Optimasi pemisahan kurkumin dalam kapsul lunak Obat Herbal Terstandar (OHT) Rheumakur dengan metode kromatografi lapis tipis densitometri - USD Repository

  

OPTIMASI PEMISAHAN KURKUMIN DALAM KAPSUL LUNAK OBAT

HERBAL TERSTANDAR (OHT) RHEUMAKUR ® DENGAN METODE

  

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

  

Program Studi Farmasi

Oleh:

Theresia Weliana Kosasih

  

NIM: 078114093

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

  

2011

HALAMAN PERSEMBAHAN

  

Janganlah takut, sebab Aku menyertai engkau, janganlah bimbang,

sebab Aku ini Allahmu; Aku akan meneguhkan, bahkan akan

menolong engkau; Aku akan memegang engkau dengan tangan

kanan-Ku yang membawa kemenangan (Yesaya 41:10)

  

PRAKATA

  Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan atas berkat, anugerah dan kuasa-Nya, sehingga skripsi berjudul “Optimasi Pemisahan Kurkumin dalam

  ®

  Kapsul Lunak Obat Herbal Terstandar (OHT) Rheumakur dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis Densitometri” dapat dikerjakan dengan sebaik-baiknya.

  Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan untuk memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Ilmu Farmasi (S. Farm).

  Dalam menyelesaikan skripsi ini, penulis mengalami permasalahan dan kesulitan. Namun demikian dengan adanya bantuan dari berbagai pihak, penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Oleh karena itu dengan segala hormat, penulis ingin mengucapkan terima kasih atas bantuan yang telah diberikan, kepada :

  1. Ipang Djunarko, M.Sc, Apt. selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta

  2. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah membimbing penulis, memberikan masukan, dan dukungan selama penyusunan skripsi ini.

  3. Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen penguji yang memberikan kritik dan saran untuk skripsi ini.

  4. Jeffry Julianus,M.Si. selaku dosen penguji yang memberikan kritik dan saran untuk skripsi ini.

  5. Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  6. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M. S., Apt. yang telah bersedia memberikan senyawa baku kurkumin yang berguna dalam penelitian.

  7. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Obat Tradisional yang telah meluangkan waktu untuk memberikan diskusi dan saran yang membangun.

  8. Seluruh staf laboratorium di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta terutama Mas Bimo, Mas Wagiran, Pak Parlan, dan Mas Kunto yang telah membantu dan mendukung kelangsungan skripsi ini.

  9. Teman-teman FST 2007 yang sangat kompak dan memberikan proses pembelajaran yang berharga.

  10. Seno, Lilis, Eliz, Yunita, Veny, Katrin, Beny, Dian P., Katiti, Lala, Toro tim pelaksana pemisahan kurkumin.

  11. Kakakku, Bayu Aryono yang memberikan semangat dan doa selama kelangsungan skripsi ini.

  12. Teman-teman seperjuangan yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu namanya.

  Penulis menyadari bahwa dalam skripsi ini masih terdapat banyak kekurangan mengingat keterbatasan kemampuan dan pengetahuan penulis. Maka penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari semua pihak. Akhir kata, semoga skripsi ini berguna bagi kemajuan ilmu pengetahuan.

  Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL..................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING............................................. ii HALAMAN PENGESAHAN....................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN.................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA......................................................... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA.......... vi PRAKATA...................................................................................................... vii DAFTAR ISI................................................................................................... ix DAFTAR TABEL........................................................................................... xiii DAFTAR GAMBAR...................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN................................................................................... xvi

  INTISARI....................................................................................................... xviii ...................................................................................................... xix

  ABSTRACT BAB I. PENGANTAR....................................................................................

  1 A. Latar Belakang.........................................................................................

  1 1. Permasalahan.......................................................................................

  3 2. Keaslian penelitian..............................................................................

  4 3. Manfaat penelitian...............................................................................

  4 B. Tujuan Penelitian.....................................................................................

  5 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA............................................................

  6 A. Kurkumin.................................................................................................

  6

  B. Kunyit......................................................................................................

  9 1. Kegunaan tanaman..............................................................................

  10 2. Kandungan kimia................................................................................

  10 C. Obat Herbal Terstandar............................................................................

  10 D. Kapsul Obat Tradisional..........................................................................

  11 E. Kromatografi Lapis Tipis Densitometri...................................................

  12 1. Kromatografi lapis tipis secara umum................................................

  12 2. Jenis fase diam KLT............................................................................

  14 3. Jenis fase gerak KLT...........................................................................

  16 4. Aplikasi penotolan sampel..................................................................

  17 5. Pengembangan....................................................................................

  17 6. Penentuan kromatogram......................................................................

  18 7. Kromatografi lapis tipis kuantitatif.....................................................

  24 F. Landasan Teori........................................................................................

  26 G. Hipotesis..................................................................................................

  28 BAB III. METODE PENELITIAN................................................................

  29 A. Jenis dan Rancangan Penelitian...............................................................

  29 B. Variabel....................................................................................................

  29 C. Definisi Operasional................................................................................

  30 D. Bahan Penelitian......................................................................................

  30 E. Alat Penelitian..........................................................................................

  31 F. Tata Cara Penelitian.................................................................................

  31 1. Pembuatan metanol p.a. pH 4.............................................................

  31

  2. Pembuatan larutan baku kurkumin......................................................

  31 3. Preparasi sampel..................................................................................

