukan
terhadap
sampel
yang
menghasilkan spot terbaik pada saat deteksi
oligosakarida. Urutan kerja yang dilakukan
sama seperti pada saat deteksi, namun
mengikuti kaidah teknik KLT preparatif,
dilakukan dengan plat berukuran 20 x 20 cm
dan aplikasi sampel dilakukan pada jarak 2 cm
dari bawah lempeng. Setelah lempeng KLT
dipanaskan dalam oven, pita yang terbentuk
diukur Rf-nya. Pita yang memiliki Rf> dari
standar DP 2 dikerok. Selanjutnya, silika hasil
pengerokan di larutkan dalam 40 mL etanol
dengan konsentrasi yang sama pada saat
pemulihan oligosakarida yang menghasilkan
keterpisahan spot terbaik, dan kemudian
larutan diaduk dengan kecepatan 600 rpm
selama 10 menit. Selanjutnya, larutan
disentrifugasi dengan kecepatan 5000 rpm
selama 30 menit. Supernatan dipisahkan
dengan penyaringan menggunakan millipore
0.22 μ m kemudian dievaporasikan dalam
keadaan vakum pada suhu 400C.
Identifikasi oligosakarida menggunakan
LC-MS (modifikasi HPLC Astwood et al.
1998)
Madu murni dan isolat oligosakarida yang
didapatkan dilarutkan dalam air nanofiltrasi
dan sebanyak 20µL (20 mg/mL) diinjeksikan
ke dalam sistem LC-MS yang memiliki

Pelarut

% rendemen

Etanol 50%

2,09

Etanol 80%

7,62

G
M

0,65
0,61

0,63 0,63

Std S5 S8

G
M

0,65 0.65 0,65
0,62 0,62 0.62
0,55 0,55
0,48

Std S8 S5

0.38

1
2
3

0,31
0.22

Rt = 2.26

Rt = 2.24

Rt = 2.23

9

Rt = 2.24

Standar

Rt = 2.22

Madu

Rt = 2.24

Rt = 2.31

Standar

Rt = 2.40

Madu

Rt = 2.29

Isolat Oligosakarida

Isolat Oligosakarida

Gambar
6
Kromatogram
LC-MS
maltotetraosa dari senyawa standar,
madu murni, dan isolat oligosakarida.

Gambar 7 Kromatogram LC-MS glukosa dari
senyawa standar, madu murni, dan
isolat oligosakarida.

Konsentrasi maltotetraosa pada isolat yang
lebih tinggi dibanding pada madu murni
tersebut menunjukkan bahwa proses yang
dilakukan berhasil mengisolasi oligosakarida
dengan DP 4 pada konsentrasi yang
signifikan. Hasil yang berbeda terjadi pada
maltotriosa dengan DP 3, dimana konsentrasi
oligosakarida tersebut menurun setelah proses
isolasi dilakukan.

Penurunan konsentrasi DP 3 tidak
mendukung sebagaimana yang disebutkan
dalam Karimah (2010) bahwa konsentrasi
oligosakarida dengan DP>2 berada pada
konsentrasi yang lebih signifikan setelah
madu mengalami proses isolasi. Penurunan
konsentrasi perolehan oligosakarida DP 3
setelah isolasi memberikan alasan tambahan
perlunya dilakukan optimasi metode isolasi
yang digunakan.

Tabel 3 Hasil identifikasi kandungan oligosakarida madu murni dan isolat oligosakarida
menggunakan LC-MS
Standar
Konsentrasi (µg/mL)
Kadar senyawa isolat/madu murni (%)
Madu murni
Isolat
Glukosa (DP 1)
2182,96
278,34
12,75
Maltotriosa (DP 3)
246,94
95,03
38,48
Maltotetraosa (DP 4)
23,27
118,71
510,23

