Uji toksisitas subkronis infusa daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz and Pav.) pada tikus : studi terhadap gambaran mikroskopis hati dan kadar SGPT darah - USD Repository
UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRIH MERAH (Piper
crocatum Ruiz & Pav.) PADA TIKUS : STUDI TERHADAP GAMBARAN
MIKROSKOPIS HATI DAN KADAR SGPT DARAH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi Oleh:
Yuningsih Wulan Oei NIM : 098114064
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRIH MERAH (Piper
crocatum Ruiz & Pav.) PADA TIKUS : STUDI TERHADAP GAMBARAN
MIKROSKOPIS HATI DAN KADAR SGPT DARAH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi Oleh:
Yuningsih Wulan Oei NIM : 098114064
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
HALAMAN PERSEMBAHAN
Ku percaya kau Tuhan yang tak pernah gagal,
menjadikanku lebih dari pemenang……
Ku percaya kau Tuhan yang tak pernah lalai,
menepati janti-janjimu….
karena satu hal yang Ku tahu,
tiada hal yang sia-sia di dunia ini
Karena bagiku hidup adalah kristus dan mati adalah
keuntungan
Filipi 1:21
Hasil 4 tahun kuliah ini kupersembahkan kepada Tuhan Yesus
yang telah membimbing dan menuntun aku,
keluarga-Ku papa, mama, dan ke pada ke tiga adik-adik-Ku Tian,Cu, dan Vensya yang telah mensuportku
kepada sahabat-sahabatku yang selama ini telah berbagi suka dan
duka
dan kepada almamaterku
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmat-Nya, penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul “Uji Toksisitas Subkronis Infusa Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Pada Tikus Wistar : Studi Terhadap Gambaran Mikroskopis Hati Dan Kadar SGPT”. Tugas akhir ini dikerjakan demi memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi di Universitas Sanata Dharma.
Penulis menyadari bahwa, terselesaikannya tugas ini tak lepas dari dorongan dan batuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada :
1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, yang telah memimpin, menyelenggarakan, pendampingan dan tuntunan selama perkuliahan.
2. Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji yang telah membimbing, membantu, dan memberi saran dalam proses pengerjaan skripsi ini.
3. Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah membimbing, membantu, dan memberi saran dalam proses pengerjaan skripsi ini.
4. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji.
Yang telah membimbing, membantu, memberi saran dalam proses pengerjaan skripsi ini.
5. Rini Dwiastuti, M.Si.,Apt., selaku Kepala Penanggung jawab Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi ini.
6. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi tanaman sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) dan juga bersedia memberikan tanaman tersebut untuk digunakan dalam penelitian skripsi ini.
7. Pak Parjiman, Pak Kayat, Pak Heru, Pak Wagiran, Mas Andri, selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah banyak memberikan bantuan selama proses pelaksanaan penelitian.
8. Papa, Mama, Sii dan Siitiung yang telah mendukung, memberi saran dan masukan selama proses penulisan skripsi ini.
9. Teman-teman kelompok skripsiku, Herta, Charlie, dan Catur atas segala kerjasama, bantuan, dan masukkan dalam pengerjaan penelitian.
10. Sahabat-sahabatku Herta, Chissa, Raisa, Riri, Ina, Nggek, Ree, atas segala motivasi, dukungan dan kebersamaannya, selama ini.
11. Seluruh dosen dan teman-teman FSM B 09, FST B 09 serta seluruh angkatan 2009 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
12. Semua pihak yang penulis tidak dapat menyebutkan satu-persatu yang telah ikut membantu selama penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna oleh karena itu, penulis menerima kritik dan saran yang membangun skripsi ini. Penulis juga berharap, skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya bidang Farmasi, serta semua pihak, mahasiswa maupun masyarakat.
Yogyakarta, 2 Juli 2013 Penulis
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................... iv LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH ...................................................................................................... v HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................. vi PRAKATA .................................................................................................. vii DAFTAR ISI ............................................................................................... x DAFTAR TABEL ....................................................................................... xiv DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xvi
INTISARI .................................................................................................... xviii
ABSTRACT .................................................................................................. xix
BAB I. PENGANTAR ................................................................................1 A. Latar Belakang .....................................................................................
1 1. Perumusan masalah ........................................................................
3 2. Keaslian penelitian .........................................................................