  32 4.

  maks )...........................

  32 Penentuan panjang gelombang maksimum (λ 5. Optimasi metode KLT densitometri....................................................

  32 G. Analisis Hasil...........................................................................................

  33 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.......................................................

  35 A. Jenis dan Komposisi Fase Gerak.............................................................

  35 B. Pembuatan Metanol p.a. pH 4.................................................................

  36 C. Pembuatan Larutan Baku.........................................................................

  37 D. Preparasi Sampel......................................................................................

  37 E. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Baku Kurkumin dengan KLT Densitometri....................................................................................

  38 F. Optimasi Pemisahan Kurkumin dalam Kapsul Lunak OHT

  ® Rheumakur dengan Metode KLT Densitometri....................................

  40

  1. Fase gerak kloroform p.a.:metanol p.a. dengan perbandingan 48:2 (komposisi I).......................................................................................

  44

  2. Fase gerak kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a. dengan perbandingan 9,50:0,50 (komposisi II)...............................................

  46 3. Fase gerak heksan p.a.:kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a. dengan perbandingan 5:4,875:0,125 (komposisi III)..........................

  48 4. Fase gerak heksan p.a.:kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a. dengan perbandingan 0,5:8,5:1,0 (komposisi IV)...............................

  50 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN........................................................

  55

  A. Kesimpulan..............................................................................................

  B. Saran........................................................................................................ DAFTAR PUSTAKA..................................................................................... LAMPIRAN.................................................................................................... BIOGRAFI PENULIS....................................................................................

  55

  55

  56

  59

  89

  

DAFTAR TABEL

Tabel I. Tatanama lempeng KLT.............................................................

  15 Tabel II. Nilai indeks polaritas pelarut......................................................

  17 Tabel III. Jenis dan komposisi fase gerak..................................................

  33 Tabel IV. Nilai indeks polaritas dari jenis dan komposisi fase gerak........

  35 Tabel V. Data pengukuran panjang gelombang serapan maksimum kurkumin....................................................................................

  39 Tabel VI. Pemisahan pada berbagai jenis dan komposisi fase gerak.........

  43 Tabel VII. Parameter pemisahan dan nilai koefisien variansi (KV) dari nilai resolusi ketiga replikasi dengan komposisi fase gerak IV, heksan:kloroform:asam asetat glasial (0,5:8,5:1,0)....................

  53

  

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur kimia dari golongan kurkuminoid................................

  23 Gambar 11. Pemisahan dua senyawa.............................................................

  ® dengan fase gerak kloroform:metanol (48:2).......

  42 Gambar 16. Peak baku kurkumin konsentrasi 300 ppm dan peak pemisahan dari kurkumin dalam kapsul lunak OHT Rheumakur

  41 Gambar 15. Interaksi fase diam dengan kurkumin........................................

  40 Gambar 14. Gugus polar dan non polar kurkumin.........................................

  39 Gambar 13. Kromatogram panjang gelombang maksimum baku kurkumin 100, 300, dan 500 ppm masing-masing direplikasi 3 kali..........

  24 Gambar 12. Gugus kromofor dan auksokrom pada struktur kurkumin.........

  22 Gambar 10. Penentuan peak asymmetry........................................................

  7 Gambar 2. Reaksi degradasi kurkumin dalam kondisi basa........................

  21 Gambar 9. Isoterm sorpsi serta profil-profil puncak yang dihasilkan..........

  21 Gambar 8. Ilustrasi 3 prinsip utama yang menggambarkan puncak............

  19 Gambar 7. Keadaan simetris dan pelebaran puncak kromatogram..............

  15 Gambar 6. Cara penentuan harga R f ............................................................

  11 Gambar 5. Ikatan hidrogen pada permukaan silika......................................

  9 Gambar 4. Logo obat herbal terstandar........................................................

  8 Gambar 3. Produk fotodegradasi kurkumin.................................................

  45 Gambar 17. Peak baku kurkumin konsentrasi 300 ppm dan peak pemisahan dari kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur dengan fase gerak kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a. (9,50:0,50) ...................................... ........................

  47 Gambar 18. Peak baku kurkumin konsentrasi 300 ppm dan peak pemisahan dari kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur dengan fase gerak heksan p.a. :kloroform p.a. :asam asetat glasial p.a. (5:4,875:0,125) .............................

  49 Gambar 19. Peak baku kurkumin konsentrasi 300 ppm dan peak pemisahan dari kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur dengan fase gerak heksan p.a. :kloroform p.a. :asam asetat glasial p.a. (0,5:8,5:1,0) ................... ..............

  50 Gambar 20. Tiga replikasi peak pemisahan dari kurkumin dalam kapsul

  ®

  lunak OHT Rheumakur dengan fase gerak heksan p.a. :kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a. (0,5:8,5:1,0) ..........

  52 Gambar 21. Interaksi kurkumin dengan fase gerak heksan p.a.:kloroform p.a. :asam asetat glasial p.a. (0,5:8,5:1,0) ................... ..............

  54

  

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Sertifikat analisis baku kurkumin................... ......................

  60 Lampiran 2. Hasil kromatogram scanning dengan panjang gelombang serapan maksimum kurkumin................... ............................