10

Tabel 4 Jenis-jenis trisakarida (C18H32O16, BM = 504.4) dalam madu (Ruiz-Matute et. al 2010)
Nama Senyawa
Rumus Molekul
Centosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→2)-D-Glcp
Erlosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Isomaotriosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→6)-D-Glcp
Isomelezitosa
α-D-Glcp-(1→6)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Isopanosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→6)-D-Glcp
1-Kestosa
β-D-Fruf-(2→1)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
6-Kestosa
β-D-Fruf-(2→6)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Laminaritriosa
β-D-Glcp-(1→3)-β-D-Glcp-(1→3)-D-Glcp
Maltotriosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→4)-D-Glcp
Melezitosa
α-D-Glcp-(1→3)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Neokestosa
β-D-Fruf-(2→6)-α-D-Glcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Panosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→4)-D-Glcp
Planteosa
α-D-Galp-(1→6)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Raffinosa
α-D-Galp-(1→6)-α-D-Glcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Theanderosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Isomaltosylglukosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→3)-D-Glcp
4-α-Gentobiosilglukosa (sorborosa)
β-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→4)-D-Glcp
Tabel 5 Jenis-jenis tetrasakarida (C24H42O21, BM = 666.6) dalam madu (Astwood et al. 1998;
Rittig 2001; Ruiz Matute et al 2010).
Nama Senyawa
Rumus Molekul
α-4’-glukosilerlosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1↔2)-β-D-Fruf
α-6’-glukosilerlosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→4)-α-DGlcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Fruktosilisomelezitosa
Fru-(?→?)-α-D-Glcp-(1→6)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Isomaltotetraosa
α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→6)-α-DGlcp-(1→6)-D-Glcp
Maltotetraosa
α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→4)-α-DGlcp-(1→4)-D-Glcp
Nistosa
β-D-Fruf-(2→1)-β-D-Fruf-(2→1)-β-D-Fruf-(2↔1)-α-D-Glcp
Stakiosa
α-D-Galp-(1→6)-α-D-Galp-(1→6)-α-DGlcp-(1↔2)-β-D-Fruf
Metode
identifikasi
oligoskarida
menggunakan LC-MS pada studi ini belum
cukup untuk menentukan jenis oligosakarida
DP 3 & DP 4 yang terkandung dalam madu
hutan Gunung Tambora Sumbawa secara
spesifik. Modifikasi metode lain diperlukan
seperti GC-MS dalam Ruiz-Matute et al
(2010) ataupun instrumen tambahan seperti
Matrix Assisted Laser Desoprtion IonisatianTime of flight Mass Spectrometry (MALDITOF-MS). Tabel 4 dan 5 memperlihatkan
jenis-jenis DP 3 dan DP 4 dari madu
mancanegara yang telah berhasil diidentifikasi
sampai saat ini.
Komposisi Oligosakarida,
Pembentukannya, serta Potensinya sebagai
Prebiotik
Komposisi
kimia
madu,
termasuk
kandungan oligosakarida di dalamnya dapat
bervariasi bergantung pada tanaman sumber
nektar, pengaruh musim dan iklim, serta letak
geografis dari sumber nektar. Senyawa
senyawa dalam madu berasal dari:
pematangan dari madu, penambahan dari
lebah, dan lainnya merupakan derivat dari
tanaman (Bogdanov 2009). Lebih dari 95%

padatan di dalam madu merupakan
karbohidrat di alam dan 85-95% nya adalah
fruktosa dan glukosa sebagai pembentuk
oligosakarida
(Bogdanov
2009).
Oligosakarida pada madu merupakan produk
proses enzimatik yang dilakukan oleh
beberapa enzim, yaitu: α-Glukosidase, βGlukosidase, dan Invertase ragi ( Pontoh
2001,Pontoh & Low 2002, Balasubramanyam
2011).
Enzim α-Glukosidase merupakan enzim
yang bertanggung jawab pada proses
hidrolisis nektar hingga menjadi glukosa dan
sukrosa. Enzim α-Glukosidase ini merupakan
enzim yang ditambahkan oleh lebah madu ke
dalam madu, yang bertanggung jawab atas
hidrolisis sukrosa (DP 2) pada nektar menjadi
glukosa dan fruktosa. Enzim ini juga memiliki
fungsi transglikosilasi (Pontoh 2001).
Transglikosilasi
merupakan
proses
pemindahan gugus α-D-glukosil dari molekul
sukrosa baik menuju molekul air membentuk
glukosa bebas, ataupun menuju molekul gula
lain untuk membentuk oligosakarida yang
lebih kompleks di dalam madu seperti
maltulosa, nigerosa, maltosa, kojibiosa,
turanosa, ataupun isomaltosa. Erlosa sebagai

