Validasi metode kromatografi lapis tipis densitometri pada penetapan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam kaplet - USD Repository
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN
DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Metri Setyadhiani Karunawati
NIM : 098114103
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN
DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET
Halaman judul
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Metri Setyadhiani Karunawati
NIM : 098114103
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
i
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Persetujuan Pembimbing
ii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Pengesahan Skripsi Berjudul
iii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
HALAMAN PERSEMBAHAN
z
Kupersembahkan karya ini untuk:
Kedua orangtuaku,
Kakakku, adikku dan almamaterku
iv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
v
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
vi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat,
anugerah dan penyertaan yang telah diberikan-Nya, sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis
(KLT)-Densitometri pada Penetapan Kadar Campuran Deksametason dan
Deksklorfeniramin Maleat dalam Kaplet. Dimana skripsi ini disusun sebagai salah
satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm).
Penyusunan skripsi ini telah mendapatkan dukungan dari berbagai pihak
baik bimbingan, semangat, kritik, dan saran yang membangun. Oleh karena itu,
pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya kepada:
1.
Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2.
Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt., selaku dosen pembimbing atas segala
bimbingan, perhatian, kesabaran, semangat, kritik, dan saran selama
penelitian dan penyusunan naskah.
3.
Ibu Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si., selaku dosen pendamping
pembimbing skripsi dan selaku dosen pembimbing akademik (DPA) atas
segala pendampingannya baik dari semester satu hingga penyusunan skripsi.
4.
Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan, masukan,
kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
5.
Lucia Wiwid Wijayanti M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan,
masukan, kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
vii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
6.
Ibu Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma atas ijin yang diberikan untuk melakukan
penelitian di laboratorium Kimia Analisis Instrumental.
7.
Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang diberikan,
sehingga berguna dalam penyusunan skripsi ini.
8.
Pihak PT Konimex atas pemberian baku deksametason sebagai bahan
penelitian.
9.
Pihak
PT
Ifars
Pharmaceutical
Laboratories
atas
pemberian
baku
deksklorfeniramin maleat sebagai bahan penelitian.
10. Mas Bimo, Mas Parlan, Mas Kunto, selaku laboran yang telah banyak
membantu penulis selama penelitian di laboratorium.
11. Pak Otok, atas bantuannya dalam pengadaan bahan-bahan yang diperlukan
selama penelitian.
12. Shinta dan Sashya sebagai teman seperjuangan satu judul dalam penyelesaian
penelitian ini, atas kebersamaan, semangat, keceriaan, nasehat, dan
dukungannya selama penelitian di laboratorium dan kuliah.
13. Marimar, Novia, Chen2, Nindy, Is sumitro, Mike, Bahok, Anta, Adel, Lia
susanti untuk kebersamaan, keceriaan, semangat, dan dukungan selama
kuliah semester satu hingga saat ini
14. Mbah Rina, tante kekar, kutil, john, ci ana, berta, mayke, gendut, sefi, ita,
esty, eni, double dewi, geka, seruni, intan, deby, dan sesepuh amakusa
sebagai teman satu kost, atas segala kebersamaan, keceriaan, kenyamanan
selama ini.
viii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
15. Ci lele, Ci sasa untuk kebersamaan, keceriaan dan semangat yang diberikan
selama ini.
16. Teman-teman kelas FST B 2009 dan teman-teman angkatan 2009 atas
semangat, kerja sama, dan kebersamaannya selama ini.
17. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis, terima
kasih atas segala bantuan yang telah diberikan selama ini, sehingga penulis
dapat menyelesaikan skrispi ini.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan di dalam penulisan skripsi
ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun
untuk perkembangan selanjutnya.
Penulis
ix
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i
PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................................................... ii
PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ............................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... v
PRAKATA ........................................................................................................... vi
DAFTAR ISI.......................................................................................................... x
DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiv
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvii
INTISARI ....................................................................................................... xviii
ABSTRACT ........................................................................................................ xix
BAB I PENGANTAR .......................................................................................... 1
A. Latar Belakang .................................................................................................. 1
1. Permasalahan ................................................................................................ 3
2. Keaslian penelitian ....................................................................................... 3
3. Manfaat penelitian ........................................................................................ 4
x
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
B. Tujuan ............................................................................................................... 4
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 5
A. Deksametason ................................................................................................... 5
B. Deksklorfeniramin Maleat ................................................................................ 6
C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................................... 7
D. Fase Diam ......................................................................................................... 7
E. Densitometri ...................................................................................................... 9
F. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 10
G. Validasi Metode .............................................................................................. 11
1. Akurasi. ...................................................................................................... 11
2. Presisi. ........................................................................................................ 12
3. Selektivitas ................................................................................................. 13
4. Linearitas .................................................................................................... 13
5. Range .......................................................................................................... 13
H. Landasan Teori ................................................................................................ 14
I. Hipotesis ......................................................................................................... 14
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 15
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ...................................................................... 15
B. Variabel Penelitian .......................................................................................... 15
1. Variabel bebas ............................................................................................ 15
2. Variabel tergantung .................................................................................... 15
3. Variabel pengacau terkendali ..................................................................... 15
xi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
C. Definisi Operasional ....................................................................................... 16
D. Bahan Penelitian ............................................................................................. 16
E. Alat Penelitian ................................................................................................. 16
F. Tata Cara Penelitian ........................................................................................ 17
1. Pembuatan fase gerak ................................................................................. 17
2. Pembuatan larutan baku ............................................................................. 17
3. Penentuan panjang gelombang pengamatan ............................................... 18
4. Pembuatan kurva baku ............................................................................... 19
5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran.............. 19
6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku ........ 20
G. Analisis Hasil .................................................................................................. 22
1. Selektivitas ................................................................................................. 22
2. Linearitas .................................................................................................... 22
3. Akurasi ....................................................................................................... 23
4. Akurasi adisi baku dalam matriks sampel .................................................. 23
5. Presisi ......................................................................................................... 23
6. Range .......................................................................................................... 24
BAB IV PEMBAHASAN ................................................................................... 25
A. Pembuatan Fase Gerak .................................................................................... 25
B. Pembuatan Larutan Baku ................................................................................ 26
C. Penetapan Panjang Gelombang Pengamatan .................................................. 27
D. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 29
E. Penetapan kurva baku ..................................................................................... 33
xii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
F. Validasi Metode Analisis ................................................................................ 37
1. Selektivitas ................................................................................................. 37
2. Linearitas .................................................................................................... 38
3. Akurasi ....................................................................................................... 39
4. Presisi ......................................................................................................... 41
5. Range .......................................................................................................... 42
6. Penentuan akurasi dan presisi adisi baku dalam sampel ............................ 43
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 45
A. Kesimpulan ..................................................................................................... 45
B. Saran ............................................................................................................... 45
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 46
LAMPIRAN......................................................................................................... 49
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 85
xiii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR TABEL
Tabel I.
Parameter analisis dalam validasi metode analisis ............................ 11
Tabel II.
Kriteria rentang recovery yang dapat diterima .................................. 12
Tabel III.
Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan
ketentuan AOAC Peer Verified Methods (PVM) berdasarkan
kadar analit ........................................................................................ 12
Tabel IV.
Data Penentuan Kurva Baku Deksametason ..................................... 34
Tabel V.
Data Penentuan Kurva Baku Deksklorfeniramin Maleat .................. 35
Tabel VI.
Data nilai resolusi baku campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat .................................................................. 38
Tabel VII. Data nilai resolusi sampel .................................................................. 38
Tabel VIII. Data % recovery baku campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 40
Tabel IX.
Data
%KV
baku
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 42
Tabel X.
% Recovery dan %KV baku adisi ...................................................... 43
xiv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Struktur Deksametason ...................................................................... 5
Gambar 2.
Struktur Deksklorfeniramin Maleat ................................................... 6
Gambar 3.
Struktur Silika Gel ............................................................................. 8
Gambar 4.
Densitometer dan Autosampler .......................................................... 9
Gambar 5.
Diagram skematis densitometer ...................................................... 10
Gambar 6.
Perpotongan
Spektra
Deksametason
(A)
dan
Deksklorfeniramin maleat (B) dalam pelarut etanol ........................ 28
Gambar 7.
Bagian kromofor deksametason ....................................................... 29
Gambar 8.
Bagian kromofor dan auksokrom deksklorfeniramin maleat ........... 29
Gambar 9.
Densitogram baku tunggal deksametason ........................................ 30
Gambar 10. Densitogram baku tunggal deksklorfeniramin maleat ..................... 30
Gambar 11. Densitogram sampel tanpa penambahan baku ................................. 30
Gambar 12. Densitogram sampel dengan penambahan baku .............................. 31
Gambar 13. Pola Spektra baku tunggal deksametason ........................................ 32
Gambar 14. Pola Spektra baku tunggal deksklorfeniramin maleat...................... 32
Gambar 15. Pola Spektra sampel tanpa penambahan baku ................................. 33
Gambar 16. Pola Spektra Sampel dengan penambahan baku .............................. 33
Gambar 17. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason 3
replikasi ............................................................................................ 34
xv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Gambar 18. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin
maleat 3 replikasi ............................................................................. 35
Gambar 19. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason ................... 36
Gambar 20. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin
maleat ............................................................................................... 37
xvi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
COA (Certificate of Analysis) Deksametason .............................. 50
Lampiran 2.
COA (Certificate Of Analysis) Deksklorfeniramin Maleat .......... 51
Lampiran 3.
Data penimbangan bahan .............................................................. 52
Lampiran 4.
Spektra deksametason (0,03 ; 0,06 ; 0,09 mg/mL) dan
deksklorfeniramin maleat (0,1 ; 0,3 ; 0,5 mg/mL) ........................ 54
Lampiran 5.
