Analisis Fosfor pada Cacing Tanah (Megascolex sp. dan Fridericia sp.) Secara Spektrofotometri Sinar Tampak

  

LAMPIRAN

Lampiran 1. Gambar Sampel

  Gambar 1. Cacing Tanah Megascolex sp.

  Gambar 2. Cacing Tanah Fridericia sp.

  Lampiran 2. Hasil Analisis Kualitatif Mineral Fosfor Gambar 3. Hasil Analisis Kualitatif dengan Larutan Ammonium Molibdat 4%

  Gambar 4. Hasil Analisis Kualitatif dengan Larutan BaCl

  2

  Lampiran 3. Bagan Alir Proses Persiapan Sampel

  Cacing Tanah Ditimbang ± 750 gram Dibersihkan dari kotoran dan tanah dengan menggunakan air mengalir Dibilas dengan akuabides Dioven pada suhu 100ºC selama 7 jam Ditimbang beratnya

  Sampel

  Lampiran 4. Bagan Alir Proses Destrusi Basah

  Sampel Ditimbang sebanyak ± 5 gram.

  Dimasukkan ke dalam kurs porselein. Ditambahkan 5 ml asam nitrat 65% b/v. Didiamkan selama 24 jam. Dipanaskan di atas hotplate pada suhu ±100ºC Ditambahkan asam nitrat 65% b/v secara perlahan-lahan sebanyak 15 ml, waktu pemanasan 6 jam

  Hasil Destruksi Basah

  Lampiran 5.Bagan Alir Pembuatan Larutan Sampel

  Hasil Destruksi Basah Dipindahkan secara kuantitatif ke dalam labu tentukur 25 ml.

  Ditambahkan akuabides hingga garis tanda. Disaring dengan kertas saring Whatmann No.42 dengan membuang 2 ml filtrat pertama. Ditampung filtrat yang diperoleh. Filtrat

  Dipindahkan ke dalam botol Larutan Sampel

  Lampiran 6. Bagan Alir Analisis Kuantitatif Cacing Tanah Megascolex sp.

  Larutan Sampel Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml.

  Dicukupkan volume hingga garis tanda dengan akuabides. Dipipet 10 ml dari labu tersebut. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml. Dicukupkan volume hingga garis tanda dengan menggunakan akuabides. Dipipet 1 ml larutan tersebut, dimasukkan ke dalam erlenmeyer. Ditambahkan 5 ml akuabides. Diukur serapan pada panjang gelombang 705 nm pada rentang kerja, yaitu pada menit ke-20.

  Hasil

  Lampiran 7. Bagan Alir Analisis Kuantitatif Cacing Tanah Fridericia sp.

  Larutan Sampel Dipipet 1 ml, dimasukkan ke dalam erlenmeyer.

  Ditambahkan 5 ml akuabides. Ditambahkan 1 ml larutan pengembang warna.

  Diukur serapan pada panjang gelombang 705 nm pada rentang kerja, yaitu pada menit ke-20.

  Hasil

  Lampiran 8. Perhitungan Konsentrasi Larutan Induk Baku KH PO

  2

  4

  mg KH PO × BA P

  2

  4 Konsentrasi Larutan Induk Baku KH PO =

  2

  

4

V (ml) × BM KH PO

  2

  4

  219,5 mg × 31 = 500 ml × 136 = 0,1000 mg/ml = 100

  μg/ml

  Lampiran 9. Data Penentuan Waktu Kerja pada Panjang Gelombang 705 nm 0,491 0,49 0,489 0,488 0,487 n

  0,486 apa er

  0,485 S

  0,484 0,483 0,482

  1

  6

  11

  16

  21

  26

  31

  36

  41

  46

  51

  56

  61 Waktu

  No. Menit ke- Serapan

  1 1 0,485

  2 2 0,490

  3 3 0,489

  4 4 0,490

  5 5 0,490

  6 6 0,490

  7 7 0,490

  8 8 0,489

  9 9 0,489

  10 10 0,488

  11 11 0,488

  12 12 0,488

  13 13 0,488

  14 14 0,487

  15 15 0,487

  31 31 0,487

  44 44 0,487

  43 43 0,487

  42 42 0,487

  41 41 0,487

  40 40 0,487

  39 39 0,487

  38 38 0,487

  37 37 0,487

  36 36 0,487

  35 35 0,487

  34 34 0,487

  33 33 0,487

  32 32 0,487

  30 30 0,487

  16 16 0,488

  29 29 0,487

  28 28 0,487

  27 27 0,487

  26 26 0,487

  25 25 0,487

  24 24 0,487

  23 23 0,487

  22 22 0,487

  21 21 0,487

  20 20 0,487

  19 19 0,488

  18 18 0,488

  17 17 0,488

  45 45 0,487

  46 46 0,487

  57 57 0,488

  Serapan (Y)

