Uji aktivitas antioksidan dengan metode spektrofotometri visibel menggunakan deoksiribosa dan penentuan kadar flavonoid total fraksi etil asetat buah ketapang [Terminilia catappa L.] - USD Repository

  

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE

SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL MENGGUNAKAN DEOKSIRIBOSA

DAN PENENTUAN KADAR FLAVONOID TOTAL

FRAKSI ETIL ASETAT BUAH KETAPANG (Terminalia catappa L.)

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Diajukan oleh :

  Yovita Dwi Arini NIM : 038114128

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

  

PRAKATA

  Puji dan Syukur Penulis panjatkan kepada Allah Bapa yang senantiasa mendampingi, membimbing, memberikan berkat, anugerah, kasih dan pertolonganNya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Skripsi dengan judul Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode

  

Spektrofotometri Visibel Menggunakan Deoksiribosa Dan Penentuan Kadar

Flavonoid Total Fraksi Etil Asetat Buah Ketapang (Terminalia catappa L.)

  disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, dalam kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada :

  1. Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Bapak Dr. C.J. Soegihardjo, Apt selaku Dosen Pembimbing yang dengan sabar telah bersedia membimbing, mengoreksi, memberi masukan, bantuan dan saran mulai dari awal persiapan hingga akhir penyusunan skripsi ini. Bahan-bahan yang bapak berikan sungguh berguna.

  3. Bapak Drs. Sulasmono, Apt., selaku Dosen Penguji yang bersedia berdiskusi, menguji, memberikan saran, kritik selama penyusunan skripsi.

  4. Ibu Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku Dosen Penguji yang bersedia berdiskusi, menguji, memberikan saran, masukan, kritik selama

  5. Ign. Y. Kristio Budiasmoro, M.Si., selaku Dosen Pembimbing Akademik yang telah mendukung, memotivasi, membantu dan memberikan pengarahan selama kuliah.

  6. Seluruh staf pengajar dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Terima kasih atas pengalaman, ilmu, dan pengetahuannya.

  7. Mas Wagiran, Mas Sigit, Mas Sarwanto, Mas Kunto, Mas Parlan, terima kasih atas kerja sama, bantuan, dan pendampingan selama penulis “ngelab” di lantai tiga dan empat. Untuk Mas Andri, Mas Heru, Mas Parjiman, Mas Kayat, Mas Yuwono, Pak Musrifin, Pak Iswandi dan Mas Ottok, terima kasih atas peminjaman alat, kerja sama dan sapa ramahnya.

  8. My sisters and brothers yang selalu menanyakan ’kapan selesai, kapan wisuda?’, yang merupakan motivator untuk maju dan terus berusaha.

  9. Teman-teman seperjalan hidup empat tahun ini, yanti ’nduke’, rachel ’ndut’, nopha ’nyet2’, tatik ’item’, mbak dias, mbak pepi, mbak sisca, mbak estri, rita, tutu, vira. Cerita, tawa, kebersamaan dan kekompakan yang akan selalu kurindukan.

  10. Kelas C angkatan 2003 (kami menyebutnya Che_mistry), rasanya tak habis-habis aku bercerita tentang semua yang kita lakukan empat tahun ini.

  Canda, cerita, tugas, praktikum, ”dolan”, dan lainnya, pasti akan buat aku kangen. Terima kasih buat persahabatan, kebersamaan, perhatian, doa, semangat, kekompakkan dan kegilaannya. Tetap jadi sahabatku.

  11. Anggara Eka Nugraha, yang selalu memberi motivasi, bantuan, kritik, saran, semangat ketika penulis sedang putus asa. Terima kasih buat sayang, perhatian, doa, waktu, dukungan, dan pendampingannya serta karya-karyanya yang sungguh ’cantik’.

  12. Adik-adik angkatan baik yang menemani penulis saat ”ngelab”, sehingga suasana di laboratorium lebih hidup dan ramai maupun yang selalu menyapa penulis sehingga penulis termotivasi dan bersemangat kembali.

  13. Mas Prasojo, yang mau memberikan ilmu tentang mekanisme reaksi dan mas Ardian yang membantu memastikan metode yang digunakan.

  14. Pak Yahya di UGM yang memberi ijin dan bersedia memetik ketapang untuk penulis.

  Serta untuk semua pribadi yang membantu penulis dalam banyak hal untuk menyelesaikan skripsi ini, dan terima kasih untuk semuanya.

  Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran dari berbagai pihak. Akhirnya besar harapan penulis semoga hasil penelitian ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu farmasi

  Yogyakarta, Januari 2008 Yovita Dwi Arini

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL........................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................. ii HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... iv PRAKATA....................................................................................................... v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................... viii DAFTAR ISI.................................................................................................... ix DAFTAR TABEL............................................................................................ xii DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xvi

  INTISARI......................................................................................................... xvii ....................................................................................................... xviii

  ABSTRACT

  BAB I. PENGANTAR ..................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................ 1 B. Permasalahan............................................................................................... 4 C. Manfaat Penelitian....................................................................................... 4 D. Keaslian Penelitian...................................................................................... 5 E. Tujuan Penelitian ......................................................................................... 5 BAB II. PENELAHAAN PUSTAKA.............................................................. 6

