BRINE SHRIMP LETHALITY TEST EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN TEMBELEKAN (Lantana camara L.) BESERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA SKRIPSI

  

BRINE SHRIMP LETHALITY TEST EKSTRAK ETANOL

DAUN TUMBUHAN TEMBELEKAN (Lantana camara L.)

BESERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA

  

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  Natalia Sugianti NIM: 038114041

  

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

  BRINE SHRIMP LETHALITY TEST EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN TEMBELEKAN (Lantana camara L.) BESERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  Natalia Sugianti NIM: 038114041

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING

  Persetujuan skripsi berjudul

  BRINE SHRIMP LETHALITY TEST EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN TEMBELEKAN (Lantana camara L.) BESERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA

  Yang diajukan oleh: Natalia Sugianti

  NIM: 038114041 Telah disetujui oleh:

  Pembimbing

  I Pembimbing

  II Yustina Sri Hartini, M.Si.,Apt. Yohanes Dwiatmaka, M.Si.

  Tanggal: ……………………. Tanggal: …………………….

  

H A L A M A N P E R S E M B A H A N

TUHAN TIDAK BERJANJI LANGIT SELALU BIRU . . . BUNGA DI SEPANJANG JALANMU. . . LAUTAN TANPA GELOMBANG. . .

TAPI . . .

  

IA BERJANJI

BESERTA KITA. . . MENDAMPINGI KITA. . .

DALAM SEGALA KEADAAN!!!

  Kupersembahkan karya kecilku ini teruntuk:

JESUS- MY SAVIOR

  Bunda MARIA P a p a dan

  Ma ma tercinta

  Dhe- dhe ku imoet

  “ Dev i

  ” OH A L U N G

KATA PENGANTAR

  Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan rahmat dan berkatnya untuk menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul Brine Shrimp Lethality Test Ekstrak Etanol Daun Tumbuhan Tembelekan (Lantana camara L.) Beserta Profil Kromatografi Lapis Tipisnya.

  Penelitian ini dilakukan untuk memenuhi salah satu syarat tugas akhir untuk mencapai gelar sarjana ilmu Farmasi bidang studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Penulis telah banyak mendapat bantuan baik moral maupun spiritual dan dukungan yang berupa bimbingan, dorongan, sarana, maupun fasilitas dari berbagai pihak dalam penulisan skripsi ini, oleh karena itu penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada:

  1. Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  2. Ibu Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing atas bimbingan dan pengarahan selama penelitian sampai penyusunan skripsi.

  3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen pembimbing atas bimbingan dan pengarahan selama penelitian sampai penyusunan skripsi.

  4. Ibu dr. Luciana Kuswibawati, M. Kes. selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

  6. Papa dan Mama serta adikku Devi atas cinta, pengorbanan, dukungan, semangat, dan doa nya yang tak pernah berhenti.

  7. Mas Wagiran, Mas Sigit, Mas Sarwanto selaku staf laboratorium Farmakognosi Fitokimia . Terima kasih atas bantuan yang diberikan.

  8. Lanny, sahabat dalam berbagi suka dan duka.

  9. Indah, Renny, Nike, Yohana, ci Meta, ci Listy, ci Ricka, ci Maria, Chicka, Selvi, Aning, Ratih, dan teman-teman kost DEWI lainnya. Terima kasih atas kebersamaan dan kekompakkannya selama ini.

  10. Mas Wondo, Novi, Apri, Rosa, Mba Sinta. Terima kasih atas kerja sama dan bantuannya selama penelitian.

  11. Teman-teman angkatan 2003, khususnya kelas A. Terima kasih atas kebersamaan dan kerja samanya selama ini.

  12. Teman-teman BPM, khususnya PD Missio Dei dan PD Ignatius Loyola, Meidi, Yandy, Iyonk, Ko Hendy, dan Ko Ari. Terima kasih atas dukungan doanya.

  13. Pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis.

  Penulis menyadari masih ada kekurangan dalam penyusunan skripsi ini, maka penulis sangat mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari berbagai pihak demi kemajuan dan kesempurnaan penelitian yang telah dilakukan. Semoga skripsi ini memberikan manfaat bagi kita semua.

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL ............................................................................................ ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN............................................................................... iv HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................... v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... vi KATA PENGANTAR .......................................................................................... vii DAFTAR ISI......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL................................................................................................. xiii DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xiv DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................... xv DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG ....................................................... xvi

  INTISARI.............................................................................................................. xvii

  

ABSTRACT ........................................................................................................... xviii

  BAB I. PENGANTAR .......................................................................................... 1 A. Latar Belakang ...............................................................................................1 1. Perumusan masalah...................................................................................3

  2. Keaslian penelitian ....................................................................................3

  3. Manfaat penelitian.....................................................................................4 B. Tujuan Penelitian ............................................................................................4

  1. Keterangan botani .....................................................................................5

  Siklus hidup artemia..................................................................................17

  I. Landasan Teori................................................................................................29 J.

  H. Kromatografi Lapis Tipis................................................................................27

  Penyarian.........................................................................................................26

  F. Kanker .............................................................................................................24 G.

