B1J009034 16.
Lampiran 1. Spesifikasi Peralatan dan Bahan
No. Nama Alat Merek/Tipe Kegunaan Tempat
1 Laminar air flow AirClean 5000 Tempat kerja aseptis
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI
OSK CVB
130M
2 Autoklaf HL36E
(Hirayama Manufacturing Corp.)
Sterilisasi alat dan bahan
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI HVA-85
(Hirayama
3 Inkubator Memmert Inkubasi kultur
bakteri
Lab.
Mikrobiologi 4 Shaker incubator Lab
Companion
Inkubasi inokulum sambil
digoyangkan
Lab.
Mikrobiologi
5 pH meter Thermo
Electron
Mengukur pH
larutan dan media
Lab. Mikrobiologi Bante Instrument Lab. Eko-Fisiologi LIPI 6 Microcentrifuge Eppendorf Memisahkan kultur
dengan supernatan
Lab.
Mikrobiologi
Mini Spin
Eppendorf
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 7 UV-Vis
Spektrofotometer
Shimadzu UV Mini 1240
Mengukur
kepadatan optik sel
Lab.
Mikrobiologi 8 Mikropipet dan tip Transferpette
& Eppendorf
Memindahkan larutan atau cairan
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI
9 Cawan Petri Iwaki Pyrex,
Herma, CMSI
Membiakkan kultur bakteri
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI 10 Labu Erlenmeyer Iwaki Pyrex,
Herma
Tempat membuat media
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI 11 Chlorophyll meter SPAD-502Plus Mengukur kadar
klorofil daun
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 12 Digital Light Meter
(Luxmeter)
DER EE DE-3351
Mengukur intensitas cahaya
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 13 Orbital Shaker Orbital Genie Inkubasi media
atau perlakuan sambil digojlog
Lab. Eko-Fisiologi LIPI
bio.unsoed.ac.id
(2)
42 14 High Performance
Liquid
Chromatography
Shimadzu Analisis kandungan IAA
Lab. Biokimia LIPI
15 Vortex Heidolf Menghomogenkan
larutan
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 16 Rotary Evaporator Eyela Menguapkan
pelarut
Lab. Eko-Fisiologi LIPI
17 Oven Ecocell Mengeringkan
sampel tanaman
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 18 Tabung gelas ukuran
3x20 cm
Iwaki Pyrex Tempat perlakuan penanaman jagung
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 19 Tabung reaksi Iwaki Pyrex Mengkultur bakteri Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI
20 Jarum inokulum - Memindahkan
kultur bakteri
Lab.
Mikrobiologi 21 Milipore 0,22 mikron Corning Sterilisasi bahan
tidak tahan panas
Lab. Eko-Fisiologi LIPI 22 Syringe Terumo Alat bantu milipore Lab.
Mikrobiologi 23 Timbangan analitik Ohaus tipe EO
2140
Menimbang bahan pembuatan media
Lab.
Mikrobiologi
Vibra SJ 620 Lab.
Eko-Fisiologi LIPI
24 Cuvette - Wadah cairan yang
akan diukur
kepadatan optiknya
Lab.
Mikrobiologi
25 Tabung Eppendorf Eppendorf Wadah untuk
sentrifus
Lab.
Mikrobiologi
26 Pinset - Memindahkan
benda dengan cara dijepit
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI
27 Gelas ukur Iwaki Pyrex,
Herma
Mengukur akuades Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI 28 Beaker glass Iwaki Pyrex,
Herma
Menampung media Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI
29 Pembakar spiritus - Menciptakan
kondisi aseptis
Lab.
Mikrobiologi
30 Plastik wrapper ClingWrap Merekatkan tepi
cawan dan tabung
Lab.
Mikrobiologi & Lab. Eko-Fisiologi LIPI 31 Aluminium foil KlinPak Sebagai tutup
wadah
Lab.
Mikrobiologi
bio.unsoed.ac.id
(3)
43
& Lab. Eko-Fisiologi LIPI
32 Pipet tetes - Meneteskan reagen Lab.
Mikrobiologi
33 Kapas - Penutup tabung
reaksi
Lab.
Mikrobiologi
34 Tissue - Membersihkan
kotoran
Lab.
Mikrobiologi
35 Kertas label - Penanda cawan
atau tabung
Lab.
Mikrobiologi 36 Camera digital Olympus Dokumentasi
kegiatan
Lab.
Mikrobiologi
No. Nama Bahan Spesifikasi Kegunaan
1 Koleksi kultur
Azospirillum spp.
- Isolat uji dan objek penelitian
2 Koleksi fungi patogen (R.solani, F.oxysporum,
Cercospora sp., &
Aspergillus sp.)