  1. Nama tanaman ....................................................................................... 6

  2. Sistematika tanaman .............................................................................. 7

  3. Kandungan kimia .................................................................................. 7

  4. Kegunaan dan khasiat ........................................................................... 7

  B. Flavonoid..................................................................................................... 8

  1. Kerangka dasar dan pengertian flavonoid ............................................. 8

  2. Penyebaran flavonoid ............................................................................ 9

  3. Penggolongan dan sifat flavonoid ........................................................ 10

  4. Penyarian flavonoid .............................................................................. 12

  5. Deteksi dan identifikasi flavonoid ........................................................ 16

  6. Kegunaan flavonoid .............................................................................. 16

  C. Antioksidan ................................................................................................ 16

  1. Radikal bebas ........................................................................................ 16

  2. Definisi dan aktivitas antioksidan ......................................................... 18

  3. Penggolongan antioksidan .................................................................... 18

  4. Metode pengujian daya antioksidan ...................................................... 22

  D. Deoksiribosa ............................................................................................... 24

  E. Metode Penyarian ....................................................................................... 26

  F. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ................................................................ 29

  G. Spektrofotometri UV-Vis ........................................................................... 32

  H. Keterangan Empirik ................................................................................... 38

  H. Keterangan Empirik Yang Diharapkan ....................................................... 39

  BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ................................................. ..... 40 A. Jenis dan Rancangan Penelitian …………………………………….. ...... 40 B. Variabel - Variabel Penelitian …………………………………………40

  1. Variabel bebas........................................................................................ 40

  2. Variabel tergantung ............................................................................... 40

  3. Variabel pengacau ................................................................................. 40

  C. Definisi Operasional …………………………………………………... 41

  1. Uji aktivitas antioksidan ........................................................................ 41

  2. Fraksi etil asetat ..................................................................................... 41

  3. Kadar senyawa flavonoid total .............................................................. 41 4. buah ketapang ........................................................................................ 41

  D. Bahan Penelitian ......................................................................................... 42

  E. Alat Penelitian ............................................................................................ 42

  F. Tata Cara Penelitian .................................................................................... 43 1.

  Determinasi tanaman............................................................................ 43

  2. Pengumpulan bahan ............................................................................ 43

  3. Pembuatan ekstrak etanol buah ketapang ........................................... 43

  4. Pembuatan fraksi etil asetat buah ketapang ........................................ 44

  5. Uji kualitatif kandungan flavonoid dengan metode KLT .................... 44 6.

  Pembuatan buffer fosfat ...................................................................... 44

  7. Pembuatan pereaksi ............................................................................. 45

  8. Optimasi metode ................................................................................. 47

  9. Uji aktivitas penangkapan radikal hidroksil oleh fraksi etil asetat buah ketapang ........................................................................... 48

  10. Penentuan kadar flavonoid total .......................................................... 49

  G. Analisis Hasil ............................................................................................. 50

  BAB IV. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ............................... 51 A. Hasil Determinasi Tanaman .............................................................. 51 B. Hasil Pengumpulan Bahan ........................................................................ 51 C. Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Ketapang................................................ 52 D. Hasil Pembuatan Fraksi Etil Asetat Buah Ketapang.................................. 57 E. Hasil Uji Kualitaif Flavonoid dengan metode KLT .................................. 58 F. Optimasi Metode ....................................................................................... 61

  1. Penentuan waktu operasi ..................................................................... 61

  2. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum ............................ 66

  G. Hasil Uji Aktivitas Penangkapan Radikal Hidroksil dengan Metode Deoksiribosa .............................................................................................. 68

  H. Penentuan Kadar Senyawa Flavonoid Total ............................................. 74

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 79 A. Kesimpulan ............................................................................................... 79 B. Saran .......................................................................................................... 79 DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 80 LAMPIRAN..................................................................................................... 85 BIOGRAFI PENULIS …………………………………………………… .... 101

  

DAFTAR TABEL

  Halaman Tabel I. Warna bercak beberapa flavonoid setelah disemprot dengan pereaksi besi (III) klorida .............................................................. 13 Tabel II. Penafsiran warna bercak dari segi struktur flavonoid .................... 15 Tabel III. Beberapa macam ROS dan antioksidan yang menetralkan............ 17 Tabel IV. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat buah ketapang dengan berbagai konsentrasi........................ 69 Tabel V. Persen scavenging fraksi etil asetat buah ketapang ....................... 71 Tabel VI. Kadar kuersetin dan absorbansinya setelah direaksikan dengan aluminium klorida dalam suasana basa ......................................... 76 Tabel VII. Kadar flavonoid total fraksi etil asetat dihitung sebagai %b/b ekivalen kuersetin .......................................................................... 77

  

DAFTAR GAMBAR

  Halaman Gambar 1. Kerangka dasar flavonoid .......................................................... 9 Gambar 2. Kerangka tipe-tipe flavonoid ...................................................... 11 Gambar 3. Pembentukan struktur kuinoid flavonoid karena uap ammonia . 13 Gambar 4. Reaksi pembentukan kompleks flavonoid (flavon, 5-OH flavon, flavonol) dengan pereaksi aluminium klorida ................ 14 Gambar 5. Senyawa-senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan ............ 21 Gambar 6. Struktur kimia beberapa antioksidan sintetik ............................. 21 Gambar 7. Struktur deoksiribosa ................................................................. 24 Gambar 8. Tingkat energi elektronik ............................................................ 34 Gambar 9. Struktur rutin ............................................................................... 58 Ganbar 10. Kromatogram uji kualitatif flavonoid pada fraksi etil asetat dengan fase diam: selulosa, fase gerak: butanol-asam asetat-air