   Brine Shrimp Lethality Test ...........................................................................23

  D. Uji Toksisitas Akut .........................................................................................22 E.

  5. Penggunaan artemia pada metode BST.....................................................19

  3. Lingkungan hidup artemia ........................................................................16 4.

  2. Nama daerah dan nama asing....................................................................5 3.

  Morfologi artemia .....................................................................................12

  1. Keterangan zoologi ...................................................................................11 2.

  C. Artemia............................................................................................................11

  Flavonoid ..................................................................................................9

  1. Triterpenoid...............................................................................................7 2.

  5. Kegunaan ..................................................................................................6 B. Senyawa Yang Diidentifikasi..........................................................................7

  4. Kandungan kimia ......................................................................................6

  Deskripsi tumbuhan ..................................................................................6

  Hipotesis..........................................................................................................30

  B.

  Maserasi ....................................................................................................34

  Analisis hasil .............................................................................................38

  10. Uji KLT pada ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan........................37 11.

  Uji toksisitas akut dengan BST .................................................................37

  8. Pembuatan larutan sampel.........................................................................36 9.

  7. Penyiapan sampel untuk uji toksisitas ......................................................36

  Penetasan telur artemia .............................................................................35

  5. Pembuatan air laut buatan .........................................................................35 6.

  3. Penyiapan bahan .......................................................................................34 4.

  Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .................................................31

  2. Pengumpulan bahan ..................................................................................34

  Determinasi tumbuhan tembelekan...........................................................34

  D. Tata Cara Penelitian ........................................................................................34 1.

  Alat penelitian ...........................................................................................33

  1. Bahan penelitian........................................................................................32 2.

  C. Bahan dan Alat Penelitian...............................................................................32

  Definisi operasional ..................................................................................32

  1. Variabel penelitian ....................................................................................31 2.

  BAB IV. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ..................................... 39 A. Determinasi Tumbuhan...................................................................................39 B. Pengumpulan dan Pengeringan Bahan............................................................39

  E.

  Penetasan Siste Artemia ..................................................................................44

  F. Uji Toksisitas dengan Metode BST ................................................................45 G.

  Uji Kualitatif Ekstrak Etanol dengan KLT .....................................................53

  1. Identifikasi triterpenoid.............................................................................54

  2. Identifikasi flavonoid ................................................................................57

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN............................................................... 61 A. Kesimpulan .....................................................................................................61 B. Saran................................................................................................................61 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 62 LAMPIRAN.......................................................................................................... 66 BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 83

  

DAFTAR TABEL

  Tabel I Perbedaan uji toksisitas akut, uji toksisitas sub kronis dan uji toksisitas kronis................................................................................. 23 Tabel II Seri konsentrasi larutan sampel daun tumbuhan tembelekan ........... 36 Tabel III Persentase kematian larva artemia akibat pemberian ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan .............................................................. 49 Tabel IV Hasil KLT pemeriksaan triterpenoid dalam ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan ...................................................................... 55 Tabel V Hasil KLT pemeriksaan flavonoid dalam ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan ....................................................................... 58

  Gambar 1. Struktur pentasiklik triterpenoid .......................................................7 Gambar 2. Mekanisme penghambatan enzim topoisomerase..............................8 Gambar 3. Struktur umum flavonoid ...................................................................9 Gambar 4. Mekanisme kematian sel yang terprogram (apoptosis) pada sel normal (A) dan sel tumor yang kekurangan p53 menyebabkan kanker (B) .........................................................................................10

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar 5. Larva artemia ....................................................................................13 Gambar 6. Perubahan bentuk artemia ..................................................................13 Gambar 7. Bagian-bagian tubuh artemia dewasa ................................................14 Gambar 8. Artemia dewasa jantan dan betina .................................................... 15 Gambar 9. Siklus hidup artemia biseksual ..........................................................18 Gambar 10. Kerja RNA polymerase dalam transkripsi .........................................20 Gambar 11. Mekanisme kerja Na

• and K
• ATP ase .............................................21

  Gambar 12. Siklus sel ...........................................................................................25 Gambar 13. Kurva hubungan nilai probit versus log konsentrasi ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan ..............................................................50 Gambar 14. Kromatogram ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan untuk pemeriksaan triterpenoid dengan jarak pengembangan 10 cm .........56 Gambar 15. Kromatogram ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan untuk

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Surat keterangan determinasi tumbuhan tembelekan ........................66 Lampiran 2. Foto tumbuhan tembelekan ...............................................................67 Lampiran 3. Foto aquarium untuk uji BST .............................................................67 Lampiran 4. Orientasi untuk mendapatkan seri konsentrasi yang akan digunakan dalam pengujian ...............................................................68 Lampiran 5. Jumlah kematian larva artemia akibat pemberian ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan ..............................................................73 Lampiran 6. Perhitungan data statistik SPSS 10.00 dengan analisis probit terhadap ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan ........................74 Lampiran 7. Foto kromatogram identifikasi triterpenoid ......................................77 Lampiran 8. Jurnal penggunaan uji Brine Shrimp Lethality Test ...........................78

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

  1. ALB = Air Laut Buatan 2. = aluminium klorida

  AlCl

  3

  3. CaCl

  2 = kalsium klorida

  4. cm = centimeter 5. = kalium klorida

  KCl 6. = Kromatografi Lapis Tipis

  KLT 7.