2

tergantung
pada
sumber
nektarnya
diantaranya
manuka
(Leptospermum),
cengkeh (Trifolium), blewah (Nothofagus),
dan heather (Calluna). Madu mengandung
berbagai campuran zat yang tergolong ke
dalam gula, mineral, antioksidan, enzim,
senyawa aromatik, dan air (Bradbear 2009).
Komponen gula terbesar di dalam madu
adalah fruktosa. Tetapi terdapat pula madu
yang lebih banyak mengandung glukosa.
Komponen madu terbesar ketiga adalah air.
Madu memiliki berbagai oligosakarida. Madu
manuka (Leptospermum) dan cengkeh
(Trifolium)
mengandung
berbagai
oligosakarida
antara
lain
isomaltosa,
kojibiosa, turanosa (atau gentiobiosa),
nigerosa, dan maltosa sebagai komponen
utamanya. Sedangkan
madu heather
(Calluna) mengandung isomaltosa sebagai
komponen utamanya. Madu asal bunga
blewah memiliki komponen oligosakarida
yang lebih rumit dengan trisakarida
melezitosa dan panosa sebagai komponen
yang
paling
melimpah
(Weston
&
Brocklebank 1999).
Madu dapat menggantikan gula dalam
berbagai makanan dan minuman karena
mengandung sekitar 69% fruktosa dan
glukosa. Kalori yang dihasilkan dari satu
sendok makan madu adalah 64 kalori. Nilai
ini lebih besar dibandingkan gula yang hanya
menghasilkan 50 kalori, sehingga madu
menjadi sumber energi yang baik. Madu
sebagai pemanis memiliki daya rusak gigi
yang lebih rendah dibanding dengan sukrosa
biasa. Madu juga dapat menyembuhkan diare
serta sangat baik untuk dikonsumsi oleh balita
(Bogdanov et al. 2008).
Banyak penelitian yang membuktikan sifat
antimikrob dari madu. Madu bahkan dapat
membunuh bakteri yang resisten terhadap
antibiotik. Kemampuan ini berasal dari
kandungan hidrogen peroksida pada madu
pada taraf yang dapat membunuh mikrob
namun tetap aman untuk jaringan di
sekitarnya. Dwisaputri (2009) menyebutkan
bahwa madu dari lebah Apis mellifera
memiliki aktivitas antibakteri terhadap
Pseudomonas aeruginosa secara in vitro
dengan
KHM
(Konsentrasi
Hambat
Minimum) 16,6% dan KBM (Konsentrasi
Bunuh Minimal) 16,6%.
Kandungan antioksidan pada madu juga
sangat
bermanfaat
bagi
kesehatan.
Antioksidan yang terdapat pada madu antara
lain flavonoid, asam fenolik, dan asam absisat.
Komponen flavonoid utama dari jelly bush
honey (Leptospermum poygalifolium) antara