Penentuan
kurva
baku
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat.............................................................. 54
Lampiran 6.
Contoh perhitungan nilai resolusi ................................................. 60
Lampiran 7.
Densitogram
presisi
dan
akurasi
baku
campuran
deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1 ............... 60
Lampiran 8.
Presisi dan akurasi baku campuran deksametason :
deksklorfeniramin maleat periode ke-1......................................... 63
Lampiran 9.
Densitogram
presisi
dan
akurasi
baku
campuran
deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2 ............... 68
Lampiran 10. Presisi dan akurasi baku campuran deksametason :
deksklorfeniramin maleat periode ke-2......................................... 71
Lampiran 11. Densitogram sampel tanpa penambahan ....................................... 73
Lampiran12. Densitogram
sampel
dengan
penambahan
baku
deksametason : deksklorfeniramin maleat .................................... 76
Lampiran 13. Presisi akurasi adisi baku deksametason dalam sampel ............... 79
Lampiran 14. Presisi akurasi adisi baku deksklorfeniramin maleat dalam
sampel ........................................................................................... 82
xvii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
INTISARI
Penjaminan mutu suatu obat sangatlah penting, karena berkaitan dengan
penggunaan obat secara tepat, lengkap dan obyektif. Salah satu penjaminan mutu
obat yaitu kesesuaian antara klaim label dengan kadar obat sebenarnya. Untuk
menetapkan kadar obat diperlukan suatu metode yang sudah tervalidasi. Tujuan
penelitian ini adalah membuktikan metode KLT Densitometri yang akan
digunakan untuk melakukan penetapan kadar campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat dalam kaplet memenuhi parameter-parameter validasi.
Metode yang digunakan yaitu Kromatografi Lapis Tipis (KLT)densitometri dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak etil asetat :
metanol : amonia 25% dengan perbandingan (25 : 4 : 1), dengan jarak
pengembangan 5 cm dan panjang gelombang (λ) 262 nm.
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, metode ini memenuhi
parameter selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Nilai Rs > 1,5
menunjukan metode memenuhi parameter selektivitas. Lineritas deksametason
memiliki nilai r2=0,999 dan 0,999 untuk linearitas deksklorfeniramin maleat.
Akurasi dan presisi campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada
konsentrasi rendah (30 : 100 ppm), sedang (90 : 300 ppm) dan tinggi (150 : 500
ppm) yang dilakukan selama 2 periode memenuhi persyaratan presisi inter-day,
dimana semua konsentrasi memiliki % recovery dan % KV yang memenuhi
parameter akurasi dan presisi.
Kata kunci: Deksametason, Deksklorfeniramin maleat, KLT-densitometri,
Validasi metode, Penjaminan mutu
xviii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
ABSTRACT
Quality assurance of a drug is important, for it is related to complete and
objective drug usage. One of the drug quality assurance is correspondence
between label claims and actual drug levels. To determine drug levels, a validated
method is required. The aim of this study is to show that TLC-densitometry
method meets the validation parameters and can be used to perform the assay
mixture of dexamethasone and dexchlorpheramine maleate in kaplet.
The method that is used is Thin Layer Chromatography (TLC)densitometry with silica gel 60 F254 as the stationary phase, ethyl acetate:
methanol: ammonia 25% (25: 4: 1) as the mobile phase, 5 cm development
distance and UV detector at wavelength (λ) 262 nm.
Based on the results of research, this method meets the parameters
selectivity, linearity, accuracy, precision and range. Rs value > 1.5 indicates that
the method meets the selectivity parameter. Dexamethasone linearity has r2 value
0.999 and 0.999 for dexchlorpheniramin maleate linearity. Accuracy and precision
of dexamethasone and deksklorfeniramine maleate mixture at low concentrations
(30: 100 ppm), medium (90: 300 ppm) and high (150: 500 ppm) that were
performed in 2 periods meet the requirements of inter-day precision, where all
concentrations have % recovery and % KV that meets the accuracy and precision
parameters.
Keyword: Dexamethasone, Dexchlorpheniramin maleate, KLT-densitometry,
Validation method, Quality assurance
xix
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Berdasarkan data dari World Allergy Organization (WAO) 2011
menunjukkan bahwa prevalensi alergi terus meningkat dengan angka 30-40
persen dari total populasi dunia. Data tersebut sejalan dengan data dari Center for
Disease Control and Prevention (CDC) yang mencatat bahwa angka kejadian
alergi meningkat tiga kali lipat sejak 1993 hingga 2006. Di Indonesia, beberapa
peneliti juga memperkirakan bahwa peningkatan kasus alergi mencapai 30 persen
per tahunnya (Pdpersi, 2012).
Campuran deksklorfeniramin maleat dan deksametason merupakan salah
satu obat yang telah beredar untuk mengatasi berbagai menifestasi reaksi alergi.
Dengan beredarnya suatu obat ke masyarakat luas, maka penjaminan mutu obat
sangatlah penting. Salah satu penilaian mutu obat adalah kesesuaian antara klaim
label, yang dalam hal ini kadar zat aktif obat yang tertera pada label, dengan kadar
sebenarnya. Hal ini berguna untuk memastikan bahwa informasi yang tercantum
pada label obat (etiket/brosur/kemasan) adalah informasi yang lengkap dan
obyektif, yang dapat menjamin penggunaan obat secara tepat, rasional dan aman.
Menurut Keputusan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik
Indonesia nomor hk.04.1.23.11.11.09219 tahun 2011 tentang penerapan sistem
manajemen
mutu
(quality
management
1
system),
manual
mutu
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
2
pada pengawasan post market salah satunya yaitu pengawasan promosi dan
penandaan/label obat dan makanan. Pengawasan ini meliputi pengambilan sampel
(sampling) dan pengujian terkait kesesuaian terhadap kadar obat dan monitoring
konsistensi informasi dalam label/penandaan obat (BPOM, 2011).
Untuk menguji kesesuaian kadar sebenarnya dengan klaim label,
diperlukan suatu metode untuk menetapkan kadar. Dalam sediaan yang akan diuji
terdapat dua senyawa yang akan ditetapkan kadarnya yaitu deksametason dan
deksklorfeniramin maleat. Kromatografi lapis tipis (KLT)-densitometri dapat
digunakan untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat,
dimana metode KLT-densitometri dapat memisahkan kedua senyawa dan dapat
digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.
Metode KLT-densitometri dapat digunakan untuk analisis obat di
laboratorium farmasi, karena metodenya cepat, dapat digunakan untuk analisis
preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah cuplikan yang
sedikit. Metode analisis KLT-densitometri ini dapat digunakan untuk analisis
preparatif, kualitatif dan kuantitatif, secara preparatif metode ini akan
memisahkan senyawa campuran, sedangkan secara kualitatif dapat digunakan
untuk menentukan nilai Rf (retardation factor), dimana nilai Rf tersebut dapat
digunakan sebagai pembanding nilai bercak pada baku dan bercak sampel. Selain
itu, secara kuantitatif metode ini dapat menentukan kadar masing-masing
komponen campuran, nilai resolusi, nilai CV dan recovery yang menggambarkan
akurasi dan presisi metode (Khopkar, 1990).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
3
Sebelum digunakan untuk penetapan kadar, metode yang dipilih harus
divalidasi terlebih dahulu. Parameter validasi berdasarkan prosedur analisis
kategori 1 meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Validasi
dilakukan agar hasil yang didapat merupakan hasil yang valid atau dapat
dipercaya, karena validasi merupakan kebutuhan dasar untuk menjamin kualitas
dan reliabel hasil dalam aplikasi analitis (Ermer dan Miller, 2005).
1.
Permasalahan
Apakah metode KLT-densitometri untuk penetapan kadar deksametason
dan deksklorfeniramin maleat dalam campuran memenuhi parameter-parameter
validasi kategori 1 yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan
range?
2.
Keaslian penelitian
Beberapa penetapan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat
dalam campuran yang pernah dilakukan yaitu penetapan kadar deksklorfeniramin
maleat dan deksametason dalam tablet dengan metode Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT) sudah pernah dilakukan oleh Syarif (2009). Penetapan kadar
deksametason secara tunggal dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) telah dilakukan oleh Huetos dan
Ramos (1999). Penetapan kadar deksametason dalam ointment dengan metode
kromatografi lapis tipis densitometri oleh Krzek, Maslanka dan Lipner (2005).
Penelitian yang dilakukan oleh penulis adalah melakukan validasi metode
KLT-densitometri untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
4
maleat dalam kaplet yang belum pernah dilakukan pada penelitian sebelumnya,
dimana KLT-densitometri memiliki metode yang cepat, dapat digunakan untuk
analisis preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah
cuplikan yang sedikit.
3.
Manfaat penelitian
a. Manfaat metodologis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan
sumbangan ilmiah tentang penggunaan metode KLT-densitometri pada penetapan
kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam kaplet.
b. Manfaat praktis. Hasil penelitian diharapkan dapat memberikan
informasi mengenai selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range metode
KLT-densitometri
untuk
penetapan
kadar
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat dalam sampel kaplet X®.
B. Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa metode KLTdensitometri telah memenuhi parameter-parameter validasi kategori 1 yaitu
selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range, sehingga dapat digunakan
untuk penetapan kadar campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat
dalam sampel kaplet X®.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Deksametason
Deksametason memiliki pemerian yaitu serbuk hablur, putih sampai
praktis putih, tidak berbau, stabil di udara, melebur pada suhu lebih kurang 250oC
disertai peruraian. Kelarutan deksametason yaitu: praktis tidak larut dalam air,
agak sukar larut dalam aseton, dalam etanol, dalam dioksan dan dalam metanol,
sukar larut dalam kloroform, sangat sukar larut dalam eter (Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).