  50 = Median Lethal Concentration LC

  8. LD

  50 = Median Lethal Dose

  9. millimeter mm = 10. mg = milligram

  11. MgCl

  2 = magnesium klorida

  12. = magnesium sulfat MgSO

  4

  13. ml = milliliter

  14. NaHCO

  3 = natrium bikarbonat

  15. = natrium klorida NaCl

  16. = nanometer nm 17. rpm = rotasi per menit 18. =

  UV ultraviolet 19. °C = derajat celcius 20. = persen

  % 21. microgram per milliliter

  μg/ml = 22. = microliter

  μl

  

INTISARI

  Bahan alam banyak digunakan masyarakat untuk mengobati penyakit kanker. Salah satunya yaitu daun tumbuhan tembelekan (Lantana camara L.) yang secara luas digunakan masyarakat untuk menghilangkan tumor. Telah dilaporkan pula bahwa tumbuhan ini toksik pada hewan yang memakannya. Sebagai langkah awal untuk mengetahui apakah daun tumbuhan tembelekan mempunyai aktivitas antikanker, maka dilakukan penelitian menggunakan metode Brine Shrimp Lethality sehingga didapatkan informasi tentang toksisitas ekstrak etanol daun tumbuhan

  Test tembelekan terhadap larva Artemia salina Leach (artemia).

  Penelitian ini merupakan eksperimental murni dengan rancangan posttest

  

only control group design . Penelitian dilakukan dengan menggunakan ekstrak etanol

  daun tumbuhan tembelekan yang diperoleh dengan metode maserasi. Sampel uji dibuat seri konsentrasi yaitu 40, 52, 68, 88, dan 114 μg/ml. Kontrol menggunakan air laut buatan, dan dilakukan replikasi sebanyak 5 kali. Jumlah larva artemia yang mati pada tiap konsentrasi dihitung setelah 24 jam perlakuan. Nilai LC

  50 dihitung dengan

  analisis probit. Ekstrak dikatakan toksik apabila harga LC

  50 < 1000 μg/ml. Ekstrak

  etanol daun tumbuhan tembelekan kemudian diidentifikasi menggunakan kromatografi lapis tipis untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung di dalamnya.

  Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan bersifat toksik dengan harga LC

  50 sebesar 60,4

  μg/ml. Identifikasi dengan kromatografi lapis tipis menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan diduga mengandung senyawa golongan triterpenoid dan flavonoid.

  Kata kunci : Brine Shrimp Lethality Test, Lantana camara L., Artemia salina Leach., toksisitas

  

ABSTRACT

  Natural substances are often done by people to cure cancer. One of them is by using the tembelekan leaf (Lantana camara L.) that is widely used by people to omit the tumor. It is reported that this plant is toxic for the animal that consume it. As the beginning step to find out whether the tembelekan leaf has an anticancer activity or not, the research is being conducted with the Brine Shrimp Lethality Test method so the information about toxicity of ethanol extract of tembelekan leaf to the Artemia

  Leach larva can be gained.

  salina

  The research was simple pure experimental with posttest only control group design. The research was done by using an ethanol extract of tembelekan leaf that is gained from maserasi method. The experiment sample is made in concentration series, they are 40, 52, 68, 88, and 114 μg/ml. The controller that is used is artificial sea water and it is replicated 5 times. The number of artemia larva that died in every concentration is counted after 24 hours treatment. The value of LC

  50 was counted

  using the probit analysis method. The extract is considered as toxic if the LC

  50 <

  1000 μg/ml. The ethanol extract of tembelekan leaf then identified by the thin layer of chromatography to find out the compound type that is contained inside.

  The research findings show that the ethanol extract of tembelekan leaf is toxic with LC

  50 is 60,4 μg/ml. The identification uses the thin layer of

  chromatography shows that the ethanol extract of tembelekan leaf is estimated contains the compound type triterpenoid and flavonoid.

  Key words: Brine Shrimp LethalityTest, Lantana camara L., Artemia salina Leach, toxicity

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Penyakit kanker dikenal sebagai penyakit yang sukar disembuhkan dan

  dapat menyebabkan kematian penderitanya jika tidak dirawat sejak awal. Kasus kanker di Indonesia dari tahun ke tahun menunjukkan peningkatan. Walaupun telah banyak ditemukan obat antikanker dan telah banyak dilakukan kemoterapi, namun hasilnya belum memuaskan dan biayanya juga sangat mahal. Hal inilah yang mendorong masyarakat untuk melakukan pengobatan menggunakan bahan alam atau obat tradisional (Mills and Bone, 2000).

  Penggalian obat-obat antikanker dari bahan alam terus dilakukan. Salah satunya yaitu daun tumbuhan tembelekan (Lantana camara L.) yang secara luas digunakan untuk pengobatan tumor, tetanus, rematik, malaria, sebagai antiseptik, dan perangsang muntah (Rana, Prasad, and Blazquez, 2005). Untuk menghilangkan bengkak, biasanya daun tumbuhan tembelekan dihaluskan lalu ditempel pada bagian yang sakit (Hembing, 2000). Daun tumbuhan tembelekan mengandung beberapa senyawa antara lain lantadene A dan B, lantanolic acid, lantic acid, humulene (mengandung minyak atsiri),

  β-caryophyllene, γ-terpidene, α-pinene, dan p-cymene (Rana, 2005).

