DETEKSI ANTIBODI TERHADAP VIRUS AVIAN INFLUENZA A/H5 PADA KUNING TELUR AYAM DARI BEBERAPA PASAR TRADISIONAL DI KOTA SURABAYA Repository - UNAIR REPOSITORY

  

DETEKSI ANTIBODI TERHADAP VIRUS AVIAN INFLUENZA A/H5 PADA

KUNING TELUR AYAM DARI BEBERAPA PASAR TRADISIONAL

DI KOTA SURABAYA

  Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

  Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga

  Oleh WIJAYANTI LIESTIYONINGTIYAS NIM 060313215

  Menyetujui Komisi Pembimbing,

  Jola Rahmahani, M.Kes., Drh Rimayanti, M.Kes., Drh Pembimbing Pertama Pembimbing Kedua

  PERNYATAAN

  Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi berjudul :

  

Deteksi Antibodi Terhadap Virus Avian Influenza A/H5 Pada Kuning Telur

Ayam Dari Beberapa Pasar Tradisional Di Kota Surabaya

  tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

  Surabaya, Desember 2007 Wijayanti Liestiyoningtiyas

  NIM 060313215 Telah dinilai pada Seminar Hasil Penelitian Tanggal : 11 Desember 2007 KOMISI PENILAI SEMINAR HASIL PENELITIAN Ketua : Emmanuel Djoko Poetranto, M.S., Drh.

  Sekretaris : Dr. Agnes Theresia Soelih Estoepangestie, Drh. Anggota : Dr. Suwarno, M.Si., Drh. Pembimbing I : Jola Rahmahani, M.Kes., Drh. Pembimbing II : Rimayanti, M.Kes., Drh.

  Telah diuji pada Tanggal : 19 Desember 2007 KOMISI PENGUJI SKRIPSI Ketua : Emmanuel Djoko Poetranto, M.S., Drh.

  Anggota : Dr. Agnes Theresia Soelih Estoepangestie, Drh.

  Dr. Suwarno, M.Si., Drh. Jola Rahmahani, M.Kes., Drh. Rimayanti, M.Kes., Drh.

  Surabaya, 10 Januari 2008 Fakultas Kedokteran Hewan

  Universitas Airlangga Dekan, Prof. Hj. Romziah Sidik, Ph.D., Drh.

  NIP. 130687305

  

THE DETECTION OF ANTIBODY OF A/H5 AVIAN INFLUENZA VIRUS

IN EGG YOLK FROM TRADITIONAL MARKETS

  Wijayanti Liestiyoningtiyas

  

ABSTRACT

  The aim of this study is to detect the antibody of A/H5 Avian Influenza (AI) virus in egg yolk from consumption eggs sold in traditional markets in Surabaya. Total of 300 eggs were collected from 15 markets of five districts in Surabaya using Stratified Random Sampling method and were examined by Haemaglutination Inhibition test. The result showed that there were significantly different (p<0,05) among the five districts in Surabaya, North Surabaya was a district with the highest AI A/H5 antibody titer and Central Surabaya was the lowest. The variable of egg type showed that antibody titer against AI A/H5 of kampong chicken egg yolk was higher then domestic (p<0,01). The combination of district and type of egg was significantly different (p<0,01). The AI A/H5 antibody titer of kampong chicken egg yolk from North Surabaya and domestic from West Surabaya were the highest.

  

Key words : Antibody, Avian Influenza virus, egg yolk, Haemagglutination Inhibition.

UCAPAN TERIMA KASIH

  Puji syukur Kehadirat Allah SWT atas karunia yang telah dilimpahkan sehingga penulis dapat melaksanakan penelitian dan menyelesaikan skripsi dengan judul Deteksi Antibodi Terhadap Avian Influenza A/H5 Pada Kuning Telur Ayam Dari Beberapa Pasar Tradisional Di Kota Surabaya.

  Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada : Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Prof. Hj. Romziah

  Sidik, Ph.D., Drh., atas kesempatan mengikuti pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

  Jola Rahmahani, M.Kes., Drh., selaku pembimbing pertama, Rimayanti, M.Kes., Drh selaku pembimbing kedua dan Dr. Suwarno, M.Si., Drh., selaku pembimbing penelitian sekaligus anggota penguji atas saran dan bimbingannya sampai dengan selesainya skripsi ini.

  Emmanuel Djoko Poetranto, MS., Drh., selaku ketua penguji dan Dr Agnes Theresia Soelih Estoepangestie Drh., selaku sekretaris penguji.

  Seluruh staf pengajar Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga atas wawasan keilmuan selama mengikuti pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

  Seluruh dosen dan staf di Laboratorium Virologi dan Imunologi Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga atas bantuan teknik dalam proses penelitian ini.

  Ayahku Widji, ibuku Alm. Lissiyah serta kakak-kakakku Listiyanto D., Liestiyani W., dan Wiwik L. yang tercinta atas segala do’a, pengorbanan, kasih

  Teman sepenelitian Mega Yunita atas semangat, do’a dan kesabarannya, Nurma S. H., Yuni Widhi, dan teman-teman angkatan 2003 atas segala bantuan dan nasehatnya.

  Semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan makalah ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu.

  Penulis menyadari bahwa makalah ini jauh dari sempurna, untuk itu penulis mengharap kritik dan saran dari pembaca sebagai upaya penyempurnaan makalah ini.

  Semoga penelitian ini dapat bermanfaat dalam upaya pencegahan dan pengendalian penyakit AI.

  Akhir kata penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya.