- Isolat uji antagonisme
3 Pasir Besi - Medium pertumbuhan jagung
4 Biji jagung Manis Hibrida
F1
Objek penelitian
5 Medium selektif Caceres Racikan Subkultur isolat Azospirillum
6 Medium Pikovskaya Racikan Medium pelarut fosfat
7 Medium Chrome azurol sulfate
Racikan Medium produksi siderofor
8 Medium Dworkin-Foster Medium uji ACC Deaminase
9 Medium Iron Free
Succinate
Medium uji estimasi siderofor
10 Medium Nutrient agar OXOID Medium untuk subkultur isolat 11 Medium Nutrient broth OXOID-Half
strength
Medium untuk subkultur isolat
12 Medium Potato Dextrose Agar
OXOID, DIFCO
Medium uji antagonisme
13 Larutan Hoagland Half strength Larutan fisiologis
14 Reagen Salkowski Racikan Reagen deteksi IAA
15 Reagen Chloromolybdic Acid
Racikan Reagen estimasi fosfat anorganik terlarut
16 Reagen Chlorostannous Acid
Racikan
17 Substrat L-triptofan 10.000 ppm Prekursor IAA
18 Substrat ACC 0,5 M Prekursor uji ACC Deaminase
19 Etil Asetat - Pelarut ekstraksi IAA
20 Methanol HPLC - Fase Gerak IAA
21 Ethanol Absolut - Membilas esktrak kering IAA
22 Asam Asetat Glasial 1 % Fase Gerak IAA
23 NaOCl 5,5% Sterilisasi permukaan jagung
24 Alkohol 70% Desinfeksi meja kerja dan
(4)
44
Sterilisasi permukaan jagung
25 HCl 1 N Melarutkan triptofan dan atur pH
medium
26 NaOH 2 N Menaikkan pH media
27 Akuades - Melarutkan bahan dan media
28 Spiritus - Bahan pembakar
(5)
45
Lampiran 2. Komposisi dan Pembuatan Medium Pertumbuhan A. Medium Nutrient Agar/Nutrient Broth
Komposisi :
Beef Extract 3 g
Peptone 5 g
Agar 15 g
Akuades 1000 ml
pH medium 7,0 ± 0,2
Cara Pembuatan :
Larutkan semua bahan dalam akuades, untuk medium Nutrient Agar ditambahkan dengan agar sebagai pemadat, atur pH medium hingga sesuai lalu dimasukkan dalam labu Erlenmeyer/botol Schott. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit. Untuk membuat medium Nutrient Broth 50%, komposisi yang dibutuhkan untuk 1000 ml medium adalah 1,5 g Beef Extract dan 2,5 g Peptone.
B. Medium Caceres (medium selektif Azospirillum spp.) Komposisi :
K2HPO4 0,5 g
MgSO4.7H2O 0,2 g
NaCl 0,1 g
Yeast Extract 0,5 g
FeCl3.6H2O 0,015 g
DL-Malic Acid 5 g
KOH 4,8 g
Congo Red 0,25% 15 ml
Agar 20 g
Akuades 1000 ml
pH medium 7,0 ± 0,2
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan ke dalam akuades kemudian ditambahkan dengan Congo Red Solution 0,25%, aduk hingga merata. atur pH medium hingga sesuai menggunakan NaOH/HCl lalu dimasukkan dalam labu Erlenmeyer/botol Schott. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
(6)
46
C. Medium Pikovskaya (medium selektif Mikroorganisme Pelarut Fosfat) Komposisi :
Glukosa 10 g
Ca3(PO4)2 5 g
(NH4)2SO4 0,5 g
NaCl 0,2 g
MgSO4.7H2O 0,1 g
KCl 0,2 g
Yeast Extract 0,5 g
MnSO4 0,001 g
FeSO4.7H2O 0,001 g
Agar 22 g
Akuades 1000 ml
pH medium 7,0 ± 0,2
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan ke dalam akuades kemudian ditambahkan dengan Ca3(PO4)2, aduk hingga merata. atur pH medium hingga sesuai menggunakan NaOH/HCl lalu dimasukkan dalam labu Erlenmeyer/botol Schott. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
D. Medium Potato Dextrose Agar
Komposisi :
Potato Extract 4 g
Dextrose 20 g
Agar 20 g
pH medium 5,6 ± 0,2
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan ke dalam akuades aduk hingga merata. atur pH medium hingga sesuai menggunakan NaOH/HCl lalu dimasukkan dalam labu Erlenmeyer/botol Schott. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
E. Medium Dworkin-Foster Salt
Komposisi :
Macroelement
KH2PO4 4 g
Na2HPO4 6 g
MgSO4.7H2O 0,2 g
(7)
47
Glukosa 2 g
Gluconic Acid 2 g
Citric Acid 2 g
Akuades 1000 ml
Microelement Solution Stock I (larutkan dalam 10 ml akuades) FeSO4.7H2O 100 mg
Akuades 10 ml
Microelement Solution Stock II (larutkan dalam 100 ml akuades)
H3BO3 10 mg
MnSO4.H2O 11,19 mg
ZnSO4.7H2O 124,6 mg CuSO4.5H2O 78,22 mg
MoO3 10 mg
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan macroelement secara berurutan (penambahan bahan hanya boleh dilakukan setelah bahan sebelumnya larut sempurna). Setelah seluruh bahan macroelement larut, tambahkan dengan masing-masing 0,1 ml microelement solution stock I dan II dalam akuades berisi macroelement tersebut. Atur ph hingga 6,8 ± 0,2 dengan NaOH/HCl. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
F. Medium Chrome Azurol Sulfate (medium selektif penghasil Siderofor)
Blue Dye :
Solution I
Larutkan 0,06 g Chrome Azurol S (Sigma-Aldrich) dalam 50 ml akuabides
Solution II
Larutkan 0,0027 g FeCL3.6H2O dalam 10 ml HCl 10 mM
Solution III
Larutkan 0,073 g HDTMA dalam 40 ml akuabides
Tambahkan 9 ml Solution II ke dalam Solution I, aduk hingga homogen. Secara perlahan masukkan Solution III sambil diaduk perlahan dan terbentuk larutan berwarna biru. Tuang pada wadah yang telah dideferasi dengan 6 M HCl, sterilisasi dengan autoklaf selama 20 menit pada suhu 121oC, 2 atm.