Gambar 1. Struktur Deksametason
Deksametason
merupakan
salah
satu
kortikosteroid
sintetis.
Kemampuannya dalam menanggulangi peradangan dan alergi kurang lebih
sepuluh kali lebih hebat dari pada yang dimiliki prednison (Katzung, 1998).
Penggunaan deksametason antara lain pada terapi artritis reumatoid,
sistemik lupus eritematosus, rinitis alergika, asma, leukemia, limpoma, anemia
hemolitik atau autoimun, selain itu deksametason dapat digunakan untuk
menegakkan
diagnosis
sindroma
cushing.
5
Efek
samping
pemberian
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
6
deksametason antara lain terjadinya insomnia, osteoporosis, retensi cairan tubuh,
glaukoma dan lain-lain (Suherman, 2007).
B. Deksklorfeniramin Maleat
Pemerian pada deksklorfeniramin maleat yaitu serbuk hablur, putih, tidak
berbau sedangkan kelarutannya diketahui mudah larut dalam air, larut dalam
etanol dan dalam kloroform, sukar larut dalam benzen dan dalam eter (Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).
Gambar 2. Struktur Deksklorfeniramin Maleat
Mekanisme kerja dari deksklorfeniramin maleat yaitu memblokir
reseptor-H1 dan bersaing dengan histamin pada reseptornya di otot polos dinding
pembuluh dan dengan demikian menghindarkan timbulnya reaksi alergi. Khasiat
lainnya menyempitkan bronchi, saluran cerna, kandung kemih dan rahim (Tjay
dan Rahardja, 2002).
Deksklorfeniramin maleat merupakan obat yang menentang kerja
histamin pada H1 reseptor histamin berguna dalam menekan alergi yang
disebabkan oleh timbulnya simptom karena histamin (ISO, 2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
7
C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Prinsip kromatogarfi lapis tipis yaitu memisahkan komponen-komponen
campuran atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah
gerakan pelarut pengembang (Mulja dan Suharman, 1995). Fase gerak yang
digunakan harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian
rupa, sehingga nilai Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan
(Gandjar dan Rohman, 2007).
Selama pemisahan dalam sistem kromatografi terjadi proses sorpsi dan
desorpi. Sorpsi merupakan proses pemindahan solut dari fase gerak ke fase diam,
sementara itu proses sebaliknya (pemindahan solut dari fase diam ke fase gerak)
disebut dengan desorpsi. Ada 4 jenis mekanisme sorpsi dasar dan umumnya 2
atau lebih mekanisme ini terlibat dalam satu jenis kromatografi. Keempat jenis
tersebut yaitu adsorpsi, partisi, pertukaran ion, dan eksklusi ukuran. Pada sistem
kromatografi lapis tipis mekanisme yang terjadi yaitu adsorpsi (Gandjar dan
Rohman, 2007).
D. Fase Diam
Sejauh ini silika gel merupakan fase diam KLT paling penting dimana
pembuatannya menggunakan presipitasi asam dari larutan natrium silika
(Na2SiO3). Karakteristik sorpsi dari silika gel yaitu terletak pada permukaan
gugus silanol (SiOH) yang mana bersifat asam lemah. Silika gel dapat mengikat
tiga lapisan molekul air, dimana 2 lapisan atas dapat dihilangkan secara reversible
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
8
dengan pemanasan 120oC, sedangkan pada suhu di atas 200oC air dapat hilang
secara irreversible dan ketika dipanaskan lebih dari 1000oC akan menghilangkan
aktivitas karena gugus silanol menghilang. Untuk itu disarankan pemanasan silika
gel tidak lebih dari 180oC (Spangenberg, 2010).
Gambar 3. Struktur Silika Gel (Habtemariam, 2013)
Lapisan Silika gel sering diresapi berbagai senyawa kimia dengan cara
dicelupkan, disemprot atau ditambahkan dalam fase gerak namun yang sering
dilakukan yaitu dengan ditambahkan pada fase gerak. Gugus silanol yang terletak
pada permukaan silika merupakan gugus yang reaktif yang mampu bereaksi
dengan reagen organosilane sehingga terjadi modifikasi yang mampu memperluas
cakupan aplikasi. Polimer organik yang digunakan sebagai pengikat (binder)
dapat menstabilkan lapisan. Untuk meningkatkan stabilitas, gugus NH2, CN dan
diol diikatkan ke matrik silika gel melalui gugus n-propyl (-CH2-CH2-CH2-)
(Spangenberg, 2010).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
9
E. Densitometri
Teknik kuantitasi dapat didasarkan atas pengukuran intensitas sinar yang
diserap (absorbsi), intensitas sinar yang dipantulkan (reflektansi), atau intensitas
sinar yang difluoresensikan (fluoresensi). Disini biasanya dipilih sinar pada
panjang gelombang yang diserap atau dipantulkan paling banyak oleh noda yang
diteliti. Banyaknya sinar yang direfleksikan akan ditangkap paling banyak oleh
suatu alat yang disebut reflection photomultiplier yang akan diteruskan ke
pencatat atau rekorder untuk diubah menjadi suatu puncak atau kromatogram
(Mintarsih, 1990).
Gambar 4. Densitometer dan Autosampler (Wall, 2005)
Monokromator digunakan untuk memilih panjang gelombang yang
cocok, sistem untuk memfokuskan sinar pada lempeng, pengganda foton, dan
rekorder. Densitometer dapat bekerja secara serapan atau fluoresensi, dalam
sistem serapan terdapat dua model yaitu pantulan dan transmisi. Cara pantulan
dapat digunakan untuk sinar tampak maupun ultraviolet sedangkan transmisi
hanya dapat digunakan untuk sinar tampak (Gandjar dan Rohman, 2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
10
Gambar 5. Diagram skematis densitometer (Scott, 2009)
F. Analisis Kualitatif
Analisis kualitatif dapat dilakukan melalui 3 pendekatan :
1) Perbandingan antara retensi solut yang tidak diketahui dengan retensi baku
yang sesuai pada kondisi yang sama.
2) Dengan cara spiking, dilakukan dengan menambah sampel yang mengandung
senyawa tertentu yang akan diselidiki dengan senyawa baku pada kondisi
kromatogram yang sama, maka akan terjadi perbedaan tinggi atau luas peak
antara sampel dengan sampel yang telah ditambah baku.
3) Menggabungkan alat kromatografi dengan spektrometer massa
Identifikasi dengan hanya menggunakan data retensi pada satu kondisi
kromatografi tidak selalu menghasilkan data yang reliabel (Gandjar dan Rohman,
2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
11
G. Validasi Metode
Tujuan utama validasi metode adalah menjamin bahwa metode analisis
yang digunakan dapat memberikan hasil analisis yang baik (Adamovics, 1997).
Prosedur analisis terbagi menjadi 4 kategori, dimana masing-masing kategori
membutuhkan parameter analisis yang berbeda-beda seperti terlihat pada Tabel I.
Kategori I merupakan prosedur analisis untuk kuantifikasi komponen utama zat
obat atau bahan aktif dalam produk jadi farmasi. Kategori II merupakan prosedur
analisis untuk penentuan impurities dalam bahan obat atau senyawa degradasi
dalam produk jadi farmasi, prosedur ini meliputi tes kuantitatif dan tes batas.
Kategori III merupakan prosedur analisis untuk menentukan karakteristik kinerja
(disolusi, pelepasan obat). Kategori IV yaitu uji identifikasi (United States
Pharmacopeial Convention, 2007).
Tabel I. Parameter analisis yang dibutuhkan dalam validasi metode analisis (United States
Pharmacopeial Convention, 2007)
Karakteristik
Akurasi
Presisi
Selektivitas
Batas Deteksi
Batas Kuantifikasi
Linearitas
Range
Kategori
I
Yes
Yes
Yes
No
No
Yes
Yes
Kategori II
Kuantitatif Batas Uji
Yes
*
Yes
No
Yes
Yes
No
Yes
Yes
No
Yes
No
Yes
*
Kategori
Kategori
III
IV
*
No
Yes
No
*
Yes
*
No
*
No
*
No
*
No
*Mungkin dibutuhkan
1. Akurasi.
Akurasi merupakan kedekatan antara nilai terukur (nilai rata-rata hasil
analisis) dengan nilai yang diterima sebagai nilai sebenarnya, kemudian
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
12
dinyatakan sebagai persen perolehan kembali/recovery (Gandjar dan Rohman,
2007).
Tabel II. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Horwitz
cit.,Gonzales and Herador, 2007)
Konsentrasi
analit
(%)
100
≥10
≥1
≥0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
0,0000001
Fraksi
Analit
Unit
Akurasi
(%)
1
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
100%
10%
1%
0,1%
100 ppm
10 ppm
1 ppm
100 ppb
10 ppb
1 ppb
98-102
98-102
97-103
95-105
90-107
80-110
80-110
80-110
60-115
40-120
2. Presisi.
Presisi atau keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat
kesesuaian antara hasil uji individual yang diukur melalui penyebaran hasil
individual dari rata-rata, jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran yang homogen (Snyder dkk., 1997).
Tabel III. Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan ketentuan AOAC Peer
Verified Methods (PVM) berdasarkan kadar analit
(Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007)
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
13
3. Selektivitas
Selektivitas suatu metode adalah kemampuan suatu metode untuk dapat
mengukur zat tertentu secara cermat dan seksama dengan adanya komponen lain
yang mungkin ada dalam matrik sampel (Harmita, 2004). Selektivitas ditentukan
melalui perhitungan nilai Rs. Nilai Rs = 1,5 disebut baseline resolution, yaitu
pemisahan sempurna dari dua puncak dengan ukuran yang sama (Pecsok dkk.,
1976).