3 3. Manfaat penelitian .........................................................................
4 B. Tujuan Penelitian .................................................................................
5
2. Tujuan khusus ................................................................................
5 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA.........................................................
6 A. Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) ...............................
6 1. Morfologi tanaman .........................................................................
6 2. Taksonomi daun sirih merah ..........................................................
6 3. Kandungan kimia dan kegunaannya ..............................................
7 B. Toksikologi ..........................................................................................
8 C. Toksisitas Subkronis ............................................................................
10 D. Hati .......................................................................................................
13 E. Patologi Hati ........................................................................................
15 F. Serum Aminotransferase ......................................................................
16 G. Sediaan Infusa ......................................................................................
17 H. Keterangan Empiris .............................................................................
17 BAB III. METODE PENELITIAN ...........................................................
18 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ...........................................................
18 B. Variabel Penelitian ...............................................................................
18 1. Variabel utama ...............................................................................
18 2. Variabel pengacau ..........................................................................
18 C. Definisi Operasional ............................................................................
19 1. Infusa ..............................................................................................
19
2. Kriteria efek toksisitas subkronis meliputi histopatologi hati dan kadar SGPT ....................................................................................
19
E. Alat dan Instrumen Penelitian ..............................................................
20 F. Tata Cara Penelitian .............................................................................
20 1. Determinasi tanaman .....................................................................
20 2. Pengumpulan daun sirih merah ......................................................
21 3. Pembuatan serbuk daun sirih merah ..............................................
21 4. Penetapan kadar air serbuk daun sirih merah.................................
21 5. Penetapan dosis infusa daun sirih merah .......................................
22 6. Penetapan dosis aquadest sebagai kontrol negatif .........................
22 7. Pembuatan infusa daun sirih merah ...............................................
22 8. Penyiapan hewan uji ......................................................................
23 9. Pengelompokan hewan uji .............................................................
23 10. Prosedur pelaksanaan toksisitas subkronis ....................................
23 11. Prosedur pembedahan ....................................................................
24 12. Histopatologi hati ...........................................................................
25 13. Pengamatan ....................................................................................
25 a. Pengamatan berat badan hewan uji ..........................................
25 b. Pengukuran asupan pakan hewan uji .......................................
25 c. Pengukuran asupan minum hewan uji .....................................
26 14. Analisis Data ..................................................................................
26 a. Pemeriksaan kadar SGPT darah ...............................................
26 b. Pengamatan berat badan hewan uji ..........................................
27 c. Pengukuran asupan pakan hewan uji .......................................
27
e. Histopatologi hati .....................................................................
27 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................
28 A. Determinasi Tanaman Sirih Merah ......................................................
28 B. Serbuk dan Kadar Air Daun Sirih Merah ............................................
28 C. Kadar SGPT Darah Tikus Akibat Pemberian Infusa Daun Sirih Merah ...................................................................................................
29 D. Histopatologi Hati ................................................................................
33 E. Perubahan Berat Badan Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian Infusa Daun Sirih Merah ......................................................................
38 F. Asupan Pakan Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian Infusa Daun Sirih Merah .................................................................................
41 G. Asupan Minum Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian Infusa Daun Sirih Merah .................................................................................
44 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .....................................................
46 A. Kesimpulan ..........................................................................................
46 B. Saran ....................................................................................................
46 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................