  No. Konsentrasi (X)

  Sinar Tampak, Perhitungan Persamaan Garis Regresi dan Koefisien Korelasi

  

Lampiran 10. Data Kalibrasi Fosfor dengan Menggunakan Spekteofotometer

  61 61 0,488 Keterangan: Serapan kompleks stabil pada menit ke-20 hinga ke-53.

  60 60 0,488

  59 59 0,487

  58 58 0,487

  56 56 0,487

  47 47 0,487

  55 55 0,487

  54 54 0,488

  53 53 0,487

  52 52 0,487

  51 51 0,487

  50 50 0,487

  49 49 0,487

  48 48 0,487

  1 2 0,2857 0,161 3 0,5714 0,298 4 0,8571 0,437 5 1,1429 0,590 6 1,4286 0,727

  2

  2 Konsentrasi Serapan

  XY

  X Y (X) (Y)

  0,2857 0,161 0,0460 0,0816 0,0259 0,5714 0,298 0,1703 0,3265 0,0888 0,8571 0,437 0,3746 0,7364 0,1910 1,1429 0,590 0,6743 1.3062 0,3481 1,4286 0,727 1,0386 2,0409 0,5285

  2

  2

  = = ∑X = 4,2857 ∑Y = 2,213 ∑XY = 2,3038 ∑ X ∑ Y

  X � = 0,7143 � = 0,3688 Y 4,4916 1,1823 (

  ∑XY) − (∑X)(∑Y)/n a =

  2

  2

  ( ) /n ∑X − (∑X)

  (2,3038) − (4,2857)(2,213)/6 a =

  2

  (4,4916) /6 − (4,2857)

  0,7231 a = 1,4304 a = 0,5055 b = y

  � − ax� b = 0,3688 − (0,5055)(0,7143) b = 0,0077

  Persamaan Regresi y = ax + b y = 0,5055x + 0,0077

  ( ∑XY) − (∑X)(∑Y)/n r =

  2

  2

  ( (

  2 ∑X) 2 ∑Y)

  ) ) ��(∑X − � �(∑Y − � n n r = (2,3038)

  − (4,2857)(2,213)/6 ��(4,4916) −

  (4,2857)

  2

  6 � �(1,1823) −

  (2,2130)

  2

  6 � r =

  0,7231 0,7236 r = 0,9993

  Lampiran 11. Hasil Analisis Kadar Fosfor pada Sampel A.

  Cacing Tanah Megascolex sp.

  No. Berat (g) Serapan Konsentrasi ( μg/ml) Kadar (

  μg/g) 1. 5,3491 0,290 0,5585 228,3971 2. 5,3095 0,288 0,5545 228,4525 3. 5,1143 0,277 0,5327 227,8477 4. 5,0879 0,275 0,5288 227,3531 5. 5,3252 0,289 0,5565 228,6006 6. 6,0863 0,329 0,6356 228,4434 B.

  Cacing Tanah Fridericia sp.

  No. Berat (g) Serapan Konsentrasi ( μg/ml) Kadar (

  μg/g) 1. 5,1321 0,498 0,6090 33,0727 2. 5,1668 0,530 0,6065 34,9946 3. 5,2183 0,510 0,5924 33,3246 4. 4,9845 0,491 0,5898 33,5676 5. 5,5247 0,548 0,6078 33,8552 6. 5,2802 0,518 0,6589 33,4575

  Lampiran 12. Contoh Perhitungan Kadar Fosfor pada Sampel 1.