  Surabaya, Desember 2007 Penulis

  DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN PERNYATAAN ................................................................................ ii HALAMAN IDENTITAS ....................................................................................... iii ABSTRACT ............................................................................................................ v UCAPAN TERIMA KASIH.................................................................................... vi DAFTAR ISI ........................................................................................................... viii DAFTAR TABEL.................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. xi DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ xii BAB 1 PENDAHULUAN .......................................................................................

  1 1.1. Latar Belakang ....................................................................................

  1 1.2. Rumusan Masalah ...............................................................................

  4 1.3. Landasan Teori....................................................................................

  5 1.4. Tujuan Penelitian ................................................................................

  6 1.5. Manfaat Penelitian ..............................................................................

  6 1.5.1. Manfaat Teoritis........................................................................

  6 1.5.2. Manfaat Praktis .........................................................................

  6 1.6. Hipotesis Penelitian ............................................................................

  6 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................................

  7 2.1. Virus Avian Influenza ...........................................................................

  7

  2.1.1. Etiologi dan Morfologi ............................................................. 7 2.1.2. Sifat Virus AI............................................................................

  8 2.1.3. Variasi Antigenik Virus AI......................................................

  9

  2.1.4. Sumber dan Cara Penularan AI................................................. 10

  2.1.5. Gejala Klinik ............................................................................. 11

  2.1.6. Diagnosis dan Diagnosis Banding ............................................ 12

  2.1.7. Pencegahan, Pengendalian dan Pemberantasan AI................... 13

  2.1.8. Pengobatan ................................................................................ 15

  2.2. Telur..................................................................................................... 16

  2.2.1. Struktur Telur ........................................................................... 16

  2.2.2. Komposisi Telur........................................................................ 16

  2.2.3. Kualitas telur ............................................................................. 17

  2.3. Hemaglutinasi Inhibisi ......................................................................... 18

  2.3.1. Hemaglutinasi ........................................................................... 18

  2.3.2. Hemaglutinasi Inhibisi .............................................................. 19

  BAB 3 MATERI DAN METODE........................................................................... 20

  3.1. Tempat dan Waktu Penelitian .............................................................. 20

  3.2. Bahan dan Materi Penelitian ................................................................ 20

  3.2.1. Bahan Penelitian ....................................................................... 20

  3.2.2. Alat-alat Penelitian.................................................................... 20

  3.3. Metode Penelitian ................................................................................ 21

  3.3.1. Sampel Telur ............................................................................. 21

  3.3.4. Retitrasi Antigen 4 HA Unit ..................................................... 22

  3.3.5. Uji Hemaglutinasi Inhibisi (HI) Mikroteknik ........................... 23

  3.4. Rancangan Penelitian........................................................................... 24

  3.5. Peubah Yang Diamati .......................................................................... 24

  3.6. Analisis Data........................................................................................ 24

  BAB 4 HASIL PENELITIAN.................................................................................. 25 BAB 5 PEMBAHASAN.......................................................................................... 28 BAB 6 KESIMPULAN dan SARAN ...................................................................... 33

  6.1 Kesimpulan ........................................................................................... 33

  6.2 Saran ..................................................................................................... 33 RINGKASAN .......................................................................................................... 34 DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 36 LAMPIRAN............................................................................................................. 40

  

DAFTAR TABEL

  Tabel Halaman

  4.1 Rata-rata dan simpangan baku titer antibodi (log2) kuning telur ayam buras dan ras di lima wilayah kota Surabaya ................................................. 25

  4.2 Selisih rata-rata total titer antibodi (log2) pada perlakuan wilayah ................ 26

  4.3 Hasil uji BNJ 5% untuk perlakuan wilayah .................................................... 27

  4.3 Hasil uji BNJ 5% untuk perlakuan kombinasi antara wilayah dengan jenis Telur................................................................................................................ 27

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar Halaman 2.1 Ilustrasi virus Avian influenza.........................................................................

  8

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran Halaman

  1 Analysis of Variance ....................................................................................... 40

  2 Bahan dan Alat Penelitian................................................................................ 43

  3 Ekstraksi Kuning Telur Ayam Ras dan Buras ................................................. 44

  4 Tabel Hasil Uji HI Telur Ayam Ras dan Buras ............................................... 45

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Sektor peternakan merupakan salah satu komoditas penting di Indonesia.

  Menurut Sudaryani dan Sentosa (1997) ternak unggas, khususnya ayam, merupakan komoditas ternak yang cepat berproduksi dan banyak dipelihara karena relatif murah dan mudah pemeliharaannya jika dibandingkan dengan ternak lain. Perkembangan usaha peternakan dipengaruhi oleh berbagai macam faktor salah satunya adalah penyakit. Menurut Lusiastuti dkk (2006) penyakit dapat mempengaruhi kesejahteraan ternak, produktifitas ternak dan secara langsung maupun tidak langsung akan berpengaruh terhadap kehidupan manusia. Salah satu penyakit infeksi pada unggas yang disebabkan oleh virus adalah avian influenza (AI) atau flu burung.

  Keberadaan virus ini sudah ada sejak lama dan tersebar luas di dunia yang dapat menyebabkan influenza pada babi, kuda dan unggas serta manusia (Fenner et

  

al ., 1995). Avian influenza yang menyebabkan kematian sangat tinggi pada unggas

  dilaporkan pertama kali di Italia tahun 1878 dan dikenal sebagai “fowl plaque”. Fowl

  

plaque telah dikenal di Eropa sejak abad ke-19 tetapi virus penyebabnya baru

  diidentifikasi sebagai virus influenza A pada tahun 1955 (Tabbu, 2000). Diuraikan oleh Murphy et al. (1999) bahwa pandemi AI di dunia telah terjadi pada abad ke-20, yaitu Spanish Flu tahun 1918 yang menyebabkan 25 hingga 40 juta orang meninggal dunia. Menurut Tabbu (2000) virus influenza A strain H5NI yang menyerang ayam dan burung peliharaan pernah dilaporkan mewabah di Hong Kong pada tahun 1997.