  Tembelekan merupakan spesies tumbuhan yang toksik pada binatang yang

  

A dan B (Tyler, Brady, and Robbers, 1988). Senyawa flavonoid dalam daun

  tumbuhan tembelekan yaitu jenis flavon juga diketahui bersifat toksik pada sel dengan menginduksi apoptosis, yang merupakan suatu mekanisme kematian sel yang terprogram (Middleton, Kandaswami, and Theoharides, 2000). Dari penelitian yang telah dilakukan oleh Asterina (1994), diketahui bahwa ekstrak etanol 95% daun tumbuhan tembelekan mengandung senyawa flavonoid.

  Etanol dapat melarutkan flavonoid (Anonim, 1986) serta sebagian besar senyawa terpenoid (Mursyidi, 1990). Maka dalam penelitian ini digunakan ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan.

  Pencarian senyawa antikanker baru dari tanaman dapat dilakukan pertama kali dengan cara skrining bioaktivitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BST). Prinsip metode ini adalah uji toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach (artemia) dengan penentuan nilai LC setelah perlakuan 24 jam (Meyer,

  50 Ferrigni, Putnam, Jacobsen, Nichols, and Laughlin, 1982). Digunakan artemia

  sebagai hewan uji karena artemia memiliki kesamaan tanggapan dengan mamalia, misalnya tipe DNA-dependent RNA polymerases artemia serupa dengan yang

  terdapat dalam mamalia dan organisme ini memiliki ouabaine-sensitive Na and K

  

dependent ATPase, sehingga senyawa maupun ekstrak yang memiliki aktivitas pada

  sistem tersebut dapat terdeteksi (Solis, Wright, Anderson, Gupta, and Phillipson, 1993). Jika suatu larutan memiliki nilai LC

  50 < 1000 μg/ml maka larutan tersebut

  memiliki efek toksik yang besar yang nantinya diharapkan memiliki efek sitotoksik,

  Metode BST tidak spesifik untuk pengujian antikanker dan sebagian aksi fisiologis, namun metode ini dapat memonitor kemungkinan adanya efek sitotoksik dengan waktu dan biaya penelitian yang lebih sedikit dibandingkan dengan pengujian sitotoksisitas menggunakan biakan sel kanker. Senyawa yang bersifat toksik pada uji BST belum tentu bersifat sitotoksik, sehingga perlu dilakukan uji tingkat lanjut dengan menggunakan sel kanker. Namun, suatu senyawa yang bersifat sitotoksik akan bersifat toksik bila diuji dengan metode BST (Meyer et al., 1982). Maka diharapkan metode BST dapat digunakan sebagai langkah awal untuk menentukan senyawa yang memiliki efek sitotoksik.

  1. Perumusan masalah

  Apakah ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan bersifat toksik terhadap larva artemia?

  2. Keaslian penelitian

  Penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya dengan menggunakan daun tumbuhan tembelekan antara lain isolasi dan identifikasi komponen kimia daun tembelekan asal Tamalanrea, Ujung Pandang oleh Aida (1990); penelitian farmakognosi dan kandungan kimia dari daun Lantana camara L. oleh Soelastru (1986); pemeriksaan flavonoid dan verbaskosid daun Lantana camara L. oleh Rini Asterina (1994); dan uji potensi antibakteri ekstrak etanol daun tembelekan terhadap

  

Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 35218 oleh Asteria

  (2006). Tetapi sejauh penelusuran pustaka belum pernah dilakukan penelitian

3. Manfaat penelitian

  Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi yang lebih jelas, yang berguna bagi perkembangan ilmu pengetahuan terutama dalam bidang farmasi mengenai toksisitas ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan terhadap larva artemia.

B. Tujuan Penelitian

  Berdasarkan latar belakang dan permasalahan yang ada, maka penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas ekstrak etanol daun tumbuhan tembelekan terhadap larva artemia yang tercermin dari nilai LC 50 .

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Tumbuhan Tembelekan

  1. Keterangan botani

  Tumbuhan tembelekan (Lantana camara L.) termasuk dalam familia Verbenaceae. Tumbuhan ini mempunyai sinonim antara lain Lantana aculeata L.,

  Lantana antillana Rafin., Lantana mutabilis Salisb., Lantana polyacanthus SCH., Lantana scabrida Soland (Becker and Bakhuizen, 1963).