47 LAMPIRAN ...............................................................................................
50 BIOGRAFI PENULIS ...............................................................................
78
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel I. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirih merah serta nilai p kadar glukosa darah tikus jantan tiap kelompok
31 Tabel II. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirih merah serta nilai p kadar glukosa darah tikus betina tiap kelompok
32 Tabel III. Hasil pemeriksaan histopatologis hati pada tikus jantan
34 Tabel IV. Hasil pemeriksaan histopatologis hati pada tikus betina
35 Tabel V. Purata berat badan ± SEM tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirih merah
39 Tabel VI. Purata berat badan ± SEM tikus betina akibat pemberian infusa daun sirih merah
40
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 1. Daun Sirih Merah
6 Gambar 2. Diagram batang rata-rata pengaruh pemberian infusa daun sirih merah terhadap kadar SGPT darah tikus jantan antar kelompok perlakuan
31 Gambar 3. Diagram batang rata-rata pengaruh pemberian infusa daun sirih merah terhadap kadar SGPT darah tikus betina antar kelompok perlakuan
32 Gambar 4. Histopatologi hati normal. Anak panah hitam menunjukkan vena sentralis, anak panah hijau menunjukkan sinusoid, dan anak panah biru menunjukkan hepatosit
36 Gambar 5. Gambaran perubahan struktur histopatolohi hati. (A) Multifokal nekrosis, (B) degenerasi melemak, (C) degenerasi hidropik, dan (D) hepatitis
36 Gambar 6. Grafik perubahan berat badan tikus jantan selama pemberian infusa daun sirih merah
39 Gambar 7. Grafik perubahan berat badan tikus betina selama pemberian infusa daun sirih merah
40 Gambar 8. Grafik asupan pakan tikus jantan selama pemberian infusa daun sirih merah menurut
42 Gambar 9. Grafik asupan pakan tikus betina selama pemberian infusa Gambar 10.Grafik asupan minum tikus jantan selama pemberian infusa daun sirih merah
44 Gambar 11.Grafik asupan minum tikus betina selama pemberian infusa daun sirih merah
45
DAFTAR LAMPIRAN
55 Lampiran 10. Analisis Statistik Kadar SGPT Darah Pre dan Post pada Tikus Jantan melalui Paired T-Test
70
63 Lampiran 15. Analisis Statistik Berat Badan Tikus Betina
61 Lampiran 14. Analisis Statistik Berat Badan Tikus Jantan
59 Lampiran 13. Analisis Statistik Kadar SGPT Darah Post pada Tikus Betina
58 Lampiran 12. Analisis Statistik Kadar SGPT Darah Post pada Tikus Jantan
57 Lampiran 11. Analisis Statistik Kadar Glukosa Darah Pre dan Post pada Tikus Betina melalui Paired T-Test
Halaman Lampiran 1. Foto daun sirih merah
50 Lampiran 2. Foto infusa daun sirih merah
53 Lampiran 8. Surat ethics committee approval
52 Lampiran 7. Surat pengesahan determinasi tanaman sirih merah
51 Lampiran 6. Perhitungan rendemen serbuk daun sirih merah dan kadar air
51 Lampiran 5. Perhitungan konversi dosis untuk manusia
50 Lampiran 4. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa daun sirih merah pada kelompok perlakuan
50 Lampiran 3. Foto serbuk daun sirih merah
54 Lampiran 9. Hasil Histopatologi INTISARI Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) dimanfaatkan sebagai obat tradisional di masyarakat. Penelitian bertujuan mengetahui keamanan sirih merah jika digunakan dalam jangka panjang serta melihat spektrum efek toksik penggunaan infusa daun sirih merah.
Penelitian bersifat eksperimental murni rancangan acak pola searah. Empat puluh tikus wistar (20 jantan dan 20 betina) 2-3 bulan, dibagi secara acak ke dalam 4 kelompok. Kelompok I sebagai kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB, kelompok II sampai kelompok IV dipejankan infusa daun sirih merah selama 28 hari, dengan dosis berturut-turut 1,38 ; 2,07 ; 3,105 g/Kg BB. Pada hari ke-0 dan 28 dan diukur kadar SGPT darah, sedangkan pada hari ke-28 dan 42 dibedah. Kriteria pengamatan efek toksisitas subkronis meliputi histopatologi hati dan kadar SGPT. Kadar SGPT dianalisis dengan Kolmogrov-Smirnov, kemudian diuji dengan One-Anova dengan taraf kepercayaan 95% dan juga, uji paired-T.
Dari analisis Kolmogrov-Smirnov diketahui distribusi datanya normal tetapi setelah uji One-Anova tidak terdapat perbedaan yang signifikan. Dari
B
paired-T , pada kontrol betina didapatkan nilai p = 0,310 . Dari histopatologi hati,
diketahui bahwa pemberian infusa daun sirih merah tidak mengakibatkan kerusakan pada hati.
Disimpulkan bahwa, pemberian infusa daun sirih merah tidak berpengaruh terhadap kadar SGPT darah hewan uji dan juga tidak menimbulkan kerusakan pada organ hati.
Kata kunci : sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), subkronis, infusa, SGPT, histopatologi hati
ABSTRACT
Red betel (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Used as traditional medicine in the community. The research aims to determine the safety of red betel if used in the long term and look at the spectrum of toxic effects of the use of red betel leaf infusion.