Contoh Perhitungan Kadar Fosfor pada Megascolex sp

  0,290 = 0,5055x + 0,0077 x = 0,5585 µg/ml Kadar =

  Berat sampel yang ditimbang : 5,1321 g Serapan (Y) : 0,498 Persamaan Regresi : y = 0,5055x + 0,0077

  W = Berat sampel (g) = Faktor pengenceran

  P

  V = Volume (ml) F

  W Keterangan: C = Konsentrasi larutan sampel (µg/ml)

  P

  C × V × F

  0,498 = 0,5055x + 0,0077 x = 0,9699 µg/ml Kadar =

  = 228,3971 µg/g Maka kadar fosfor dalam sampel adalah 228,3971 µg/g.

  C × V × F

  Berat sampel yang ditimbang : 5,3491 g Serapan (Y) : 0,290 Persamaan Regresi : y = 0,5055x + 0,0077

  0,5585 μg/ml × 25 ml × 5 × 2,5 × 7

  W = Berat sampel (g) Kadar =

  P

  V = Volume (ml) F

  W Keterangan: C = Konsentrasi larutan sampel (µg/ml)

  P

  5,3491 g = Faktor pengenceran Kadar = 0,9699

  μg/ml × 25 ml × 7 5,1321 g

  1,1618

  −0,6393 0,6797/

  = �

  hitung 1

  � t

  SD/ √6

  (x − x�)

  = �

  hitung

  = α/2, dk = 4,0321 t

  tabel

  = 0,4820 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; dk = 5, maka t

  6 − 1

  SD = �

  = 33,0727 µg/g Maka kadar fosfor dalam sampel adalah 33,0727 µg/g.

  n − 1

  2

  (x − x�)

  = 1,1618 SD = �∑

  2

  ∑(X − X�)

  X � = 228,1824

  ∑X = 1369,0944

  228,3971 0,2147 0,0461 228,4525 0,2701 0,0730 227,8477 -0,3347 0,1120 227,3531 -0,8293 0,6877 228,6006 0,4182 0,1749 228,4434 0,2160 0,0681

  2

  (X − X�)

  X X − X�

  Lampiran 13. Perhitungan Statistik Kadar Fosfor dalam Sampel 1.Cacing Tanah Megascolex sp.

  √6 � = 2,3038

  1,2826 t =

  hitung 2 � � = 4,6210

  0,6797/ √6

  −0,3874 t =

  hitung 3

  � � = 1,3960 0,6797/

  √6 −0,1444 t =

  hitung 4 � � = 0,5204

  0,6797/ √6

  0,1432 t =

  hitung 5 � � = 0,5128

  0,6797/ √6

  −0,2542 t =

  hitung 6 � � = 0,9160

  0,6797/ √6

  Dari hasil perhitungan di atas terdapat t yang lebih besar dari t , yaitu

  hitung tabel

  t hitung2 , maka data tersebut tidak diterima. Sehingga dilakukan perhitungan ulang tanpa mengikutsertakan data tersebut.

  2 X

  X (X − X� − X�)

  228,3971 0,0488 0,0024 228,4525 0,1042 0,0109 227,8477 -0.5006 0,2506 228,6006 0,2523 0,0637 228,4434 0,0951 0,0090

  2

  ∑X = 1141,7413 ∑( − �) = 0,3366

  � = 228,3483

  2

  (x − x�)

  SD = �∑ n

  − 1

  0,3366 SD = = 0,2901

  �

  5 − 1

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; dk = 4, maka t tabel = α/2, dk = 4,6401 (x

  − x�) t =

  hitung � �

  SD/ √6

  −0,3828 t =

  hitung 1 � � = 3,2358

  0,2898/ √5

  −0,1309 t =

  hitung 2 � � = 1,1060

  0,2898/ √5

  0,1121 t =

  hitung 3 � � = 0,9476

  0,2898/ √5

  0,3997 t =

  hitung 4 � � = 3,3787

  0,2898/ √5

  0,0020 t =

  hitung 5 � � = 0,0169

  0,2898/ √5

  Dari hasil perhitungan di atas diperoleh semua t hitung < t tabel , maka semua data diterima.

  Kadar fosfor pada cacing tanah Megascolex sp. adalah × SD/

  μ = x� ± (t ( √n

  α/2,dk )

  μ = 228,3483 ± (4,6401 × 0,2901/√5) μ = (228,3483 ± 0,6020)μg/g

  2.Cacing Tanah Megascolex sp.