  2. Nama daerah dan nama asing

  a. Nama daerah

  1) Sumatera : tembelekan, kembang telek, bunga pagar, kayu singapur, tahi ayam 2) Jawa : kembang telek, oblo, puyengan, pucengan, tembelek, tembelekan, teterapan, waung, wilweran 3) Sunda : kembang satek, saliyara, saliyare, tahi hayam, tahi kotok, cente 4) Madura : kamanco, mainco, tamanjho

  (Hembing, 2000)

  b. Nama asing

  1) Cina : wu se mei, ma ting tan 2) Tagalog: sapinit, koronitas, kantutay 3) Inggris : prickly lantana, hedge flower

  3. Deskripsi tumbuhan

  Tembelekan kadang tumbuh liar atau ditanam sebagai tanaman hias dan tanaman pagar. Tumbuhan asal Amerika tropis ini bisa ditemukan dari dataran rendah sampai 1.700 meter di atas permukaan laut, pada tempat-tempat terbuka yang terkena sinar matahari atau agak ternaung. Perdu, tegak, atau agak memanjat, tinggi 0,5-4 m, berbau. Batang berkayu, bercabang banyak, ranting bentuk segi empat, berduri, berambut. Daun tunggal, berhadapan, bundar telur, ujung runcing, pangkal tumpul, tepi bergerigi, pertulangan menyirip, kedua permukaan berambut, perabaan kasar, panjang 5-8 cm, lebar 3,5-5 cm, warnanya hijau tua. Perbungaan majemuk berbentuk bulir, mahkota bagian dalam berambut, warnanya putih, merah muda, jingga, kuning, dan sebagainya. Buah buni, tangkai berambut, masih muda hijau, bila masak hitam mengkilap (Dalimartha, 1999).

  4. Kandungan kimia

  Daun mengandung lantadene A (0,31-0,68%), lantadene B (0,2%),

  lantanolic acid, lantic acid, humulene (mengandung minyak menguap 0,16-0,2 %), β caryophyllene, γ terpidene, α pinene, p-cymene (Rana, 2005) dan flavonoid

  (Asterina ,1994).

  5. Kegunaan

  Akar berkhasiat mengatasi influenza yang disertai demam tinggi, TBC kelenjar (skrofuloderma), rematik, bengkak terbentur (memar), keputihan (leukorea), kencing nanah (gonore), gondongan (parotitis, mumps), dan sakit kulit yang untuk pengobatan tumor, tetanus, rematik, malaria, sebagai antiseptik, dan perangsang muntah (Rana, 2005).

B. Senyawa yang Diidentifikasi

1. Triterpenoid

  Terpenoid berasal dari molekul isoprene CH =C(CH )-CH=CH . Terpenoid

  2

  3

  2

  terdiri atas beberapa macam senyawa mulai dari komponen minyak atsiri yaitu monoterpenoid dan sesquiterpenoid yang mudah menguap sampai ke senyawa yang tidak mudah menguap yaitu triterpenoid dan sterol (C30) serta pigmen karotenoid (C40) (Harborne, 1984). Terpenoid tersebar luas dalam damar, getah, dan kutin tumbuhan (Robbers, Speedie, Tyler, 1996).

  HO

Gambar 1. Struktur pentasiklik triterpenoid (Kaufman, Cseke , Warbers, Duke,

Brielmann, 1988)

  Triterpenoid secara biosintesis terbentuk dari 6 unit isoprene sehingga triterpenoid merupakan suatu terpenoid dengan 30 atom C. Triterpenoid di alam dapat berbentuk ester atau glikosida dan kemungkinan berstruktur alifatik, tetrasiklik atau pentasiklik. Triterpenoid saponin biasanya dalam bentuk pentasiklik. Senyawa serta asam turunannya yaitu asam ursolat dan asam oleanolat (Evans and Trease, 2002). Pentasiklik triterpenoid dapat menghambat kerja enzim topoisomerase I dan II serta menghambat RNA polymerase sehingga mengakibatkan kematian sel (Lee, Fang, Wang, Li, Cook, 1991).

  

Gambar 2 . Mekanisme penghambatan enzim topoisomerase (Albert, Johnson,

Lewis, Raff, Roberts, Walter, 2002)

  Untuk mendeteksi adanya triterpenoid salah satunya dapat dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis. Metode ini dapat menggunakan fase diam digunakan penyemprotan dengan asam sulfat pekat, diteruskan dengan pemanasan pada 100 °C - 105°C sampai pembentukan warna sempurna (Harborne, 1984). Untuk senyawa terpenoid, akan menghasilkan warna abu-abu, merah violet atau ungu (Wagner, Brady, and Zgainski, 1984).

2. Flavonoid

  Flavonoid adalah senyawa fenol alam yang terdapat dalam hampir semua tumbuhan dari bangsa Algae hingga Gymnospermae. Di dalam tumbuhan flavonoid biasanya berikatan dengan gula sebagai glikosida (Mursyidi, 1990). Glikosida flavonoid merupakan senyawa polar, maka umumnya cukup larut dalam pelarut yang polar anatara lain seperti etanol, metanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida, dan air (Markham, 1988).

  

Gambar 3. Struktur umum flavonoid (Harborne, 1984)

  Flavonoid terdapat pada hampir semua bagian tanaman seperti daun, bunga, tepung sari, akar dan batang. Secara khusus flavonoid terutama terdapat pada bagian yang di atas tanah dan masih muda misalnya daun, pucuk-pucuk yang berbunga; yang terlokalisasi dalam jaringan epidermis dan sel palisade (Markham, 1988).

  Flavonoid berfungsi untuk pengaturan tumbuh, pengaturan fotosintesis, kerja kematian yang terprogram) pada sel kanker salah satunya dengan mencegah terjadinya mutasi p53. Dengan adanya apoptosis, sel yang telah rusak (abnormal) dan tidak berfungsi lagi akan mati dengan sendirinya, tidak terus menerus membelah dan menghasilkan sel neoplastik yang dapat berkembang menjadi sel tumor dan kanker (Middleton, 2000).

