UJI ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOKSORUBISIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA SECARA IN VITRO
TESIS UJI ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOKSORUBISIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA SECARA IN VITRO Oleh: MAINAL FURQAN NIM 127014008
UJI ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOKSORUBISIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA SECARA IN VITRO TESIS Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Oleh: MAINAL FURQAN NIM 127014008 PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2014
LEMBAR PERSETUJUAN TESIS UJI ANTIKANKER KOMBINASI EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOKSORUBISIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA SECARA IN VITRO Oleh: MAINAL FURQAN NIM 127014008
Medan, Juni 2014 Menyetujui: Komisi Pembimbing, Komisi Penguji, Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.
NIP 195311281983031002 NIP 195301011983031004 Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed.
NIP 195103261978022001 NIP 196602091992031003 Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.
NIP 195311281983031002 Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
NIP 195103261978022001 Mengetahui: Disahkan Oleh: Ketua Program Studi, Dekan, Prof. Dr. Karsono, Apt. Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.
NIP 195409091982011001 NIP 195311281983031002
Nama Mahasiswa : Mainal Furqan Nomor Induk Mahasiswa : 127014008 Program Studi : Magister Farmasi Judul Tesis : Uji Antikanker Kombinasi Ekstrak Etil Asetat Daun Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) dengan Doksorubisin Terhadap Sel Kanker Payudara Secara In Vitro
Telah diuji dan dinyatakan LULUS di depan Tim Penguji pada hari Senin tanggal enam belas bulan Juni tahun dua ribu empat belas.
Mengesahkan: Tim Penguji Tesis Ketua Tim Penguji Tesis : Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.
Anggota Tim Penguji Tesis : Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
Prof. Dr. Urip Harahap, Apt. Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed. Saya yang bertanda tangan dibawah ini: Nama Mahasiswa : Mainal Furqan Nomor Induk Mahasiswa : 127014008 Program Studi : Magister Farmasi Judul Tesis : Uji Antikanker Kombinasi Ekstrak Etil Asetat
Daun Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) dengan Doksorubisin Terhadap Sel Kanker Payudara Secara In Vitro
Dengan ini menyatakan bahwa tesis yang saya buat adalah asli karya saya sendiri, bukan plagiat dan apabila dikemudian hari diketahui tesis saya tersebut plagiat karena kesalahan saya sendiri maka saya bersedia diberi sanksi apapun oleh Program Studi Magister Farmasi Fakultas Farmasi USU. Saya tidak akan menuntut pihak manapun atas perbuatan saya tersebut.
Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya dan dalam keadaan sehat.
Medan, Juni 2014 Yang membuat pernyataan, Mainal Furqan NIM 127014008 Puji dan syukur kepada Allah SWT atas segala nikmat yang tak terhingga sehingga penulis bisa menyelesaikan penelitian dan penulisan tesis dengan judul uji antikanker kombinasi ekstrak etil asetat daun poguntano (Picria fel-terrae Lour.) dengan doksorubisin terhadap sel kanker payudara, sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Magister Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Selama menyelesaikan penelitian dan tesis ini penulis telah banyak mendapatkan bantuan dan dorongan dari berbagai pihak, baik moril maupun materil. Untuk itu penulis ingin menghaturkan penghargaan dan terima kasih yang tiada terhingga kepada:
1. Rektor Universitas Sumatera Utara, Bapak Prof. Dr. dr. Syahril Pasaribu, DTMH&H., M.Sc., (CTM)., Sp.A(K).
2. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Bapak Prof. Dr.
Sumadio Hadisahputra, Apt., yang telah menyediakan fasilitas dan kesempatan bagi penulis menjadi mahasiswa Program Studi Magister Farmasi Fakultas Farmasi.
3. Ketua Program Studi Magister Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Bapak Prof. Dr. Karsono, Apt., yang telah menyediakan fasilitas bagi penulis selama menjadi mahasiswa Program Studi Magister Farmasi Fakultas Farmasi.
4. Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. dan Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt., selaku Pembimbing yang selalu membimbing, mengarahkan, memberikan dorongan dan semangat sehingga penulis terpacu untuk menyelesaikan penelitian dan penyelesaian tesis ini.
Bapak Prof. Dr. Urip Harahap, Apt., dan Bapak Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed., sebagai penguji.