4. Linearitas
Linearitas prosedur analisis merupakan kemampuan mendapatkan hasil
respon (absorbansi dan AUC) yang secara langsung proporsional dengan
konsentrasi analit di dalam sampel. Respon yang dapat dikuantifikasikan adalah
peak area, peak heights atau ratio of peak area dari analit ke peak eksternal
standar. Pada linearitas digunakan setidaknya lima tingkat konsentrasi, seperti
direkomendasikan oleh ICH. Dalam keadaan normal, linearitas dicapai bila
koefisian determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004).
5. Range
Range dalam metode analisis adalah interval antara konsentrasi paling
atas dan konsentrasi paling bawah analit yang sudah memenuhi prosedur analisis
yang meliputi akurasi, presisi, dan linearitas (The British Pharmacopoeia
Commission, 2011).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
14
H. Landasan Teori
Deksametason dan deksklorfeniramin maleat merupakan dua zat aktif
yang terdapat pada obat anti alergi, kedua zat aktif ini memiliki sifat kepolaran
yang berbeda sehingga dengan mengunakan sistem kromatografi lapis tipis kedua
senyawa ini dapat dipisahkan. Jika dilihat dari sifat fisikokimia deksametason
lebih bersifat non polar dibandingkan dengan deksklorfeniramin maleat yang
cenderung lebih larut pada air dan sukar larut pada benzen.
Metode yang digunakan yaitu KLT densitometri dimana metode ini dapat
memisahkan antara dua senyawa dan dapat untuk melakukan analisis kuantitatif.
Pemisahan terjadi karena adanya perbedaan afinitas dan interaksi senyawa
terhadap fase diam dan fase gerak. Bercak yang muncul setelah dilakukan elusi
dapat dianalisis kuantitatif menggunakan densitometer, sehingga dapat diperoleh
nilai Rf dan AUC.
Suatu metode yang akan digunakan untuk menetapkan kadar suatu obat
harus memiliki parameter validitas yang baik agar data yang diperoleh dapat
dipercaya. Parameter validasi untuk prosedur analisis kategori 1 meliputi
selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. Suatu metode analisis dikatakan
memiliki validitas yang baik apabila memenuhi parameter-parameter validasi
tersebut.
I.
Metode
KLT-densitometri
Hipotesis
untuk
penetapan
kadar
campuran
deksametason dan deksklorfeniramin maleat memenuhi parameter-parameter
validasi yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan bersifat non-eksperimental dengan
rancangan penelitian deskriptif. Non-eksperimental karena tidak terdapat
manipulasi dan perlakuan terhadap subjek uji, sedangkan deskriptif karena
peneliti hanya mendeskripsikan keadaan yang ada.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas pada penelitian ini yaitu sistem KLT yang telah
dioptimasi, yaitu jenis dan komposisi fase gerak.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini yaitu parameter-parameter
validasi meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range.
3. Variabel pengacau terkendali
Variabel pengacau terkendali pada penelitian ini yaitu digunakan pelarut
pro analisis yang memiliki kemurnian tinggi, bahan baku yang digunakan yaitu
bahan baku yang memiliki Certificate of Analysis (CoA), dan penjenuhan bejana
kromatografi menggunakan kertas saring sebagai indikator kejenuhan bejana
kromatografi.
15
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
16
C. Definisi Operasional
1.
Sistem KLT yang digunakan yaitu fase normal dengan fase diam silika gel 60
F254 dan fase gerak kombinasi etil asetat : metanol : amonia 25% (25 : 4 : 1).
2.
Kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dinyatakan dalam satuan
mg/mL dalam pelarut etanol.
3.
Parameter validasi yang digunakan adalah selektivitas, linearitas, akurasi,
presisi dan range.
D. Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan adalah baku deksametason (Tianjin
Tianyao Pharmaceuticals CO., LTD), baku deksklorfeniramin maleat (Siegfried
Ltd 4800 Zofingen Switzerland), lempeng KLT silika gel 60 F254 20x20cm (E.
Merck), etanol p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), amonia p.a (E. Merck),
metanol p.a (E. Merck), dan obat kaplet X® yang berisi campuran deksametason
dan deksklorfeniramin maleat .
E. Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat alat
densitometer (Camag TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No.160602),
autosampler (Linomat 5 No.170610), neraca analitik (OHAOUS Carat Series PAJ
1003, max 60/120 g, min 0,0001 g, d = 0,01/0,1 mg), neraca analitik (Scaltec SBC
22 max 60/210 g; min 0,001 g; d = 0,01/0,1mg), bejana kromatografi (Camag),
alat-alat gelas yang lazim digunakan (Pyrex), kertas saring.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
F.
17
Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan fase gerak
Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak yang telah didapat dari
hasil optimasi pada penelitian sebelumnya yaitu etil asetat, metanol, dan amonia
25% (25:4:1).
2. Pembuatan larutan baku
a. Pembuatan stok larutan baku deksametason 0,3 mg/mL. Baku
deksametason ditimbang seksama lebih kurang 37,5 mg, dimasukkan ke dalam
labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi selama 2
menit dan dilanjutkan pengojogan menggunakan vortex selama 2 menit, kemudian
encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu, larutan tersebut diambil 2
mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan diencerkan dengan etanol
sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku deksametason dengan
konsentrasi 0,3 mg/mL.
b. Pembuatan larutan baku tunggal deksametason. Larutan baku
deksametason 0,3 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing dimasukkan ke
dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda,
sehingga diperoleh seri larutan baku deksametason dengan konsentrasi 0,09
mg/mL.
c. Pembuatan stok larutan baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL.
Baku deksklorfeniramin maleat ditimbang seksama lebih kurang 50 mg,
dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol,
sonifikasi selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan vortex
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
18
selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu,
larutan tersebut diambil 5 mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan
diencerkan dengan etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku
deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi 1 mg/mL.
d. Pembuatan larutan baku tunggal deksklorfeniramin maleat. Larutan
baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing
dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai
batas tanda, sehingga diperoleh seri larutan baku deksklorfeniramin maleat
dengan konsentrasi 0,3 mg/mL.
e. Pembuatan
seri
larutan
baku
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat. Larutan baku deksametason 0,3 mg/mL dan larutan
baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL masing-masing dipipet 1; 2; 3; 4 dan 5
mL dan masing-masing dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL kemudian
diencerkan dengan etanol sampai tanda batas dan digojog, sehingga diperoleh seri
konsentrasi campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1
mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan 0,15 : 0,5
mg/mL.
3. Penentuan panjang gelombang pengamatan
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL masing-masing
ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak
antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan didalam bejana kromatografi
(Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
19
dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur AUC tiap masingmasing senyawa kemudian dilakukan pembacaan panjang gelombang 200-450 nm
sehingga diperoleh panjang gelombang overlapping spektra deksametason dan
deksklorfeniramin maleat.
4. Pembuatan kurva baku
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 100 mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan
0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika
gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan di dalam
bejana kromatografi (Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan
setinggi 5 cm. Pelat dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur
AUC tiap masing-masing senyawa (deksametason dan deksklorfeniramin maleat
akan memisah) menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan.
Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali. Dipilih persamaan kurva baku dengan nilai
r2 ≥ 0.997 untuk kurva baku deksametason dan kurva baku deksklorfeniramin
maleat.
5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan sebanyak 1
µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan
0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah
dijenuhkan oleh fase gerak. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat
dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan dilakukan scanning
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
20
menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan. Nilai AUC
yang didapat dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku yang telah dibuat
sebelumnya, sehingga didapatkan jumlah deksametason dan deksklorfeniramin
maleat yang kemudian dapat digunakan untuk menghitung %recovery dan %KV.
Penelitian dilakukan selama 2 periode, dimana tiap periode dilakukan paling lama
4 hari dan di replikasi sebanyak 3 kali.
6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku dalam
sampel
a. Preparasi sampel kaplet. 20 kaplet yang setara dengan 0,5 mg
deksametason dan 2 mg deksklorfeniramin maleat digerus dalam mortir hingga
homogen.
b. Pembuatan larutan stok baku adisi. Timbang dengan seksama lebih
kurang 10 mg baku deksametason dan 40 mg baku deksklorfeniramin maleat
masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan larutkan dengan 5,0 mL etanol,
sonifikasi larutan selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan
vortex selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda dan
vortex, sehingga diperoleh larutan stok baku campuran deksametason konsentrasi
1 mg/mL atau setara dengan 1000 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi
4 mg/mL atau setara dengan 4000 ppm.
c. Pembuatan larutan intermediet baku adisi (LA). Pipet 1,0 mL larutan
stok baku campuran deksametason (1 mg/mL) : deksklorfeniramin maleat (4
mg/mL), masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol
hingga batas tanda dan dilakukan penggojogan menggunakan vortex, sehingga di
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
21
peroleh larutan intermediet baku campuran deksametason dengan konsentrasi 0,1
mg/mL atau setara dengan 100 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi 0,4
mg/mL atau setara dengan 400 ppm.
d. Pembuatan larutan sampel tanpa penambahan baku deksametason dan
deksklorfeniramin maleat (LB). Timbang dengan seksama lebih kurang 90 mg
sampel yang telah dihomogenkan, masukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan
larutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi larutan selama 2 menit dilanjutkan
dengan penggojogan menggunakan vortex selama 15 menit, kemudian larutan
diencerkan dengan etanol hingga batas tanda, gojog dengan vortex dan saring
menggunakan kertas saring. Replikasi dilakukan sebanyak 9 kali.
e. Pembuatan larutan sampel dengan penambahan baku deksametason
dan deksklor
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN
DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Metri Setyadhiani Karunawati
NIM : 098114103
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI
PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN
DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET
Halaman judul
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Metri Setyadhiani Karunawati
NIM : 098114103
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
i
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Persetujuan Pembimbing
ii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Pengesahan Skripsi Berjudul
iii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
HALAMAN PERSEMBAHAN
z
Kupersembahkan karya ini untuk:
Kedua orangtuaku,
Kakakku, adikku dan almamaterku
iv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
v
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
vi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat,
anugerah dan penyertaan yang telah diberikan-Nya, sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis
(KLT)-Densitometri pada Penetapan Kadar Campuran Deksametason dan
Deksklorfeniramin Maleat dalam Kaplet. Dimana skripsi ini disusun sebagai salah
satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm).