  (4:1:5) v/v, deteksi: uap amonia ................................................. 59 Gambar 11. Kromatogram uji kualitatif flavonoid pada fraksi etil asetat dengan fase diam: selulosa, fase gerak: n-butanol-asam asetat- air (4:1:5) v/v, deteksi: pereaksi semprot besi (III) klorida ...... 60

  Gambar

  12. Kurva hubungan waktu (menit) dengan absorbansi kromogen MDA-TBA................................................................. 62 Gambar 13. Reaksi pembentukan gugus enol pada TBA ................................ 63 Gambar 14. Reaksi pembentukan MDA ......................................................... 64

  Gambar 16. Struktur kromogen MDA-TBA .................................................. 66 Gambar 17. Kurva hubungan panjang gelombang (nm) dengan absorbansi kromogen MDA-TBA................................................................. 67 Gambar 18. Kurva hubungan antara penambahan konsentrasi fraksi etil asetat buah ketapang dengan absorbansi kromogen MDA-TBA 70 Gambar 19. Kurva hubungan kenaikan konsentrasi fraksi etil asetat dengan

  % Scavenging ............................................................................. 71

  Gambar 20. Mekanisme penangkapan radikal hidroksil oleh flavonoid dan efek resonansi yang terjadi pada flavonoid................................. 73 Gambar 21. Reaksi kopling radikal fenoksil.................................................... 74 Gambar 22. Reaksi yang terjadi dalam penetapan kadar flavonoid ............... 75 Gambar 23. Kurva kadar kuersetin dan absorbansinya setelah direaksikan dengan aluminium klorida dalam suasana basa .......................... 76 Gambar 23. Pohon ketapang ........................................................................... 94 Gambar 24. Buah ketapang ............................................................................. 94 Gambar 25. Daun ketapang ............................................................................. 94 Gambar 26. Bunga ketapang ........................................................................... 94 Gambar 27. Ekstrak kental buah ketapang ...................................................... 95 Gambar 29. Fraksi etil asetat buah ketapang .................................................. 95 Gambar 30. Perkolator ..................................................................................... 95

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Halaman Lampiran 1. Tabel nilai koefisien korelasi (r) ................................................. 85 Lampiran 2. Perhitungan rendemen ................................................................ 85 Lampiran 3. Gambar kromatogram uji kualitatif flavonoid............................. 86 Lampiran 4. Contoh perhitungan % scavenging fraksi etil asetat buah ketapang ...................................................................................... 86 Lampiran 5. Perhitungan nilai ES fraksi etil asetat ...................................... 87

  50 Lampiran 6. Contoh perhitungan kadar flavonoid fraksi etil asetat ................ 87

  Lampiran 7.Perhitungan A (1%, 1 cm) ............................................................ 88 Lampiran 8. Foto-foto ...................................................................................... 94 Lampiran 9. Surat determinasi ......................................................................... 96 Lampiran 10. Sertifikat analisis deoksiribosa .................................................. 97 Lampiran 11. Sertifikat analisis rutin............................................................... 98 Lampiran 12. Sertifikat analisis kuersetin........................................................ 99 Lampiran 13. Asam urat sebagai antioksidan .................................................. 100

  

INTISARI

  Antioksidan adalah senyawa yang menghambat reaksi radikal bebas dalam tubuh, akibatnya kerusakan sel dan jaringan dapat dicegah. Ketapang merupakan salah satu tanaman, dimana buahnya memiliki kadar senyawa fenolik dan flavonoid yang digunakan untuk obat sakit kepala, pencahar, rematik, dan lepra.

  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah ketapang serta menentukan kadar flavonoid total. Nilai aktivitas penangkapan radikal hidroksil dinyatakan dalam persen penangkapan (%

  

scavenging ) dan nilai penangkapan efektif (effective scavenging) radikal hidroksil

  sebesar 50% (ES 50 ).

  Metode penangkapan radikal hidroksil yang digunakan adalah metode spektrofotometri visibel menggunakan deoksiribosa. Prinsip metode ini adalah degradasi deoksiribosa oleh radikal hidroksil, membentuk malondialdehid (MDA) dalam suasana asam dan adanya asam tiobarbiturat (TBA) menghasilkan kromogen MDA-TBA berwarna merah muda yang diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum 532 nm.

  Data kromatografi berupa hRf dan warna bercak sebelum dan sesudah ditambah pereaksi (uap amonia dan besi (III) klorida), diamati dengan sinar tampak maupun dengan sinar UV 254 nm dan 366 nm. Kadar flavonoid total dihitung menggunakan persamaan regresi linear kurva baku kuersetin.

  Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat buah ketapang memiliki aktivitas penangkapan radikal hidroksil dengan ES

  50 sebesar

  69,39µg/mL. Kadar flavonoid total fraksi etil asetat buah ketapang adalah 3,302 %b/b ekivalen kuersetin. Kata kunci : buah ketapang (Terminalia catappa L.), fraksi etil asetat, flavonoid total, antioksidan, metode deoksiribosa

  

ABSTRACT

  Antioxidant is a compound which habbits free radical reaction inside the body, so it prevents body cells and tissues damage. Ketapang is one of plants, which its fruit contents phenolic and flavonoid compounds, used for treating headache, laksantia, gout, and leprosy.

  This research aimed to find out the antioxidant activity of the ethyl acetate fraction of ketapang fruit, and also to determine the total consentrations of flavonoid. The activity value of hydroxyl radical scavenging activity is state in percent (%) scavenging and hydroxyl radical effective scavenging value is in 50% (ES 50 ).

  The hydroxyl radical scavenging method that is spectrophotometry visible method used deoxyribose. The principle of this method is the deoxyribose degradation by the hydroxyl radical, forms the malondialdehyde (MDA) in acid condition, and also by the existence of thiobarbituric acid (TBA) produces the pink chromogent which has 532 nm for the length of the maximum wave, after the absorbance is measured.

  The chromatography data is the form of hRf and spots colour on before and after being added with reagent (ammonia vapor and iron (III) chloride), is being observed by the normal beam or even UV lights on 254 nm and 366 nm. The total contents of flavonoid is analyzed using the regretion linear equation quercetin.

  The result of the research indicates that the ethyl acetate fraction of ketapang fruit has 93.39 %

  50 the activity of hydroxyl radical

  μg/ml for ES scavenging. The total flavonoid consentrations of ethyl acetate fraction from ketapang fruit is 3.302 % b/b equivalent quercetin. Key words : ketapang fruit (Terminalia catappa L.), ethyl acetate fraction, total flavonoid, antioxidant, deoxyribose method

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Oksigen merupakan atom yang sangat reaktif dan dapat berubah menjadi

  suatu molekul perusak yang sering disebut ‘radikal bebas’. Radikal bebas dapat menyerang sel-sel tubuh yang sehat dan menyebabkan sel-sel tersebut kehilangan fungsi dan strukturnya. Radikal bebas yang sangat reaktif ini akan mencuri (menangkap atau mengambil) elektron dari senyawa lain seperti protein, lipid dan DNA untuk menetralkan diri. Radikal bebas yang masuk dalam tubuh akan menyerang selaput lipid yang melindungi sel, kemudian merusak protein, enzim dan inti sel dimana DNA dibentuk (Kumalaningsih, 2007). Kerusakan sel yang disebabkan radikal bebas menjadi kontributor utama dalam penuaan dan penyakit degeneratif seperti kanker, penyakit kardiovaskular, katarak, penurunan sistem imun dan kerusakan otak (Percival, 1998).

  Reactive Oxygen Species (ROS) merupakan bentuk yang terdiri dari

  radikal yang sangat reaktif, molekulnya mengandung oksigen dan merupakan radikal bebas yang umum dihasilkan dalam sistem biologi. ROS juga dapat dihasilkan oleh sumber eksogen seperti komponen makanan dan radiasi ultraviolet. Beberapa macam ROS: radikal superoksid (O2•-), anion peroksid (HOO-), radikal hidroksil (•OH), radikal peroksil (ROO•), radikal peroksinitrit (O=NOO•-), radikal oksida nitrit (NO•), oksigen singlet (O•), radikal hipoklorid

• (ClO4 ), peroksida nitrit (Percival, 1998). Diantara ROS yang telah disebutkan,

  Antioksidan merupakan senyawa yang mampu menghambat reaksi berantai radikal bebas dalam tubuh manusia dan dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas tanpa terganggu fungsinya (Kumalaningsih, 2007). Antioksidan merupakan first line dalam pertahanan terhadap kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas karena berfungsi menstabilkan atau mendeaktivasi radikal bebas sebelum menyerang sel (Percival, 1998).

  Ketapang merupakan tanaman pelindung yang biasa ditanam di daerah pantai sebagai peneduh, memperindah pantai dan produsen edible nuts (kacang- kacangan), karena bijinya dapat dimakan. Banyak tumbuh didaerah tropis dan subtropis. Mudah beradaptasi dengan tanah tempat tumbuh dan kadar garam, cepat tumbuh dan perawatannya minimal sehingga mudah dibudidayakan (Thomson, 2006). Ketapang merupakan tanaman yang memiliki kandungan fenolik, yaitu tanin dan flavonoid. Buahnya digunakan untuk obat sakit kepala,

  

leprosy (lepra), rematik, mual saat perjalanan, laksantia (pencahar) (Anonim,

  2006a). Daun tanaman ketapang memiliki kegunaan sebagai antikanker dan antioksidan sebaik sifat anticlastogenic (pencegah pemutusan ikatan) (Anonim, 2006b). Dalam beberapa penelitian buah ketapang mempunyai efek sebagai anti HIV, anti asmathik, anti katarak, antidiabetik, xanthin oxidase inhibitor, aldose

  

reductase inhibitor . Kombinasi dari daun dan batang tanaman ketapang memiliki

  aktivitas antikanker-antioksidan (Nagappa, Thakurdesai, Venkat Rao, Singh, 2006). Kemungkinan dalam buah ketapang memiliki aktivitas yang sama atau mirip dengan daun yang merupakan bagian tanaman ketapang yang lain.