Mixture Solution :
Minimal Media 9 Salt Solution Stock
Larutkan 15 g KH2PO4, 25 g NaCl , dan 50 g NH4Cl dalam 500 ml Akuabides.
Glucose Stock
Larutkan 20 g Glukosa ke dalam 100 ml akuabides. Sterilisasi menggunakan milipore 0,2 µm, letakkan pada botol steril.
(8)
48
Casamino Acid Solution
Larutkan 5 g Casamino Acid dalam 45 ml akuabides kemudian diekstrak dengan 3%
8-hydroxyquinoline dalam Chloroform (v/v). Ekstrak air yang didapat kemudian disterilisasi menggunakan milipore 0,2 µm, letakkan pada botol steril.
Pembuatan CAS Agar
Larutkan 100 ml MM9 Salt pada 750 ml akaubides. Tambahkan 32,24 g PIPES secara perlahan sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer, tambahkan sedikit demi sedikit NaOH hingga PIPES larut sempurna atau hingga pH medium mencapai 6,8 kemudian ditambahkan 15 g Bacto Agar dan disterilisasi dengan autoklaf selama 20 menit. Setelah steril, biarkan hingga suhu turun (±50-60oC) lalu ditambahkan dengan 30 ml Casamino Acid Solution dan 10 ml Glucose Stock kemudian secara perlahan tambahkan 100 ml Blue Dye melalui tepi wadah sambil dihomogenkan menggunakan magnetic stirrer. Setelah homogen, medium dituang ke dalam cawan Petri steril.
G. Medium Succinate Iron Free
Komposisi :
K2HPO4 6 g
KH2PO4 3 g
MgSO4.7H2O 0,2 g
(NH4)2SO4 1 g
Succinic Acid 4 g pH medium 7,0 ± 0,2
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan ke dalam akuades aduk hingga merata. atur pH medium hingga sesuai menggunakan NaOH/HCl lalu dimasukkan dalam labu Erlenmeyer/botol Schott. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
H. Medium Fisiologis Hoagland
Komposisi :
Macroelement
CaNO3.4H2O 1,181 g
KNO3 0,506 g
MgSO4.7H2O 0,493 g
KH2PO4 0,136 g
Fe-EDTA solution 0,1 ml (0,03 g dalam 10 ml akuades)
Akuades 900 ml
Microelement Stock Solution (larutkan dalam 100 ml akuades)
H3BO3 0,286 g
MnSO4.7H2O 0,181 g
(9)
49 ZnSO4.7H2O 0,022 g
CuSO4.5H2O 0,008 g
H2MoO4.H2O 0,002 g
Cara Pembuatan :
Larutkan seluruh bahan macroelement secara berurutan (penambahan bahan hanya boleh dilakukan setelah bahan sebelumnya larut sempurna). Setelah seluruh bahan macroelement larut, tambahkan dengan masing-masing 10 ml microelement stock solution dan 0,1 ml Fe-EDTA solution. Sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC, 2 atm selama 20 menit.
(10)
50
Lampiran 3. Komposisi dan Pembuatan Reagent serta Prekursor Medium A. Reagen Salkowski
Solution A
Sebanyak 100 ml HClO4 35% ditambahkan dengan 100 ml akuades lalu dihomogenkan
Solution B
Sebanyak 1,35 g FeCl3.6H2O dilarutkan dalam 10 ml akuades (0,5 M FeCl3.6H2O).
Sebanyak 4 ml solution B dimasukkan ke dalam 200 ml solution A sambil dihomogenkan. Setelah homogen, reagen kemudian disimpan pada wadah gelap.
B. Reagen Chloromolybdic Acid
Sebanyak 15 g Ammonium Molybdate dilarutkan ke dalam 400 ml akuades hangat, aduk menggunakan magnetic stirrer. Setelah larut, sebanyak 342 ml 12 N HCl ditambahkan sambil diaduk perlahan menggunakan magnetic stirrer. Larutan kemudian didinginkan dan ditambahkan dengan akuades hingga 1000 ml. Reagen disimpan pada botol gelap.