Experimental research design pure random unidirectional pattern. Forty Wistar rats (20 males and 20 females) 2-3 months, were randomly divided into 4 groups. I distilled water as a control group 15.525 g / kg bw, the group II to group
IV dipejankan red betel leaf infusion for 28 days, at a dose of 1.38 respectively; 2.07; 3.105 g / kg bw. On day 0 and 28 measured blood levels of alanine aminotransferase, while some test animals dissected in order to see the damage to the liver. Observation criteria subchronic toxicity effects include liver histopathology and SGPT levels. SGPT levels were analyzed by One-ANOVA with a level of 95% and a paired-T test.
The results showed no significant changes, the ALT levels and body weight when given a red betel leaf infusion for 28 days. Reading of rat liver preparations showed no specific changes were observed after pemejanan.
Concluded that, giving the red betel leaf infusion has no effect on blood levels of alanine aminotransferase test animals and also cause damage to the liver.
Key words : sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), subchronic, infusion,
SGPT, liver histopathologyBAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), di masyarakat pada mulanya
untuk menjaga kebersihan gigi dan mulut dengan menyusur (makan sirih). Selain dengan menyusur, juga dapat dengan cara meminum air rebusan daun sirih merah, sesuai dengan keperluan masing-masing orang (Handita, 2010).
Menurut Werdhany, Marton, dan Setyorini (2008), daun sirih merah memiliki kandungan kimia antara lain : minyak atsiri, hidroksikavikol, kavikol,
kavibetol , allylprokatekol, karvakrol, eugenol, p-cymene, cineole, caryfelen,
kadimen estragol, terpena, dan fenil propada. Selain itu, juga banyak mengandung senyawa fitokimia seperti alkaloid, saponin, tanin, dan flavonoid.
Seiring dengan perkembangan zaman, khasiat sirih merah mulai teruji secara klinis dengan adanya penelitian. Khasiat sirih merah antara lain, antioksidan, antidiabetes, antikanker, antiseptik, meringankan penyakit jantung dan antiinflamasi (Handita, 2010).
Penelitian tentang khasiat sirih merah telah banyak dilakukan di antaranya daun sirih merah yang diremas-remas dan kemudian dioleskan pada perut dapat mengurangi rasa panas, sakit panas, dan sakit empedu; pada penyakit empedu cairan hasil perasan diminum juga (Heyne, 1987). Selain itu berdasarkan penelitian diketahui bahwa pemberian infusa daun sirih merah secara topikal dapat membatu penyembuhan luka pada orang diabetes (Abdul, Azizahwati dan Fimani, 2010) dan dapat menurunkan kadar gula darah pada pemberian secara oral (Salim, 2006).
Diabetes merupakan salah satu penyakit yang dapat menyebabkan komplikasi akibat dari tingginya gula darah, misalnya pada organ hati, ginjal, dan sebagainya (Choirul, 2013). Hati merupakan filter utama untuk menghilangkan racun seperti obat-obatan dan alkohol, dan juga membantu dalam pencernaan dengan memproduksi empedu untuk memecah lemak dan menyerap lemak dan vitamin yang larut air dan mineral. Selain itu juga membantu dalam pengaturan kadar glukosa, tekanan darah, insulin, estrogen, testoteron, imun, dan produksi kolesterol darah dan pembuangannya (Berkowitz, 2013).
Kegagalan pada hati dapat menyebabkan penyakit kuning, akumulasi cairan dalam tubuh dan muntah darah (Bengaluru, 2013). Kerusakan pada hati dapat terdeteksi dengan uji AST (aspartate aminotransferase), ALT (alanine
aminotransferase ), atau MRI (Magnetic Resonance Imaging) untuk mendapatkan
gambaran hati (Berkowitz, 2013).Oleh karena itu, perlu adanya dilakukan penelitian mengenai keamanan dari penggunaan daun sirih merah jika digunakan secara terus – menerus, dalam hal ini, penelitian subkronis tentang penggunaan infusa daun sirih merah. Penelitian ini, ingin mengetahui spektrum efek toksik infusa daun sirih merah dan juga, hubungan efek dan dosis terhadap wujud efek toksiksitas subkronis infusa daun sirih merah pada histopatologi hati (struktural) dan kadar SGPT (biokimia) darah tikus putih jantan dan betina galur Wistar. Infusa dilakukan dengan cara Dipilih infusa karena, merupakan salah satu bentuk sederhana dalam pembuatan obat tradisional yang sering digunakan oleh masyarakat.