  

Gambar 4. Mekanisme kematian sel yang terprogram (apoptosis) pada sel

normal (A) dan sel tumor yang kekurangan p53 menyebabkan kanker (B)

(Albert et al., 2002)

  Adanya senyawa flavonoid dalam suatu bahan dapat dianalisis dengan kromatografi lapis tipis. Biasanya digunakan fase diam selulosa dan fase gerak bercak yang timbul setelah pengembangan dapat menggunakan sinar UV, pereaksi semprot seperti sitroborat, pereaksi aluminium klorida, dan antimon triklorida (Wagner et al.,1984).

  Flavonoid pada sinar UV 254 nm menyebabkan terjadinya pemadaman dan pada sinar UV 366 nm memberikan warna kuning, biru, atau ungu yang tergantung pada struktur flavonoidnya (Markham, 1988).

  Pedoman umum flouresensi flavonoid di bawah UV 366 nm menurut Marhkam (1988) adalah

  a. pada sinar UV tanpa NH

  3 berfluoresensi biru muda, dan dengan NH

  3

  berfluoresensi hijau-kuning, kemungkinan merupakan flavonoid jenis flavon atau flavonol yang tidak mengandung 5-OH b. pada sinar UV tanpa NH

  3 berfluoresensi biru muda, dan dengan NH 3 nampak

  perubahan sedikit warna atau tanpa perubahan, mungkin merupakan flavonoid jenis isoflavon yang tidak mengandung 5-OH bebas c. pada sinar UV tanpa NH

  3 berfluoresensi biru muda, dan dengan NH

  3

  berfluoresensi murup biru muda, kemungkinan merupakan flavonoid jenis isoflavon yang tidak mengandung 5-OH bebas

C. Artemia

1. Keterangan zoologi

  Artemia termasuk dalam familia Artemidae. Artemia merupakan udang- lakunya menunjukkan bahwa artemia tidak mempunyai alat atau cara untuk mempertahankan diri terhadap serangan musuh-musuhnya. Penyesuaian hidupnya di perairan berkadar garam tinggi merupakan suatu perlindungan alam sehingga mereka bebas dari pemangsanya. Karena di perairan yang demikian, para pemangsanya (ikan, udang, serangga, dan lainnya) sudah tidak dapat hidup lagi (Mudjiman, 1989).

2. Morfologi artemia

  a. Telur Istilah untuk telur artemia yang benar adalah siste, yaitu telur yang telah berkembang lebih lanjut menjadi embrio dan kemudian diselubungi oleh cangkang yang tebal dan kuat. Cangkang ini berguna untuk melindungi embrio terhadap pengaruh kekeringan, benturan keras, sinar ultraviolet dan mempermudah pengapungan. Oleh karena itu, ia sangat tahan menghadapi keadaan lingkungan yang buruk (Mudjiman, 1989).

  b. Larva Apabila siste artemia direndam dalam air laut bersuhu 25°C, maka akan menetes dalam waktu 24-36 jam. Dari dalam cangkangnya keluarlah burayak

  (larva) yang juga dikenal dengan istilah nauplius. Dalam perkembangan selanjutnya, larva akan mengalami 15 kali perubahan bentuk atau metamorfosis.

  Setiap kali larva mengalami perubahan bentuk merupakan satu tingkatan. Larva tingkat I dinamakan instar I, tingkat II dinamakan instar II, tingkat III dinamakan instar III, demikian seterusnya samapi instar XV. Setelah itu berubahlah menjadi

  Gambar 5. Larva artemia (Mudjiman, 1989)

  Larva yang baru saja menetas masih dalam tingkatan instar I. Warnanya kemerah-merahan karena masih banyak mengandung makanan cadangan. Oleh karena itu mereka masih belum perlu makan. Anggota badannya terdiri dari sepasang sungut kecil (antenula atau antena I) dan sepasang sungut besar (antena atau antena II). Di bagian depan di antara kedua sungut kecilnya terdapat bintik merah, yaitu mata larva (oselus). Di belakang sungut besar terdapat sepasang

  

mandibulata (rahang) yang kecil, sedangkan di bagian perut (ventral) terdapat

labrum.

  Sekitar 24 jam setelah menetas, larva akan berubah menjadi instar II. Pada tingkatan instar II, larva sudah mulai mempunyai mulut, saluran pencernaan dan dubur. Oleh karena itu mereka mulai mencari makanan. Bersamaan dengan itu, cadangan makanannya juga sudah mulai habis. Pengumpulan makanannya mereka lakukan dengan menggerak-gerakkan antena II nya. Selain untuk mengumpulkan makanan, antena II tersebut juga berguna untuk bergerak.