6. Ibu Dra. Suwarti, M.Si., Apt., Kepala Laboratorium Farmakognosi beserta staf.
7. Bapak Prof. Dr. Supargiyono Kepala Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada beserta staf.
Penulis juga mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang tiada hentinya kepada keluarga tercinta Krisna Lestari, Danish Baariq Furqan dan Ibunda Nuraini Ns, yang tiada hentinya berkorban dengan tulus ikhlas bagi kesuksesan penulis. Serta buat rekan Fitri Yanti, Vonna Aulianshah, Denny Satria, Sri Wastuti, Puji Lestari, Cut Masyitah dan semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu yang telah banyak membantu dalam penelitian tesis ini.
Kiranya Allah SWT memberikan balasan yang berlipat ganda atas kebaikan dan bantuan yang telah diberikan kepada penulis.
Penulis menyadari bahwa tesis ini masih jauh dari kesempurnaan, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun. Akhir kata semoga tulisan ini dapat menjadi sumbangan yang berarti bagi ilmu pengetahuan khususnya bidang farmasi.
Medan, Juni 2014 Penulis, Mainal Furqan
DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN
DOKSORUBISIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA
SECARA IN VITRO
ABSTRAKPoguntano (Picria fel-terrae Lour.) merupakan salah satu tumbuhan obat di Sumatera Utara yang digunakan untuk mengatasi penyakit degeneratif dan metabolisme. Penelitian sebelumnya telah melakukan uji tentang efek sitotoksik dari ekstrak n-heksana daun poguntano dengan doksorubisin terhadap sel kanker payudara MCF-7 dan T47D secara in vitro. Ekstrak etil asetat daun poguntano (EEADP) juga memiliki efek sitotoksik terhadap sel kanker payudara namun belum dilakukan penelitian lanjutannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik dari EEADP, indeks selektivitas (IS), efek kombinasi dengan doksorubisin, mekanisme penghambatan siklus sel, mekanisme apoptosis serta penekanan ekspresi siklin D1 dan Bcl-2 pada sel kanker payudara.
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara maserasi bertingkat menggunakan
pelarut berdasarkan tingkat kepolarannya, n-heksana, etil asetat dan etanol serta
dilakukan skrining fitokimia dan karakterisasi terhadap simplisia dan ekstrak. Ekstrakdiuji sitotoksiknya terhadap sel MCF-7 dan T47D dengan menggunakan metode
kolorimetri MTT (Microculture Tetrazolium Technique), indeks selektivitas, indekskombinasi, mekanisme penghambatan siklus sel dan apoptosis dengan metode
flowsitometri serta penekanan ekspresi siklin D1 dan Bcl-2 dengan metode
imunositokimia.Hasil uji sitotoksik EEADP pada sel kanker payudara MCF-7 dan sel T47D memberikan nilai IC
50 sebesar 120,312 µg/mL dan 99,404 µg/mL. Pengujian
sitotoksik terhadap sel normal (sel Vero) menunjukkan EEADP selektif terhadap sel MCF-7 dan T47D (IS > 3). Selanjutnya kombinasi EEADP dengan doksorubisin pada sel MCF-7 memberikan efek sinergis kuat dengan konsentrasi
1
1
optimal yaitu 15 µg/mL – 2 µg/mL ( / –
8 IC 50 /
4 IC 50 ). EEADP dikombinasikan
dengan doksorubisin terhadap sel T47D memberikan efek sinergis sangat kuat
1
1
diperoleh konsentrasi optimal 12,5 µg/mL – 0,25 µg/mL ( /
8 IC – 50 /
8 IC 50 ).
EEADP dan kombinasinya dengan doksorubisin dilakukan uji penghambatan siklus sel terhadap sel MCF-7, memberikan hasil penghambatan siklus sel pada fase G -G
1 dan G 2 -M dengan persentase berturut-turut 70,01% dan 21,16%. Uji
penghambatan siklus sel EEADP dan kombinasinya dengan doksorubisin terhadap sel T47D diperoleh hasil menghambat siklus sel pada fase G -G dengan
1
persentase berturut-turut 62,33% dan 71,24% serta dapat memacu apoptosis dengan persentase 81,52%; 29,89% dan dapat menekan ekspresi siklin D1 dan Bcl-2. Berdasarkan hasil tersebut maka EEADP dapat dikombinasikan dengan doksorubisin sebagai antikanker payudara karena adanya efek sinergis dan terjadinya penghambatan siklus sel serta pemacuan apoptosis.