Penyusunan skripsi ini telah mendapatkan dukungan dari berbagai pihak
baik bimbingan, semangat, kritik, dan saran yang membangun. Oleh karena itu,
pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya kepada:
1.
Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2.
Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt., selaku dosen pembimbing atas segala
bimbingan, perhatian, kesabaran, semangat, kritik, dan saran selama
penelitian dan penyusunan naskah.
3.
Ibu Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si., selaku dosen pendamping
pembimbing skripsi dan selaku dosen pembimbing akademik (DPA) atas
segala pendampingannya baik dari semester satu hingga penyusunan skripsi.
4.
Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan, masukan,
kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
5.
Lucia Wiwid Wijayanti M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan,
masukan, kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
vii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
6.
Ibu Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma atas ijin yang diberikan untuk melakukan
penelitian di laboratorium Kimia Analisis Instrumental.
7.
Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang diberikan,
sehingga berguna dalam penyusunan skripsi ini.
8.
Pihak PT Konimex atas pemberian baku deksametason sebagai bahan
penelitian.
9.
Pihak
PT
Ifars
Pharmaceutical
Laboratories
atas
pemberian
baku
deksklorfeniramin maleat sebagai bahan penelitian.
10. Mas Bimo, Mas Parlan, Mas Kunto, selaku laboran yang telah banyak
membantu penulis selama penelitian di laboratorium.
11. Pak Otok, atas bantuannya dalam pengadaan bahan-bahan yang diperlukan
selama penelitian.
12. Shinta dan Sashya sebagai teman seperjuangan satu judul dalam penyelesaian
penelitian ini, atas kebersamaan, semangat, keceriaan, nasehat, dan
dukungannya selama penelitian di laboratorium dan kuliah.
13. Marimar, Novia, Chen2, Nindy, Is sumitro, Mike, Bahok, Anta, Adel, Lia
susanti untuk kebersamaan, keceriaan, semangat, dan dukungan selama
kuliah semester satu hingga saat ini
14. Mbah Rina, tante kekar, kutil, john, ci ana, berta, mayke, gendut, sefi, ita,
esty, eni, double dewi, geka, seruni, intan, deby, dan sesepuh amakusa
sebagai teman satu kost, atas segala kebersamaan, keceriaan, kenyamanan
selama ini.
viii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
15. Ci lele, Ci sasa untuk kebersamaan, keceriaan dan semangat yang diberikan
selama ini.
16. Teman-teman kelas FST B 2009 dan teman-teman angkatan 2009 atas
semangat, kerja sama, dan kebersamaannya selama ini.
17. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis, terima
kasih atas segala bantuan yang telah diberikan selama ini, sehingga penulis
dapat menyelesaikan skrispi ini.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan di dalam penulisan skripsi
ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun
untuk perkembangan selanjutnya.
Penulis
ix
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i
PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................................................... ii
PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ............................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... v
PRAKATA ........................................................................................................... vi
DAFTAR ISI.......................................................................................................... x
DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiv
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvii
INTISARI ....................................................................................................... xviii
ABSTRACT ........................................................................................................ xix
BAB I PENGANTAR .......................................................................................... 1
A. Latar Belakang .................................................................................................. 1
1. Permasalahan ................................................................................................ 3
2. Keaslian penelitian ....................................................................................... 3
3. Manfaat penelitian ........................................................................................ 4
x
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
B. Tujuan ............................................................................................................... 4
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 5
A. Deksametason ................................................................................................... 5
B. Deksklorfeniramin Maleat ................................................................................ 6
C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................................... 7
D. Fase Diam ......................................................................................................... 7
E. Densitometri ...................................................................................................... 9
F. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 10
G. Validasi Metode .............................................................................................. 11
1. Akurasi. ...................................................................................................... 11
2. Presisi. ........................................................................................................ 12
3. Selektivitas ................................................................................................. 13
4. Linearitas .................................................................................................... 13
5. Range .......................................................................................................... 13
H. Landasan Teori ................................................................................................ 14
I. Hipotesis ......................................................................................................... 14
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 15
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ...................................................................... 15
B. Variabel Penelitian .......................................................................................... 15
1. Variabel bebas ............................................................................................ 15
2. Variabel tergantung .................................................................................... 15
3. Variabel pengacau terkendali ..................................................................... 15
xi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
C. Definisi Operasional ....................................................................................... 16
D. Bahan Penelitian ............................................................................................. 16
E. Alat Penelitian ................................................................................................. 16
F. Tata Cara Penelitian ........................................................................................ 17
1. Pembuatan fase gerak ................................................................................. 17
2. Pembuatan larutan baku ............................................................................. 17
3. Penentuan panjang gelombang pengamatan ............................................... 18
4. Pembuatan kurva baku ............................................................................... 19
5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran.............. 19
6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku ........ 20
G. Analisis Hasil .................................................................................................. 22
1. Selektivitas ................................................................................................. 22
2. Linearitas .................................................................................................... 22
3. Akurasi ....................................................................................................... 23
4. Akurasi adisi baku dalam matriks sampel .................................................. 23
5. Presisi ......................................................................................................... 23
6. Range .......................................................................................................... 24
BAB IV PEMBAHASAN ................................................................................... 25
A. Pembuatan Fase Gerak .................................................................................... 25
B. Pembuatan Larutan Baku ................................................................................ 26
C. Penetapan Panjang Gelombang Pengamatan .................................................. 27
D. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 29
E. Penetapan kurva baku ..................................................................................... 33
xii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
F. Validasi Metode Analisis ................................................................................ 37
1. Selektivitas ................................................................................................. 37
2. Linearitas .................................................................................................... 38
3. Akurasi ....................................................................................................... 39
4. Presisi ......................................................................................................... 41
5. Range .......................................................................................................... 42
6. Penentuan akurasi dan presisi adisi baku dalam sampel ............................ 43
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 45
A. Kesimpulan ..................................................................................................... 45
B. Saran ............................................................................................................... 45
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 46
LAMPIRAN......................................................................................................... 49
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 85
xiii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR TABEL
Tabel I.
Parameter analisis dalam validasi metode analisis ............................ 11
Tabel II.
Kriteria rentang recovery yang dapat diterima .................................. 12
Tabel III.
Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan
ketentuan AOAC Peer Verified Methods (PVM) berdasarkan
kadar analit ........................................................................................ 12
Tabel IV.
Data Penentuan Kurva Baku Deksametason ..................................... 34
Tabel V.
Data Penentuan Kurva Baku Deksklorfeniramin Maleat .................. 35
Tabel VI.
Data nilai resolusi baku campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat .................................................................. 38
Tabel VII. Data nilai resolusi sampel .................................................................. 38
Tabel VIII. Data % recovery baku campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 40
Tabel IX.
Data
%KV
baku
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 42
Tabel X.
% Recovery dan %KV baku adisi ...................................................... 43
xiv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Struktur Deksametason ...................................................................... 5
Gambar 2.
Struktur Deksklorfeniramin Maleat ................................................... 6
Gambar 3.
Struktur Silika Gel ............................................................................. 8
Gambar 4.
Densitometer dan Autosampler .......................................................... 9
Gambar 5.
Diagram skematis densitometer ...................................................... 10
Gambar 6.
Perpotongan
Spektra
Deksametason
(A)
dan
Deksklorfeniramin maleat (B) dalam pelarut etanol ........................ 28
Gambar 7.
Bagian kromofor deksametason ....................................................... 29
Gambar 8.
Bagian kromofor dan auksokrom deksklorfeniramin maleat ........... 29
Gambar 9.
Densitogram baku tunggal deksametason ........................................ 30
Gambar 10. Densitogram baku tunggal deksklorfeniramin maleat ..................... 30
Gambar 11. Densitogram sampel tanpa penambahan baku ................................. 30
Gambar 12. Densitogram sampel dengan penambahan baku .............................. 31
Gambar 13. Pola Spektra baku tunggal deksametason ........................................ 32
Gambar 14. Pola Spektra baku tunggal deksklorfeniramin maleat...................... 32
Gambar 15. Pola Spektra sampel tanpa penambahan baku ................................. 33
Gambar 16. Pola Spektra Sampel dengan penambahan baku .............................. 33
Gambar 17. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason 3
replikasi ............................................................................................ 34
xv
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
Gambar 18. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin
maleat 3 replikasi ............................................................................. 35
Gambar 19. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason ................... 36
Gambar 20. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin
maleat ............................................................................................... 37
xvi
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
COA (Certificate of Analysis) Deksametason .............................. 50
Lampiran 2.
COA (Certificate Of Analysis) Deksklorfeniramin Maleat .......... 51
Lampiran 3.
Data penimbangan bahan .............................................................. 52
Lampiran 4.
Spektra deksametason (0,03 ; 0,06 ; 0,09 mg/mL) dan
deksklorfeniramin maleat (0,1 ; 0,3 ; 0,5 mg/mL) ........................ 54
Lampiran 5.
Penentuan
kurva
baku
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat.............................................................. 54
Lampiran 6.
