Pemeriksaan Jenis Alel Tripsin Inhibitor Kunitz pada Kedelai dengan Menggunakan Metode Elektroforesis Gel Poliakrilamid Lempengan
t i q l t i . Juhi 1994. hlm. 18-20
ISSN 0854-8587
Pemeriksaan Jenis Ale1 Tripsin Inhibitor Kunitz
pada Kedelai dengan ~ e n ~ ~ u n a kMetode
a n Elektroforesis
Gel Poliakrilarnid Lempengan
BRIGITA JANSEN. MI~AHUDIN*, UTUT WIDYASTUTI. DAN MUHAMMAD JUSUF
Juruson Biulngi FMlPA IPB, / I . Raw Pajajaan, Bugor 16144
rr
Ditzrimr 16 Mei 1994/Disetujui 12 Juni 1994
Trypsin inhibitor Kunitz protein found in soybean seed is a main antinutrition and inhibit
the animal growth if used as animal feed in raw condition. This protein can be dirnimted
by heating or by creating soybean variety without trypsin inhibitor through plant breeding.
Trypsin inhibitor Kunitz protein in soybean seeds controled by one gene, four alleles. Based on
electroforegr~mof trypsin inhibitor Kunitz dele types from 35 soybean accesiorrs, consisted of
11 local varieties, 14 introduced varieties f m Japan and 10 mutants, them are no t, gemtipe which indicate protein trypsin inhibitor and Ti , but 32 accesions contain Ti and 3
aecsiom contain Ti, (eomistd of 2 introduced varieties SP-07 and JP-20, and 1 mutan8m-28).
B a d on electrophoretic data, alleles Ti , Tib. Pnd Tit had d a t i v e mobility on 0.88, 0.84, and
$4
I . r V
?
0.94.
PENDAHULUAN
Kdalai (Glycinr
m a (La)
Merrill) selrin dikonsumsi
oleh manusir. jug. dikenal scbagri haban pkan Lama
memiliki kandungm protein ymg cukup tinggi. yritu
sampai 38% (Maynard Jan Looali. 1956; Aykroyd d m
Doughty, 1964). Namun, kendala yaag memhrtasi
pggunaan k d e l i i rrchagai pakan ialah perlunya pro.ses
pemanasan lrehelum dihcrikan kepadr ternak. Hal ini
tidak efieien karunr dapat menaikkan biayr produksi
temak. Prows pcmcrnasan dipdr1uk.n untuk rnanghilangk.n pengamh protein inhibitor tripsin ymg twdy#t pwtr
biji kdslai mentah. Pmtein tersehut diketahut lebagai
fiktor mtinutrini (Eldridgc rt nl.. 1966).
Protoin u t a m &ri inhibitor tripsin kedclai &I& protein SBTI-A2 yang bcrhalsil Jikristalkan oleh Kunitz
(1945) rehingga dikenal uebagai tripsin inhibitor kunir:.
Pewarisan protein ini dikzndalikan oleh srutu ristem gen
iungg~lmulti ale1 yrng hamifat k d o m i m n . Ale1 yang
mcn~~~tulrur
jenis protein ttlpJin inhibitor k u ~ i t zdi-i
dcngan T i , T i , dan Ti Selrin itu jug. tehpat ale1 t i
yang rereGf. &n dalamCkcrdunhomotigot tidak m a g harilkan tripin inhibitor kvnirz (Sinyh er al.. 1969; Orf
dm Hymowitz. 1979). Ale1 t i meruprkan ruatu mutan
huil mutui ~ b a kh c ~ g k a Jofuku
.
et al. (1989) mcnunjukkan mutari tarjadi pad. t i y a nukleotida dalam r u a r
p o n y d i antittipin kunitz yaitu + 48 1. + 486. J.n + 487.
Dungan Jitcmukan ale1 t i maka dimungkinkan untuk
J i h t u k w t u varietm kalciai t ~ mtitripain
p
kunitt
ldcntifikawijcnir ale1 y m g terdapat Jalarn hiji kdclai
& p t dillkukrn Jcngur mgpurulrln m d d e elektrofon* u d m met(& ini
sis gcl poli&rilrmiJ. Dargur
ale1 rripsin inhibitor kuttirz ditandai dcngan rdanyr pita
protcin yang memiliki keceputan mlgrmsi yrng k r h e J a
untuk maring-maning rlcl; drn untuk ale1 hamozipot
reserif tidak Jikntuk pita protein (Stnyh ct nl.. 1969;
.
IBenul~s
untuk Kc~rcsplndcnsl
Clulc et at.. 1970; Hymowitz.
1a70\
I *I I).
1973; Orf dan Hymowitz.
