43 |
N e m a t o d a E n t o m o p a t o g e n - I S B N 9 7 8 - 9 7 9 - 3 1 0 0 - 9 8 - 2
keluar dari tubuh larva digoreskan pada media Nutrien Agar atau media NA-NR Lampiran 1-III. Media diinkubasi pada
suhu 25
o
C selama 24 jam.
b. Perbanyakan Bakteri Simbion Steinernema spp. Isolat Tulungagung
Menyiapkan media cair Yeast Salt Lampiran 1-I, dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer ukuran 250 ml,
kemudian disterilkan dalam autoclave selama 30 menit suhu 121
o
C; tekanan 15 atm. Isolasi bakteri simbion dilakukan dengan cara mengambil koloni bakteri simbion dari hasil
inkubasi dari media Nutrient Agar atau NA-NR. Koloni bakteri simbion, selanjutnya dibiakkan dalam media cair Yeast Salt,
dan dikocok pada shaker secara terus-menerus, pada suhu 25
o
C Kaya dan Stock, 1997. Setelah diinkubasikan selama 24 jam, bakteri simbion tersebut siap digunakan untuk proses
produksi nematoda secara in vitro dalam media spon.
c. Pembuatan media Spon sebagai media pembiakan nematoda
Pembuatan media spon dilakukan dengan cara
mencampur semua bahan yang diperlukan untuk membuat media spon Lampiran 1-II. Spon sebanyak 36 gram diremas-
remas dalam bahan tersebut. Media spon dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer ukuran 1000 ml, kemudian ditutup dengan
kapas dan dilapisi aluminium foil. Media spon dalam tabung Erlenmeyer tersebut selanjutnya disterilkan dalam autoclave
selama 30 menit suhu 121
o
C; tekanan 15 atm.
44 |
N e m a t o d a E n t o m o p a t o g e n - I S B N 9 7 8 - 9 7 9 - 3 1 0 0 - 9 8 - 2
d. Inokulasi Bakteri Simbion pada Media Spon Setelah media Spon steril disiapkan, selanjutnya media
dalam tiap tabung Erlenmeyer diinokulasi bakteri simbion Xenorhabdus spp. umur 24 jam yang diambil dari media
Yeast Salt. Inokulasi dilakukan dengan menggunakan mikropipet Ependorf ukuran 100
µ l - 1000
µ l, selanjutnya
diinkubasikan pada suhu 25
o
C.
e. Inokulasi Nematoda Entomopatogen pada Media Spon.
Inokulasi Nematoda Entomopatogen pada media spon dilakukan satu hari 24 jam setelah media spon diinokulasi
bakteri simbion tersebut. Nematoda entomopatogen Steinernema spp. Isolat Tulungagung diaplikasikan pada
media spon yang telah diisi bakteri simbion Xenorhabdus sp. Tabung Erlenmeyer yang telah berisi nematoda dalam media
spon tersebut ditutup menggunakan kapas steril dan pada pinggirnya ditutup parafilm atau kertas, kemudian disimpan
pada suhu 25
o
C. f. Panen Nematoda Entomopatogen.
Setelah disimpan dalam media spon selama 14 - 21 hari pada suhu 25
o
C, nematoda entomopatogen dapat dipanen.
g. Formulasi Nematoda Entomopatogen