Kata kunci: Daun poguntano , doksorubisin, T47D, MCF-7, sitotoksik, indeks
kombinasi, indeks selektivitas, flowsitometri, apoptosis, imunositokimia.EXTRACT POGUNTANO LEAVES (Picria fel - terrae Lour.)
WITH DOXORUBICIN ON BREAST CANCER CELLS
AS IN VITRO
ABSTRACTPoguntano (Picria fel - terrae Lour.) is one of the medicinal plants in Sumatera Utara used to treat degenerative and metabolic diseases. Previous research has conducted tests on the cytotoxic effects of n-hexane extract of leaves poguntano with doxorubicin against breast cancer cells MCF-7 and T47D in vitro. Ethylacetate extract of leaves poguntano (EAELP), also has potent cytotoxic effect against breast cancer cells, but subsequent studies have not been conducted.
This study aims to determine the cytotoxic effects of EAELP, selectivity index (SI), the effect of combination with doxorubicin, the mechanism of cell cycle inhibition, the mechanism of apoptosis, suppression of the expression of cyclin D1 and Bcl-2 in breast cancer cells.
Preparation of extracts was done by graded with solvents on the level of polarity. The solvents were n-hexane, ethyl acetate and ethanol as well as performed phytochemical screening and characterization of simplex and extracts. Extracts were tested against T47D cells with MTT method (Microculture Tetrazolium Technique), selectivity index, combination of active extracts with doxorubicin, effects inhibition of cell cycle and apoptosis with flowcytometry method and suppression of cyclin D1 and Bcl-2 expression in T47D cells with immunocytochemistry method.
The test results of EAELP cytotoxic against breast cancer cells MCF-7 and T47D cells giving IC
50 value of 120.312 mg/mL and 99.404 mg/mL. Tests
cytotoxic against normal (Vero) cells showed selective EEALP against MCF-7 and T47D (SI > 3). Furthermore EAELP combined with doxorubicin against MCF-7 cells provide strong synergistic effect by optimal concentrations present in
1
1 IC /
- concentrations EAELP - doxorubicin at 15 mg/mL - 2 mg/mL ( / IC ).
8
50
4
50 EAELP combined with doxorubicin on T47D cells provide a very strong
1
synergistic effect obtained optimal concentration of 12.5 ug/mL - 0.25 ug/mL ( /
8
1
50 /
- IC
8 IC 50 ). EAELP and doxorubicin combination with cell cycle inhibition
test against MCF-7 cells with flowcytometry methods, giving results inhibit the cell cycle at G -G phase and G -M with a percentage of 70.01% respectively and
1
2
21.16%. EAELP cell cycle inhibition test and its combination with doxorubicin on T47D cells inhibits cell cycle results obtained in the G -G
1 phase with a
percentage of 62.33% respectively and 71.24% and can stimulate apoptosis by percentage 81.52%; 29.89% and can suppress the expression of cyclin D1 and Bcl-2. Based on result test, EAELP and doxorubicin combination showed selective on breast cancer cells, giving selective effects, inhibit the cell cycle and stimulate apoptosis on breast cancer cells.
Keywords: Poguntano leaves, doxorubicin, T47D, MCF-7, cytotoxic, combination index, selectivity index, flowcytometry, apoptosis, immunocytochemistry.
Halaman JUDUL ....................................................................................................... i LEMBAR PENGESAHAN ....................................................................... iii SURAT PERNYATAAN ........................................................................... iv KATA PENGANTAR ............................................................................... v ABSTRAK ................................................................................................. vii ABSTRACT ............................................................................................... viii DAFTAR ISI .............................................................................................. ix DAFTAR TABEL ...................................................................................... xv DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xvi DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xvii DAFTAR SINGKATAN ........................................................................... xx BAB I PENDAHULUAN .......................................................................
1 1.1 Latar Belakang ......................................................................
1 1.2 Perumusan Masalah ...............................................................
6 1.3 Hipotesis ...............................................................................
6 1.4 Tujuan Penelitian ..................................................................
7 1.5 Manfaat Penelitian ................................................................