  Letupan wabah AI atau flu burung di Indonesia telah terjadi pada akhir 2003 sampai awal 2004. Wabah tersebut telah menyebabkan kematian unggas di beberapa Daerah Istimewa Yogyakarta (DIY). Pemerintah mengindikasikan penyebab kematian ayam tersebut adalah penyakit Newcastle Disease velogenic viscerotropic (vvND).

  Departemen Pertanian pada tanggal 25 Januari 2004 mengumumkan secara resmi bahwa penyebab kematian unggas yang menyerang Indonesia adalah virus AI sub tipe H5NI (Rahardjo, 2004).

  Kejadian AI di Indonesia telah mengalami perkembangan. Bulan April tahun 2005, virus AI telah ditemukan pada babi di Tangerang - Propinsi Banten. Memasuki bulan Juni, kasus AI pertama pada manusia terjadi di Tangerang-Banten. Kasus AI pada manusia juga menimpa warga Kalideres - Jakarta Barat dan Serpong - Tangerang yang diduga terkait dengan bangkai bebek yang dibuang di sungai (Poultry Indonesia, 2007). Flu burung dipastikan telah menyerang wilayah Surabaya setelah hasil uji laboratorium Balai Besar Veteriner di Wates, Yogyakarta, menyatakan bahwa kasus di Kedurus, Surabaya, positif flu burung (Kompas, 2006). Dampak dari merebaknya kasus ini sangatlah jelas, yaitu menurunnya permintaan broiler hingga 50%, melemahnya permintaan DOC dan menurunnya permintaan pakan mendorong agrobisnis perunggasan menghadapi ancaman kebangkrutan (Poultry Indonesia, 2007). Selain itu, alokasi dana yang digunakan untuk pencegahan, pengendalian dan pemberantasan penyakit avian influenza juga tidak sedikit jumlahnya.

  Masalah avian influenza ini membutuhkan perhatian yang sangat serius dari inter disiplin profesi, termasuk kerja sama diantara pemerintah, kalangan Kedokteran Umum dan Kedokteran Hewan serta tak lepas dari dukungan masyarakat. Salah satu upaya yang perlu dilakukan untuk mengatasi hal itu adalah tindakan pencegahan dan pemberantasan penyakit yang didukung dengan diagnosis yang tepat.

  Diagnosis avian influenza secara klinik pada umumnya tidak bisa digunakan

  (Murphy et al., 1999). Secara umum, diperlukan pemeriksaan laboratorium untuk mendiagnosis penyakit virus hewan, meliputi isolasi dan identifikasi agen penyebab penyakit dari bahan tersangka, uji serologi untuk mendeteksi dan mengukur antibodi spesifik yang terbentuk selama kejadian penyakit, menemukan antigen virus dalam lesi dengan menggunakan antibodi yang diwarnai dengan fluoresein atau peroksidase, dan pemeriksaan dengan mikroskop elektron dari bahan tersangka dengan pewarnaan positif dan negatif guna mengenal dan mengetahui ukuran partikel virus (Ernawati dkk., 2002). Diungkapkan oleh Rahardjo (2004) bahwa pemeriksaan serologik yang sering dipakai adalah uji Hemaglutinasi Inhibisi (HI) untuk mengetahui antibodi terhadap Hemaglutinin (H) dan Agar Gel Presipitasi (AGP) untuk mengetahui adanya antibodi terhadap Neuraminidase (N). Uji serologik yang lain adalah Netralisasi Virus (VN), Neuraminidase-Inhibition (NI), Enzyme Linked Immuno- sorbent Assay (ELISA), antibodi monoklonal, dan hibridisasi in situ.

  Status avian influenza pada peternakan ayam dapat ditentukan dengan uji serum darah. Metode uji serum darah merupakan uji serologis yang dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus AI (Beck et al., 2003). Metode ini dapat menjadi suatu kendala tertentu karena membutuhkan tenaga intensif untuk penanganan tiap individu ayam. Supernatan yang berasal dari kuning telur ayam dapat digunakan sebagai uji serologis sebagai pengganti serum darah. Seperti halnya dengan serum darah, kuning telur juga mengandung antibodi yang dapat digunakan sebagai uji serologis. Menurut Camenish et al. (1999) sumber antibodi pada kuning telur adalah imunoglobulin (IgY).

  1.2 Rumusan Masalah

  Berdasarkan latar belakang di atas, maka rumusan masalah dalam penelitian ini adalah :

  1. Apakah antibodi anti-AI A/H5 dapat dideteksi pada kuning telur ayam?

  2. Apakah terdapat perbedaan titer antibodi anti-AI A/H5 antara kuning telur ayam ras dan buras ?

  3. Apakah terdapat perbedaan lokasi pengambilan sampel terhadap titer antibodi anti-AI A/H5 pada kuning telur ayam ras dan buras ?

  1.3 Landasan Teori

  Tindakan pencegahan dan pemberantasan penyakit AI yang didukung dengan diagnosis yang tepat sangat dibutuhkan untuk mengatasi merebaknya kasus AI.