Dengaa mengetahui jenis atel protein SBTI-A2 yaag
lerd.plt d.lun kedelai. d a senurgkairn kegiatan pemulimn dapat dilakukan dcngan tujun untuk memperoleh
ta~murymp ti& menghrurilku, protein t w i n inhibitor kunirz. agar para peternrk dapat menygunakan biji
k 4 . i meatah sebgai pakm t e d .
BAHAN DAN METODE
&ham. Probin rriprin inhibitor kunitz diekstmkoi &ri
hiji kedslai yang bsr.wl J a r i kolekri PAU Biotaknologi.
IPB yurg t d i r i atmi i t nomor v a r i ~ 14
. nomor introduksi drri Jepanp, dan 10 nomor mutan-hasil radiaui
0 a h . I 1). Sebagai kantrol digunakan 5 nomor ksclelai.
yaitu varictrs Harosoy dan Williams untuk ale1 T i
Jefferson untuk ale1 T i b, Huk tae untuk r i e l T ic d&
Kunitz unhrlt ale1 ti.
Ehtmksi Rottin. Ekstraksi protein menggunakan
teknik Hymowitz Jan Hadlay (1972) dengan kberapa
modifikasi. Sebanyak 0. I g tepung kedelri yang krrarl
Jlri biji yurg diburng kulit bijinyr diampur dengan I ml
Irnrtan penyangga t r i s HCI pH 8.1 (trig 0.092 M. CaCI
0.023 M) dan 0.5 ml sukrosa 40% (b/v) di atas bak er!
Campuran torrebut relrnjutnyr disentr i fugaai dcngan
k s c g r t a n 6500 rpm mlama lima menit p d a .uhu kamrr.
Supernatan y m g tcrhentuk diaimpan pad. ruhu 4-8°C
J.n d
i untuk elcktrofomsir.
~
~
Pcmisahan Protein. Pemisahrn protein dilakukan
h g m tdtnik eldctmfonais m c n ~ a gel
n plilrilamid t i p lcmpngmn vertikal, rirrtam kontinu dengan
konscatrasi gel 10%. Lempengrn gel krukuran 20 cm x
IS cm r 1 mm. Untuk penymgga clcktrcdc digunakm
larutan trir-glirina pH 8.3. Setirp luhrny contoh J i i s i
J c n p m 4 0 p l campuran yany terdiri Jari SO rl larutan
contoh dm' 10 Gwrrnr trndr hiru hromofcnol 0.02 9C
(htv). Pnms clcktmfon=*is hcrlangsung yJ. suhu 2O"C
dcngan kekurtrn 1 0 0 volt selvmr sepuluh tncnjt pertarnu
.
.
ISSN 0854-8587
Pemeriksaan Jenis Ale1 Tripsin Inhibitor Kunitz
pada Kedelai dengan ~ e n ~ ~ u n a kMetode
a n Elektroforesis
Gel Poliakrilarnid Lempengan
BRIGITA JANSEN. MI~AHUDIN*, UTUT WIDYASTUTI. DAN MUHAMMAD JUSUF
Juruson Biulngi FMlPA IPB, / I . Raw Pajajaan, Bugor 16144
rr
Ditzrimr 16 Mei 1994/Disetujui 12 Juni 1994
Trypsin inhibitor Kunitz protein found in soybean seed is a main antinutrition and inhibit
the animal growth if used as animal feed in raw condition. This protein can be dirnimted
by heating or by creating soybean variety without trypsin inhibitor through plant breeding.
Trypsin inhibitor Kunitz protein in soybean seeds controled by one gene, four alleles. Based on
electroforegr~mof trypsin inhibitor Kunitz dele types from 35 soybean accesiorrs, consisted of
11 local varieties, 14 introduced varieties f m Japan and 10 mutants, them are no t, gemtipe which indicate protein trypsin inhibitor and Ti , but 32 accesions contain Ti and 3
aecsiom contain Ti, (eomistd of 2 introduced varieties SP-07 and JP-20, and 1 mutan8m-28).
B a d on electrophoretic data, alleles Ti , Tib. Pnd Tit had d a t i v e mobility on 0.88, 0.84, and
$4
I . r V
?
0.94.
PENDAHULUAN
Kdalai (Glycinr
m a (La)
Merrill) selrin dikonsumsi
oleh manusir. jug. dikenal scbagri haban pkan Lama
memiliki kandungm protein ymg cukup tinggi. yritu
sampai 38% (Maynard Jan Looali. 1956; Aykroyd d m
Doughty, 1964). Namun, kendala yaag memhrtasi
pggunaan k d e l i i rrchagai pakan ialah perlunya pro.ses
pemanasan lrehelum dihcrikan kepadr ternak. Hal ini
tidak efieien karunr dapat menaikkan biayr produksi
temak. Prows pcmcrnasan dipdr1uk.n untuk rnanghilangk.n pengamh protein inhibitor tripsin ymg twdy#t pwtr
biji kdslai mentah. Pmtein tersehut diketahut lebagai
fiktor mtinutrini (Eldridgc rt nl.. 1966).