  61 Lampiran 3. Sistem KLT-Densitometri yang digunakan...........................

  62 Lampiran 4. Perhitungan kepolaran fase gerak..........................................

  66 Lampiran 5. Penimbangan baku dan sampel serta contoh perhitungan kadar seri baku......................................... .............................

  67 Lampiran 6. Kromatogram pada fase gerak kloroform : metanol (48:2)...

  69 Lampiran 7. Kromatogram pada fase gerak kloroform : asam asetat glasial (9,50:0,50) ......................................... .......................

  71 Lampiran 8. Kromatogram pada fase gerak heksan : kloroform : asam asetat glasial (5:4,875:0,125) ................................................

  73 Lampiran 9. Kromatogram pada fase gerak heksan : kloroform : asam asetat glasial (0,5:8,5:1,0)......................................................

  75 Lampiran 10. Kromatogram pada fase gerak heksan : kloroform : asam asetat glasial (0,5:8,5:1,0) replikasi I.....................................

  77 Lampiran 11. Kromatogram pada fase gerak heksan : kloroform : asam asetat glasial (0,5:8,5:1,0) replikasi II...................................

  79 Lampiran 12. Kromatogram pada fase gerak heksan : kloroform : asam asetat glasial (0,5:8,5:1,0) replikasi III..................................

  81 Lampiran 13. Nilai faktor asimetris (As) kelima komposisi fase gerak dan

  tiga replikasi komposisi fase gerak V serta contoh perhitungan nilai faktor asimetris (As) .................................

  83 Lampiran 14. Nilai faktor retardasi (R f ) kelima komposisi fase gerak dan tiga replikasi komposisi fase gerak V....................................

  85 Lampiran 15. Nilai resolusi (Rs) kelima komposisi fase gerak dan tiga replikasi komposisi fase gerak V serta contoh perhitungan nilai resolusi pemisahan kurkumin........................................

  87 Lampiran 16. Nilai koefisien variansi (KV) dari nilai resolusi ketiga replikasi sampel dan perhitungan nilai % KV.......................

  88

  

INTISARI

  Kurkumin merupakan senyawa yang sering digunakan dalam campuran obat tradisional, salah satunya OHT. Produk OHT yang beredar dipasaran tidak hanya mengandung kurkumin tetapi juga mengandung senyawa-senyawa lain termasuk turunan lain dari kurkuminoid. Salah satu metode analisis yang dapat digunakan untuk dapat memisahkan kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur ialah kromatografi lapis tipis (KLT) densitometri. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui jenis dan komposisi fase gerak yang optimum

  ®

  untuk memisahkan kurkumin dalam kapsul lunak OHT Rheumakur dengan metode KLT densitometri.

  Penelitian ini bersifat eksperimental dua tingkat. Sistem KLT merupakan fase normal dengan fase diam silika gel G

  60 dan fase gerak pada penelitian ini

  ialah variasi komposisi dari kloroform:asam asetat glasial dan heksan:kloroform:asam asetat glasial. Scan dilakukan pada panjang gelombang 425 nm.

  Dari hasil penelitian ini kondisi optimum ditunjukkan pada fase gerak heksan p.a.:kloroform p.a.:asam asetat glasial p.a (0,5:8,5:1). Kondisi ini memenuhi parameter pemisahan yang baik yaitu bentuk peak yang simetris (0,95- 1,10), sempit, dan tajam; nilai faktor retardasi 0,2-0,8; nilai resolusi dari

  ®

  pemisahan peak yang terdapat dalam kapsul lunak OHT Rheumakur ≥ 1,5; dan reprodusibilitas nilai resolusi pemisahan peak yang terdapat dalam kapsul lunak

  ®

  OHT Rheumakur ditunjukkan dengan nilai koefisien variasi ≤ 2. Kata kunci : kurkumin, OHT, KLT densitometri

  

ABSTRACT

  Curcumin is compound that is often used in mixing of traditional medicine, Scientific Based Herbal Medicine (SBHM) is one of them. SBHM product that distribute in the market not only involved curcumin but also involved another compound included other curcuminoid derivatif. One of analysis method

  ®

  that can be used to be able separate curcumin in SBHM Rheumakur soft capsule is thin layer chromatography (TLC) densitometry. The aim of this research is to detect the kind and the composition of optimum mobile phase to separated

  ® curcumin in SBHM Rheumakur soft capsule is TLC densitometry.

  This research have two level experiment characteristic. TLC system is normal phase with G

  60 silica gel stationary phase and mobile phase in this

  research is composition variation of cloroform:glacial acetic acid and hexane: cloroform:glacial acetic acid. Scanning is carried out at wavelenght 425 nm.

  From this result of research, optimum condition is showed at hexane: cloroform:glacial acetic acid (0,5:8,5:1,0) mobile phase. This condition fill the good separating parameter that is simetric peak shape (0,95-1,10), narrow, and sharp; value of retardation factor 0,2-0,8; resolution value of peak separation in

  ®

  the SBHM Rheumakur soft capsule ≥ 1,5; and reprodusibility of resolution value

  ®

  of peak separation in the SBHM Rheumakur soft capsule is showed with variation coefisien value ≤ 2.