lain mirisetin, luteolin, dan trisetin dengan
kadar 2,22 mg/100g. Asam fenolik yang
paling banyak ditemukan adalah asam galat
dan kumarat dengan kadar 5,14 mg/100g
sedangkan asam absisat berjumlah 11,6
mg/100g. Madu manuka Leptospermum
scoparium mengandung flavonoid yang terdiri
dari kuersetin, isorhamnetin, krisin, dan
luteloin 3,06 mg/10g (Gheldof & Engeseth
2002). Total asam fenolik mencapai 14
mg/100g dengan asam galat sebagai
komponen utamanya sementara asam absisat
mencapai 32,8 mg/100g (Yao et al. 2003).
Selain
antioksidan
yang
membantu
melindungi sel-sel tubuh dari radikal bebas,
manfaat lainnya dari madu adalah madu yang
di campur dengan susu dapat membantu
menghaluskan kulit.
Madu juga mengandung senyawa volatil.
Analisis dengan kromatografi gas dan
spektofotometri massa pada madu rosemari
menemukan adanya 122 senyawa volatil yang
tergolong ke dalam alkohol, keton, aldehid,
asam, eter, terpen, hidrokarbon, fenol, furan,
dan piran (Vazquez et al. 2003).
Madu Indonesia
Madu di Indonesia baik yang telah
dihasilkan dari peternakan maupun yang
berasal dari alam diambil dari madu lebah
hutan. Spesies lebah hutan yang hidup di
Indonesia adalah Apis dorsata. Dalam
pengembangan sektor peternakan, industri
peternakan lebah madu memiliki masa depan
yang prospektif karena seluruh produk yang
dihasilkan sangat bermanfaat sehingga
bernilai tinggi seperti madu, royal jelly,
malam (wax/lilin), propolis, apitoksin dan
paket bibit lebah madu (Fauzan 2002).
Permintaan madu dalam negeri Indonesia
mencapai 3000 ton per tahun, namun hanya
sebesar 1000-1500 ton atau 30% saja yang
dapat dipenuhi oleh produsen madu dalam
negeri, sedangkan sisanya (70%) madu
diimpor dari China, Australia, Selandia Baru
dan negara–negara lain (Refiyanti 2011).
Jumlah madu yang diperdagangkan di pasaran
internasional berkisar sebesar 566.000 ton per
tahun, dimana 60% dari jumlah tersebut
dipasok oleh China (200.000 ton), Argentina
(80.000), dan Meksiko (56.000 ton) (Bradbear
2009). Berdasarkan potensi alam Indonesia,
banyaknya
hutan dan perkebunan yang
luasnya mencapai 120 juta hektar dengan
berbagai jenis tanaman, iklim yang kondusif,
serta musim bunga silih berganti sepanjang
tahun diperkirakan seharusnya Indonesia
dapat memproduksi madu hingga sebanyak

PENDAHULUAN
Madu adalah salah satu campuran
karbohidrat yang paling rumit di alam.
Kandungan gula terbesar pada madu adalah
fruktosa dan glukosa. Serta terdapat juga
triosa dan oligosakarida (Bogdanov 2009).
Kandungan lain yang terdapat di dalam madu
diantaranya mineral (Nanda et al. 2003),
antioksidan (Gheldof & Engeseth 2002),
senyawa fenolik (Yao et al. 2003), enzim, dan
air.
Secara umum madu tersusun atas
komponen yang sama, tetapi keragaman
nektar bunga yang menjadi sumber madu serta
spesies lebah madu yang memproduksi madu
dari nektar tersebut dapat memberikan
keragaman yang unik pada kandungan madu
termasuk oligosakarida
yang terdapat
didalamnya. Semua spesies lebah dari genus
Apis menghasilkan madu. Tetapi hanya Apis
mellifera dan Apis cerana yang madunya telah
dimanfaatkan secara luas untuk tujuan
komersil sehingga lebih dikenal di
mancanegara, khususnya di Eropa, Australia,
dan Amerika. Penelitian mengenai kandungan
oligosakarida kedua madu tersebut telah
banyak dilakukan di mancanegara.
Oligosakarida
merupakan
molekul
karbohidrat yang tersusun atas 2 atau lebih
monosakarida yang dihubungkan dengan
ikatan glikosidik (Nelson & Cox 2004).
Oligosakarida telah banyak digunakan dalam
berbagai produk makanan dengan tujuan
sebagai sumber prebiotik yang merupakan
komponen pangan yang tidak tercerna dan
memberikan keuntungan melalui modulasi
mikroba yang berguna bagi kesehatan usus
besar (probiotik) (FAO 2007).
Isolasi oligosakarida madu lokal asal
Sumbawa dan Kalimantan serta uji aktivtas
prebiotiknya sudah dilaporkan. Karimah
(2010) melaporkan bahwa isolat oligosakarida
asal Sumbawa dan Kalimantan memiliki
aktivitas prebiotik. Aktivitas prebiotik dari
isolat oligosakarida tersebut kemungkinan
disebabkan oleh adanya oligosakarida rantai
pendek, dengan derajat polimerisasi (DP)
antara 3-4. Kemungkinan tersebut diperkuat
oleh Biedrzycka & Bielecka (2004) yang
menyebutkan bahwa oligosakarida rantai
pendek tanpa percabangan yang larut dalam
air akan lebih mudah dimanfaatkan oleh
bakteri probiotik. Aktivitas prebiotik isolat
oligosakarida madu lokal asal Sumbawa
memiliki aktivitas prebiotik yang lebih tinggi
dibanding dengan inulin yang merupakan
prebiotik komersil (Karimah 2010).