  Murphy et al. (1999) menyatakan bahwa diagnosis secara klinik pada umumnya tidak bisa digunakan untuk meneguhkan diagnosis penyakit secara pasti karena gejala klinik yang beragam. Menurut Ernawati dkk. (2002) diperlukan pemeriksaan laboratorium untuk mendiagnosis penyakit virus hewan, salah satunya adalah uji serologi untuk mendeteksi antibodi spesifik.

  Status avian influenza pada peternakan ayam dapat ditentukan dengan uji serum darah untuk mengetahui adanya antibodi terhadap virus AI. Sebagai metode tes alternatif, kuning telur ayam dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus avian influenza (Beck et al., 2003). Indriani dan Dharmayanti (2006) mengungkapkan bahwa perpindahan unggas maupun produk asal unggas, baik di dalam negeri maupun dari dan ke luar negeri, memerlukan sertifikat untuk menjamin dilakukan dengan mendeteksi antibodi dalam sampel yang berasal dari kuning telur dan dapat diperoleh tanpa mengganggu unggas saat pengambilan contoh sampel.

  Suartha dkk (2003) menyebutkan bahwa antibodi spesifik (IgY) yang ada dalam darah induk ayam dapat ditransfer secara baik ke dalam telur dalam jumlah yang cukup banyak. Kandungan IgY pada kuning telur mencapai 10 hingga 20 mg/ml.

  1.4. Tujuan Penelitian

  Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus AI A/H5 pada kuning telur ayam buras dan ras dari beberapa pasar tradisional di kota Surabaya.

  1.5 Manfaat Penelitian

  

1.5.1 Manfaat teoritis dari penelitian ini adalah sebagai landasan ilmiah bahwa

  kuning telur mengandung antibodi yang dapat digunakan sebagai uji serologis untuk mendeteksi antibodi virus AI.

  1.5.2 Manfaat praktis dari penelitian ini adalah : 1.

  Sebagai metode alternatif pada uji serologis dengan menggunakan kuning telur ayam sebagai pengganti serum darah.

  2. Kuning telur dapat dimanfaatkan sebagai uji serologis dalam prosedur monitoring penyakit AI pada peternakan ayam.

  3. Penggunaan kuning telur dalam uji serologis merupakan salah satu upaya untuk menentukan tindakan pencegahan penyakit AI.

1.6 Hipotesis Penelitian 1.

  Terdapat perbedaan titer antibodi anti-AI A/H5 antara kuning telur ayam buras dan ras.

2. Terdapat perbedaan lokasi pengambilan sampel terhadap titer antibodi anti-AI A/H5 pada kuning telur ayam ras dan buras.

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Virus Avian Influenza

2.1.1 Etiologi Dan Morfologi

  Avian influenza disebabkan oleh virus influenza yang tergolong dalam famili

Orthomyxoviridae (Tabbu, 2000). Famili ini terbagi menjadi tiga tipe, yaitu virus

  influenza tipe A, B, dan C (Cox et al., 2000; Indriani dan Dharmayanti, 2006; Rantam, 2005). Virus influenza A patogen pada kuda, babi, mink, anjing laut, paus, unggas dan manusia. Virus influenza B patogen pada manusia, sedangkan virus influenza C dapat menginfeksi manusia dan babi (Murphy et al., 1999).

  Virus avian influenza berbentuk spherical atau pleomorphic, mempunyai amplop dan berdiameter 80-120 mm (Murphy et al., 1999). Jenis asam nukleat dari famili Orthomyxoviridae adalah ribonukleat acid (RNA) dan beruntai tunggal (single

  

stranded ) (Ernawati dkk., 2002).Virus ini dibungkus oleh glikoprotein dan dilapisi

  oleh lapisan lemak ganda (bilayer lipid). Glikoprotein HA dan NA merupakan protein permukaan yang sangat berperan dalam penempelan dan pelepasan virus dari sel inang (Rahardjo, 2004).

  Diungkapkan oleh Fouchier et al. (2005) yang dikutip oleh Indriani dan Dharmayanti (2006) bahwa virus influenza A diklasifikasikan berdasarkan antigenitas dari glikoprotein hemaglutinin (HA) dan neuraminidase (NA) yang diekspresikan pada permukaan partikel virus. Virus AI mempunyai 16 subtipe HA dan 9 subtipe NA yang telah dideteksi pada burung-burung liar dan unggas di dunia.

Gambar 2.1 Ilustrasi virus Avian influenza (Heinen, 2003)

2.1.2 Sifat virus AI

  Virus influenza relatif tidak stabil terhadap lingkungan. Suhu yang panas, perubahan pH yang ekstrim atau kondisi non isotonik dan kekeringan dapat menyebabkan virus menjadi inaktif (www.agnr.umd.edu_avianflu, 2006). Lapisan lemak ganda pada selubung virus menjadikan virus influenza ini sensitif terhadap pelarut lemak, misalnya deterjen, sehingga virus menjadi tidak infektif lagi. Infektivitas ini juga dirusak dengan cepat oleh formalin, asam encer, eter, dan senyawa iodium. Virus juga akan mati pada temperatur 56 C selama tiga jam atau

  60 C selama 30 menit atau lebih (Rahardjo, 2004). Sebaliknya virus ini masih dapat bertahan hidup dalam air dengan suhu 22°C selama empat hari dan 0°C selama lebih dari 30 hari (Departemen Pertanian, 2005). Virus avian influenza masih tetap infektif dalam feses selama 30-35 hari pada temperatur 4 C dan selama tujuh hari pada temperatur 20

  C. Virus influenza dapat diisolasi dari air danau atau kolam yang terletak di daerah yang banyak dihuni oleh unggas air. Virus ini dapat tumbuh di dalam jumlah besar dari feses dan sekresi respirasi dari ayam yang terinfeksi (Beck et al ., 2003).