  Keywords : curcumin, SBHM, TLC-densitometry

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Beberapa waktu belakangan ini, semboyan back to nature kembali

  digunakan oleh banyak orang. Banyak produk obat tradisional yang beredar di pasaran mengandung ekstrak dari rimpang kunyit (Curcuma domestica). Kunyit mengandung senyawa kimia yang mempunyai keaktifan fisiologi, yaitu kurkuminoid. Kurkuminoid terdiri dari kurkumin, demetoksikurkumin dan bis- demetoksikurkumin. Kurkumin merupakan senyawa aktif dari kunyit dan memiliki khasiat sebagai anti inflamasi, anti oksidan, efek pencegah kanker dan menurunkan risiko serangan jantung (Sumiati, 2010). Kurkumin banyak digunakan dalam campuran obat tradisional, salah satunya dalam bentuk kapsul

  ® lunak obat herbal terstandar (OHT) Rheumakur .

  WHO merekomendasi penggunaan obat tradisional termasuk herbal dalam pemeliharaan kesehatan masyarakat, pencegahan dan pengobatan penyakit,

  

terutama untuk penyakit kronis, penyakit degeneratif dan kanker. WHO juga

mendukung upaya-upaya dalam peningkatan keamanan dan khasiat dari obat

tradisional (WHO, 2003). Peningkatan keamanan dan khasiat dalam sediaan jamu

dengan standarisasi bahan baku dan pengujian secara praklinik dinamakan OHT.

  Proses produksi OHT dilakukan standarisasi pembuatan ekstrak tanaman obat, standarisasi pembuatan obat tradisional yang higienis, dan uji toksisitas akut maupun kronis (PT. Phapros, 2005). Penjaminan mutu yang berkaitan dengan kadar dari zat aktif dalam suatu produk penting dilakukan terkait stabilitas zat

  2 aktif dan aktivitas farmakologi yang ditimbulkan. Begitu pula dengan penjaminan

  ® mutu kadar dari kurkumin dalam sampel kapsul lunak produk OHT Rheumakur . ®

  Produk OHT Rheumakur tidak mengandung satu senyawa tunggal kurkuminoid dari Curcuma domestica tetapi juga mengandung senyawa-senyawa lain, yaitu minyak atsiri dari Curcuma xanthorizza dan Curcuma domestica. Pemakaian kurkumin sebagai campuran obat tradisional harus diberikan dengan dosis yang tepat berkaitan dengan efek farmakologi yang akan ditimbulkan. Oleh karenanya, diperlukan suatu metode analisis yang dapat digunakan untuk memisahkan kurkumin dari senyawa-senyawa lain sediaan kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur dan menetapkan kadar kurkumin dalam sediaan kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur . Metode analisis tersebut dapat memberikan jaminan kualitas dan mutu terhadap produk obat tradisional yang ditetapkan serta terhadap konsumen yang menggunakan produk obat tradisional tersebut.

  Salah satu metode analisis yang dapat digunakan ialah metode KLT densitometri. Kelebihan dari metode KLT densitometri ini dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif dalam waktu yang bersamaan dan dapat mengukur beberapa senyawa tidak hanya senyawa tunggal (Martono, 1996).

  Parameter dalam pemisahan senyawa dengan metode ini ialah bentuk peak, nilai

  

retardation factor (R f ), nilai resolusi dan nilai koefisien variansi (KV) yang

  menggambarkan reprodusibilitas dari nilai resolusi. Bentuk peak yang baik ditunjukkan dengan bentuk peak yang simetris (nilai As berada dalam range 0,95- 1,10), sempit dan tajam (Snyder, Kirkland and Glajch, 1997). Syarat nilai R f yang baik 0,2-0,8. Nilai resolusi harus mendekati atau lebih dari 1,5 (Gandjar dan

  3 Rohman, 2007). Reprodusibilitas dari nilai resolusi yang didapat ditunjukkan dengan nilai KV

  ≤ 2 (Harmita, 2004). Sebelum dilakukan penetapan kadar dengan metode KLT densitometri ini perlu dilakukan optimasi metode KLT densitometri. Optimasi ini bertujuan untuk mengetahui kondisi yang optimum untuk dapat memisahkan kurkumin dari

  ®

  senyawa-senyawa lain dalam sediaan kapsul lunak OHT Rheumakur . Optimasi ini perlu dilakukan karena dalam penelitian ini metode KLT densitometri dengan sistem yang baru yaitu penggunaan jenis dan komposisi fase gerak yang belum

  ®

  pernah dilakukan sebelumnya. Selain itu OHT Rheumakur belum pernah diteliti sebelumnya sehingga dibutuhkan suatu sistem yang baru untuk dapat memperoleh hasil pemisahan yang baik.

  Optimasi yang dilakukan pada metode KLT densitometri ini ialah jenis dan komposisi fase gerak. Variasi jenis dan komposisi fase gerak akan berpengaruh terhadap pemisahan dari kurkumin dengan senyawa-senyawa lain

  ®

  dalam sediaan kapsul lunak OHT Rheumakur . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis dan komposisi fase gerak yang optimum untuk memisahkan

  ®

  kurkumin dalam kapsul lunak OHT Rheumakur dengan metode KLT densitometri.

1. Permasalahan

  Bagaimanakah jenis dan komposisi fase gerak yang dapat memberikan bentuk peak yang simetris (nilai As berada dalam range 0,95-1,10), sempit, dan tajam; nilai R f berada dalam range 0,2-0,8; nilai resolusi

  ≥1,5; dan nilai KV dari

  4 nilai resolusi

  ≤ 2 untuk memisahkan kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ®

  Rheumakur dengan metode KLT densitometri?