8 1.6 Kerangka Pikir Penelitian .....................................................
9 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...............................................................
10 2.1 Uraian Tumbuhan .................................................................
10 2.1.1 Sistematika tumbuhan .................................................
10
2.1.3 Nama asing ...................................................................
11 2.1.4 Morfologi tumbuhan ....................................................
11 2.1.5 Khasiat tumbuhan ........................................................
12 2.2 Ekstraksi ................................................................................
12 2.2.1 Maserasi .......................................................................
12 2.3 Kanker ...................................................................................
13 2.3.1 Tinjauan umum kanker ................................................
13 2.3.2 Sifat kanker ..................................................................
14 2.3.3 Siklus sel ......................................................................
16 2.3.4 Mekanisme apoptosis ..................................................
18 2.3.5 Karsinogenesis .............................................................
20 2.3.6 P-glikoprotein ..............................................................
22 2.4 Kanker Payudara ...................................................................
24 2.5 Sel MCF-7 .............................................................................
27 2.6 Sel T47D ...............................................................................
27 2.7 Sel Vero ................................................................................
28 2.8 Uji Sitotoksik ........................................................................
28 2.8.1 Uji sitotoksik menggunakan metode MTT ..................
29 2.9 Antikanker ............................................................................
30
2.9.1 Doksorubisin dan resistensinya pada kanker payudara ......................................................................
31 2.9.2 Terapi kombinasi .........................................................
33 2.10 Indeks Selektivitas ...............................................................
35
3.1 Alat dan Bahan ......................................................................
36 3.1.1 Alat-alat ......................................................................
36 3.1.2 Bahan-bahan ...............................................................
36 3.2 Penyiapan Bahan Tumbuhan ................................................
38 3.2.1 Pengumpulan bahan tumbuhan ...................................
38 3.2.2 Identifikasi tumbuhan ..................................................
38 3.2.3 Pembuatan simplisia daun poguntano .........................
38 3.3 Pembuatan Pereaksi ..............................................................
38 3.3.1 Besi (III) klorida 1% b/v .............................................
38 3.3.2 Larutan asam klorida 2 N ...........................................
39 3.3.3 Timbal (II) asetat 0,4 M ..............................................
39 3.3.4 Pereaksi Mayer ............................................................
39 3.3.5 Pereaksi Molish ...........................................................
39 3.3.6 Pereaksi Dragendorff ...................................................
39 3.3.7 Larutan kloralhidrat .....................................................
39 3.3.8 Larutan asam sulfat 2 N ...............................................
40 3.3.9 Pereaksi Bouchardat ....................................................
40 3.3.10 Pereaksi Lieberman-Bouchardat ................................
40 3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ...............
40 3.4.1 Pemeriksaan makroskopik ...........................................
40 3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik ...........................................
40 3.4.3 Penetapan kadar air .....................................................
41
3.4.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol ......................
42 3.4.6 Penetapan kadar abu total ............................................
42 3.4.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam .........................
42 3.5 Skrining Fitokimia ................................................................
43 3.5.1 Pemeriksaan alkaloid ...................................................
43 3.5.2 Pemeriksaan flavonoid ................................................
43 3.5.3 Pemeriksaan glikosida .................................................
44 3.5.3.1 pemeriksaan glikosida antrakuinon ...................
44 3.5.4 Pemeriksaan saponin ...................................................
44 3.5.5 Pemeriksaan tanin ........................................................
45 3.5.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid .................................
45
3.6 Pembuatan Ekstrak Etil asetat Daun Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) .......................................................
45 3.7 Sterilisasi Alat dan Bahan .....................................................
45 3.8 Pembuatan Media .................................................................
46 3.8.1 Pembuatan media DMEM ...........................................
46 3.8.2 Pembuatan media komplit DMEM ..............................
46 3.8.3 Pembuatan media RPMI ..............................................
47 3.8.4 Pembuatan MK-RPMI .................................................
47 3.8.5 Pembuatan media M199 ..............................................
48 3.8.6 Pembuatan media MK-M199 ......................................
48 3.9 Penumbuhan Sel MCF-7, Sel T47D dan Sel Vero ................
49
3.9.2 Subkultur sel ................................................................
49 3.9.3 Panen sel ......................................................................
50 3.9.4 Penghitungan sel ..........................................................