C. Reagen Chlorostannous Acid
Sebanyak 2,5 g SnCl2.2H2O dilarutkan ke dalam 10 ml HCl pekat sambil dipanaskan di labu takar hingga larutan berwarna jernih kemudiang dinginkan. Setelah dingin, larutan ditambahkan dengan akuabides hingga volume mencapai 100 ml. Reagen disimpan pada botol gelas.
D. Substrat L-Tryptophan (prekursor IAA)
Sebanyak 200 mg L-Tryptophan (Merck) dilarutkan dalam 6 ml HCl 1 N. Setelah larut sempurna, tambahkan dengan 4 ml akuades kemudian diaduk hingga merata. Sebanyak 3 ml NaOH 2 N kemudian ditambahkan dan larutan diaduk hingga tercampur rata. Atur ph menjadi 7,0, kemudian ditambahkan dengan akuades hingga volume mencapai 20 ml. Sterilisasi menggunakan milipore 0,2 µm, letakkan pada botol steril dan disimpan pada kulkas.
E. Substrat 1-Aminocyclopropane 1-Carboxylic Acid (prekursor ACC Deaminase)
Sebanyak 100 mg 1-Aminocyclopropane 1-Carboxylic Acid (Sigma-Aldrich) dilarutkan dalam 1,987 ml akuades untuk membuat konsentrasi sebanyak 0,5 M ACC. milipore 0,2 µm, letakkan pada botol steril dan disimpan pada suhu -20oC.
(11)
51
Lampiran 4. Kurva Standar IAA (Kolorimetri dan HPLC) A. Kurva Standar IAA (Kolorimetri)
Sebanyak 0,001 g Indole 3-Acetic Acid dilarutkan dalam 10 ml Methanol sehingga didapatkan larutan stok 100 mg/L IAA. Seri pengenceran dibuat larutan induk dengan cara melarutkan stok ke dalam medium Nutrient Broth 50% (v/v) dengan ketentuan seperti berikut
mg/L 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
IAA (ml) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1
NB 50% (ml)
5 4,9 4,8 4,7 4,6 4,5 4,4 4,3 4,2 4,1 4 3,9
Sebanyak 0,5 ml larutan induk dipindahkan ke tabung reaksi kosong kemudian ditambahkan dengan reagen Salkowski sebanyak 1 ml kemudian divortex dan inkubasi pada ruang gelap selama 30 menit. Tiap seri pengenceran dibuat pengulangan dua kali (duplo). Setelah inkubasi, nilai absorbansi diukur pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 530 nm. Data nilai absorbansi dibuat regresi linier untuk mendapatkan persamaan kurva standar IAA.
B. Kurva Standar IAA HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Sebanyak 0,01 g Indole 3-Acetic Acid dilarutkan dalam 10 ml Methanol sehingga didapatkan larutan stok 1000 mg/L IAA. Seri pengenceran dibuat larutan induk dengan cara melarutkan stok ke dalam medium Methanol (v/v) dengan ketentuan seperti berikut
mg/L 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
IAA (ml) 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5
Methanol (ml) 5 4,95 4,9 4,85 4,8 4,75 4,7 4,65 4,6 4,55 4,5
Tiap seri pengenceran kemudian diambil sebanyak ±1 ml kemudian disaring menggunakan milipore PTFE 0,22 µm untuk menghilangkan kotoran. Sampel kemudian diinjeksi pada alat HPLC dan tunggu hingga terbentuk peak chromatogram dan catat luas areanya. Regresi linier dibuat berdasarkan luas area yang terbentuk.
(12)
52
Hasil pengukuran absorbansi Kurva Standar IAA (Kolorimetri)
mg/L abs1 abs2 Rataan
0 -0,0133 -0,0156 -0,01445 2 0,0162 0,0193 0,01775
4 0,0464 0,0504 0,0504
6 0,0934 0,0889 0,09115
8 0,1418 0,1392 0,1405
10 0,1611 0,178 0,178
12 0,2107 0,2281 0,2194
14 0,2485 0,262 0,25525
16 0,256 0,2991 0,2991
18 0,3126 0,332 0,332
20 0,365 0,374 0,3695
22 0,4159 0,4351 0,4159
Regresi Linier Kurva Standar IAA (Kolorimetri)
Berdasarkan regresi linier kurva standar IAA didapatkan persamaan :
y = 0,0197x – 0,021 Cara Perhitungan :
Abs. Sampel A = 0,567, berapa konsentrasi IAA ? y = 0,0197x - 0,021 ↔ 0,0197x = y + 0,021
0,0197x = 0,567 + 0,021 0,0197x = 0,588
x = 0,588/0,0197 x = 29,848
Jadi, konsentrasi IAA pada sampel A adalah 29,848 mg/L.