Contoh perhitungan nilai resolusi ................................................. 60
Lampiran 7.
Densitogram
presisi
dan
akurasi
baku
campuran
deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1 ............... 60
Lampiran 8.
Presisi dan akurasi baku campuran deksametason :
deksklorfeniramin maleat periode ke-1......................................... 63
Lampiran 9.
Densitogram
presisi
dan
akurasi
baku
campuran
deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2 ............... 68
Lampiran 10. Presisi dan akurasi baku campuran deksametason :
deksklorfeniramin maleat periode ke-2......................................... 71
Lampiran 11. Densitogram sampel tanpa penambahan ....................................... 73
Lampiran12. Densitogram
sampel
dengan
penambahan
baku
deksametason : deksklorfeniramin maleat .................................... 76
Lampiran 13. Presisi akurasi adisi baku deksametason dalam sampel ............... 79
Lampiran 14. Presisi akurasi adisi baku deksklorfeniramin maleat dalam
sampel ........................................................................................... 82
xvii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
INTISARI
Penjaminan mutu suatu obat sangatlah penting, karena berkaitan dengan
penggunaan obat secara tepat, lengkap dan obyektif. Salah satu penjaminan mutu
obat yaitu kesesuaian antara klaim label dengan kadar obat sebenarnya. Untuk
menetapkan kadar obat diperlukan suatu metode yang sudah tervalidasi. Tujuan
penelitian ini adalah membuktikan metode KLT Densitometri yang akan
digunakan untuk melakukan penetapan kadar campuran deksametason dan
deksklorfeniramin maleat dalam kaplet memenuhi parameter-parameter validasi.
Metode yang digunakan yaitu Kromatografi Lapis Tipis (KLT)densitometri dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak etil asetat :
metanol : amonia 25% dengan perbandingan (25 : 4 : 1), dengan jarak
pengembangan 5 cm dan panjang gelombang (λ) 262 nm.
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, metode ini memenuhi
parameter selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Nilai Rs > 1,5
menunjukan metode memenuhi parameter selektivitas. Lineritas deksametason
memiliki nilai r2=0,999 dan 0,999 untuk linearitas deksklorfeniramin maleat.
Akurasi dan presisi campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada
konsentrasi rendah (30 : 100 ppm), sedang (90 : 300 ppm) dan tinggi (150 : 500
ppm) yang dilakukan selama 2 periode memenuhi persyaratan presisi inter-day,
dimana semua konsentrasi memiliki % recovery dan % KV yang memenuhi
parameter akurasi dan presisi.
Kata kunci: Deksametason, Deksklorfeniramin maleat, KLT-densitometri,
Validasi metode, Penjaminan mutu
xviii
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
ABSTRACT
Quality assurance of a drug is important, for it is related to complete and
objective drug usage. One of the drug quality assurance is correspondence
between label claims and actual drug levels. To determine drug levels, a validated
method is required. The aim of this study is to show that TLC-densitometry
method meets the validation parameters and can be used to perform the assay
mixture of dexamethasone and dexchlorpheramine maleate in kaplet.
The method that is used is Thin Layer Chromatography (TLC)densitometry with silica gel 60 F254 as the stationary phase, ethyl acetate:
methanol: ammonia 25% (25: 4: 1) as the mobile phase, 5 cm development
distance and UV detector at wavelength (λ) 262 nm.
Based on the results of research, this method meets the parameters
selectivity, linearity, accuracy, precision and range. Rs value > 1.5 indicates that
the method meets the selectivity parameter. Dexamethasone linearity has r2 value
0.999 and 0.999 for dexchlorpheniramin maleate linearity. Accuracy and precision
of dexamethasone and deksklorfeniramine maleate mixture at low concentrations
(30: 100 ppm), medium (90: 300 ppm) and high (150: 500 ppm) that were
performed in 2 periods meet the requirements of inter-day precision, where all
concentrations have % recovery and % KV that meets the accuracy and precision
parameters.
Keyword: Dexamethasone, Dexchlorpheniramin maleate, KLT-densitometry,
Validation method, Quality assurance
xix
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Berdasarkan data dari World Allergy Organization (WAO) 2011
menunjukkan bahwa prevalensi alergi terus meningkat dengan angka 30-40
persen dari total populasi dunia. Data tersebut sejalan dengan data dari Center for
Disease Control and Prevention (CDC) yang mencatat bahwa angka kejadian
alergi meningkat tiga kali lipat sejak 1993 hingga 2006. Di Indonesia, beberapa
peneliti juga memperkirakan bahwa peningkatan kasus alergi mencapai 30 persen
per tahunnya (Pdpersi, 2012).
Campuran deksklorfeniramin maleat dan deksametason merupakan salah
satu obat yang telah beredar untuk mengatasi berbagai menifestasi reaksi alergi.
Dengan beredarnya suatu obat ke masyarakat luas, maka penjaminan mutu obat
sangatlah penting. Salah satu penilaian mutu obat adalah kesesuaian antara klaim
label, yang dalam hal ini kadar zat aktif obat yang tertera pada label, dengan kadar
sebenarnya. Hal ini berguna untuk memastikan bahwa informasi yang tercantum
pada label obat (etiket/brosur/kemasan) adalah informasi yang lengkap dan
obyektif, yang dapat menjamin penggunaan obat secara tepat, rasional dan aman.
Menurut Keputusan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik
Indonesia nomor hk.04.1.23.11.11.09219 tahun 2011 tentang penerapan sistem
manajemen
mutu
(quality
management
1
system),
manual
mutu
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
2
pada pengawasan post market salah satunya yaitu pengawasan promosi dan
penandaan/label obat dan makanan. Pengawasan ini meliputi pengambilan sampel
(sampling) dan pengujian terkait kesesuaian terhadap kadar obat dan monitoring
konsistensi informasi dalam label/penandaan obat (BPOM, 2011).
Untuk menguji kesesuaian kadar sebenarnya dengan klaim label,
diperlukan suatu metode untuk menetapkan kadar. Dalam sediaan yang akan diuji
terdapat dua senyawa yang akan ditetapkan kadarnya yaitu deksametason dan
deksklorfeniramin maleat. Kromatografi lapis tipis (KLT)-densitometri dapat
digunakan untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat,
dimana metode KLT-densitometri dapat memisahkan kedua senyawa dan dapat
digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.
Metode KLT-densitometri dapat digunakan untuk analisis obat di
laboratorium farmasi, karena metodenya cepat, dapat digunakan untuk analisis
preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah cuplikan yang
sedikit. Metode analisis KLT-densitometri ini dapat digunakan untuk analisis
preparatif, kualitatif dan kuantitatif, secara preparatif metode ini akan
memisahkan senyawa campuran, sedangkan secara kualitatif dapat digunakan
untuk menentukan nilai Rf (retardation factor), dimana nilai Rf tersebut dapat
digunakan sebagai pembanding nilai bercak pada baku dan bercak sampel. Selain
itu, secara kuantitatif metode ini dapat menentukan kadar masing-masing
komponen campuran, nilai resolusi, nilai CV dan recovery yang menggambarkan
akurasi dan presisi metode (Khopkar, 1990).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
3
Sebelum digunakan untuk penetapan kadar, metode yang dipilih harus
divalidasi terlebih dahulu. Parameter validasi berdasarkan prosedur analisis
kategori 1 meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Validasi
dilakukan agar hasil yang didapat merupakan hasil yang valid atau dapat
dipercaya, karena validasi merupakan kebutuhan dasar untuk menjamin kualitas
dan reliabel hasil dalam aplikasi analitis (Ermer dan Miller, 2005).
1.
Permasalahan
Apakah metode KLT-densitometri untuk penetapan kadar deksametason
dan deksklorfeniramin maleat dalam campuran memenuhi parameter-parameter
validasi kategori 1 yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan
range?
2.
Keaslian penelitian
Beberapa penetapan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat
dalam campuran yang pernah dilakukan yaitu penetapan kadar deksklorfeniramin
maleat dan deksametason dalam tablet dengan metode Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT) sudah pernah dilakukan oleh Syarif (2009). Penetapan kadar
deksametason secara tunggal dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) telah dilakukan oleh Huetos dan
Ramos (1999). Penetapan kadar deksametason dalam ointment dengan metode
kromatografi lapis tipis densitometri oleh Krzek, Maslanka dan Lipner (2005).
Penelitian yang dilakukan oleh penulis adalah melakukan validasi metode
KLT-densitometri untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
4
maleat dalam kaplet yang belum pernah dilakukan pada penelitian sebelumnya,
dimana KLT-densitometri memiliki metode yang cepat, dapat digunakan untuk
analisis preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah
cuplikan yang sedikit.
3.
Manfaat penelitian
a. Manfaat metodologis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan
sumbangan ilmiah tentang penggunaan metode KLT-densitometri pada penetapan
kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam kaplet.
b. Manfaat praktis. Hasil penelitian diharapkan dapat memberikan
informasi mengenai selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range metode
KLT-densitometri
untuk
penetapan
kadar
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat dalam sampel kaplet X®.
B. Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa metode KLTdensitometri telah memenuhi parameter-parameter validasi kategori 1 yaitu
selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range, sehingga dapat digunakan
untuk penetapan kadar campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat
dalam sampel kaplet X®.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Deksametason
Deksametason memiliki pemerian yaitu serbuk hablur, putih sampai
praktis putih, tidak berbau, stabil di udara, melebur pada suhu lebih kurang 250oC
disertai peruraian. Kelarutan deksametason yaitu: praktis tidak larut dalam air,
agak sukar larut dalam aseton, dalam etanol, dalam dioksan dan dalam metanol,
sukar larut dalam kloroform, sangat sukar larut dalam eter (Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).
