PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA DARI EKSTRAK DAUN JATI BELANDA (Guazuma ulmifolia Penentuan Potensi Induksi Apoptosis Tilirosida Dari Ekstrak Daun Jati Belanda (Guazuma Ulmifolia Lamk.) Terhadap Sel T47d Dengan Metode Flow Cytometry.

PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA
DARI EKSTRAK DAUN JATI BELANDA (Guazuma ulmifolia
Lamk.) TERHADAP SEL T47D DENGAN METODE
FLOW CYTOMETRY

SKRIPSI

Oleh:

MARHAMAH NUR AZIZAH
K 100110006

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015

1

2


PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA
DARI EKSTRAK DAUN JATI BELANDA (Guazuma ulmifolia
Lamk.) TERHADAP SEL T47D DENGAN METODE
FLOW CYTOMETRY

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta

Oleh:

MARHAMAH NUR AZIZAH
K100110006

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA

2015
ii

3

4

iv

5

KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh
Alhamdulillahirobbil’alamin, atas rahmat dari Allah SW yang telah
memberikan segala nikmat dan karunia-Nya kepada penulis, hanya dengan
kehendak-Nya

penulis

mampu


menyelesaikan

skripsi

dengan

judul

“PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA DARI
EKSTRAK

DAUN

JATI

BELANDA

(Guazuma


ulmifolia

Lamk.)

TERHADAP SEL T47D DENGAN METODE FLOW CYTOMETRY”. Tak
lupa solawat serta salam penulis panjatkan kepada Nabi Muhammad SAW,
sebagai rahmatan lil alamin.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan
lancar tanpa adanya bantuan, dukungan dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka,
penulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi UMS
2. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. dan Ibu Ika Trisharyanti D. K.,
M.Farm., Apt selaku dosen pembimbing.
3. Bapak Andi Suhendi, M.Sc., Apt, selaku pembimbing akademik.
4. Orang tua saya Bapak Bajuri dan Ibu Sri Setyaningsih serta seluruh
keluarga besar Sriyana Harjana
5. Tim peneliti tilirosida daun jati belanda, Rizqi O., Risqie C.K, Fadhila
D.S, Lita R.O., Faridha C.D., Drajad T.W., Ahmad Rifki K.
6. Alifah, Rani, Amin, Ela, Eva, Listya, Vina, Retno, Meda, Sinta, Sains
2011, dan Angkatan 2011 yang selalu memberikan semangat.

Semoga penelitian ini bermanfaat bagi pembaca untuk pengetahuan di
bidang akademik dan kesehatan.
Wassalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh.

Surakarta, Januari 2015

Penulis
v

6

DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL....................................................................................... i
HALAMAN PENGAJUAN ........................................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN....................................................................... iii
DEKLARASI ................................................................................................ iv
KATA PENGANTAR ................................................................................... v
DAFTAR ISI ................................................................................................. vi

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. viii
DAFTAR TABEL ......................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. x
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................... x
INTISARI.................................................................................................... xiv
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................. 1
A. Latar Belakang ........................................................................... 1
B. Perumusan Masalah .................................................................... 3
C. Tujuan Penelitian ........................................................................ 3
D. Tinjauan Pustaka ......................................................................... 3
1. Tumbuhan jati belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) ........... 3
a. Klasifikasi ..................................................................... 3
b. Tilirosida ....................................................................... 3
c. Khasiat .......................................................................... 4
2. Kanker payudara .................................................................. 5
3. Sel T47D .............................................................................. 6
4. Apoptosis sel ........................................................................ 7
5. Flow cytometry ................................................................... 10
6. Analisis apoptosis dengan annexin V-PI............................ 12
E. Landasan Teori .......................................................................... 13

F. Hipotesis .................................................................................... 14
BAB II. METODE PENELITIAN ............................................................... 15
vi

7

1.

Kategori Penelitian .................................................................... 15

2.

Variabel Penelitian .................................................................... 15

3.

Alat dan Bahan .......................................................................... 15

4.


Tempat Penelitian...................................................................... 16

5.

Jalannya Penelitian .................................................................... 16
a. Pengumpulan sampel ......................................................... 16
b. Sterilisasi LAF ................................................................... 16
c. Sterilisasi alat ..................................................................... 16
d. Pembuatan media RPMI .................................................... 16
e. Penumbuhan sel ................................................................. 16
f. Pemanenan sel .................................................................... 17
g. Perhitungan sel ................................................................... 17
h. Perlakuan sel ...................................................................... 17
i. Pembuatan reagen flow cytometry...................................... 18
j. Persiapan sampel ............................................................... 18
k. Analisis dan interpretasi data ............................................ 19

BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 20
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 25
A. Kesimpulan ............................................................................... 25

B. Saran .......................................................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 26
LAMPIRAN ................................................................................................. 32

vii

8

DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Struktur tilirosida.......................................................................... 4
Gambar 2. Sel T47D ...................................................................................... 6
Gambar 3. Perbedaan mekanisme sel nekrosis dan apoptosis ....................... 8
Gambar 4. Jalur apoptosis melalui jalur intrinsik dan ekstrinsik ................. 10
Gambar 5. Skema flow cytometer ................................................................ 11
Gambar 6. Mekanisme reaksi dari reagen Annexin V-PI dan sel ................ 12
Gambar 7. Hasil persebaran sel setelah induksi dengan tilirosida ¼
IC50 ............................................................................................ 20
Gambar 8. Hasil analisis dengan cell quest pada konsentrasi ¼ IC50 .......... 21
Gambar 9. Grafik apoptosis awal, apoptosis akhir dan nekrosis pada