y = 0,0197x - 0,021 R² = 0,999
-0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
0 5 10 15 20 25
Nila
i A
bs
o
rba
ns
i
5
3
0
nm
Konsentrasi IAA (mg/l)
Kurva Standar IAA
Series1 Linear (Series1)
(13)
53
Hasil Pengukuran Luas Area Peak Chromatogram Standar IAA (HPLC)
mg/L Luas Peak Area
0 0
10 98409
20 248347
30 411483
40 498110
60 793498
80 1049086
90 1213242
100 1397929
Regresi Linier Kurva Standar IAA (HPLC)
Berdasarkan regresi linier kurva standar IAA didapatkan persamaan :
y = 13825x - 26048 Cara Perhitungan :
Luas Peak Area Sampel A = 42420, berapa konsentrasi IAA ? y = 13825x - 26048 ↔ 13825x = y + 26048
13825x = 42420 + 26048 13825x = 68468
x = 68468/13825 x = 4,952
Jadi, konsentrasi IAA pada sampel A adalah 4,952 mg/L.
y = 13825x - 26048 R² = 0,9975
-500000 0 500000 1000000 1500000
0 20 40 60 80 100 120
A
xi
s
Ti
tle
Axis Title
Standar IAA-HPLC
Series1 Linear (Series1)
(14)
54
Lampiran 5. Pengukuran IAA isolat Azospirillum spp. asal lahan pasir besi dengan metode Kolorimetri
Kode Isolat
Jam Pengamatan
0 jam 24 jam 48 jam
Rataan Abs
Kons. IAA (mg.L-1)
Rataan Abs
Kons.IAA (mg.L-1)
Rataan Abs.
Kons.IAA (mg.L-1)
HR154 0,0715 4,695 0,083 5,279 0,937 48,629
KR33 0,0804 5,147 0,818 42,589 0,7 36,599
HR92 0,0914 5,706 1,47275 75,825 1,89025 97,018
HR124 0,1051 6,401 0,36775 19,734 0,53075 28,008
HR141 0,0968 5,980 1,09625 56,713 0,952 49,391
HR152 0,1073 6,513 1,015 52,589 0,8515 44,289
Keterangan : Abs = Absorbansi; Kons = Konsentrasi Cara Perhitungan :
Abs. Sampel A = 0,567, berapa konsentrasi IAA ? y = 0,0197x - 0,021 ↔ 0,0197x = y + 0,021
0,0197x = 0,567 + 0,021 0,0197x = 0,588
x = 0,588/0,0197 x = 29,848
Jadi, konsentrasi IAA pada sampel A adalah 29,848 mg/L.
(15)
55
Lampiran 6. Pengukuran IAA isolat Azospirillum spp. asal lahan pasir besi dengan metode HPLC
Kode Isolat
Jam pengamatan
24 jam 48 jam
Luas Peak Area Jumlah IAA (mg.L-1)
Luas Peak Area Jumlah IAA (mg.L-1)
HR154 36649 4,535045 72680 7,141266
KR33 57444 6,039204 42420 4,952477
HR92 407168 31,3357 584574 44,16796
HR124 173539 14,43667 239456 19,20463
HR141 114991 10,20174 112839 10,04608
HR152 47414 5,313707 112446 10,01765
Cara Perhitungan :
Luas Peak Area Sampel A = 42420, berapa konsentrasi IAA ? y = 13825x - 26048 ↔ 13825x = y + 26048
13825x = 42420 + 26048 13825x = 68468
x = 68468/13825 x = 4,952
Jadi, konsentrasi IAA pada sampel A adalah 4,952 mg/L.
(16)
56
Lampiran 7. Kurva Standar Fosfat Anorganik Terlarut (KH2PO4)
Sebanyak 0,2199 g KH2PO4 dikeringkan pada oven bersuhu 60oC selama satu jam kemudian didinginkan di dalam dessicator hingga bobot konstan lalu dilarutkan dalam 500 ml akuades sehingga didapatkan larutan induk fosfat 100 mg/L. Larutan induk kemudian dibuat seri pengenceran dengan cara memasukkan sejumlah variasi volume larutan induk ke dalam labu takar 50 ml sehingga didapatkan konsentrasi seri pengenceran seperti berikut
mg/L 0 5 10 15 20 30 35 40 45
Volume Lar.Induk 0 2,5 5 7,5 10 15 17,5 20 22,5
Larutan induk yang telah dimasukkan dalam labu takar kemudian ditambahkan dengan 10 ml reagen Chloromolybdic Acid kemudian dikocok hingga homogen. Setelah homogen kemudian ditambahkan dengan 100 µl reagen Chlorostannous Acid dan dikocok hingga tercampur rata lalu ditambahkan akuades hingga 50 ml. Larutan akan berubah warna menjadi biru dan tunggu hingga 10 menit kemudian diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm. Data absorbansi kemudian dibuat analisis regresi liniernya sehingga didapatkan persamaan kurva standar fosfat.