  Pada tingkatan selanjutnya mulai terbentuk sepasang mata majemuk, selain itu berangsur-angsur tumbuh tunas-tunas kakinya. Setelah menjadi instar XV, kakinya sudah lengkap sebanyak 11 pasang, maka berakhirlah masa larva, dan berubah menjadi artemia dewasa. c. Artemia dewasa Artemia dewasa bentuknya telah sempurna dan menyerupai udang kecil dengan ukuran panjang sekitar 1 cm, dengan kaki yang sudah lengkap sebanyak

  11 pasang yang secara khusus disebut torakopoda. Baik pada yang jantan maupun yang betina, antena I nya (antenula) tetap saja sebagai sungut, yang fungsinya sebagai alat peraba. Pada artemia jantan, antena II berubah menjadi alat penjepit yang membesar dan berotot yang kegunaannya untuk berpegangan pada betina pada waktu menjelang perkawinan. Pada betina, antena II-nya mengalami penyusutan yang akhirnya berubah menjadi alat peraba. Di belakang kaki torakopoda yang jantan terdapat sepasang alat kelamin luarnya (penis), sedangkan pada yang betina terdapat sepasang indung telur (ovarium) yang terletak di sebelah kanan dan kiri saluran pencernaan.

3. Lingkungan hidup artemia

  Artemia tidak dapat bertahan hidup pada suhu kurang dari 6° C atau lebih dari 35° C, tetapi hal ini sangat tergantung pada ras dan kebiasaan tempat hidup mereka. Pertumbuhan artemia yang baik berkisar pada suhu antara 25°C -30°C. Daya tahan artemia terhadap perubahan kandungan ion-ion kimia dalam air ternyata juga sangat tinggi. Apabila kandungan ion natrium dibandingkan dengan ion kalium di dalam air laut alami adalah 28, maka artemia masih dapat bertahan pada perbandingan antara 8-173 (Mudjiman, 1989).

  Untuk perkembangan artemia yang baik, mereka membutuhkan kadar garam air yang tinggi sebab pada kadar garam yang tinggi itu musuh-musuhnya sudah tidak dapat hidup lagi, sehingga mereka akan dapat hidup lebih aman tanpa gangguan. Untuk pertumbuhan telur, ternyata dibutuhkan air yang kadar garamnya lebih rendah dari pada suatu batas tetentu. Batas ini berlainan untuk setiap jenis artemia. Secara umum, apabila kadar garam air lebih tinggi dari 85 permil, maka telur tidak akan dapat menetas karena tekanan osmosis di luar telur lebih tinggi sehingga telur tidak dapat menyerap air yang cukup untuk proses metabolismenya yang semula berada dalam keadaan diapauze. (Mudjiman, 1989).

  Artemia dapat hidup dan menyesuaikan diri pada tempat yang kadar oksigennya rendah atau mengalami kejenuhan oksigen. Pengaruh pH terhadap kehidupan artemia muda dan dewasa belum jelas namun berpengaruh terhadap penetasan siste. Apabila pH untuk penetasan kurang dari 8, maka efisiensi penetasan

4. Siklus hidup artemia

  Ditinjau dari segi cara berkembang biaknya, ada 2 jenis artemia yaitu jenis biseksual dan partenogenesis. Jenis biseksual tidak dapat berkembangbiak secara partenogenesis, demikian pula sebaliknya. Baik pada perkembangbiakan biseksual maupun partenogenesis, keduanya dapat terjadi secara ovovivipar maupun ovipar (Mudjiman, 1991).

  Pada ovovivipar yang keluar dari induknya sudah berupa anak atau larva yang dinamakan nauplius, jadi sudah langsung hidup sebagai artemia muda. Pada cara ovipar yang keluar dari induknya berupa telur bercangkang tebal yang disebut

  

siste. Untuk menjadi nauplius harus melalui proses penetasan lebih dahulu

(Mudjiman, 1991).

  Setelah sel telur masak menjadi oosit, dikeluarkan dari indung telur kemudian masuk ke dalam saluran telur (oviduct). Di dalam kantung telur ini pada perkembangbiakan secara biseksual perlu dibuahi lebih dahulu oleh sel kelamin jantan (spermatozoid) agar dapat berkembang lebih lanjut. Namun pada perkembangbiakan secara partenogenesis, pembuahan ini tidak diperlukan karena telur dapat berkembang lebih lanjut dengan sendirinya (Mudjiman, 1991).

  Sel telur yang telah dibuahi di dalam uterus akan berkembangbiak lebih lanjut menjadi embrio melalui tingkatan blastula dan gastrula. Dalam keadaan lingkungan yang baik, gastrula akan berkembang lebih lanjut hingga menjadi larva yang akhirnya dikeluarkan dari tubuh induknya. Apabila keadaan lingkungannya dihasilkan oleh kelenjar cangkang telur. Setelah itu barulah mereka dikeluarkan dari tubuh induknya berupa telur yang berbutir-butir (Mudjiman, 1991).

  Proses pembentukan cangkang telur dimulai dengan memburuknya keadaan lingkungan terutama kadar oksigennya yang rendah. Pada lingkungan dengan kadar oksigen yang rendah ini artemia akan kesulitan bernafas. Oleh karena itu untuk mengatasinya dibentuklah hemoglobin di dalam darahnya. (Mudjiman, 1991).

  Artemia dapat hidup sampai 6 bulan. Sementara itu setiap 4-5 hari sekali mereka dapat beranak (pada lingkungan yang baik) atau bertelur (pada lingkungan yang buruk) sebanyak 50-300 ekor atau butir. Anak artemia sudah menjadi dewasa dalam waktu 14 hari (Mudjiman, 1991).