perlakuan tilirosida .................................................................... 22
Gambar 10. Hasil percobaan kontrol sel, perlakuan dengan tilirosida dan
doksorubisin .............................................................................. 24

viii

9

DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Hasil penelitian antikanker tilirosida secara in vitro ...................... 13
Tabel 2. Hasil persentase induksi apoptosis pada sel T47D ........................ 21

ix

10

DAFTAR LAMPIRAN


Halaman
Lampiran 1. Surat Izin Penelitian dari Lab. Parasitologi FK UGM............. 33
Lampiran 2. Ethical Clearence dari Komisi Etik FK UGM ........................ 34
Lampiran 3. Perhitungan Kepadatan Sel...................................................... 35
Lampiran 4. Pembuatan Stok dan Seri Konsentrasi ..................................... 36
Lampiran 5. Perhitungan Persentase Populasi Sel T47D ............................. 37
Lampiran 6. Hasil Persebaran dan Hasil Analisis dengan Program cell
quest ........................................................................................ 38

x

11

DAFTAR SINGKATAN

µL

= mikroliter

µM

= mikromolar

ºC

= derajat celcius

AIF

= Apoptosis Inducing Factor

Apaf-1

= Apoptotic Protein Activating Factor-1

Bax

= Bcl2 associated protein X

Bcl-2

= B-cell lymphoma protein-2

Bcl-XL

= B cell leukemia XL

Bcl-XS

= B cell leukemia XS

Bfl-1

= Benign Familial Leukopenia

BPOM

= Badan Pengawas Obat dan Makanan

C30H26013

= Karbon 30 Hidrogen 26 Oksigen 13

Ca2+

= Calsium 2+

CCRF-CEM = Human T-lymphoblastic leukemic
CO2

= karbondioksida

COX-2

= cyclooxygenase-2

Da

= Dalton

DCIS

= ductal carcinoma in situ

DIABLO

= direct IAP Binding protein with Low pI

DISC

= death-inducing signaling complex

DNA

= deoxyribonucleic acid

DR5

= Dopamine Receptor 5

EB

= Ethidium Bromida

EDTA

= Ethylene Diamine Tetraacetic Acid

ER

= estrogen receptor

FACSCalibour = Fluorescence Activated Cell Sorting Calibur
FADD

= Fas-associated death domain

FAO

= Food and Agriculture Organization
xi

12

Fas-L

= Fas Ligand

FBS

= Fetal Bovine Serum

Fmol/mL

= femtomole per mililiter

FSC

= forward-angle light scatter

G1

= Gap 1

GFP

= green fluorescent protein

HepG2

= Hepatoma G2

HO33342

= Hoechst 33342

HPTE

= High Profile Training Event

HtrA2

= high temperature requirement protein A

IC50

= Inhibitory Concentration dalam 50% populasi

LAF

= Laminar Air Flow

L292

= TNF-α sensitive cell line

MB435

= ductal carcinoma

MCF-7

= Michigan Cancer Foundation–7

Mcl-1

= Myeloid Cell Leukemia 1

mg

= miligram

mL

= mililiter

mm

= milimeter

mRNA

= messenger Ribonucleic Acid

MTS

= mitochondrial signal

NAMALWA = Burkitt’s lymphoma cell
NF-κB

= Nuclear Factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells

nm

= nanometer

NO

= Nitric Oxide

Noxa

= Nitrogen and Oxygen-α

NRCS

= Natural Resources Conservation Service

OH

= hidroksil

p53

= protein 53

PARP

= Procyclic Acidic Repetitive Protein

PBMC

= Peripheral Blood Mononuclear Cell
xii

13

PBS

= Phosphate Buffer Saline

PC-3

= Prostate Cancer Cell Line

PGE2

= prostaglandin E2

pH

= paul Hoffman

PI

= Propidium Iodida

ppm

= part per million

PR

= progesterone receptor

PS

= Phosphatidilserine

PUMA

= Portland United Messenger Association

rpm

= rotation per minutes

S

= sintesis

SF268

= Glioma/Astrocrytoma Cell Line

Smac

= second mitochondria-derived activator of caspase

SSC

= side-angle light scatter

T47D

= Human ductal breast epithelial tumor cell line

TNF-α

= Tumor Necrosis Factor alpha

TNFR1

= type 1 TNF receptor

TRADD

= TNF receptor-associated death domain

TRAIL

= TNF-α-related apoptosis-inducing ligand

UV

= Ultraviolet
= rata-rata

xiii

14

INTISARI
Jati belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) mempunyai aktivitas sitotoksik.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui persentase induksi apoptosis tilirosida
dari daun jati belanda terhadap sel T47D.
Induksi apoptosis dilakukan dengan metode flow cytometry dengan alat
FACSCaliburTM menggunakan reagen Annexin V dan zat pewarna PI (Propidium
Iodida). Konsentrasi induksi apoptosis yang digunakan berdasarkan pada uji MTT
assay (IC50) tilirosida pada sel T47D, yaitu sebesar 60 µg/mL. Konsentrasi yang
dibutuhkan yakni 1 IC50, ½ IC50, dan ¼ IC50.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa induksi apoptosis awal tilirosida
tertinggi yaitu 11,01 % pada konsentrasi ¼ IC50, dan apoptosis akhir tertinggi
yaitu 4,93 % pada konsentrasi ½ IC50. Jika persentase tersebut dibandingkan
dengan kontrol,persentase induksi apoptosis tilirosida lebih kecil. Jadi tilirosida
tidak mampu menginduksi apoptosis sel kanker payudara T47D.
Kata kunci : Tilirosida, Guazuma ulmifolia Lamk., apoptosis, flow cytometry, sel
T47D

xiv