  2. Keaslian penelitian

  Sejauh pengetahuan peneliti, penelitian kurkumin dalam kapsul lunak

  ® OHT Rheumakur menggunakan KLT densitometri ini belum pernah dilakukan.

  Penelitian yang pernah dilakukan terkait penelitian mengenai kurkumin menggunakan KLT densitometri yaitu Penentuan Kadar Kurkumin secara KLT Densitometri dengan fase gerak kloroform:etanol:air suling (25:0,96:0,04) dilakukan oleh Martono, 1996; Simultaneous determination of curcuminoids in

  

curcuma samples using high performance thin layer chromatography dengan fase

  gerak kloroform:metanol (98:2 dan 95:5) dilakukan oleh Gupta, Gupta, Kumar, 1999, dan Occurrence of curcuminoids in curcuma longa: a quality

  

standardization by HPTLC dengan fase gerak kloroform:metanol (48:2) pernah

dilakukan oleh Paramasivam, Aktar, Poi, Banerjee, Bandyopahyay, 2008.

  3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat metodologis. Penelitian ini adalah alternatif metode analisis yang dapat digunakan untuk mengetahui jenis dan komposisi fase gerak yang

  ® optimum untuk memisahkan kurkumin dalam kapsul lunak OHT Rheumakur .

  Alternatif metode analisis yang digunakan ialah metode KLT densitometri.

  5 b. Manfaat praktis. Dari hasil penelitian ini untuk memberikan informasi bagi konsumen mengenai mutu, keamanan dan kemanfaatan kurkumin dalam

  ® kapsul lunak OHT Rheumakur yang beredar di masyarakat.

B. Tujuan Penelitian

  Untuk mengetahui jenis dan komposisi fase gerak yang dapat memberikan bentuk peak yang simetris (nilai As berada dalam range 0,95-1,10), sempit, dan tajam; nilai R f berada dalam range 0,2-0,8; nilai resolusi

  ≥1,5; dan nilai KV dari nilai resolusi ≤ 2 memisahkan kurkumin dalam kapsul lunak OHT

  ® Rheumakur dengan metode KLT densitometri.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Kurkumin Kurkumin berupa serbuk kristal berbentuk batang atau prisma, berwarna

  kuning orange, larut dalam alkohol dan aseton, tidak larut dalam air dan eter (Robinson, 1995). Kurkumin memiliki sifat yaitu rasanya sedikit pahit. Kurkumin juga larut dalam asam asetat glasial dan alkali hidroksida (Majeed et al., 1995).

  Kurkumin (C

  21 H

  20 O 6 ) memiliki titik lebur 184-185 °C, berat molekul 368,37 g/mol (Majeed et al., 1995).

  Kurkumin merupakan senyawa fenol alami berwarna kuning orange, terdapat bersama golongannya (dikenal dengan nama kurkuminoid). Kurkuminoid ada 3 macam yaitu kurkumin, demetoksikumin dan bis-demetoksikurkumin (Martono, 1996). Struktur kimia dari golongan kurkuminoid ditunjukan pada gambar berikut: _HO

demetoksikurkumin

_{O O}

_OH

  

H CO OCH

_{3 3}

kurkumin

  7 _HO

O O

_OH H ^H

  

Bis -demetoksikurkumin

Gambar 1. Struktur kimia dari golongan kurkuminoid

  Dari ketiga senyawa kurkuminoid tersebut, kurkumin merupakan komponen terbesar. Sering kadar total kurkuminoid dihitung sebagai % kurkumin, karena kandungan kurkumin paling besar dibanding komponen kurkuminoid lainnya. Karena alasan tersebut beberapa penelitian baik fitokimia maupun farmakologi lebih ditekankan pada kurkumin (Muhsin, 2009).

  Kurkumin memiliki aktifitas sebagai antiinflamasi pada penyakit osteoarthritis. Osteoartritis adalah penyakit reumatik dengan prevalensi yang terus meningkat sesuai dengan pertambahan usia. Secara klinis osteoartritis ditandai oleh nyeri, deformitas, pembesaran sendi, hambatan gerak; disamping itu juga terjadi inflamasi tingkat ringan sampai berat (Kalim, 1996; Rahardjo, 1994).

  Ekstrak rimpang kunyit dengan kadar kurkuminoid 3,66 ± 0,65 % b/b dan 25 mL minyak atsiri rimpang temulawak yang mengandung kamfora, kamfen, kurkumin, bergamoten germakren B, kurserenon, germakron dan antorizol mampu menurunkan angka leukosit di dalam cairan sinovial penderita osteoarthritis. Sehingga produksi sitokin yang menyebabkan inflamasi menjadi berkurang (Kertia, Sudarsono, Imono, Mufrod, Catur, Rahardjo, dkk, 2005).

  Atom karbon kurkumin kurang dari 40 tetapi tetap dapat dikelompokkan kedalam karotenoid (pigmen yang berstruktur tetraterpenoid, bersifat larut dalam lemak dengan memberikan warna kuning sampai merah) karena kekhasan dalam

  8 strukturnya sehingga senyawa ini disebutkan berasal dari penguraian karotenoid (Robinson, 1995).