  Flavonoid merupakan senyawa polar karena mempunyai sejumlah gugus hidroksi yang tidak tersubstitusi atau suatu gula. Oleh karena itu, umumnya flavonoid cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, aseton, etil asetat, dimetilsulfoksida, dimetilformamid, dan air (Markham, 1988).

  Aktivitas antioksidan dimiliki oleh sebagian besar flavonoid disebabkan adanya gugus hidroksi fenolik dalam struktur molekulnya. Beberapa tahun belakangan ini diteliti kemampuan flavonoid sebagai antioksidan untuk merubah atau mereduksi radikal bebas dan juga sebagai antiradikal bebas (Giorgio, 2000).

  Etil asetat merupakan pelarut yang paling baik untuk aglikon flavonoid dan dianjurkan untuk digunakan dalam proses pemurnian (Robinson, 1995).

  Glikosida dan beberapa aglikon flavonoid larut dalam etil asetat (Mabry, Markham, and Thomas, 1970). Aktivitas antioksidan daun ketapang dalam fraksi etil asetat lebih tinggi dibandingkan pentana atau diklorometana (Chyau, Tsai, Ko, and Mau, 2002). Dalam penelitian tentang antioksidan herba ketul (Bidens pilosa L.), didapatkan fraksi etil asetat memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang paling tinggi dibandingkan rutin, fraksi klorofom dan ekstrak metanoliknya (Nusarini, 2007; Wiyatsih, 2007).

  Metode pengujian yang dipilih adalah metode deoksiribosa. Metode ini menggunakan deoksiribosa sebagai model biomolekul dari gula DNA yang terdapat dalam tubuh sehingga secara tidak langsung memberikan gambaran reaksi radikal hidroksil dalam tubuh. Selain itu, metode ini relatif sederhana dan mudah. Adanya aktivitas penangkapan radikal hidroksil oleh fraksi etil asetat buah absorbansi larutan kontrol (tanpa sampel) dan larutan dengan sampel dibagi absorbansi kontrol dikalikan 100%. Nilai aktivitas penangkapan radikal hidroksil dapat dinyatakan dalam aktivitas penangkapan efektif 50% radikal hidroksil atau

  effective scavenging 50% (ES 50 ). Semakin kecil nilai ES 50 maka sampel tersebut

  mempunyai nilai keefektifan sebagai penangkap radikal hidroksil (sebagai antioksidan) yang lebih baik

  B.

  

Permasalahan

  1. Apakah fraksi etil asetat buah ketapang mempunyai aktivitas antioksidan melalui uji penangkapan radikal hidroksil dengan metode deoksiribosa?

  2. Berapa besar kadar flavonoid total fraksi etil asetat buah ketapang? C.

  

Manfaat Penelitian

  1. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberi informasi bagi penelitian lebih lanjut maupun masyarakat luas mengenai potensi buah ketapang sebagai antioksidan alami.

  2. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan pada perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang farmasi, khususnya tentang penggunaan metode deoksiribosa dalam menguji aktivitas antioksidan.

  D.

  

Keaslian Penelitian

  Penelitian terhadap buah ketapang sejauh ini belum banyak dilakukan terutama penelitian terhadap kadar flavonoid total serta uji aktivitas antioksidan dengan metode deoksiribosa. Adapun penelitian yang telah dilakukan adalah aktivitas antidiabetes buah ketapang (Nagappa, et.al, 2006)

E. Tujuan Penelitian

  Penelitian ini bertujuan :

  1. Mengetahui aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah ketapang melalui uji penangkapan radikal hidroksil dengan metode deoksiribosa.

  2. Mengetahui kadar flavonoid total fraksi etil asetat buah ketapang.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Tanaman Ketapang

1. Nama tanaman Nama latin : Terminalia catappa L.

  Sinonim : Phytolacca javanica Osbeck.

  Terminalia mauritiana Blanco. Terminalia moluccana Lamk. Terminalia procera Roxb. (Thomson and Evans, 2006)

  Nama daerah: Sumatera: beowa, kilaulu, geutapang, ketapang, hatapang, katapang, lahapang, katafa, ketapas, ketapieng. Jawa: katapang, ketapang.

  Nusatenggara: katapang, klihi. Sulawesi: tarisei, salrise, talisei, kanaunggang, katapang, atapang, lisa. Maluku: wewa, wew, sadina, sarina, saliha, sertalo, kayane, sirisa, sarisa, sarisalo, lisa, tasi, klis, klais, kris, ngusu, id. Irian: ruge (Anonim, 1989).

  Common Name: Tropical Almond, India Almond, Umbrella Tree, Badam

Amandier De Cayenne, Wild Almond, Hulu Kwang, Sea Almond, Bengal Almond,

Singapore Almond, Malabar Almond, Tropical Almond, Alite, ‘Autara’a, ‘Aua,

‘Auari’iroa, Kamani Haole, Kamani‘ula, False Kamani, Kauariki, Kaukauariki,

Taraire, Ma’i’i, Koa’i’i, Ta’ie, Natapoa, Talie, Talise, Tavola, Tivi, Telie.

  (Anonim, 2006a; Gilman and Watson, 2006; Thomson and Evans, 2006).