(17)
57
Hasil pengukuran nilai absorbansi kurva standar Fosfat Anorganik Terlarut mg/L Abs1 Abs2 Rataan
0 0,0059 0,006 0,00595
5 0,0398 0,04 0,0399
10 0,0613 0,0623 0,0618
15 0,0895 0,0901 0,0898
25 0,1356 0,1456 0,1406
30 0,1612 0,1723 0,16675
35 0,1865 0,1867 0,1866
40 0,2132 0,2201 0,21665
45 0,2358 0,241 0,2384
Regresi Linier Kurva Standar Fosfat Anorganik Terlarut (Spektrofotometri)
Berdasarkan regresi linier kurva standar fosfat anorganik terlarut didapatkan persamaan :
y = 0,005x + 0,0109 Cara Perhitungan :
Abs. Sampel A = 0,425, berapa konsentrasi fosfat anorganik terlarut dengan faktor pengenceran 50x ?
y = 0,005x + 0,0109 ↔ 0,005x = y - 0,0109 0,005x = 0,425 – 0,0109 0,005x = 0,406
x = 0,406/0,005 x = 81,2
x = 81,2 x 50 = 4060
Jadi, konsentrasi fosfat anorganik terlarut pada sampel A adalah 4060 mg/L. y = 0,005x + 0,0109
R² = 0,999
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25
0 10 20 30 40 50
N
il
ai
A
b
sor
b
an
si
600
n
m
Konsentrasi Fosfat (mg/L)
Standar Fosfat Anorganik Terlarut
Series1 Linear (Series1)
(18)
58
Lampiran 8. Analisis Perkecambahan Biji Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 70 80 90 80 10
HR154 90 60 60 70 17,32051
KR33 80 60 30 56,66667 25,16611
HR92 100 80 80 86,66667 11,54701
HR141 100 100 100 100 0
HR124 80 60 50 63,33333 15,27525
HR152 80 90 80 83,33333 5,773503
ANOVA : Faktor Tunggal
Groups Count Sum Average Variance
KONTROL 3 240 80 100
HR154 3 210 70 300
KR33 3 170 56,66667 633,3333
HR92 3 260 86,66667 133,3333
HR141 3 300 100 0
HR124 3 190 63,33333 233,3333
HR152 3 250 83,33333 33,33333
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 3961,9048 6 660,3175 3,224806** 2,847726
Galat 2866,6667 14 204,7619
Total 6828,5714 20
UJI BEDA NYATA TERKECIL
Tabel Korelasi
KONTROL HR154 KR33 HR92 HR141 HR124 HR152
KONTROL 1
HR154 10 1
KR33 23,33333 13,33333 1
HR92 6,666667 16,66667 30 1
HR141 20 30 43,33333 13,33333 1
HR124 16,66667 6,666667 6,666667 23,33333 36,66667 1
(19)
59
Lampiran 9. Analisis Seedling Bioassay (15 hari setelah tanam) A. Tinggi Tanaman
Perlakuan Ulangan Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 8,7 7,3 6,2 7,400 1,253
HR154 6,8 9,8 10,5 9,033 1,966
KR33 8,5 8,3 9,8 8,867 0,814
HR92 7,2 8,4 4,6 6,733 1,943
HR141 9,5 9,1 8,9 9,167 0,306
HR124 8,7 9,5 7,8 8,667 0,850
HR152 7,6 8,2 8,4 8,067 0,416
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 22,2 7,4 1,57
HR154 3 27,1 9,033333 3,863333
KR33 3 26,6 8,866667 0,663333
HR92 3 20,2 6,733333 3,773333
HR141 3 27,5 9,166667 0,093333
HR124 3 26 8,666667 0,723333
HR152 3 24,2 8,066667 0,173333
ANOVA
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 15,1781 6 2,529683 1,63055ns 2,847726
Galat 21,72 14 1,551429
Total 36,8981 20
(20)
60
B. Panjang Akar Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 6,3 3,4 2,3 4 2,0663978
HR154 3,8 5,5 6,5 5,266667 1,3650397
KR33 4,9 5,2 5,6 5,233333 0,3511885
HR92 5,2 7,2 3,8 5,4 1,7088007
HR141 8,8 5,2 4,8 6,266667 2,2030282
HR124 10,4 6,7 7,4 8,166667 1,9655364
HR152 5,6 5,4 5,2 5,4 0,2
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 12 4 4,27
HR154 3 15,8 5,266667 1,863333
KR33 3 15,7 5,233333 0,123333
HR92 3 16,2 5,4 2,92
HR141 3 18,8 6,266667 4,853333
HR124 3 24,5 8,166667 3,863333
HR152 3 16,2 5,4 0,04
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 29,63143 6 4,938571 1,927695ns 2,847726
Galat 35,86667 14 2,561905
Total 65,4981 20
(21)
61
C. Bobot Basah Tanaman
Perlakuan Ulangan Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 0,23 0,36 0,31 0,300 0,066
HR154 0,62 0,59 0,6 0,603 0,015
KR33 0,42 0,28 0,52 0,407 0,121
HR92 0,36 0,38 0,41 0,383 0,025