  Kurkumin stabil pada pH dibawah 6,5; hal ini disebabkan adanya gugus metilen yang aktif. Produk degradasi kurkumin dalam lingkungan alkali (pH 7-10) akan menghasilkan asam ferulat dan feruloilmetan. Akibat degradasi ini, terjadi perubahan pada warna larutannya yaitu pada pH 7,5-9,1 larutan berwarna merah jingga (Tonnesen dan Karlsen, 1997). Reaksi degradasi kurkumin dalam kondisi basa ditunjukkan pada gambar berikut: _{O O}

  HO _{H CO 3 OCH 3 OH} OH _{O O} OH HO _{H CO HO OH 3 f eruloilmetan} asam f erulat _{OCH 3} OH _{HO CHO} O H CO ₃ vanilin aseton

  

Gambar 2. Reaksi degradasi kurkumin dalam kondisi basa (Stankovic, 2004)

  9 Selain itu, instabilitas kurkumin juga dipengaruhi oleh adanya cahaya yang menyebabkan terjadinya degradasi fotokimia. Prinsipnya, kurkumin tidak stabil terhadap cahaya, terutama dalam bentuk larutan. Setelah mengalami foto- iradiasi, akan terdeteksi produk siklisasi, sama halnya dengan produk dekomposisi asam vanilat, vanilin, dan asam ferulat (Sasaki et al., 1998). Produk fotodegradasi kurkumin ditunjukkan pada gambar berikut:

  

Gambar 3. Produk fotodegradasi kurkumin (Sasaki et al., 1998)

B. Kunyit

  Uraian Tanaman Kunyit (Curcuma domestica Val.) dari famili Zingiberaceae sebagai berikut:

  10

  1. Kegunaan tanaman

  Kunyit berkhasiat menyejukkan, membersihkan, mengeringkan, menghilangkan gatal dan menyembuhkan kesemutan. Bermanfaat sebagai antiinflamasi, antioksidan, antimikroba, pencegahan kanker, antitumor dan menurunkan kadar lemak darah dan kolesterol serta sebagai pembersih darah (Sumiati, 2010).

  2. Kandungan kimia

  Kunyit mengandung zat warna kuning yang disebut kurkuminoid sebanyak ≥ 33,9% (meliputi kurkumin 77%, demetoksikurkumin 17%, dan bidesmetoksikurkumin 3%), protein, fosfor, kalium, besi dan vitamin C

  (Anggarwal, 1995). Dari ketiga senyawa kurkuminoid tersebut, kurkumin merupakan komponen terbesar. Sering kadar total kurkuminoid dihitung sebagai % kurkumin, karena kandungan kurkumin paling besar dibanding komponen kurkuminoid lainnya Minyak atsiri (2-5%) terdiri dari seskuiterpen dan turunan fenil propan (turmeron, arilturmeron, ß-turmeron, kurkumol, atlantor, borneol, tumerol). Kunyit juga mengandung arabinosa, fruktosa, glukosa, pati, tannin, dammar, mineral, gom dan getah (Sumiati, 2010).

C. Obat Herbal Terstandar

  Menurut peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor: 246/Menkes/Per/V/1990 tentang izin usaha industri obat tradisional dan pendaftaran obat tradisional Menteri Kesehatan Republik Indonesia, pada Bab I

  11 Pasal 1 “obat herbal terstandar adalah sediaan obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinik dan bahan bakunya telah di standarisasi. Logo untuk kelompok Obat Herbal Terstandar :”

  

Gambar 4. Logo obat herbal terstandar

  Obat Herbal Terstandar (OHT) disajikan dari ekstrak atau penyarian bahan alam dapat berupa tanaman obat, binatang, maupun mineral. Obat Herbal Terstandar umumnya telah ditunjang dengan pembuktian ilmiah berupa penelitian-penelitian pra-klinik seperti standart pembuatan ekstrak tanaman obat, standart pembuatan obat tradisional yang higienis, dan uji toksisitas akut maupun kronis (PT. Phapros, 2005). Untuk menjaga kualitas bahan baku obat alam perlu dilakukan usaha budidaya dan standarisasi terhadap bahan baku tersebut, baik yang berupa simplisia maupun yang berbentuk ekstrak atau sediaan galenik (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).

D. Kapsul Obat Tradisional

  Menurut Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 661/MENKES/SK/VII/1994 tentang persyaratan obat tradisional definisi kapsul adalah sediaan obat tradisional yang terbungkus cangkang keras atau lunak; bahan bakunya terbuat dari sediaan galenik dengan atau tanpa bahan tambahan.

  12 Kapsul cangkang lunak umumnya terbuat dari gelatin. Cangkang gelatin lunak umumnya mengandung 6% hingga 13% air. Umumnya kapsul cangkang lunak diisi dengan cairan. Khususnya bahan aktif dilarutkan atau disuspensikan dalam bahan pembawa cair. Digunakan pula bahan pembawa minyak seperti minyak nabati. Keunggulan kapsul cangkang lunak adalah keseragaman kandungan dan disolusi obatnya lebih baik daripada kapsul berisi serbuk kering.

  Namun, kontak antara cangkang lunak atau keras dengan isi zat cair lebih besar dibandingkan dengan kapsul berisi serbuk kering (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).