1. Perumusan masalah
Berdasarkan latar belakang diatas, permasalahan yang dapat diuraikan sebagai berikut : a. Seberapa besar spektrum efek toksik (perubahan biokimia dan struktural) infusa daun sirih merah (Piper crocatum) terhadap kerusakan hati yang dinilai dari perubahan kadar SGPT dan histopatologi hati?
b. Apakah terdapat hubungan kekerabatan antara dosis infusa daun sirih merah (Piper crocatum) dengan spektrum efek toksik pada kadar SGPT dan histopatologi hati? 2.
Keaslian penelitian
Sepengetahuan penulis penelitian yang telah ada sebelumnya yaitu :
a. Potensi Rebusan Daun Sirih Merah (Piper crocatum) Sebagai Senyawa Antihiperglikemia Pada Tikus Putih Galur Wistar, diperoleh bahwa pada dosis 20g/KgBB dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus diabetes galur Wistar yang diinduksi aloksan tetrahedrat hingga 17,76, 40,17, 38,44% pada hari ke-5, dan 13 setelah induksi aloksan (Salim, 2006).
b. Uji Aktivitas Fagositosis Makrofag Senyawa Kode Pc-2 dari Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & pav.) Secara In-vivo, diperoleh bahwa senyawa kode Pc-2 yang diisolasi dari ekstrak metanolik daun sirih merah pada dosis 10 mg/Kg BB mampu meningkatkan aktivitas fagositosis monocytogenes baik pada parameter indeks fagositosis,persen fagositosis, maupun efisiensi fagositosisnya (Hartini, Wahyuono, Widyarini, Yuswanto, 2013)
c. Pengaruh Pemberian Infusa Daun Sirih Merah (Piper cf.fragile,Benth) Secara Topikal Terhadap Penyembuhan Luka Pada Tikus Putih Diabet, diperoleh bawa pemberian infusa daun sirih merah secara topikal dengan konsentrasi 40% memiliki pengaruh lebih baik terhadap peningkatan presentase penyembuhan luka (Abdul, Azizahwati dan Fimani, 2010).
Dengan demikian, dapat dipastikan bahwa penelitian toksisitas subkronis infusa daun sirih merah (Piper crocatum) terhadap histopatologi hati dan kadar SGPT darah tikus jantan dan betina belum pernah dilakukan sebelumnya.
d. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoretis Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan untuk memberikan kajian efek toksik secara subkronis tentang penggunaan daun sirih merah (Piper crocatum).
b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan tambahan informasi mengenai spektrum efek toksik toksisitas subkronis infusa daun sirih merah (Piper crocatum) terhadap kadar SGPT dan histopatologi hati, hubungan efek dan dosis.
B.
Tujuan Penelitian
1. Tujuan umumSecara umum ingin mengetahui ada tidaknya potensi efek toksik dari daun sirih merah (Piper crocatum).
2. Tujuan khusus
a. Mengungkapkan spektrum efek toksik (perubahan biokimia dan struktural) infusa daun sirih merah terhadap kerusakan hati yang dinilai dari perubahan kadar SGPT dan histopatologi hati.
b. Mengungkapkan kekerabatan antara dosis infusa daun sirih merah dengan spektrum efek toksik.
BAB II PENELAHAAN PUSTAKA A. Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) 1. Morfologi tanaman Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) merupakan salah satu jenis Piper betle . Sirih merah merupakan tanaman merambat dengan daun berbentuk
hati yang berwarna kemerah-merahan, rasanya lebih pahit dan aromanya lebih tajam dibandingkan dengan sirih hijau. Tumbuhnya di dataran tinggi. Bila terkena panas matahari langsung, maka batang sirih merah akan cepat mengering dan zat warna pada daun secara perlahan akan memudar (Nurmalina dan Valley, 2012).
Gambar daun sirih merah dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Daun Sirih Merah (Plantamor, 2011) 2.