  2.1.3 Variasi Antigenik Virus AI

  Virus influenza A bersifat sangat mudah mutasi, terutama pada HA dan NA (Rahardjo, 2004). Variasi antigenik pada virus influenza dapat terjadi melalui dua cara, yaitu drift dan shift (Tabbu, 2000). Antigenic drift merupakan keadaan virus influenza yang mengalami mutasi kode genetik pada antigen permukaan HA dan NA (Zage, 1998). Mekanisme tersebut menghasilkan strain virus baru yang menyebabkan virus influenza tidak dikenali oleh antibodi. Antigenic drift dapat terjadi ketika seseorang terinfeksi oleh virus influenza di mana antibodi telah terbentuk untuk melawan virus tersebut. Strain virus baru yang dihasilkan dari mekanisme antigenic

  

drift menyebabkan antibodi dalam tubuh tidak dapat mengenali virus ini. Mekanisme

  inilah yang menyebabkan seseorang dapat terinfeksi vius influenza lebih dari satu kali selama hidupnya (www.cdc.gov/flu/ avian/gen-info/flu-viruses.htm, 2005).

  Antigenic shift dapat terjadi melalui transmisi langsung dari unggas ke

  manusia maupun melalui percampuran genetik (genetic reassortment) dari dua virus influenza yang berbeda yang menginfeksi sel (Harimoto and Kawaoka, 2001).

  2.1.4 Sumber dan Cara Penularan AI

  Virus avian influenza bereplikasi di dalam epitel usus halus dan diekskresikan melalui feses dengan konsentrasi yang tinggi dan dapat bertahan dalam jangka waktu yang lama, terutama di dalam air pada suhu yang rendah (Murphy et al., 1999). Unggas air merupakan reservoir alami dari virus influenza A

  (1995), bahwa unggas air seperti itik dan angsa merupakan sumber utama penularan penyakit flu burung.

  Unggas air yang menjadi sumber penyakit avian influenza, umumnya memang tidak memberi petunjuk adanya gejala-gejala terserang, tetapi akan mengeluarkan virus selama jangka waktu yang lama. Apabila kalkun yang terserang penyakit AI, virusnya tetap berada dalam tubuhnya selama beberapa bulan dan virus yang telah diisolasi dari telur kalkun menunjukkan adanya pemindahan vertikal meskipun virusnya akan membunuh embrio (Murtidjo, 1992).

  Penularan penyakit AI dapat terjadi secara langsung maupun tidak langsung. Penularan secara langsung terjadi ketika kontak dengan ternak yang sakit melalui udara, cairan atau lendir yang berasal dari hidung, mulut, dan mata, serta kotoran dan udara. Penularan tak langsung terjadi melalui air, peralatan, telur, pakan serta alat transportasi yang terkontaminasi oleh virus AI (Departemen Pertanian, 2006).

2.1.5 Gejala Klinik

  Menurut Franco and Herenda (1996) masa inkubasi AI bervariasi mulai dari beberapa jam sampai tujuh hari, tergantung dari dosis infeksi virus, virulensi, umur ayam yang terinfeksi, spesies dan status kekebalan dalam kandang, serta faktor lingkungan. Virus dengan virulensi yang tinggi dapat menyebabkan morbiditas dan mortalitas mencapai 100%.

  Strain “Highly Virulent” menyebabkan kematian mendadak atau tiba-tiba tanpa gejala klinis yang tampak (Murphy et al., 1999). Pada umumnya kematian dapat terjadi dalam beberapa jam setelah gejala klinis yang muncul pertama kali. Sebelum terjadi kematian temperatur akan menurun hingga menjadi subnormal (Barlough et masa bertelur, kesulitan bernapas, lakrimasi, sinusitis, diare, edema kepala, muka dan leher, serta sianosis pada kulit yang tidak berbulu, terutama pada pial dan jengger.

  Virulen virus yang tidak ganas dapat menyebabkan anoreksia, menurunnya berat badan, menurunnya produksi telur, penyakit respirasi dan sinusitis (Murphy et al., 1999). Populasi yang padat, rendahnya sistem ventilasi dan munculnya infeksi yang lain merupakan faktor predisposisi terjadinya penyakit (Quinn et al., 2002). Pada beberapa kasus terlihat adanya kongesti, hemoragi, transudat dan fosi nekrotik pada kulit dan pial. Eksudat fibrinous juga tampak pada kantung udara, perikardium, peritonium dan oviduk. Pada limpa, hati, ginjal dan paru-paru dapat ditemukan fosi nekrotik (Franco and Herenda, 1996).

2.1.6 Diagnosis dan Diagnosis Banding

  Diagnosis secara klinik pada umumnya tidak bisa digunakan untuk meneguhkan diagnosis penyakit secara pasti karena adanya gejala klinik yang bervariasi (Murphy et al., 1999). Secara umum, diperlukan pemeriksaan laboratorium untuk mendiagnosis penyakit virus hewan meliputi isolasi dan identifikasi (Ernawati dkk., 2002). Isolasi virus dapat dilakukan pada telur ayam bertunas umur 10-11 hari menggunakan jaringan trakea dan/atau kloaka dari unggas yang mati ataupun hidup (Tabbu, 2000). Pemeriksaan serologis dapat dilakukan untuk mengetahui adanya pembentukan antibodi terhadap virus influenza A (Tabbu, 2000). Antibodi anti- influenza dapat dideteksi pada serum ayam betina tujuh hari pasca inokulasi virus hidup, sedangkan deteksi antibodi pada kuning telur dilakukan 14 hari pasca inokulasi (Beck et al., 2003). Pemeriksaan serologis yang sering dipakai adalah uji Hemaglutinasi Inhibisi (HI) untuk mengetahui adanya antibodi terhadap Hemaglutinin Neuraminidase (N). Uji serologis yang lain adalah Netralisasi Virus (VN),

  

Neuraminidase-Inhibition (NI), Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA),

antibodi monoklonal, dan hibridisasi in situ (Rahardjo, 2004).