  Pada industri kapsul lunak, ekstrak kering biasa dikombinasikan dengan minyak kedelai sebagai pembawa, beeswax sebagai agen pensuspensi dan pengental, dan lesitin sebagai lubrikan. Jumlah ekstrak dan bahan lain bergantung pada dosis ekstrak yang hendak diadministrasikan. Agen pensuspensi beRfungsi untuk mencegah pengendapan padatan dan menjaga homogenitas dalam kapsul. Agen pensuspensi yang banyak digunakan dengan basis minyak adalah wax, contohnya adalah beeswax, sedangkan polietilen glikol untuk basis tidak berminyak (Naguib, 2000).

E. Kromatografi Lapis Tipis Densitometri

1. Kromatografi Lapis Tipis secara umum Kromatografi secara umum memiliki prinsip migrasi dan retensi solut.

  Kecepatan migrasi solut melalui fase diam ditentukan oleh perbandingan distribusinya (D), dan besarnya D ditentukan oleh afinitas relatif solut pada pada

  13 kedua fase (fase diam dan fase gerak). Dalam konteks kromatografi, nilai D didefinisikan sebagai perbandingan konsentrasi solut dalam fase diam (Cs) dan dalam fase gerak (Cm). Jadi semakin besar nilai D maka migrasi solut semakin lambat; dan semakin kecil nilai D maka migrasi solut semakin cepat. Solut akan terelusi menurut perbandingan distribusinya. Jika perbedaan perbandingan distribusi solut cukup besar maka campuran-campuran solut akan mudah dan cepat dipisahkan (Gandjar dan Rohman, 2007).

  Kromatografi Lapis Tipis merupakan metode pemisahan komponen atas dasar perbedaan adsorbsi atau pelarut pengembang campur sangat dipengaruhi oleh macam dan polaritas zat-zat kimia yang dipisahkan (Mulja dan Suharman, 1995). Pemisahan dan pemurnian kandungan tumbuhan dapat dilakukan dengan menggunakan salah satu dari teknik kromatografi atau gabungan dari teknik kromatografi empat teknik kromatografi tersebut yakni kromatografi kertas, KLT, kromatografi gas cair dan kromatografi cair kinerja tinggi. Pemilihan teknik kromatografi sebagian besar tergantung pada sifat kelarutan dan keatsirian senyawa yang akan dipisahkan (Harborne, 1987).

  Sorpsi merupakan proses pemindahan solut dari fase gerak ke fase diam, sementara itu proses sebaliknya (pemindahan solut dari fase diam ke fase gerak) disebut dengan desorpsi. Kedua proses ini (sorpsi dan desorpsi) terjadi secara terus menerus selama pemisahan kromatografi karenanya sistem kromatografi berada dalam keadaan kesetimbangan dinamis. Solut akan terdistribusi diantara dua fase yang bersesuaian dengan perbandingan distribusinya (D) untuk menjaga keadaan kesetimbangan ini (Gandjar dan Rohman, 2007).

  14 Adsorpsi merupakan penyerapan pada permukaannya saja. Adsorpsi pada permukaan melibatkan interaksi-interaksi elektrostatik seperti ikatan hidrogen, penarikan dipol-dipol, dan penarikan yang diinduksi oleh dipol. Solut akan bersaing dengan fase gerak untuk berikatan dengan sisi-sisi polar pada permukaan adsorben. Adsorbsi solut oleh fase diam atau oleh adsorben sangat tergantung pada struktur kimia solute, ukuran partikel adsorben, dan kelarutan solut dalam fase gerak. Adanya gugus aktif tertentu yang berinteraksi dengan adsorben, ukuran partikel adsorben. Semakin kecil ukuran partikel adsorben, maka luas permukaannya semakin luas sehingga interaksinya dengan solut juga semakin luas. Solut yang semakin mudah larut dalam fase gerak akan semakin mudah lepas dari fase diam. Kedudukan gugus fungsional tertentu dalam suatu senyawa juga menentukan interaksinya. Sorpsi adsorpsi ini umumnya terjadi pada kromatografi padat cair sebagaimana dalam kromatografi lapis tipis dan pada kromatografi gas-padat (Gandjar dan Rohman, 2007).

2. Jenis fase diam KLT

  Silika gel merupakan fase diam untuk KLT seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat berpendar dalam sinar ultraviolet. Silika gel adalah bentuk dari silikon dioksida (silika). Atom silikon dihubungkan oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. (Clark, 2007). Tatanama lempeng KLT sebagai berikut :

  15

  Tabel.I

Tatanama lempeng KLT

  Simbol/Singkatan Arti “Sil” Suatu produk yang mengandung silika gel seperti Anasil dari pabrik Analabs G Pengikat (lapisan halus) gipsum (CaSO ^{4 .½H 2 O)}

  60 Silika gel (dari E.Merck) yang mempunyai ukuran pori 60 A° (10 A° = 1 nm) (Gandjar dan Rohman, 2007).

  Namun pada permukaan silika gel, atom silikon berlekatan pada gugus hidroksi. Jadi pada permukaan silika gel terdapat ikatan Si-O-H selain terdapat ikatan Si-O-Si. Permukaan silika gel sangat polar oleh karenanya gugus hidroksi dapat membentuk ikatan hidrogen dengan senyawa-senyawa yang sesuai disekitarnya, sebagaimana halnya gaya van der Waals dan atraksi dipol-dipol (Clark, 2007). Gambar ini menunjukkan bagian kecil dari permukaan silika:

  

Gambar 5. Ikatan hidrogen pada permukaan silika (Clark, 2007)

  Silika gel memiliki permukaan yang terdiri atas gugus Si-O-Si dan gugus silanol (Si-OH). Gugus silanol bersifat sedikit asam dan polar karenanya gugus ini mampu membentuk ikatan hidrogen dengan solut-solut yang agak polar sampai sangat polar. Adanya air dari atmosfer yang diserap oleh permukaan silika gel mampu mendeaktifkan permukaan silika gel karena air akan menutup sisi aktif silika gel. Hal seperti ini dapat diatasi dengan memanaskan pada suhu 105 ºC (Gandjar dan Rohman, 2007).