Taksonomi daun sirih merah
Kingdom : Plantae (Tumbuhan) Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh) Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji) Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga) Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil) Sub Kelas : Magnoliidae Ordo : Piperales
Genus : Piper Spesies : Piper crocatum Ruiz & Pav. (Plantamor, 2011) 3.
Kandungan kimia dan kegunaannya
Kandungan kimia sirih merah yaitu, flavonoid, polifenol, alkaloid, tannin, minyak atsiri, saponin, hidroksikaficol, kaficol, allyprokatekol, karfokrol, eugenol, P-cymene, cineole, coryofelen, kadimen, ekstragol, terpenana, dan fenil propoda (Nurmalina dan Valley, 2012).
Secara empiris, khasiat kandungan senyawa dari sirih merah antara lain, flavonoid dan polifenol berfungsi sebagai antioksidan, antidiabetes, antikanker, antiseptik, dan antiinflamasi. Senyawa eugenol berfungsi sebagai analgetik, senyawa tanin sebagai penyembuh sakit perut pada diare dan antiseptik pada luka (Nurmalina dan Valley, 2012).
Senyawa fitokimia seperti alkaloid, saponin, tanin, dan flavonoid dapat berpotensi sebagai antikanker (Yulianti, Rahayu, Mercuriani, 2009). Minyak atsiri, fenil propanoid, dan tanin berpotensi sebagai antimikroba dan anti jamur yang kuat dan dapat menghambat pertumbuhan beberapa jenis bakteri antara
Escherichia coli, Salmonella sp, Staphylococcus aureus, Klebsiella, Pasteurella,
dan dapat mematikan Candida albicans (Kartasapoetra, 1992, Depkes, 1989, Mahendra, 2005, Agusta, 2000, Hariana, 2007 cit.,Revendy, 2011). Karvakol bersifat desinfektan, anti jamur, sehingga bisa digunakan untuk obat antiseptic pada bau mulut dan keputihan. Eugenol dapat digunakan untuk mengurangi rasa sakit (Manoi, 2007, cit., Arishandy, 2010).
B. Toksikologi
Menurut Doull dan Bruce, semua senyawa adalah racun, tidak satupun yang bukan racun, takaran atau dosis yang tepatlah yang membedakan racun dan obat. Berdasarkan pernyataan tersebut maka dapat disimpulkan, toksikologi adalah ilmu yang mempelajari pengaruh kuantitatif zat kimia atas sistem biologi, dan yang paling terpenting bagaimana zat kimia tersebut berbahaya bagi sistem biologi (Donatus, 2005).
Uji toksikologi dibagi menjadi dua yaitu uji ketoksikan tak khas dan uji ketoksikan khas. Uji ketoksikan tak khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi keseluruhan efek toksik suatu senyawa pada aneka ragam jenis hewan uji. Yang termasuk dalam uji ketoksikan tak khas yaitu uji ketoksikan akut, sub kronis dan kronis. Uji ketoksikan khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi secara rinci efek toksik yang khas dari suatu senyawa pada semua hewan uji. Yang termasuk dalam uji ketoksikan khas adalah uji potensiasi, kekarsinogenetikan, kemutagenetikan, keteratogenetikan, reproduksi, kulit dan mata, dan perilaku (Donatus, 2005).
Asas toksikologi dibagi menjadi tiga yaitu
1. Kondisi pemberian dan makhluk hidup Kondisi pemberian ialah Semua faktor yang menentukan keberadaan racun di tempat aksinya. Jalur pemberian seperti intravena, inhalasi, intraperitonial, subkutan, intramuskular, dermal, dan oral akan menentukan ketersediaan senyawa induk atau metabolit di tempat aksi. Saat pemberian, serta tempat aksi tertentu dan kerentanan makhluk hidup terhadap racun. Kondisi makhluk hidup adalah keadaan fisiologi (berat badan, umur, jenis kelamin, dan kehamilan) serta patologi (penyakit) makhluk hidup dapat mempengaruhi ketersediaan racun di sel sasaran dan keefektifan antaraksi antara kedua ubahan ini (Donatus, 2005).