HR141 0,45 0,4 0,42 0,423 0,025
HR124 0,52 0,46 0,48 0,487 0,031
HR152 0,36 0,37 0,29 0,340 0,044
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 0,9 0,3 0,0043
HR154 3 1,81 0,603333 0,000233
KR33 3 1,22 0,406667 0,014533
HR92 3 1,15 0,383333 0,000633
HR141 3 1,27 0,423333 0,000633
HR124 3 1,46 0,486667 0,000933
HR152 3 1,02 0,34 0,0019
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 0,181162 6 0,030194 9,123261** 2,847726
Galat 0,046333 14 0,00331
Total 0,227495 20
UJI BEDA NYATA TERKECIL Tabel Korelasi
KONTROL HR154 KR33 HR92 HR141 HR124 HR152
KONTROL 1
HR154 0,303333 1
KR33 0,106667 0,196667 1
HR92 0,083333 0,22 0,023333 1
HR141 0,123333 0,18 0,016667 0,04 1
HR124 0,186667 0,116667 0,08 0,103333 0,063333 1
HR152 0,04 0,263333 0,066667 0,043333 0,083333 0,146667 1
(22)
62
D. Bobot Kering Tanaman Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 0,04 0,06 0,05 0,050 0,010
HR154 0,07 0,06 0,06 0,063 0,006
KR33 0,05 0,03 0,05 0,043 0,012
HR92 0,03 0,04 0,04 0,037 0,006
HR141 0,04 0,05 0,05 0,047 0,006
HR124 0,06 0,06 0,06 0,060 0,000
HR152 0,04 0,05 0,04 0,043 0,006
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 0,15 0,05 1E-04
HR154 3 0,19 0,063333 3,33E-05
KR33 3 0,13 0,043333 0,000133
HR92 3 0,11 0,036667 3,33E-05
HR141 3 0,14 0,046667 3,33E-05
HR124 3 0,18 0,06 0
HR152 3 0,13 0,043333 3,33E-05
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 0,001648 6 0,000275 5,242424** 2,847726
Galat 0,000733 14 5,24E-05
Total 0,002381 20
UJI BEDA NYATA TERKECIL Tabel Korelasi
KONTROL HR154 KR33 HR92 HR141 HR124 HR152
KONTROL 1
HR154 0,076009 1
KR33 0,056009 0,056009 1
HR92 0,049342 0,049342 0,049342 1
HR141 0,059342 0,059342 0,059342 0,059342 1
HR124 0,072676 0,072676 0,072676 0,072676 0,072676 1
HR152 0,056009 0,056009 0,056009 0,056009 0,056009 0,016667 1
(23)
63
E. Kandungan Klorofil Daun Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 27,3 24,2 31,4 27,633 3,612
HR154 26 19 30,8 25,267 5,934
KR33 23,9 26,5 28,5 26,300 2,307
HR92 22,2 28 27,4 25,867 3,190
HR141 29,1 19,6 22,5 23,733 4,869
HR124 23,9 26,8 28,9 26,533 2,511
HR152 22,3 22,7 20,2 21,733 1,343
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 82,9 27,63333 13,04333
HR154 3 75,8 25,26667 35,21333
KR33 3 78,9 26,3 5,32
HR92 3 77,6 25,86667 10,17333
HR141 3 71,2 23,73333 23,70333
HR124 3 79,6 26,53333 6,303333
HR152 3 65,2 21,73333 1,803333
ANOVA
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 70,38952 6 11,73159 0,859367ns 2,847726
Galat 191,12 14 13,65143
Total 261,5095 20
(24)
Lampiran 10. Dokumentasi Penelitian
Gambar 1. Uji Kemampuan Pelarutan Fosfat
Gambar 2. Uji Kemampuan Produksi IAA
Gambar 3. Pengukuran Estimasi Siderofor Unit
Gambar 4. Uji Kemampuan ACC Deaminase
Gambar 5. Uji Antagonisme terhadap
F.oxysporum
Gambar 6. Uji Perkecambahan Biji Jagung setelah 7 hari inkubasi
Gambar 7. Tanaman jagung 15 hari setelah tanam
(1)
59
Lampiran 9. Analisis Seedling Bioassay (15 hari setelah tanam)
A.
Tinggi Tanaman
Perlakuan Ulangan Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 8,7 7,3 6,2 7,400 1,253
HR154 6,8 9,8 10,5 9,033 1,966
KR33 8,5 8,3 9,8 8,867 0,814
HR92 7,2 8,4 4,6 6,733 1,943
HR141 9,5 9,1 8,9 9,167 0,306
HR124 8,7 9,5 7,8 8,667 0,850
HR152 7,6 8,2 8,4 8,067 0,416 ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 22,2 7,4 1,57
HR154 3 27,1 9,033333 3,863333 KR33 3 26,6 8,866667 0,663333 HR92 3 20,2 6,733333 3,773333 HR141 3 27,5 9,166667 0,093333 HR124 3 26 8,666667 0,723333 HR152 3 24,2 8,066667 0,173333
ANOVA
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 15,1781 6 2,529683 1,63055ns 2,847726 Galat 21,72 14 1,551429
Total 36,8981 20
(2)
60
B.