  2. Sistematika tanaman Klasifikasi tanaman ketapang dalam sistematika tumbuhan.

  Regnum : Plantae Divisio : Magnoliophyta Classis : Magnoliopsida Ordo : Myrtales Familia : Combretaceae

  Genus : Terminalia Species : Terminalia catappa L.

   )

  3. Kandungan kimia

  Daun mengandung beberapa flavonoid (seperti kaemferol dan kuersetin), beberapa tanin (seperti punicalin, punicalagin, atau tercatin), saponin, dan fitosterol (Anonim, 2006b). Buah mengandung , corilagin, ellagic-acid, asam

  cyanidin-3-glucoside

  galat, pentosa, brevifolin-carboxyclic-acid eugenic acid, flavonoid, tanin, dan β- karoten (Nagappa et al., 2006).

  4. Kegunaan dan khasiat

  a. Daun Daun mengandung senyawa untuk mencegah kanker dan antioksidan sebaik sifat anticlastogenic (Anonim, 2006b). Sebagai obat rematik, anti- inflamasi, mengatasi masalah mata, luka baru, mencegah pendarahan setelah mengobati penyakit hati (hepatitis), daun muda sebagai pencahar, obat penyakit kulit (dermatitis), scabies (Anonim, 2006a; Lin, Hsu, Lin, and Hsu, 2001 ).

  b. Buah Buahnya digunakan untuk obat sakit kepala, leprosy (lepra), mual saat perjalanan, laksantia (pencahar), rematik dan dapat juga dikonsumsi langsung

  (Anonim, 2006a). Dalam beberapa penelitian buah ketapang mempunyai efek sebagai anti HIV, anti asmathik, anti katarak, antidiabetik, Xanthin oxidase

  

inhibitor , aldose reductase inhibitor, berpotensi untuk treatment DB (Nagappa

et al. , 2006).

  c. Batang Batangnya digunakan untuk obat mulut dan tenggorokan, sakit perut dan diare, demam, disentri (Anonim, 2006a).

  d. Kombinasi Daun dan batang telah dilaporkan mempunyai aktivitas sebagai antikanker-antioksidan, anti-HIV reverse transcriptase, hepatoprotektif, antiinflamasi, hepatitis dan aphrodisiac (Nagappa et al., 2006). Buah, batang dan daun untuk mengobati disentri (Asia Tenggara), rematik (Indonesia, India).

  Buah dan batang untuk mengobati batuk (Samoa) dan asma (Mexico).

  

B. Flavonoid

1. Kerangka dasar dan pengertian flavonoid

  Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang strukturnya merupakan dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C

  6 -C 3 -C 6 . Artinya, kerangka karbon

  terdiri atas dua gugus C

  6 (cincin benzen tersubstitusi) disambungkan dengan rantai alifatik tiga karbon (Robinson, 1995).

  

C C

C

Gambar 1. Kerangka dasar flavonoid (Robinson, 1995)

  Aktivitas antioksidan dimiliki oleh sebagian besar flavonoid disebabkan adanya gugus hidroksi fenolik dalam struktur molekulnya. Ketika senyawa- senyawa ini bereaksi dengan radikal bebas, mereka membentuk radikal baru yang distabilisasi oleh efek resonansi inti aromatik. Dengan demikian fase propagasi yang meliputi reaksi radikal berantai dapat dihambat (Cuvelier, Richards, and Besset, 1991).

2. Penyebaran flavonoid

  Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau, kecuali untuk golongan algae. Flavonoid sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kulit, kayu, tepung sari, bunga, buah dan biji. Hanya sedikit saja catatan yang melaporkan adanya flavonoid pada hewan (Harborne, 1987).

  Penyebaran flavonoid pada golongan tumbuhan yang tersebar yaitu Angiospermae (Markham, 1988). Penyebaran flavonoid sebagai salah satu senyawa aktif tumbuhan sering diakibatkan oleh lingkungan tempat tumbuh yang berbeda, karena pertumbuhan suatu tumbuhan sering diakibatkan oleh lingkungan tempat tumbuh yang berbeda, karena pertumbuhan suatu tanaman dipengaruhi oleh tinggi tempat, keadaan tanah dan cuaca. Senyawa ini dalam jaringan tumbuhan lazimnya ditemukan sebagai campuran dari berbagai turunannya dan jarang ditemukan sebagai senyawa tunggal (Harborne, 1987).

  Flavonoid dalam tumbuhan terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid, mungkin saja terdapat dalam satu tumbuhan dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida. Karena alasan itu maka dalam menganalisis flavonoid biasanya lebih baik ekstrak tumbuhan dihidrolisis terlebih dahulu untuk mendapatkan bentuk flavonoid sebagai aglikon sebelum memperhatikan kerumitan glikosida yang mungkin terdapat dalam ekstrak asal (Harborne, 1987).

3. Penggolongan dan sifat flavonoid

  Penggolongan flavonoid berdasarkan pada substituen cincin heterosiklik yang mengandung oksigen dan perbedaan distribusi gugus hidroksil pada atom C

  3 . Perbedaan di bagian atom C 3 menentukan sifat, khasiat dan golongan

  flavonoid, yaitu flavon, flavanon, flavonol, flavanolnol, isoflavon, auron, dan khalkon (Markham, 1988).