Keberadaan oligosakarida dengan DP 3-4
yang telah diduga memiliki potensi prebiotik
pada madu hutan Gunung Tambora Sumbawa
perlu dibuktikan. Untuk itu, perlu diadakan
identifikasi oligosakarida madu hutan Gunung
Tambora
Sumbawa,
yang
bertujuan
memperkuat hasil penelitian sebelumnya serta
menambah informasi ilmiah mengenai studi
oligosakarida pada madu lokal.
Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi
dan mengidentifikasi oligosakarida madu
hutan Gunung Tambora Sumbawa dengan DP
3-4 serta mendapatkan optimasi metode yang
sesuai dalam prosesnya. Hipotesis dari
penelitian ini adalah bahwa oligosakarida
dengan DP 3-4 dapat diisolasi dari madu
Hutan Gunung Tambora Sumbawa.
Hasil penelitian ini diharapkan dapat
bermanfaat khususnya untuk memberikan
informasi teknis mengenai proses isolasi dan
identifikasi oligosakarida dari madu yang
mungkin dapat diaplikasikan pada sampel
oligosakarida dari sumber yang berbeda.
Selain itu, penelitian ini diharapkan dapat
memperkaya pengetahuan mengenai sumber
oligosakarida yang terdapat di alam,
menambah pengetahuan mengenai kandungan
oligosakarida serta kemungkinan proses
pembentukan oligosakarida tersebut di dalam
madu, dan memberikan tambahan informasi
mengenai potensi sumber daya lokal
khususnya madu lokal Hutan Gunung
Tambora Sumbawa.

TINJAUAN PUSTAKA
Madu dan Manfaatnya
Madu adalah zat kaya nutrisi yang
dihasilkan oleh lebah madu dari nektar yang
berasal dari bunga, batang, atau ujung daun
tanaman. Selain itu, madu juga dapat berasal
dari
zat
ekskresi
serangga
seperti
Ultracoelostoma assimile yang menghisap
cairan floem yang disebut honeydew. Madu
sudah dikenal dan merupakan bagian dari
pengobatan kuno yang telah ada selama
ribuan
tahun.
Sejarah
menuliskan
pemanfaatan madu dimulai sejak tahun 2100
SM, dan dipercaya bahwa manusia telah
mengenal madu pada peradaban yang lebih
kuno (Bradbear 2009)
Penelitian menunjukkan bahwa madu
memiliki banyak manfaat antara lain sebagai
pemanis, sumber energi, penurun berat badan,
sumber vitamin dan mineral, antibakteri,
antifungi, antioksidan, dan penghalus kulit.
Bermacam-macam madu dapat ditemukan dan