  16 Semakin polar solut maka semakin tertahan kuat ke dalam adsorben silika gel ini. Solut-solut non polar tidak mempunyai afinitas atau mempunyai sedikit afinitas terhadap adsorben polar, sementara solut-solut yang terpolarisasi memiliki afinitas yang kecil terhadap adsorben polar disebabkan adanya interaksi dipol atau interaksi-interaksi yang diinduksi oleh dipol (Gandjar dan Rohman, 2007).

3. Jenis fase gerak KLT Fase gerak dapat hampir segala macam pelarut atau campuran pelarut.

  Sistem campuran yang dipilih berdasarkan pustaka atau biasanya merupakan hasil uji coba dengan variasi tingkat kepolaran (Gritter, Bobbit and Scharting, 1991).

  Fase gerak dalam medium KLT merupakan medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa bahan pelarut yang bergerak dalam fase diam, karena gaya kapiler (Stahl, 1985). Campuran pelarut organik dipilih yang mempunyai polaritas serendah mungkin karena akan mengurangi serapan setiap komponen dari campuran pelarut. Jika komponen-komponen campuran mempunyai sifat polar tinggi akan mengubah sistem menjadi partisi (Sastrohamidjojo, 1985).

  Ketika pelarut mulai membasahi lempengan, pelarut pertama akan melarutkan senyawa-senyawa dalam bercak yang telah ditempatkan pada garis dasar. Senyawa-senyawa akan cenderung bergerak pada lempengan kromatografi sebagaimana halnya pergerakan pelarut. Cepatnya senyawa-senyawa dibawa bergerak ke atas pada lempengan, dipengaruhi oleh:

  17 a. Kelarutan senyawa dalam pelarut. Bergantung pada besar atraksi antara molekul-molekul senyawa dengan pelarut.

  b. Kemampuan senyawa melekat pada fase diam, misalnya gel silika. Tergantung pada bagaimana besar atraksi antara senyawa dengan gel silika (Clark, 2007).

  Tabel II. berikut ini menampilkan indeks polaritas beberapa pelarut yang sering digunakan:

  

Tabel II. Nilai indeks polaritas pelarut

Pelarut

  Eluotropic Polarity Viscosity Density Refractive Boiling Value (e°) Index (cP, 25°C) (g/ml) Index (25°) Point (on silica) (p’)

  (°C) Heksana

  0.01

  0.10 0.30 0.659 1.372

  69 Kloroform

  0.31

  4.10 0.53 1.483 1.443

  61 Asam >0.73

  6.20 1.10 1.049 1.370 118 Asetat Glasial Metanol

  0.73

  5.10 0.54 0.791 1.326

  65 (Stahl, 1985).

  4. Aplikasi penotolan sampel

  Pemisahan pada KLT yang optimal akan diperoleh jika menotolkan sampel dengan ukuran bercak sekecil dan sesempit mungkin. Sebagaimana dalam prosedur kromatografi yang lain, jika sampel yang digunakan terlalu banyak maka akan menurunkan resolusi. Reprodusibilitas diperoleh dengan volume sampel yang ditotolkan paling sedikit 0,5 µL. Jika volume sampel yang akan ditotolkan lebih besar dari 2-10 µL maka penotolan harus dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar totolan (Gandjar dan Rohman, 2007).

  5. Pengembangan

  Bila sampel telah ditotolkan maka tahap selanjutnya adalah mengembangkan sampel tersebut dalam suatu bejana kromatografi yang

  18 sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. Tepi bagian bawah lempeng lapis tipis yang telah ditotoli sampel dicelupkan ke dalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi fase gerak dalam bejana harus dibawah lempeng yang telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak sedikit mungkin. Akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai ketinggian lempeng yang telah ditentukan. Penjenuhan fase gerak biasanya bejana dilapisi dengan kertas saring. Jika fase gerak telah mencapai ujung atas kertas saring, maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh.

  (Gandjar dan Rohman, 2007).

6. Penentuan kromatogram

  Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai R f yang berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai R f untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai R f dari senyawa standar. Nilai R f dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh senyawa dari titik asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut dari titik asal (Clark, 2007).

  Pemisahan kromatografi planar ini pada umumnya dihentikan sebelum semua fase gerak melewati seluruh permukaan fase diam. Solut pada kedua kromatografi ini dikarakterisasi dengan jarak migrasi solut terhadap jarak ujung fase geraknya. Gambaran untuk menghitung R terdapat dalam gambar berikut ini:

  f

  19

  Gambar 6. Ca Cara penentuan harga R (Gandjar dan Rohman an, 2007) _f

  Nilai R f dihit hitung dengan menggunakan perbandingan seba sebagaimana dalam persamaan berikut:

  R f

  = (1)

  Nilai maksim ksimum R adalah 1 dan ini dicapai ketika sol solut mempunyai

  f