  Flavonoid merupakan fitokimia tumbuhan yang tidak dapat disintesis oleh manusia. Senyawa ini mempunyai efek positif terhadap kesehatan manusia.

  Flavonoid sering merupakan senyawa pereduksi yang baik, karena menghambat banyak reaksi oksidasi, baik secara enzimatis maupun non enzimatis. Flavonoid bertindak sebagai penampung yang baik radikal hidroksil dan superoksida, dan dengan demikian melindungi lipid membran terhadap reaksi yang merusak

  OH O Khalkon

  7

  Penyarian flavonoid dari dalam simplisia tumbuhan dapat dilakukan dengan menggunakan pelarut polar, semi polar, maupun non polar sesuai dengan

  Flavonoid

Gambar 2. Kerangka tipe-tipe flavonoid

(Bors, Michel, and Stettmainer, 2005)

  3' 2' A C

B

  3 6' 5' 4'

  4

  5

  6

  8

  O O Flavanon

  O

  

O

OH flavan-3-ol

  O Neoflavon

  O O Isoflavon

  OH Anthocyanidin

  O O OH

O

O

OH O Flavone

flavon-3-ol

  O O OH Dihidroflavonol

4. Penyarian flavonoid

  kelarutan flavonoid yang diekstraksi. Kelarutan flavonoid berbeda-beda sesuai golongan dan substitusinya (Robinson, 1995). Pelarut yang kurang polar digunakan untuk mengekstraksi aglikon flavonoid, sedangkan pelarut yang lebih polar digunakan untuk glikosida flavonoid atau antosianin. Flavonoid merupakan senyawa polar karena mempunyai sejumlah gugus hidroksi yang tidak tersubstitusi atau suatu gula. Oleh karena itu, umumnya flavonoid cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, aseton, etil asetat, dimetilsulfoksida, dimetilformamid, dan air (Markham, 1988).

  Penyarian flavonoid dari tumbuhan didasarkan polaritas kandungan yang akan disari dan asal bahan (dari mana substansi tersebut berasal). Flavonoid yang berasal dari vakuola sel umumnya bersifat hidrofilik sehingga penyarian dapat dilakukan dengan air atau pelarut-pelarut alkoholik. Jika flavonoid terdapat pada kloroplas, pelarut yang dipergunakan untuk penyarian adalah pelarut-pelarut non polar sebelum dilakukan penyarian dengan alkohol. Bahan segar dapat diekstraksi dengan alkohol 96%. Bahan kering dan berkayu dapat menggunakan campuran alkohol dengan air, hal ini disesuaikan glikosida flavonoidnya (Harborne, 1987).

5. Deteksi dan identifikasi flavonoid

  Senyawa flavonoid merupakan senyawa fenolik, oleh karena itu dapat memberikan reaksi dengan pereaksi untuk fenol antara lain membentuk warna khas dengan besi (III) klorida (FeCl ), aluminium klorida (AlCl ), larutan asam

  3

  3

  sulfanilat terdiasotasi, sitroborat, vanilin HCl dan senyawa asam sulfat pekat (Harborne, 1987). Flavonoid dapat dideteksi dengan ammonia, jika tidak pembentukan garam dan struktur kuinoid pada cincin B. Reaksi ini memberi warna spesifik untuk masing-masing golongan. Flavon dan flavonol akan memberikan warna kuning, antosian berwarna lembayung biru. Flavanon tidak berwarna namun akan menjadi merah bila dipanaskan. Flavanolol akan berwarna coklat hingga jingga, dan adanya khalkon atau auron akan menimbulkan warna merah mendadak dalam suasana asam (Robinson, 1995).

  

Tabel I. Warna bercak beberapa flavonoid setelah disemprot dengan pereaksi

besi (III) klorida (Mabry, Markham, and Thomas, 1970)

Tipe Flavonoid Warna Bercak

  Naringenin Merah-violet Hesperitin Eriodictiol Biru-violet Dihidrokuersetin Dihidrofisetin Abu-abu dan biru tua Dihidrorobinetin Deodarin (Dihidroflavonol) Ungu intensif Dihidrokhalkon Merah Flavanon Hijau-coklat

  Flavonoid akan membentuk kompleks jika direaksikan dengan pereaksi sitroborat atau dengan pereaksi aluminium klorida. Kompleks yang terbentuk berwarna kuning (Mabry, et.al. , 1970). _{OH O O}

  O O _{O O O}

OH - H O

_{2 O}

  

Gambar 3. Pembentukan struktur kuinoid flavonoid karena uap ammonia

(Robinson, 1995)

  _{HO O OH HO O} O _{Al Cl} AlCl _OH

  3 O _{O OH}

HCl encer

_{O O Al Cl}

  HO O _{OH HO O O} AlCl _{OH O}

  

3

_{Cl Cl O O Al} 5 - OH - Flavon _{HO O} HCl encer _{OH OH}

  O O _{Al OH Cl Cl} Berwarna kuning _{O HO O OH HO O O} Al Cl AlCl _{O OH}

  

3

_{O Al O Cl} Flavonolol _{HO O} HCl encer _{OH OH O Al} O _Cl Berwarna kuning

  