ABSTRAK
YOGI NUR ANGGOWO. Isolasi dan Identifikasi Oligosakarida Madu Hutan
Gunung Tambora Sumbawa. Dibimbing oleh SYAMSUL FALAH dan WARAS
NURCHOLIS.
Isolat oligosakarida madu hutan Gunung Tambora Sumbawa telah terbukti
memiliki aktivitas prebiotik. Aktivitas prebiotik tersebut diyakini berasal dari
oligosakarida dengan DP 3-4. Namun, kandungan oligosakarida madu hutan
Gunung Tambora Sumbawa belum pernah diteliti sebelumnya. Tujuan penelitian
ini adalah mengisolasi dan mengidentifikasi oligosakarida madu dengan DP 3-4
serta mendapatkan optimasi metode dalam prosesnya. Preparasi sampel dilakukan
dengan adsorpsi arang aktif dan pengadukan dalam etanol 10% untuk
menghilangkan monosakarida serta etanol 50% untuk pemulihan oligosakarida.
Deteksi dan isolasi oligosakarida dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis
(KLT) menggunakan campuran eluen butanol: asam asetat: air (3:1:1 v/v) dengan
glukosa (DP 1) serta maltosa (DP 2) sebagai standar. Identifikasi dilakukan
menggunakan Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) dengan
glukosa, maltotriosa (DP 3), dan maltotetraosa (DP 4) sebagai standar. Preparasi
oligoskarida menghasilkan 2.09% rendemen. Isolasi oligosakarida menghasilkan
3 spot dengan Rf berturut-turut: 0.38 (DP 1), 0.31 (DP 2), dan 0.22 (DP>2). Hasil
identifikasi menunjukkan bahwa madu murni mengandung karbohidrat DP 1, DP
3, dan DP 4 berturut-turut 2182.96, 246.94, dan 118.71 (µg/mL) sedangkan isolat
oligosakarida mengandung karbohidrat DP 1, DP 3, dan DP 4 berturut-turut
278.34, 95.03, dan 118.71 (µg/mL).

ABSTRACT
YOGI NUR ANGGOWO. Isolation and Identification of Oligosaccharides from
Forest Honey of Mount Tambora Sumbawa. Under the direction of SYAMSUL
FALAH and WARAS NURCHOLIS.
Prebiotic activity of oligosaccharides isolated from the honey of Mount
Tambora’s forests in Sumbawa has been studied. This activity were strongly
believed occured because of the oligosaccharides with DP 3 - 4. However, the
oligosaccharides compounds of Mount Tambora’s forests in Sumbawa have never
been studied yet. The objectives of this study are to isolate and identify
oligosaccharides with DP 3 and 4, and to obtain the optimum method of the
process. The preparation of sample has been carried out through the activated
charcoal separation by stirring process within 10% ethanol solution to remove the
monosaccharides, and 50% ethanol solution to recover the oligosaccharides
compounds. Detection and isolation process of oligosaccharides were carried out
by using Thin Layer Chromatography (TLC) with buthanol: acetic acid: water
(3:1:1 v/v) as an eluen solvent. Glucose (DP 1) and maltose (DP 2) were used as
standards. Honey and isolated oligosaccharides samples were identified by using
Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) with glucose, maltotriose
(DP 3), and maltotetraose (DP 4) as a standard. Preparation of samples resulted in
2.09 % yields. Isolated oligosaccharides resulted in 3 spots with retention factors
of 0.38 (DP 1), 0.31 (DP 2), and 0.22 (DP>2) respectively. Identified
oligosaccharides showed that carbohydrates with DP 1, DP 3, and DP 4 are
present in honey and Isolated oligosaccharides samples, respectively 2182.96,
246.94, dan 118.71 (µg/mL) in honey, and 278.34, 95.03, and 118.71 (µg/mL) in
isolated oligosaccharides samples.