Gambar 1. Struktur Deksametason
Deksametason
merupakan
salah
satu
kortikosteroid
sintetis.
Kemampuannya dalam menanggulangi peradangan dan alergi kurang lebih
sepuluh kali lebih hebat dari pada yang dimiliki prednison (Katzung, 1998).
Penggunaan deksametason antara lain pada terapi artritis reumatoid,
sistemik lupus eritematosus, rinitis alergika, asma, leukemia, limpoma, anemia
hemolitik atau autoimun, selain itu deksametason dapat digunakan untuk
menegakkan
diagnosis
sindroma
cushing.
5
Efek
samping
pemberian
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
6
deksametason antara lain terjadinya insomnia, osteoporosis, retensi cairan tubuh,
glaukoma dan lain-lain (Suherman, 2007).
B. Deksklorfeniramin Maleat
Pemerian pada deksklorfeniramin maleat yaitu serbuk hablur, putih, tidak
berbau sedangkan kelarutannya diketahui mudah larut dalam air, larut dalam
etanol dan dalam kloroform, sukar larut dalam benzen dan dalam eter (Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).
Gambar 2. Struktur Deksklorfeniramin Maleat
Mekanisme kerja dari deksklorfeniramin maleat yaitu memblokir
reseptor-H1 dan bersaing dengan histamin pada reseptornya di otot polos dinding
pembuluh dan dengan demikian menghindarkan timbulnya reaksi alergi. Khasiat
lainnya menyempitkan bronchi, saluran cerna, kandung kemih dan rahim (Tjay
dan Rahardja, 2002).
Deksklorfeniramin maleat merupakan obat yang menentang kerja
histamin pada H1 reseptor histamin berguna dalam menekan alergi yang
disebabkan oleh timbulnya simptom karena histamin (ISO, 2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
7
C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Prinsip kromatogarfi lapis tipis yaitu memisahkan komponen-komponen
campuran atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah
gerakan pelarut pengembang (Mulja dan Suharman, 1995). Fase gerak yang
digunakan harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT
merupakan teknik yang sensitif. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian
rupa, sehingga nilai Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan
(Gandjar dan Rohman, 2007).
Selama pemisahan dalam sistem kromatografi terjadi proses sorpsi dan
desorpi. Sorpsi merupakan proses pemindahan solut dari fase gerak ke fase diam,
sementara itu proses sebaliknya (pemindahan solut dari fase diam ke fase gerak)
disebut dengan desorpsi. Ada 4 jenis mekanisme sorpsi dasar dan umumnya 2
atau lebih mekanisme ini terlibat dalam satu jenis kromatografi. Keempat jenis
tersebut yaitu adsorpsi, partisi, pertukaran ion, dan eksklusi ukuran. Pada sistem
kromatografi lapis tipis mekanisme yang terjadi yaitu adsorpsi (Gandjar dan
Rohman, 2007).
D. Fase Diam
Sejauh ini silika gel merupakan fase diam KLT paling penting dimana
pembuatannya menggunakan presipitasi asam dari larutan natrium silika
(Na2SiO3). Karakteristik sorpsi dari silika gel yaitu terletak pada permukaan
gugus silanol (SiOH) yang mana bersifat asam lemah. Silika gel dapat mengikat
tiga lapisan molekul air, dimana 2 lapisan atas dapat dihilangkan secara reversible
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
8
dengan pemanasan 120oC, sedangkan pada suhu di atas 200oC air dapat hilang
secara irreversible dan ketika dipanaskan lebih dari 1000oC akan menghilangkan
aktivitas karena gugus silanol menghilang. Untuk itu disarankan pemanasan silika
gel tidak lebih dari 180oC (Spangenberg, 2010).
Gambar 3. Struktur Silika Gel (Habtemariam, 2013)
Lapisan Silika gel sering diresapi berbagai senyawa kimia dengan cara
dicelupkan, disemprot atau ditambahkan dalam fase gerak namun yang sering
dilakukan yaitu dengan ditambahkan pada fase gerak. Gugus silanol yang terletak
pada permukaan silika merupakan gugus yang reaktif yang mampu bereaksi
dengan reagen organosilane sehingga terjadi modifikasi yang mampu memperluas
cakupan aplikasi. Polimer organik yang digunakan sebagai pengikat (binder)
dapat menstabilkan lapisan. Untuk meningkatkan stabilitas, gugus NH2, CN dan
diol diikatkan ke matrik silika gel melalui gugus n-propyl (-CH2-CH2-CH2-)
(Spangenberg, 2010).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
9
E. Densitometri
Teknik kuantitasi dapat didasarkan atas pengukuran intensitas sinar yang
diserap (absorbsi), intensitas sinar yang dipantulkan (reflektansi), atau intensitas
sinar yang difluoresensikan (fluoresensi). Disini biasanya dipilih sinar pada
panjang gelombang yang diserap atau dipantulkan paling banyak oleh noda yang
diteliti. Banyaknya sinar yang direfleksikan akan ditangkap paling banyak oleh
suatu alat yang disebut reflection photomultiplier yang akan diteruskan ke
pencatat atau rekorder untuk diubah menjadi suatu puncak atau kromatogram
(Mintarsih, 1990).
Gambar 4. Densitometer dan Autosampler (Wall, 2005)
Monokromator digunakan untuk memilih panjang gelombang yang
cocok, sistem untuk memfokuskan sinar pada lempeng, pengganda foton, dan
rekorder. Densitometer dapat bekerja secara serapan atau fluoresensi, dalam
sistem serapan terdapat dua model yaitu pantulan dan transmisi. Cara pantulan
dapat digunakan untuk sinar tampak maupun ultraviolet sedangkan transmisi
hanya dapat digunakan untuk sinar tampak (Gandjar dan Rohman, 2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
10
Gambar 5. Diagram skematis densitometer (Scott, 2009)
F. Analisis Kualitatif
Analisis kualitatif dapat dilakukan melalui 3 pendekatan :
1) Perbandingan antara retensi solut yang tidak diketahui dengan retensi baku
yang sesuai pada kondisi yang sama.
2) Dengan cara spiking, dilakukan dengan menambah sampel yang mengandung
senyawa tertentu yang akan diselidiki dengan senyawa baku pada kondisi
kromatogram yang sama, maka akan terjadi perbedaan tinggi atau luas peak
antara sampel dengan sampel yang telah ditambah baku.
3) Menggabungkan alat kromatografi dengan spektrometer massa
Identifikasi dengan hanya menggunakan data retensi pada satu kondisi
kromatografi tidak selalu menghasilkan data yang reliabel (Gandjar dan Rohman,
2007).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
11
G. Validasi Metode
Tujuan utama validasi metode adalah menjamin bahwa metode analisis
yang digunakan dapat memberikan hasil analisis yang baik (Adamovics, 1997).
Prosedur analisis terbagi menjadi 4 kategori, dimana masing-masing kategori
membutuhkan parameter analisis yang berbeda-beda seperti terlihat pada Tabel I.
Kategori I merupakan prosedur analisis untuk kuantifikasi komponen utama zat
obat atau bahan aktif dalam produk jadi farmasi. Kategori II merupakan prosedur
analisis untuk penentuan impurities dalam bahan obat atau senyawa degradasi
dalam produk jadi farmasi, prosedur ini meliputi tes kuantitatif dan tes batas.
Kategori III merupakan prosedur analisis untuk menentukan karakteristik kinerja
(disolusi, pelepasan obat). Kategori IV yaitu uji identifikasi (United States
Pharmacopeial Convention, 2007).
Tabel I. Parameter analisis yang dibutuhkan dalam validasi metode analisis (United States
Pharmacopeial Convention, 2007)
Karakteristik
Akurasi
Presisi
Selektivitas
Batas Deteksi
Batas Kuantifikasi
Linearitas
Range
Kategori
I
Yes
Yes
Yes
No
No
Yes
Yes
Kategori II
Kuantitatif Batas Uji
Yes
*
Yes
No
Yes
Yes
No
Yes
Yes
No
Yes
No
Yes
*
Kategori
Kategori
III
IV
*
No
Yes
No
*
Yes
*
No
*
No
*
No
*
No
*Mungkin dibutuhkan
1. Akurasi.
Akurasi merupakan kedekatan antara nilai terukur (nilai rata-rata hasil
analisis) dengan nilai yang diterima sebagai nilai sebenarnya, kemudian
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
12
dinyatakan sebagai persen perolehan kembali/recovery (Gandjar dan Rohman,
2007).
Tabel II. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Horwitz
cit.,Gonzales and Herador, 2007)
Konsentrasi
analit
(%)
100
≥10
≥1
≥0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
0,0000001
Fraksi
Analit
Unit
Akurasi
(%)
1
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
100%
10%
1%
0,1%
100 ppm
10 ppm
1 ppm
100 ppb
10 ppb
1 ppb
98-102
98-102
97-103
95-105
90-107
80-110
80-110
80-110
60-115
40-120
2. Presisi.
Presisi atau keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat
kesesuaian antara hasil uji individual yang diukur melalui penyebaran hasil
individual dari rata-rata, jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran yang homogen (Snyder dkk., 1997).
Tabel III. Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan ketentuan AOAC Peer
Verified Methods (PVM) berdasarkan kadar analit
(Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007)
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
13
3. Selektivitas
Selektivitas suatu metode adalah kemampuan suatu metode untuk dapat
mengukur zat tertentu secara cermat dan seksama dengan adanya komponen lain
yang mungkin ada dalam matrik sampel (Harmita, 2004). Selektivitas ditentukan
melalui perhitungan nilai Rs. Nilai Rs = 1,5 disebut baseline resolution, yaitu
pemisahan sempurna dari dua puncak dengan ukuran yang sama (Pecsok dkk.,
1976).