  2 X

  X (X − X� − X�)

  33,0727 -0,6393 0,4087 34,9946 1,2826 1,6451 33,3246 -0,3874 0,1501 33,5676 -0,1444 0,0290 33,8552 0,1432 0,0205 33,4575 -0,2545 0,0648

  2

  ∑X = 202,2722 ∑(X − X�)

  X � = 33,7120 = 2,3101

  2

  (x − x�)

  SD = �∑ n − 1

  2,3101 SD = = 0,6797

  �

  6 − 1

  tabel

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; dk = 5, maka t = α/2, dk = 4,0321 (x

  − x�) t =

  hitung � �

  SD/ √6

  0,2147 t =

  hitung 1 � � = 1,0910

  0,4280/ √6

  0,2701 t =

  hitung 2 � � = 1,3725

  0,4280/ √6

  −0,3347 t =

  hitung 3 � � = 1,7007

  0,4280/ √6

  −0,8293 t =

  hitung 4 � � = 4,2140

  0,4280/ √6

  0,4180 t =

  hitung 5 � � = 2,1250

  0,4280/ √6

  0,2610 t =

  hitung 6

  � � = 1,3262 0,4280/

  √6 Dari hasil perhitungan di atas terdapat t hitung yang lebih besar dari t tabel , yaitu t hitung 4 , maka data tersebut tidak diterima. Sehingga dilakukan perhitungan ulang tanpa mengikutsertakan data tersebut.

  2 X

  X (X − X� − X�)

  33,0727 -0,3828 0,1465 33,3246 -0,1309 0,0171 33,5676 0,1121 0,0126 33,8552 0,3997 0,1598

  −6

  33,4575 0,0020 4 × 10

  2

  ∑X = 167,0727 = 0,3360 ∑(X − X�)

  � = 33,4555

  X

  2

  (x − x�)

  SD = �∑ n − 1

  0,3360 SD = = 0,2898

  �

  5 − 1

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; dk = 4, maka t tabel = α/2, dk = 4,6401

  (x − x�) t =

  hitung

  � � SD/

  √6 0,0488 t =

  hitung 1 � � = 0,3763

  0,2901/ √5

  0,1042 t =

  hitung 2 � � = 0,8034

  0,2901/ √5

  −0,5006 t =

  hitung 3 � � = 3,8597

  0,2901/ √5

  0,2523 t =

  hitung 4

  � � = 1,9453 0,2901/

  √5 0,0951 t =

  hitung 5

  � � = 0,7332 0,2901/

  √5 Dari hasil perhitungan di atas diperoleh semua t < t , maka semua data

  hitung tabel diterima.

  Kadar fosfor pada cacing tanah Fridericia sp. adalah × SD/

  μ = x� ± (t (

  α/2,dk ) √n)

  μ = 33,4555 ± (4,6401 × 0,2898/√5) μ = (33,4555 ± 0,6014) μg/g

  Lampiran 14. Pengujjian Beda Nilai Rata-rata Kadar Fosfor pada Sampel No. Cacing Tanah Megascolex sp. Cacing Tanah Fridericia sp.

  1. X

  1 = 228,3483

  X

  2 = 33,4555

  2. S

  1 = 0,2901 S 2 = 0,2898

  Dilakukan uji F dengan taraf kepercayaan 99% untuk mengetahui apakah variasi kedua populasi sama ( = ) atau berbeda ( ).

  

1 ≠

  1 H : ( = )

  σ σ

  1 H : ( ) 1 σ ≠ σ

  1 Nilai kritis F yang diperoeh dari tabel (F (5,5)) adalah 14,34

0,01/2 Daerah kritis penolakan hanya jika F ≥ 14,34

  2 S

  1 F = o

  2 S

  2

  2

  (0,2901) F = = 1,0021

  o

  2

  (0,2898) Dari hasil ini diketahui bahwa H diterima dan H

  1 ditolak, maka dapat

  disimpulkan ( = ), simpangan bakunya adalah:

  1

  2

  2

• (n (n

  1

  1

  2

  2

  − 1)S − 1)S S = �

  p

  n +n

  1

  2

  − 2

  2

  2

• (5 (5

  − 1)(0,2901) − 1)(0,2898) S =

  = 0,2900 �

  p

  5 + 5 − 2

  Kemudian dilanjutkan dengan uji beda rata-rata menggunakan distribusi t dengan menggunakan taraf kepercayaan 99% denga 0,01/2 = 3,3554 untuk n nilai α = 1%, t df = 5+5-2 = 8.