50 3.10 Pembuatan Larutan Uji ........................................................
51 3.11 Pengujian Sitotoksik ............................................................
52 3.12 Analisis Hasil .......................................................................
52 3.13 Indeks Selektivitas ...............................................................
53 3.14 Uji Kombinasi ......................................................................
53 3.15 Pengujian Apoptosis dan Siklus Sel .....................................
56
3.16 Uji Penghambatan Ekspresi Protein Bcl-2 dan Siklin D1 dengan Metode Imunositokimia ..........................................
57 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................
58 4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan .................................................
58 4.2 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak .....................................
58 4.3 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ...................
60 4.4 Ekstraksi ................................................................................
63 4.5 Uji Sitotoksik EEADP Terhadap Sel MCF-7 dan T47D ......
64 4.6 Indeks Selektivitas ................................................................
65
4.7 Uji Kombinasi EEADP - Doksorubisin terhadap Sel MCF-7 .............................................................................
66
4.8 Uji Kombinasi EEADP - Doksorubisin terhadap Sel T47D ...............................................................................
68 4.9 Uji Penghambatan Siklus Sel terhadap Sel MCF-7 ...............
70 4.10 Uji Penghambatan Siklus Sel terhadap Sel T47D .................
75
4.12 Pengamatan Ekspresi Protein Bcl-2 dan Siklin D1 ..............
84 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .....................................................
89 5.1 Kesimpulan ............................................................................
89 5.2 Saran .....................................................................................
90 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................
91 LAMPIRAN …………............................................................................... .
98
Tabel Halaman 3.1 Interpretasi Nilai IK (Indeks Kombinasi) ..................................
54 4.1 Hasil karakterisasi SDP dan ekstrak daun poguntano .................
59 4.2 Hasil skrining fitokimia SDP ......................................................
61 4.3 Hasil skrining fitokimia ekstrak daun poguntano .......................
61 4.4 Nilai IK doksorubisin dengan EEADP terhadap sel MCF-7 ......
67 4.5 Nilai IK doksorubisin dengan EEADP terhadap sel T47D ..........
69
4.6 Distribusi sel MCF-7 setelah perlakuan dengan berbagai konsentrasi EEADP, doksorubisin dan kombinasi keduanya ......
71
4.7 Distribusi sel T47D setelah perlakuan dengan berbagai konsentrasi EEADP, doksorubisin dan kombinasi keduanya ......
75
4.8 Hasil pengujian apoptosis EEADP pada sel T47D dengan berbagai konsentrasi ........................................................
80
Gambar Halaman 1.1 Kerangka pikir penelitian .............................................................
50 doksorubisin .....
8 IC
50 EEADP dan
1
/
8 IC 50 doksorubisin ....................................................................
76
4.8 Gambaran siklus sel T47D yang diberi ½ IC
77 4.9 Gambaran presentase kondisi sel T47D kontrol ..........................
1
80
4.10 Gambaran presentase kondisi sel T47D yang diberi 1 x IC
50 EEADP .........................................................................................
80
4.11 Gambaran presentase kondisi sel T47D yang diberi ½ IC
50 EEADP .........................................................................................
81
4.12 Gambaran presentase kondisi sel T47D yang diberi EEADP - Doksorubisin ................................................................................
/
4.7 Gambaran siklus sel T47D yang diberi
9 2.1 Tumbuhan poguntano ..................................................................
1
11 2.2 Mekanisme pemompaan oleh Pgp ...............................................
23 3.1 Hemositometer .............................................................................
50 4.1 Gambaran siklus sel MCF-7 kontrol ............................................
72
4.2 Gambaran siklus sel MCF-7 yang diberi ½ IC 50 EEADP ...........
72
4.3 Gambaran siklus sel MCF-7 yang diberi
/
76
8 IC
50
¼ IC EEADP dan 50 doksorubisin ....................................................................
72
4.4 Gambaran siklus sel MCF-7 yang diberi ½ IC 50 doksorubisin ...
73 4.5 Gambaran siklus sel T47D kontrol ..............................................
76
4.6 Gambaran siklus sel T47D yang diberi 1 x IC 50 EEADP ............
81
4.14 Ekspresi Bcl-2 yang diberi berbagai perlakuan ...........................
85 4.15 Ekspresi siklin D1 yang diberi berbagai perlakuan .....................