  Diagnosis banding dari penyakit AI adalah viscerotropic velogenic Newcastle

  

Disease (vvND), Fowl Cholera, Clamydiosis dan Mycoplasmosis (Franco and

  Herenda, 1996). Penyakit lain yang mirip dengan AI adalah Pigeon Paramyxovirus,

  

Infectious Bronchitis (IB) dan Swollen Head Syndrome. AI juga mirip dengan

Infectious Laryngotracheitis dari gejala gangguan pernapasan dan adanya eksudat

  bercampur darah dari lumen trakea (Rahardjo, 2004).

2.1.7 Pencegahan, Pengendalian dan Pemberantasan AI

  Prinsip dasar yang diterapkan dalam pencegahan, pengendalian, dan pemberantasan avian influenza atau flu burung ini adalah mencegah kontak antara hewan peka dengan virus AI, menghentikan produksi virus AI oleh unggas tertular, meningkatkan resistensi (pengebalan) dengan vaksinasi, menghilangkan sumber penularan virus dan peningkatan kesadaran masyarakat (public awarness) (Departemen Pertanian, 2005).

  Dalam pelaksanaannya dapat dilakukan melalui sembilan tindakan yang merupakan satu kesatuan, yaitu peningkatan biosecurity, vaksinasi, depopulasi atau pemusnahan terbatas di daerah tertular, pengendalian lalu lintas keluar masuk unggas,

  

surveilans dan penelusuran, pengisian kandang kembali atau peremajaan, stamping

out atau pemusnahan menyeluruh di daerah tertular baru, peningkatan kesadaran

  masyarakat, serta monitoring dan evaluasi (Departemen Pertanian, 2005)

  Biosecurity adalah semua tindakan yang merupakan pertahanan pertama untuk penularan dengan peternakan tertular dan penyebaran penyakit. Tindakan biosecurity yang harus dilakukan meliputi pengawasan lalu lintas dan tindak karantina atau isolasi lokasi peternakan tertular dan lokasi tempat-tempat penampungan unggas yang tertular serta dekontaminasi atau desinfeksi (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

  Tindakan pemusnahan unggas selektif di daerah tertular dapat dilakukan dengan cara pemusnahan selektif (depopulasi) dan disposal. Depopulasi adalah suatu tindakan untuk mengurangi populasi unggas yang menjadi sumber penularan penyakit. Disposal adalah prosedur untuk melakukan pembakaran dan penguburan terhadap unggas mati (bangkai), karkas, telur, kotoran (feses), bulu, alas kandang (sekam), pupuk dan pakan ternak yang tercemar serta bahan dan peralatan lain terkontaminasi yang tidak dapat didekontaminasi atau didesinfeksi secara efektif (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

  Vaksinasi merupakan pertahanan kedua dalam upaya mengendalikan dan memberantas wabah penyakit AI. Tindakan vaksinasi dilakukan secara massal terhadap seluruh unggas sehat pada daerah tertular dan vaksin yang dipergunakan adalah vaksin inaktif. Monitoring pasca vaksinasi dilakukan untuk mengetahui tingkat kekebalan unggas yang divaksin dengan metode pemeriksaan serologi HI tes menggunakan antigen yang homolog dengan strain vaksin (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

  Tindakan surveilans bertujuan untuk menetapkan sumber infeksi di daerah baru tertular, menetapkan penyebaran atau perluasan penyakit di daerah tertular, memantau epidemiologi dan dinamika penyakit untuk mengetahui perkembangan pengendalian dan pemberantasan penyakit, menetapkan wilayah daerah bebas, daerah terancam dan daerah tertular penyakit, serta mendeteksi tingkat kekebalan kelompok pasca vaksinasi (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

  Pengisian kembali (restocking) unggas ke dalam kandang dapat dilakukan sekurang-kurangnya satu bulan setelah dilakukan pengosongan kandang. Pada daerah bebas atau terancam apabila timbul kasus avian influenza dan telah didiagnosis secara klinis, patologi anatomis dan epidemiologis serta dikonfirmasi secara laboratoris, maka dilakukan tindakan pemusnahan menyeluruh (stamping-out). Tindakan ini dilakukan dengan cara memusnahkan seluruh ternak unggas yang sakit maupun yang sehat pada peternakan tertular dan juga terhadap semua unggas yang berada dalam radius 1 km dari peternakan tertular tersebut (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

  Kegiatan monitoring dimaksudkan untuk mengetahui perkembangan kegiatan dan dampak serta permasalahan yang timbul pada saat kegiatan dilaksanakan.

  Pelaporan meliputi laporan situasi penyakit dan perkembangan pelaksanaan pengendalian dan pemberantasan penyakit. Evaluasi pelaksanaan pencegahan, pengendalian dan pemberantasan dimaksudkan untuk mengetahui pencapaian target fisik kegiatan dan dampak keberhasilannya serta permasalahan yang timbul di lapangan. (Direktur Jenderal Bina Produksi Peternakan, 2004).

2.1.8 Pengobatan

  Menurut Tabbu (2000) Avian influenza tidak dapat diobati, pemberian antibiotik atau antibakteri hanya ditujukan untuk mengobati infeksi sekunder oleh bakteri atau Mycoplasma. Di samping itu, perlu juga dilakukan pengobatan suportif dengan multivitamin untuk membantu proses rehabilitasi jaringan yang rusak.