Protoin u t a m &ri inhibitor tripsin kedclai &I& protein SBTI-A2 yang bcrhalsil Jikristalkan oleh Kunitz
(1945) rehingga dikenal uebagai tripsin inhibitor kunir:.
Pewarisan protein ini dikzndalikan oleh srutu ristem gen
iungg~lmulti ale1 yrng hamifat k d o m i m n . Ale1 yang
mcn~~~tulrur
jenis protein ttlpJin inhibitor k u ~ i t zdi-i
dcngan T i , T i , dan Ti Selrin itu jug. tehpat ale1 t i
yang rereGf. &n dalamCkcrdunhomotigot tidak m a g harilkan tripin inhibitor kvnirz (Sinyh er al.. 1969; Orf
dm Hymowitz. 1979). Ale1 t i meruprkan ruatu mutan
huil mutui ~ b a kh c ~ g k a Jofuku
.
et al. (1989) mcnunjukkan mutari tarjadi pad. t i y a nukleotida dalam r u a r
p o n y d i antittipin kunitz yaitu + 48 1. + 486. J.n + 487.
Dungan Jitcmukan ale1 t i maka dimungkinkan untuk
J i h t u k w t u varietm kalciai t ~ mtitripain
p
kunitt
ldcntifikawijcnir ale1 y m g terdapat Jalarn hiji kdclai
& p t dillkukrn Jcngur mgpurulrln m d d e elektrofon* u d m met(& ini
sis gcl poli&rilrmiJ. Dargur
ale1 rripsin inhibitor kuttirz ditandai dcngan rdanyr pita
protcin yang memiliki keceputan mlgrmsi yrng k r h e J a
untuk maring-maning rlcl; drn untuk ale1 hamozipot
reserif tidak Jikntuk pita protein (Stnyh ct nl.. 1969;
.
IBenul~s
untuk Kc~rcsplndcnsl
Clulc et at.. 1970; Hymowitz.
1a70\
I *I I).
1973; Orf dan Hymowitz.
Dengaa mengetahui jenis atel protein SBTI-A2 yaag
lerd.plt d.lun kedelai. d a senurgkairn kegiatan pemulimn dapat dilakukan dcngan tujun untuk memperoleh
ta~murymp ti& menghrurilku, protein t w i n inhibitor kunirz. agar para peternrk dapat menygunakan biji
k 4 . i meatah sebgai pakm t e d .
BAHAN DAN METODE
&ham. Probin rriprin inhibitor kunitz diekstmkoi &ri
hiji kedslai yang bsr.wl J a r i kolekri PAU Biotaknologi.
IPB yurg t d i r i atmi i t nomor v a r i ~ 14
. nomor introduksi drri Jepanp, dan 10 nomor mutan-hasil radiaui
0 a h . I 1). Sebagai kantrol digunakan 5 nomor ksclelai.
yaitu varictrs Harosoy dan Williams untuk ale1 T i
Jefferson untuk ale1 T i b, Huk tae untuk r i e l T ic d&
Kunitz unhrlt ale1 ti.
Ehtmksi Rottin. Ekstraksi protein menggunakan
teknik Hymowitz Jan Hadlay (1972) dengan kberapa
modifikasi. Sebanyak 0. I g tepung kedelri yang krrarl
Jlri biji yurg diburng kulit bijinyr diampur dengan I ml
Irnrtan penyangga t r i s HCI pH 8.1 (trig 0.092 M. CaCI
0.023 M) dan 0.5 ml sukrosa 40% (b/v) di atas bak er!
Campuran torrebut relrnjutnyr disentr i fugaai dcngan
k s c g r t a n 6500 rpm mlama lima menit p d a .uhu kamrr.
Supernatan y m g tcrhentuk diaimpan pad. ruhu 4-8°C
J.n d
i untuk elcktrofomsir.
~
~
Pcmisahan Protein. Pemisahrn protein dilakukan
h g m tdtnik eldctmfonais m c n ~ a gel
n plilrilamid t i p lcmpngmn vertikal, rirrtam kontinu dengan
konscatrasi gel 10%. Lempengrn gel krukuran 20 cm x
IS cm r 1 mm. Untuk penymgga clcktrcdc digunakm
larutan trir-glirina pH 8.3. Setirp luhrny contoh J i i s i
J c n p m 4 0 p l campuran yany terdiri Jari SO rl larutan
contoh dm' 10 Gwrrnr trndr hiru hromofcnol 0.02 9C
(htv). Pnms clcktmfon=*is hcrlangsung yJ. suhu 2O"C
dcngan kekurtrn 1 0 0 volt selvmr sepuluh tncnjt pertarnu
.
.