4. Linearitas
Linearitas prosedur analisis merupakan kemampuan mendapatkan hasil
respon (absorbansi dan AUC) yang secara langsung proporsional dengan
konsentrasi analit di dalam sampel. Respon yang dapat dikuantifikasikan adalah
peak area, peak heights atau ratio of peak area dari analit ke peak eksternal
standar. Pada linearitas digunakan setidaknya lima tingkat konsentrasi, seperti
direkomendasikan oleh ICH. Dalam keadaan normal, linearitas dicapai bila
koefisian determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004).
5. Range
Range dalam metode analisis adalah interval antara konsentrasi paling
atas dan konsentrasi paling bawah analit yang sudah memenuhi prosedur analisis
yang meliputi akurasi, presisi, dan linearitas (The British Pharmacopoeia
Commission, 2011).
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
14
H. Landasan Teori
Deksametason dan deksklorfeniramin maleat merupakan dua zat aktif
yang terdapat pada obat anti alergi, kedua zat aktif ini memiliki sifat kepolaran
yang berbeda sehingga dengan mengunakan sistem kromatografi lapis tipis kedua
senyawa ini dapat dipisahkan. Jika dilihat dari sifat fisikokimia deksametason
lebih bersifat non polar dibandingkan dengan deksklorfeniramin maleat yang
cenderung lebih larut pada air dan sukar larut pada benzen.
Metode yang digunakan yaitu KLT densitometri dimana metode ini dapat
memisahkan antara dua senyawa dan dapat untuk melakukan analisis kuantitatif.
Pemisahan terjadi karena adanya perbedaan afinitas dan interaksi senyawa
terhadap fase diam dan fase gerak. Bercak yang muncul setelah dilakukan elusi
dapat dianalisis kuantitatif menggunakan densitometer, sehingga dapat diperoleh
nilai Rf dan AUC.
Suatu metode yang akan digunakan untuk menetapkan kadar suatu obat
harus memiliki parameter validitas yang baik agar data yang diperoleh dapat
dipercaya. Parameter validasi untuk prosedur analisis kategori 1 meliputi
selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. Suatu metode analisis dikatakan
memiliki validitas yang baik apabila memenuhi parameter-parameter validasi
tersebut.
I.
Metode
KLT-densitometri
Hipotesis
untuk
penetapan
kadar
campuran
deksametason dan deksklorfeniramin maleat memenuhi parameter-parameter
validasi yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan bersifat non-eksperimental dengan
rancangan penelitian deskriptif. Non-eksperimental karena tidak terdapat
manipulasi dan perlakuan terhadap subjek uji, sedangkan deskriptif karena
peneliti hanya mendeskripsikan keadaan yang ada.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas pada penelitian ini yaitu sistem KLT yang telah
dioptimasi, yaitu jenis dan komposisi fase gerak.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung pada penelitian ini yaitu parameter-parameter
validasi meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range.
3. Variabel pengacau terkendali
Variabel pengacau terkendali pada penelitian ini yaitu digunakan pelarut
pro analisis yang memiliki kemurnian tinggi, bahan baku yang digunakan yaitu
bahan baku yang memiliki Certificate of Analysis (CoA), dan penjenuhan bejana
kromatografi menggunakan kertas saring sebagai indikator kejenuhan bejana
kromatografi.
15
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
16
C. Definisi Operasional
1.
Sistem KLT yang digunakan yaitu fase normal dengan fase diam silika gel 60
F254 dan fase gerak kombinasi etil asetat : metanol : amonia 25% (25 : 4 : 1).
2.
Kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dinyatakan dalam satuan
mg/mL dalam pelarut etanol.
3.
Parameter validasi yang digunakan adalah selektivitas, linearitas, akurasi,
presisi dan range.
D. Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan adalah baku deksametason (Tianjin
Tianyao Pharmaceuticals CO., LTD), baku deksklorfeniramin maleat (Siegfried
Ltd 4800 Zofingen Switzerland), lempeng KLT silika gel 60 F254 20x20cm (E.
Merck), etanol p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), amonia p.a (E. Merck),
metanol p.a (E. Merck), dan obat kaplet X® yang berisi campuran deksametason
dan deksklorfeniramin maleat .
E. Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat alat
densitometer (Camag TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No.160602),
autosampler (Linomat 5 No.170610), neraca analitik (OHAOUS Carat Series PAJ
1003, max 60/120 g, min 0,0001 g, d = 0,01/0,1 mg), neraca analitik (Scaltec SBC
22 max 60/210 g; min 0,001 g; d = 0,01/0,1mg), bejana kromatografi (Camag),
alat-alat gelas yang lazim digunakan (Pyrex), kertas saring.
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
F.
17
Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan fase gerak
Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak yang telah didapat dari
hasil optimasi pada penelitian sebelumnya yaitu etil asetat, metanol, dan amonia
25% (25:4:1).
2. Pembuatan larutan baku
a. Pembuatan stok larutan baku deksametason 0,3 mg/mL. Baku
deksametason ditimbang seksama lebih kurang 37,5 mg, dimasukkan ke dalam
labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi selama 2
menit dan dilanjutkan pengojogan menggunakan vortex selama 2 menit, kemudian
encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu, larutan tersebut diambil 2
mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan diencerkan dengan etanol
sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku deksametason dengan
konsentrasi 0,3 mg/mL.
b. Pembuatan larutan baku tunggal deksametason. Larutan baku
deksametason 0,3 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing dimasukkan ke
dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda,
sehingga diperoleh seri larutan baku deksametason dengan konsentrasi 0,09
mg/mL.
c. Pembuatan stok larutan baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL.
Baku deksklorfeniramin maleat ditimbang seksama lebih kurang 50 mg,
dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol,
sonifikasi selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan vortex
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
18
selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu,
larutan tersebut diambil 5 mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan
diencerkan dengan etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku
deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi 1 mg/mL.
d. Pembuatan larutan baku tunggal deksklorfeniramin maleat. Larutan
baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing
dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai
batas tanda, sehingga diperoleh seri larutan baku deksklorfeniramin maleat
dengan konsentrasi 0,3 mg/mL.
e. Pembuatan
seri
larutan
baku
campuran
deksametason
dan
deksklorfeniramin maleat. Larutan baku deksametason 0,3 mg/mL dan larutan
baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL masing-masing dipipet 1; 2; 3; 4 dan 5
mL dan masing-masing dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL kemudian
diencerkan dengan etanol sampai tanda batas dan digojog, sehingga diperoleh seri
konsentrasi campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1
mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan 0,15 : 0,5
mg/mL.
3. Penentuan panjang gelombang pengamatan
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL masing-masing
ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak
antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan didalam bejana kromatografi
(Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
19
dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur AUC tiap masingmasing senyawa kemudian dilakukan pembacaan panjang gelombang 200-450 nm
sehingga diperoleh panjang gelombang overlapping spektra deksametason dan
deksklorfeniramin maleat.
4. Pembuatan kurva baku
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 100 mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan
0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika
gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan di dalam
bejana kromatografi (Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan
setinggi 5 cm. Pelat dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur
AUC tiap masing-masing senyawa (deksametason dan deksklorfeniramin maleat
akan memisah) menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan.
Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali. Dipilih persamaan kurva baku dengan nilai
r2 ≥ 0.997 untuk kurva baku deksametason dan kurva baku deksklorfeniramin
maleat.
5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran
Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat
0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan sebanyak 1
µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan
0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah
dijenuhkan oleh fase gerak. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat
dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan dilakukan scanning
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
20
menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan. Nilai AUC
yang didapat dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku yang telah dibuat
sebelumnya, sehingga didapatkan jumlah deksametason dan deksklorfeniramin
maleat yang kemudian dapat digunakan untuk menghitung %recovery dan %KV.
Penelitian dilakukan selama 2 periode, dimana tiap periode dilakukan paling lama
4 hari dan di replikasi sebanyak 3 kali.
6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku dalam
sampel
a. Preparasi sampel kaplet. 20 kaplet yang setara dengan 0,5 mg
deksametason dan 2 mg deksklorfeniramin maleat digerus dalam mortir hingga
homogen.
b. Pembuatan larutan stok baku adisi. Timbang dengan seksama lebih
kurang 10 mg baku deksametason dan 40 mg baku deksklorfeniramin maleat
masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan larutkan dengan 5,0 mL etanol,
sonifikasi larutan selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan
vortex selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda dan
vortex, sehingga diperoleh larutan stok baku campuran deksametason konsentrasi
1 mg/mL atau setara dengan 1000 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi
4 mg/mL atau setara dengan 4000 ppm.
c. Pembuatan larutan intermediet baku adisi (LA). Pipet 1,0 mL larutan
stok baku campuran deksametason (1 mg/mL) : deksklorfeniramin maleat (4
mg/mL), masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol
hingga batas tanda dan dilakukan penggojogan menggunakan vortex, sehingga di
PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI
21
peroleh larutan intermediet baku campuran deksametason dengan konsentrasi 0,1
mg/mL atau setara dengan 100 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi 0,4
mg/mL atau setara dengan 400 ppm.
d. Pembuatan larutan sampel tanpa penambahan baku deksametason dan
deksklorfeniramin maleat (LB). Timbang dengan seksama lebih kurang 90 mg
sampel yang telah dihomogenkan, masukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan
larutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi larutan selama 2 menit dilanjutkan
dengan penggojogan menggunakan vortex selama 15 menit, kemudian larutan
diencerkan dengan etanol hingga batas tanda, gojog dengan vortex dan saring
menggunakan kertas saring. Replikasi dilakukan sebanyak 9 kali.
e. Pembuatan larutan sampel dengan penambahan baku deksametason
dan deksklor