2.2 Telur

  2.2.1 Struktur Telur

  Bentuk telur yang normal pada umumnya adalah bulat lonjong, tetapi ada sebagian kecil yang berbentuk abnormal yaitu terlalu bulat atau terlalu lonjong.

  Perbedaan tersebut terjadi karena faktor genetis, umur ayam sewaktu bertelur, sifat biologis induknya, dan sifat fisilogis pada induknya sewaktu bertelur. Bentuk telur ayam dinyatakan dalam indeks perbandingan antara lebar dan panjang telur (Sarwono, 1994). Hal ini sesuai dengan pendapat Sudaryani (1996) yang menyatakan bentuk telur yang baik adalah proporsional tidak terlalu bulat dan juga tidak terlalu lonjong, perbandingan antara panjang dan lebar adalah 5,7 cm dan 4,2 cm.

  2.2.2 Komposisi Telur

  Telur tersusun dari 11% cangkang, 58% putih telur (albumin) dan 31% kuning telur (yolk) (Indartono, 2007). Kulit dan membran telur berfungsi sebagai pelindung masuknya mikroba ke dalam telur yang dapat menurunkan kualitas dari telur (Lubis dan Parimin, 2001). Menurut Taylor and Field (2004) kerabang telur mengandung 94% mineral kalsium karbonat, 1% magnesium karbonat dan 1% kalsium phospor. Putih telur atau albumin terdiri dari lapisan tipis bagian luar yang disebut outer thin, lapisan tipis bagian dalam (inner thin), chalaziferous serta chalaza yang berfungsi mempertahankan kuning telur agar tetap pada tempatnya. Kuning telur terdiri dari light yolk layer, dark yolk layer, latebra, blastoderm dan membran vitelin. Pada sebutir telur ayam dengan berat 50 gram akan diperoleh 6,3 gram protein, 0,6 gram karbohidrat, 5 gram lemak, serta sejumlah vitamin dan mineral penting. Selain itu, telur juga mengandung asam amino esensial dan non esensial, juga mineral dan diserap oleh usus untuk dimanfaatkan tubuh manusia. Selain vitamin A, telur juga kaya akan vitamin B yaitu vitamin B

  2 , niasin, tiamin, dan riboflavin. Vitamin lain

  yang juga cukup tinggi dalam telur adalah vitamin E dan D. Mineral penting yang terkandung dalam telur yakni besi, fosfor, kalsium, tembaga, iodium, magnesium, mangan, kalium, natrium, seng, klorida dan sulfur (Indartono, 2007). Selain zat gizi, di dalam telur juga terkandung antibodi. Sumber antibodi pada kuning telur adalah imunoglobulin (IgY). Embrio ayam dan anak ayam yang baru ditetaskan memperoleh kekebalan pasif melalui perpindahan immunoglobulin maternal dari serum ke kuning telur (Camenish et al., 1999).

2.2.3 Kualitas Telur

  Mutu telur dapat dinilai melalui candling (peneropongan), yaitu dengan cara meletakkan telur pada jalur sorotan yang kuat sehingga memungkinkan pemeriksaan bagian dalam telur (Buckle dkk., 1987). Pemeriksaan melalui candling bertujuan untuk mengetahui adanya keretakan kulit telur, blood spot, pertumbuhan benih maupun ukuran kuning telur dan kantong udara (Koestanti, 2007).

  Menurut Koestanti (2007) penilaian mutu telur ditentukan oleh beberapa faktor, meliputi berat telur, keadaan putih dan kuning telur serta pergeseran posisi kuning telur. Standart berat telur ayam ras adalah 58 gram sedangkan untuk ayam lokal beratnya kurang dari 58 gram. Keadaan putih telur dapat dilihat pada kekentalan putih telurnya, telur yang segar memiliki kekentalan yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan telur yang sudah lama disimpan. Keadaan putih telur ini dapat diukur menggunakan metode Haugh Unit (HU) untuk mengetahui sifat keenceran berkisar antara 90-100 dan telur yang rusak memiliki nilai HU kurang dari 50. Posisi kuning telur akan mengalami pergeseran ke bagian tepi apabila disimpan terlalu lama.

  Menurut Ingham (1998) posisi kuning telur pada telur yang segar terletak di tengah- tengah putih telur (upstanding), berbentuk bundar dan sedikit lebih tinggi dari putih telur.

2.3 Hemaglutinasi Inhibisi

  2.3.1 Hemaglutinasi

  Beberapa virus memiliki kemampuan untuk mengadsorbsi sel darah merah burung atau mamalia dan menimbulkan aglutinasi (Fudge, 2000). Virus dari golongan Myxovirus, Enterovirus, Arbovirus dan Poxvirus dapat mengaglutinasikan eritrosit dari spesies unggas dan mamalia. Kemampuan mengaglutinasi eritrosit ini disebabkan karena virus mempunyai hemaglutinin, di mana pada golongan Myxovirus hemaglutinin adalah partikel virus itu sendiri (virion). Di samping itu golongan ini juga mempunyai enzim neuraminidase yang dapat melepas ikatan antara hemaglutinin dengan permukaan eritrosit. Hal inilah yang menyebabkan ikatan antara virus dengan eritrosit (hemaglutinasi) sifatnya hanya sementara (reversible) (Ernawati dkk., 2004).