Gambar 4. Reaksi pembentukan kompleks flavonoid (flavon, 5-OH flavon,

flavonol) dengan pereaksi AlCl

₃

  Tabel II. Penafsiran warna Bercak dari segi struktur flavonoid (Markham, 1988) Warna Bercak Dengan Sinar UV Jenis Flavonoid yang mungkin Sinar UV tanpa NH

  3 Lembayung Gelap

3 Sinar UV dengan NH

  (tersulih pada 3-H dan mempunyai 4’-OH)

  Tak Nampak Fluorosensi biru muda Isoflavon tanpa 5-OH bebas Kuning redup dan kuning, atau fluorosensi jinga

  Antosianidin 3,5-diglikosid Merah jambu atau Sebagian besar antosianidin 3,5-diglikosid

  Merah jingga redup atau merah senduduk Biru

  a. Auron yang tak mengandung 4’-OH bebas dan flavanon tanpa 5-OH bebas b. Flavonol yang mengandung 2-OH bebas dan disertai atau tanpa 5-OH bebas

  Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan warna

  Hijau-Kuning, Hijau-biru, atau hijau

  Fluorosensi kuning Merah atau jingga Auron yang mengandung 4’-OH bebas dan beberapa 2- atau 4-OH khalkon

  Flavonol yang mengandung 3-OH bebas dan mempunyai atau tak mempunyai 5-OH bebas (kadang-kadang berasal dari dihidroflavon)

  Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan warna

  Isoflavon yang mengandung 5-OH bebas Fluorosensi biru muda Isoflavon yang mengandung 5-OH bebas

  b. Kadang-kadang 5-OH flavonon dan 4’- OH khalkon tanpa OH pada cincin B

  Kuning, hijau-kuning atau hijau a. Biasanya 5-OH flavon atau dihidroflavon

  Fluorosensi biru muda Fluorosensi hijau-kuning atau kuning-biru a. Flavon dan flavanon yang tak mengandung 5-OH, misal 5-OH glikosid b. Flavonol tanpa 5-OH bebnas tetapi tersulih pada 3-OH

  Khalkon yang mengandung 2- dan atau 4- OH bebas

  Biru muda Beberapa 5-OH flavanon Merah atau jingga

  d. Khalkon yang mengandung 2’- dan atau 6’-OH tetapi tidak mengandung 2- atau 4- OH bebas

  c. Isoflavon, dihidroflavonol, biflavonil dan beberapa flavanon yang mengandung 5- OH

  a. Biasanya flavon atau flavonol tersulih pada 3-O mempunyai 5-OH tetapi tanpa 4’-OH bebas b.beberapa 6- tatau 8-OH flavon dan flavonol tersulih pada 3-O serta mengandung 5-OH

  Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan warna

  Perubahan warna sedikit atau tanpa perubahan warna

6. Kegunaan flavonoid

  Flavonoid dalam tanaman bertindak sebagai tabir surya alami, melindungi terhadap kerusakan sinar ultraviolet, karena berada pada permukaan atau sel epidermis daun hijau (Bors et al., 2007). Cuvelier et al. (2005) menyatakan bahwa ketika flavonoid bereaksi dengan radikal bebas, akan terbentuk radikal baru yang distabilisasi oleh efek resonansi inti aromatik. Dengan demikian fase propagasi yang meliputi reaksi berantai radikal dihambat. Aktivitas antioksidan yang dimiliki oleh sebagian besar flavonoid disebabkan adanya gugus hidroksi fenolik dalam struktur molekulnya. Selanjutnya, Hudson (dalam Achmad, 1990) menyatakan bahwa aktivitas tersebut ditentukan oleh gugus –OH ganda (gugus fenolik), terutama dengan gugus C=O pada posisi C-3 dengan gugus –OH pada posisi C-2 atau pada posisi C-5. Sistem gugus fungsi demikian memungkinkan terbentuknya kompleks dengan logam.

  Flavonoid merupakan senyawa penangkap radikal superoksida yang kuat dan dapat bereaksi dengan radikal peroksi menyebabkan terminasi reaksi berantai pada autooksidasi lemak tak jenuh ganda. Selain itu dapat berfungsi sebagai penangkap radikal –OH yang merupakan radikal bebas yang reaktif (Buhler and Miranda, 2007).

C. Antioksidan

1. Radikal bebas

  Radikal bebas merupakan atom atau molekul yang sifatnya sangat tidak stabil (mempunyai satu elektron atau lebih yang tidak berpasangan), sehingga jaringan. Radikal bebas yang terbentuk cenderung untuk mengadakan reaksi berantai yang bila terjadi dalam tubuh dapat menimbulkan kerusakan-kerusakan yang serius. Senyawa radikal tersebut timbul akibat berbagai proses kimia kompleks dalam tubuh, berupa hasil sampingan dari proses oksidasi atau pembakaran sel yang berlangsung pada waktu bernafas; metabolisme sel, 90% ROS digunakan sel untuk transpor elektron oleh mitokondria; peradangan, terjadi fagositosis oleh sel darah putih, karena mekanisme terbunuhnya virus dan bakteri serta denaturasi protein asing (antigen); metabolisme xenobiotik (zat asing yang berasal dari luar tubuh, seperti obat, toksikan); atau ketika tubuh terpapar polusi lingkungan (Percival, 1998).