15 Pengujian pengaruh penghambatan oleh ekstrak tumbuhan dan kitosan
terhadap bakteri dilakukan dengan metode pengenceran berseri dan dicawankan pada media NA. Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah koloni yang
tumbuh pada media NA setelah diinkubasi pada suhu ruang selama 48 jam. Konsentrasi ekstrak tumbuhan dan kitosan yang menunjukkan tingkat
penghambatan terhadap bakteri Xcc digunakan lebih lanjut dalam pengujian pengaruh konsentrasi ekstrak tumbuhan dan kitosan terhadap Xcc secara in vitro.
Percobaan dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap dengan 3 kali ulangan.
Uji Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Sirih dan Cengkih serta Kitosan terhadap
X. campestris pv. campestris secara In Vitro
Taraf konsentrasi diuji berdasarkan hasil uji pendahuluan keefektifan ekstrak tumbuhan dan kitosan secara in vitro. Pada uji keefektifan ekstrak
tumbuhan dan kitosan terhadap bakteri Xcc didapatkan konsentrasi yang menunjukkan penghambatan 100 terhadap bakteri Xcc untuk sirih 2.5,
cengkih 5, dan kitosan 0.5. Konsentrasi tersebut kemudian diturunkan menjadi lima konsentrasi dengan interval konsentrasi yang lebih rendah.
Konsentrasi yang diuji pada ekstrak sirih adalah 2.5, 2, 1.5, 1, dan 0.5. Konsentrasi cengkih 5, 4, 3, 2, dan 1. Konsentrasi kitosan yang diuji
adalah 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, dan 0.1. Media yang digunakan sebagai kontrol adalah media yang dicampur dengan pelarut tanpa ekstrak tumbuhan dan
kitosan. Tabung diisi 1 ml suspensi bakteri Xcc dengan kepadatan koloni 10
8
cfuml OD: 0.15. Media diinkubasi dalam shaker pada suhu ruang selama 24 jam.
Pengamatan penghambatan ekstrak tumbuhan dan kitosan terhadap bakteri dilakukan dengan metode pengenceran berseri dan dicawankan pada media NA.
Jumlah koloni yang tumbuh pada media NA dihitung setelah diinkubasi pada suhu ruang selama 48 jam.
Konsentrasi ekstrak
tumbuhan dan
kitosan yang
menunjukkan penghambatan 100 terhadap bakteri digunakan lebih lanjut dalam pengujian
perlakuan benih. Percobaan dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap dengan 3 ulangan.
16
Perlakuan Benih Kubis Menggunakan Ekstrak Tumbuhan dan Kitosan
Pengujian perlakuan benih kubis dilakukan dengan menggunakan benih yang diinfeksi secara buatan. Benih kubis hibrida kultivar Grand 22 disterilisasi
permukaan menggunakan natrium hipoklorit 0.5 selama 3 menit untuk menghilangkan patogen permukaan menggunakan akuades steril. Selanjutnya
benih dibilas 3 kali untuk menghilangkan sisa natrium hipoklorit. Benih direndam selama 1 jam dengan suspensi bakteri 1:1 wv. Suspensi bakteri dengan
kepadatan 10
8
cfuml OD: 0.15 berasal dari biakan bakteri Xcc berumur 48 jam. Benih dikeringanginkan selama 24 jam sampai mendekati tingkat kekeringan
semula. Benih kemudian disimpan pada suhu ruang selama 1 minggu hingga saat penggunaan untuk penelitian lebih lanjut Sumarti 2009.
Perlakuan dilakukan dengan perendaman benih yang telah diinokulasi buatan pada ekstrak sirih 2, cengkih 3, dan kitosan 0.5. Pengujian
dilakukan dengan membandingkan lima kisaran waktu perendaman benih yaitu 10, 20, 30, 40, dan 50 menit. Dua gram benih yang telah diinokulasi buatan
direndam pada larutan ekstrak sebanyak 4 ml. Selanjutnya benih ditiriskan dan dikeringanginkan pada laminar air flow selama 3 jam. Benih disimpan selama 3
hari pada suhu ruang untuk memastikan bahwa perlakuan tidak memacu perkecambahan benih. Kontrol yang digunakan adalah benih yang telah
diinokulasi buatan tanpa perlakuan perendaman. Percobaan dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap dengan 3 ulangan. Pengamatan yang
dilakukan adalah pengaruh waktu perendaman terhadap kepadatan inokulum, tingkat infeksi dan viabilitas benih.
Pengaruh Waktu Perendaman Ekstrak Tumbuhan dan Kitosan terhadap Kepadatan Inokulum
X. campestris pv. campestris pada Benih