  Aglutinasi sempurna (100%) terlihat jelas berupa lapisan eritrosit secara merata (difuse) pada dasar sumuran dan penjernihan dari cairan bagian atas tanpa terjadinya pengendapan eritrosit berbentuk titik di tengah sumuran (Ernawati dkk., 2004).

  2.3.2 Hemaglutinasi Inhibisi

  Antibodi spesifik terhadap hemaglutinin virus dapat menghambat terjadinya hemaglutinasi (Hemagglutination Inhibition). Reaksi hambatan ini dapat membantu diagnosis laboratorium dalam melakukan identifikasi virus, selain itu uji ini dapat digunakan untuk mengetahui titer antibodi hasil vaksinasi maupun hasil infeksi. Hambatan aglutinasi sempurna (100%) adalah terjadinya pengendapan eritrosit pada dasar lubang mikroplat (Ernawati dkk., 2004).

BAB 3 MATERI DAN METODE PENELITIAN

  3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

  Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Virologi dan Imunologi, Bagian Mikrobiologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya mulai bulan Agustus 2006 hingga Mei 2007.

  3.2 Bahan dan Materi Penelitian

  3.2.1 Bahan Penelitian

  Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel telur yang diperoleh dari beberapa pasar tradisional di Surabaya. Jumlah keseluruhan sampel telur yang digunakan adalah 300 sampel telur yang meliputi telur ayam ras dan buras. Bahan lain yang digunakan untuk ekstraksi kuning telur dan uji HI adalah chloroform, NaCl fisiologis, aquadest steril, alkohol 70%, antigen AI A/H5N1 dari laboratorium Virologi dan Imunologi FKH Unair.

  3.2.2 Alat-Alat Penelitian

  Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah pembakar bunsen, venoject, mikroplate U, lemari es, rak tabung, sentrifuge, vorteks mixer, pinset, gunting, pipet hisap, pipet pasteur, autoclave, microtube steril, alumunium foil, gelas beker, labu erlenmayer, timbangan, mikropipet tunggal dan mikropipet multi.

3.3 Metode Penelitian

3.3.1 Sampel Telur

   Penentuan lokasi pengambilan sampel menggunakan metode stratified tradisional yang ada di Surabaya dengan pembagian wilayah Surabaya Timur, Surabaya Barat, Surabaya Pusat, Surabaya Utara dan Surabaya Selatan dengan masing-masing wilayah diwakili oleh tiga pasar. Lokasi pengambilan sampel untuk wilayah Surabaya Utara adalah pasar Pabean, Pegirian, dan Sidotopo sedangkan sampel untuk wilayah Surabaya Timur diambil dari pasar Mulyosari, Rungkut, dan Manyar. Sampel untuk wilayah Surabaya Selatan berasal dari pasar Wonokromo, Gayung Sari, dan Pagesangan sedangkan untuk wilayah Surabaya Barat berasal dari pasar Benowo, Tandes, dan Manukan. Sampel untuk wilayah Surabaya Pusat berasal dari pasar Keputran, Kembang, dan Blauran. Penentuan besaran sampel menggunakan rumus (t-1) (n-1) ≥ 15 (Rochiman, 1989). Masing-masing pasar diwakili oleh dua pedagang dan tiap pedagang diambil 5 butir telur untuk tiap jenisnya, sehingga didapatkan 150 butir telur ayam ras dan 150 butir telur ayam buras, total keseluruhan sampel yang diperoleh adalah 300 butir.

3.3.2 Ekstraksi Kuning Telur

  Ekstraksi kuning telur dilakukan dengan menambahkan satu bagian kuning telur ditambah satu bagian NaCl fisiologis ( PZ ). Selanjutnya campuran dikocok dengan mixer dan ditambahkan dua bagian Chloroform. Campuran ini diinkubasikan pada suhu ruangan selama 30 menit dan dikocok dengan mixer setiap 5 menit.

  Selanjutnya dilakukan sentrifugasi pada kecepatan 3000rpm selama 15 menit ( Beck

  

et al ., 2003; Selleck, 2005; Indriani dan Dharmayanti, 2006). Hasil ekstraksi kuning

  telur berupa cairan yang berwarna putih dan jernih terdapat pada lapisan paling atas yang disebut supernatan.

  3.3.3 Titrasi Antigen

  Antigen yang digunakan pada uji HI perlu dititrasi terlebih dahulu untuk mengetahui titer antigen yang digunakan. Titrasi dilakukan untuk mendapatkan antigen 4 HA unit yang akan dipakai pada uji HI. Sebelum dilakukan titrasi antigen, antigen yang akan dipakai terlebih dahulu diinaktifkan dengan menggunakan formalin 0,1% dan didiamkan selama satu malam di dalam kulkas. Langkah pertama yang dilakukan untuk titrasi antigen adalah mengisikan 0,025 ml PZ ke dalam lubang mikroplate nomor satu sampai 12 dengan menggunakan mikropipet volume 0,025 ml. Setelah itu isi lubang nomor 1 dengan antigen yang telah diinaktifkan sebanyak 0,025 ml menggunakan mikropipet. Langkah selanjutnya adalah mencampur antigen dan PZ pada lubang nomor satu menggunakan mikropipet dengan cara menghisap dan mengeluarkan cairan pada lubang tersebut, kemudian ambil 0,025 ml dan masukkan ke dalam lubang berikutnya sampai dengan lubang nomor 11. Lubang nomor 12 digunakan sebagai kontrol eritrosit (tanpa antigen). Setelah itu isi semua lubang dengan 0,05 ml eritrosit ayam 0,5% dan inkubasikan pada suhu kamar selama 30 menit (Ernawati dkk, 2004).

  3.3.4 Retitrasi Antigen 4 HA Unit