87
Lampiran Halaman
9 Perhitungan kadar abu tidak larut asam SDP, ENDP, EEADP dan EEDP ..................................................................................... 106
15 Bagan penumbuhan sel ............................................................... 112
14 Bagan pembuatan MK-RPMI ...................................................... 111
13 Bagan pembuatan media RPMI ................................................... 110
12 Perhitungan persen sel hidup Vero .............................................. 109
11 Perhitungan persen sel hidup T47D ............................................. 108
10 Perhitungan persen sel hidup MCF-7 .......................................... 107
8 Perhitungan kadar abu total SDP, ENDP, EEADP dan EEDP ............................................................................................ 105
1 Hasil identifikasi tumbuhan poguntano (Picria fel-terrae Lour.) ...............................................................
7 Perhitungan kadar sari larut etanol SDP, ENDP, EEADP dan EEDP ............................................................................................ 104
6 Perhitungan kadar sari larut air SDP, ENDP, EEADP dan EEDP............................................................................................. 103
5 Perhitungan kadar air SDP, ENDP, EEADP dan EEDP ............... 102
4 Bagan ekstraksi serbuk simplisia secara maserasi bertingkat ...... 101
3 Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk SDP ............................... 100
99
98 2 Gambar daun poguntano (Picria fel-terrae Lour.) ......................
16 Bagan panen sel .......................................................................... 113
18 Bagan pembuatan larutan uji ....................................................... 115
26 Hasil penentuan IC
2 dan mikroskop inverted ............................. 132
30 LAF, inkubator CO
29 Indeks Kombinasi T47D .............................................................. 129
28 Indeks Kombinasi MCF-7............................................................. 126
50 sel Vero dengan analisa probit SPSS 17 ... 125
27 Hasil penentuan IC
50 sel T47D dengan analisa probit SPSS 17 .. 124
sel MCF-7 dengan analisis probit
19 Bagan pengujian sitotoksik .......................................................... 116
50 SPSS 17 ........................................................................................ 123
25 Hasil penentuan IC
24 Microplate-96 sumuran ................................................................ 122
23 Sel Vero di bawah mikroskop ...................................................... 121
22 Sel MCF-7 dan T47D di bawah mikroskop ................................. 120
21 Bagan pengujian imunositokimia ................................................ 118
20 Bagan pengujian flowsitometri ................................................... 117
31 ELISA reader dan flowsitometer ................................................. 133
ABCB1 ATP Binding Cassette Famili B 1 AIF Apoptosis Including Factor Apaf-1 Apoptosis activating factor-1 ATP Adenosine-Tri Phosphat Bcl-2 B cell Limphoma-2 Bcl-XL B cell Limphoma- Extra Large BCRP Breast Cancer Resistance Protein CAK CDK Activating Kinase CDK Cyclin Dependent Kinase CDKI Cyclin Dependent Kinase Inhibitor Cdc25c Cell division cycle 25 homolog C CI Combination Index Cyc Cyclin DR Death Reseptor DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium DMSO Dimethyl Sulfoxide DNA Deoxiribo Nukleid Acid Dox Doxorubicin ENDP Ekstrak n-heksana daun poguntano EEADP Ekstrak etil asetat daun poguntano EEDP Ekstrak etanol daun poguntano ER Estrogen Reseptor FACS Fluorescence Activated Cell Sorting FADD Fas-Asociated Death Domain FBS Fetal Bovine Serum HER-2 Human Epidermal growth factor Receptor 2 HIV Human Immunodeficiency Virus
IAP Inhibitory Apoptosis
IK Indeks Kombinasi
IS Indeks Selektivitas
MDR Multi Drug Resistance MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromida] NF
ĸB
Nuclear Factor kappa B
p21 Protein 21 p53 Protein 53 Pgp P-glikoprotein PI Propidium Iodida PKC Protein Kinase C pRB Protein Retinoblastoma PS Phosphatidylserine RNA Ribo Nucleid Acid ROS Reactive Oxygen Species RPMI Roswell Park Memorial Institute SDP Simplisia Daun Poguntano SDS Sodium Dodesil Sulfat SI Selectivity Index TNF Tumor Necrosis Factor TNFR Tumor Necrosis Factor Receptor T47D Tumor 47 Ductal