  Daerah kritis penerimaan: -3,3554 ≤ t ≤ 3,3554. Daerah kritis penolakan: t < -3,3554 dan t > 3,3554.

  �

  X

  1

  2

  − X� t =

  o

  1

  1 S �

• n n

  1

  2

  228,3483 − 33,4555 t =

  o

  0,2900 �1/5 + 1/5

  194,8928 t = = 1062,67

  o

  0,1834 Karena t o = 1062,67 > 3,3554 maka hipotesa ditolak. Berarti terdapat perbedaan signifikan rata-rata kadar fosfor pada Megascolex sp. Dan Fridericia sp.

  Lampiran 15. Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

  y = 0,5055x + 0,0077 Slope = 0,5055

  2 −3 −3

  Konsentrasi Serapan Y Y (× 10 ) [Y (× 10 )]

  i − Y i − Y i

  (X) (Y) 0,0077 -7,7 59,29

  0,2857 0,161 0,1521 8,9 79,21 0,5714 0,298 0,2965 1,5 2,25 0,8571 0,437 0,4409 -3,9 15,21 1,1429 0,590 0,5854 4,6 21,16 1,4286 0,727 0,7299 -2,9 8,41

  2 −3

  (× 10 )] ∑[Y − Y i

  −6

  = 185,53 × 10

  2

  (Y ) − Y i

  SY/X = � n − 2

  −6

  SY 185,53 × 10

  −3

  = � = 6,8105 × 10 = 0,0068 μg/ml

  X

  4

  3 × SY/X LOD = a

  3 × 0,0068 μg/ml

  LOD = = 0,0404 μg/ml

  0,5055 10 × SY/X LOD = a

  10 × 0,0068 μg/ml

  LOQ = = 0,1345 μg/ml

  0,5055

  

Lampiran 16. Hasil Uji Perolehan Kembali Fosfor Setelah Penambahan Larutan

  Standar pada Sampel

  Sampel Berat Serapan Konsentrasi Kadar Persen Perolehan Sampel ( ( Kembali (%) μg/ml) μg/g) (g)

  1 5,7204 0,551 1,0748 411,0071 104,49 2 6,0808 0,606 1,1836 425,7869 120,05 3 5,4738 0,533 1,0392 415,2965 102,23 4 5,7627 0,563 1,0985 416,9866 108,71 5 5,5324 0,541 1,0550 417,1449 104,45 6 5,7727 0,570 1,1124 421,5315 111,52

  ��������������������������� = %Perolehan Kembali 108,59

  Lampiran 17. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali Fosfor pada Sampel

  Berat sampel yang ditimbang : 5,7204 g Serapan (Y) : 0,551 Persamaan Regresi : y = 0,5055x + 0,0077

  0,551 = 0,5055x + 0,0077 x = 1,0748 µg/ml C × V × F

  P

  Kadar = W

  Keterangan: C = Konsentrasi larutan sampel (µg/ml) V = Volume (ml)

  F P = Faktor pengenceran W = Berat sampel (g)

  1,0748 μg/ml × 25 ml × 5 × 2,5 × 7

  Kadar = 5,7204 g

  = 411,0071 µg/g

• Kadar Larutan Standard yang ditambahkan (C A )

  100 μg/ml × 10 ml

  ∗

  C = = 174,8130

  A μg/g

  5,7204 g Kadar rata-rata sampel (C A ) = 228,3482

  μg/g ( )

  − % × 100%

  =

  ∗

  411,0071 μg/g − 228,3483 μg/g

  %Recovery = × 100% = 104,49% 174,8130

  μg/g

  Lampiran 18. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD)

  2 x (%) x (x

  − x� − x�) 104,49 11,46 131,3316 120,05 6,26 39,1876 102,33 -4,1 16,8100 108,71 0,12 0,0144 104,45 -4,14 17,1396 111,52 2,93 8,5849

  2 ∑x = 651,55 ∑(x − x�) x = 213,0681

  � = 108,59

  SD RSD = × 100%

  X 6,5279

  �

  RSD = × 100% = 6,01% 108,59

  Lampiran 19. Hasil Identifikasi Sampel

  Lampiran 20. Tabel Distribusi F

  Lampiran 21.Tabel Distribusi t