Panjang Akar
Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 6,3 3,4 2,3 4 2,0663978
HR154 3,8 5,5 6,5 5,266667 1,3650397
KR33 4,9 5,2 5,6 5,233333 0,3511885
HR92 5,2 7,2 3,8 5,4 1,7088007
HR141 8,8 5,2 4,8 6,266667 2,2030282
HR124 10,4 6,7 7,4 8,166667 1,9655364
HR152 5,6 5,4 5,2 5,4 0,2
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 12 4 4,27
HR154 3 15,8 5,266667 1,863333 KR33 3 15,7 5,233333 0,123333
HR92 3 16,2 5,4 2,92
HR141 3 18,8 6,266667 4,853333 HR124 3 24,5 8,166667 3,863333
HR152 3 16,2 5,4 0,04
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 29,63143 6 4,938571 1,927695ns 2,847726
Galat 35,86667 14 2,561905
Total 65,4981 20
(3)
61
C.
Bobot Basah Tanaman
Perlakuan Ulangan Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 0,23 0,36 0,31 0,300 0,066
HR154 0,62 0,59 0,6 0,603 0,015
KR33 0,42 0,28 0,52 0,407 0,121
HR92 0,36 0,38 0,41 0,383 0,025
HR141 0,45 0,4 0,42 0,423 0,025
HR124 0,52 0,46 0,48 0,487 0,031
HR152 0,36 0,37 0,29 0,340 0,044
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 0,9 0,3 0,0043
HR154 3 1,81 0,603333 0,000233
KR33 3 1,22 0,406667 0,014533
HR92 3 1,15 0,383333 0,000633
HR141 3 1,27 0,423333 0,000633
HR124 3 1,46 0,486667 0,000933
HR152 3 1,02 0,34 0,0019
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 0,181162 6 0,030194 9,123261** 2,847726 Galat 0,046333 14 0,00331
Total 0,227495 20
UJI BEDA NYATA TERKECIL Tabel Korelasi
KONTROL HR154 KR33 HR92 HR141 HR124 HR152
KONTROL 1
HR154 0,303333 1
KR33 0,106667 0,196667 1
HR92 0,083333 0,22 0,023333 1
HR141 0,123333 0,18 0,016667 0,04 1
HR124 0,186667 0,116667 0,08 0,103333 0,063333 1
HR152 0,04 0,263333 0,066667 0,043333 0,083333 0,146667 1
(4)
62
D.
Bobot Kering Tanaman
Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 0,04 0,06 0,05 0,050 0,010
HR154 0,07 0,06 0,06 0,063 0,006
KR33 0,05 0,03 0,05 0,043 0,012
HR92 0,03 0,04 0,04 0,037 0,006
HR141 0,04 0,05 0,05 0,047 0,006
HR124 0,06 0,06 0,06 0,060 0,000
HR152 0,04 0,05 0,04 0,043 0,006
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 0,15 0,05 1E-04
HR154 3 0,19 0,063333 3,33E-05 KR33 3 0,13 0,043333 0,000133 HR92 3 0,11 0,036667 3,33E-05 HR141 3 0,14 0,046667 3,33E-05
HR124 3 0,18 0,06 0
HR152 3 0,13 0,043333 3,33E-05
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 0,001648 6 0,000275 5,242424** 2,847726 Galat 0,000733 14 5,24E-05
Total 0,002381 20
UJI BEDA NYATA TERKECIL
Tabel Korelasi
KONTROL HR154 KR33 HR92 HR141 HR124 HR152
KONTROL 1
HR154 0,076009 1
KR33 0,056009 0,056009 1
HR92 0,049342 0,049342 0,049342 1
HR141 0,059342 0,059342 0,059342 0,059342 1
HR124 0,072676 0,072676 0,072676 0,072676 0,072676 1
HR152 0,056009 0,056009 0,056009 0,056009 0,056009 0,016667 1
(5)
63
E.
Kandungan Klorofil Daun
Perlakuan
Ulangan
Rataan Deviasi
1 2 3
KONTROL 27,3 24,2 31,4 27,633 3,612
HR154 26 19 30,8 25,267 5,934
KR33 23,9 26,5 28,5 26,300 2,307
HR92 22,2 28 27,4 25,867 3,190
HR141 29,1 19,6 22,5 23,733 4,869
HR124 23,9 26,8 28,9 26,533 2,511
HR152 22,3 22,7 20,2 21,733 1,343
ANOVA : Faktor Tunggal
Perlakuan Jumlah Jumlah Rataan Variansi
KONTROL 3 82,9 27,63333 13,04333 HR154 3 75,8 25,26667 35,21333 KR33 3 78,9 26,3 5,32 HR92 3 77,6 25,86667 10,17333 HR141 3 71,2 23,73333 23,70333 HR124 3 79,6 26,53333 6,303333 HR152 3 65,2 21,73333 1,803333 ANOVA
Sumber Variasi JK DB KT Fhitung F tabel
Perlakuan 70,38952 6 11,73159 0,859367ns 2,847726 Galat 191,12 14 13,65143
Total 261,5095 20
(6)