5. Penggunaan artemia pada metode BST

  Artemia secara luas telah digunakan untuk pengujian aktivitas farmakologi ekstrak suatu tanaman. Artemia juga merupakan hewan uji yang digunakan untuk praskrining aktivitas antikanker di National Cancer Institude (NCI), Amerika Serikat. Uji BST dengan hewan uji artemia dapat digunakan untuk skrining awal terhadap senyawa-senyawa yang diduga berkhasiat sebagai antitumor karena uji ini mempunyai korelasi yang positif dengan potensinya sebagai antitumor meskipun penggunaan artemia ini memang tidak spesifik untuk antitumor maupun fisiologis aktif tertentu (Anderson, Goets, and Laughin, 1991).

  Artemia dapat digunakan sebagai hewan uji karena artemia memiliki kesamaan tanggapan dengan mamalia, misalnya tipe DNA-dependent RNA

  

polymerases yang terdapat pada artemia serupa dengan yang terdapat pada mamalia

• +

  dan organisme ini juga memiliki ouabaine-sensitive Na and K dependent ATPase (Solis et al., 1992).

  DNA-dependent RNA polymerases merupakan DNA yang mengarahkan proses transkripsi RNA yang bergantung pada RNA polymerases. Enzim ini membuka pilinan kedua untai DNA sehingga terpisah dan mengkaitkannya bersama- sama nulkeotida RNA pada saat nukleotida-nukleotida ini membentuk pasangan-basa di sepanjang cetakan DNA. Eukariotik mempunyai 3 macam RNA polymerases yaitu mRNA (messenger RNA) yang merupakan pembawa kode genetik dari DNA ke ribosom, tRNA (transfer RNA) yang berfungsi untuk menterjemahkan kodon dan ribosom. Jika RNA polymerases tersebut dihambat, maka DNA tidak dapat mensintesis RNA dan RNA tidak dapat terbentuk sehingga sintesis protein juga dihambat. Protein merupakan komponen utama semua sel. Protein berfungsi sebagai unsur struktural, hormon, imunoglobulin, serta terlibat dalam kegiatan transport oksigen, kontraksi otot, dan lainnya (Nuswantari, 1998). Tidak terbentuknya protein dapat mengganggu metabolisme sel, sehingga pada akhirnya akan menyebabkan kematian sel.

  Gambar 10. Kerja RNA polymerase dalam transkripsi (Michael, 2007)

• Artemia juga memiliki ouabaine-sensitive Na and K dependent ATPase.

  Na K ATPase merupakan enzim yang mengkatalisis hidrolisis ATP menjadi ADP

  serta menggunakan energi untuk mengeluarkan 3 Na dari sel dan mengambil 2 K

  ke dalam, tiap sel bagi tiap mol ATP dihidrolisis. Na K ATPase ditemukan dalam semua bagian tubuh. Aktivitas enzim ini dihambat oleh ouabaine. Adanya ouabaine

  menyebabkan keseimbangan ion Na dan K tetap terjaga (homeostasis). Selain itu, sekarang ini ouabaine juga digunakan untuk terapi payah jantung. Di dalam jantung,

• 2+

  Na K ATPase secara tak langsung mempengaruhi transport Ca karena Na

  2+ 2+

  maka lebih sedikit Ca intrasel dikeluarkan dan Ca intrasel meningkat, sehingga memudahkan kontraksi otot jantung (Ganong, 1995).

• + + Gambar 11. Mekanisme kerja Na and K ATP ase (Michael, 2007)

  Jika suatu senyawa bekerja mengganggu kerja salah satu enzim ini pada artemia dan menyebabkan kematian artemia, maka senyawa tersebut bersifat toksik dan dapat menyebabkan kematian sel mamalia. Metode BST dengan hewan uji artemia tidak dapat digunakan untuk pengujian senyawa yang dalam mengganggu kerja salah satu enzim tersebut memerlukan aktivasi dalam sel mamalia, seperti 6- mercaptopurine yang harus dimetabolisme terlebih dahulu dalam sel mamalia.

  Sehingga jika senyawa 6-mercaptopurine diujikan pada artemia, maka akan memberikan LC

  50 yang lebih besar dari 1000 (bersifat tidak toksik pada artemia) (Solis et al.,1992).

  Keuntungan penggunaan artemia sebagai hewan uji adalah kesederhanaan

D. Uji Toksisitas Akut

  Toksisitas merupakan sifat relatif toksikan berkaitan dengan potensinya mengakibatkan efek negatif bagi makhluk hidup. Toksisitas juga dapat diartikan sebagai kualitas bersifat racun, khususnya derajad virulensi mikroba toksik atau racun (Nuswantari, 1998). Toksisitas dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain komposisi dan jenis toksikan, konsentrasi toksikan, durasi dan frekuensi pemaparan. Toksikan dapat menghasilkan efek negatif bagi semua atau sebagian dari tingkat organisasi biologis (populasi, individu, organ, jaringan, sel, biomolekul) dalam bentuk merusak struktur maupun fungsi biologis, baik secara akut, sub kronis maupun kronis (Halang, 2004).