2. Mekanisme aksi toksik Mekanisme aksi toksik racun digolongkan menjadi tiga, yakni mekanisme berdasarkan sifat dan tempat kejadian, berdasarkan sifat antaraksi antara racun dan tempat aksinya, dan berdasarkan risiko penumpukan racun dalam gudang penyimpanan tubuh. Berdasarkan sifat dan tempat kejadian mekanisme aksi toksik digolongkan menjadi dua yaitu mekanisme luka intrasel dan mekanisme luka ekstrasel. Mekanisme luka intrasel diawali oleh racun pada tempat aksinya di dalam sel sasaran. Racun akan berinteraksi dengan sasaran molekuler yang khas atau tak khas, melalui mekanisme reaksi kimia. Tubuh akan memberi respon berupa perbaikan atau adaptasi sebelum terjadi efek yang tidak diinginkan, tetapi apabila mekanisme pertahanan tubuh tidak lagi mampu memperbaiki akan timbul respon toksik berupa perubahan biokimia, fungsional, atau struktural. Mekanisme luka ekstrasel terjadi secara tidak langsung karena racun bereaksi diluar sel sasaran (Donatus, 2005).
3. Wujud dan sifat efek toksik Wujud efek toksik sesuatu racun dapat berupa perubahan biokimia, fungsional, dan struktural. Berbagai perubahan ini memiliki ciri yang khas, yakni menunjukkan bukti secara langsung terhadap patologi organ, apabila mekanisme homeostatis normal makhluk hidup masih dapat bekerja maka perubahan biokimia bersifat timbal balik (Donatus, 2005).
C. Toksisitas Subkronis
Toksisitas subkronis merupakan salah satu jenis uji toksikologi. Uji ketoksikan subkronis adalah uji ketoksikan sesuatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji tertentu, selama kurang dari tiga bulan. Uji ini ditujukan untuk mengungkapkan spektrum efek toksik senyawa uji, serta untuk memperlihatkan apakah spektrum efek toksik tersebut berkaitan dengan takaran dosis (Donatus, 2005). Uji toksisitas subkronis tidak difokuskan pada titik akhir tertentu, melainkan untuk mengeksplorasi secara luas keseluruhan efek biologis yang ditimbulkan pada tempat aksi yang diberikan pada rentang dosis tertentu. Uji toksisitas subkronis dapat menentukan toksisitas secara kualitatif (organ target dan efek yang ditimbulkan) dan kuantitatif (pengaruh atau efek yang ditimbulkan terhadap jaringan dan plasma darah) dari pemberian dosis berulang pada hewan uji (Gad, 2002).
Hewan uji yang disarankan paling tidak satu jenis hewan dewasa sehat, baik jantan maupun betina. Hewan uji dipilih yang peka dan memiliki pola metabolisme terhadap senyawa uji yang semirip mungkin dengan manusia (Donatus, 2005). Spesies hewan dapat digunakan rodent dan non-rodent. Spesies hewan rodent menggunakan tikus. Hewan dimasukkan dalam dua kategori
(Gad, 2002). Jumlah kelompok hewan uji paling tidak sebanyak empat kelompok yaitu satu kelompok kontrol dan tiga kelompok peringkat dosis. Jumlah hewan uji untuk jangka waktu penelitian selama empat minggu, paling tidak terdapat lima jantan dan lima betina dalam satu kelompok (Derelanko and Mannfred, 2002).
Jalur pemberian sesuai dengan jalur yang digunakan manusia dan peringkat dosis. Pengamatan dan pemeriksaan yang dilakukan dalam uji ketoksikan subkronis, meliputi:
1. Perubahan berat badan yang diperiksa paling tidak 7 hari sekali, 2. asupan makanan untuk masing-masing hewan atau kelompok hewan, diukur paling tidak 7 hari sekali, 3. gejala-gejala klinis umum yang diamati setiap hari, 4. pemeriksaan terhadap hematologi, paling tidak diperiksa dua kali, pada awal akhir uji coba, 5. pemeriksaaan kimia darah, paling tidak diperiksa dua kali, pada awal akhir uji coba, 6. analisis urin, paling tidak sekali, 7. pemeriksaan histopatologi organ pada akhir uji coba
(Donatus, 2005) Keterbalikan toksisitas terjadi apabila efek buruk atau efek yang tidak diinginkan yang dapat dikembalikan apabila pemaparan dihentikan. Keterbalikan toksisitas tergantung pada sejumlah faktor, termasuk tingkat pemaparan (waktu dan jumlah racun) dan kemampuan jaringan yang terkena untuk memperbaiki atau Ada banyak cara organisme dapat menanggapi senyawa beracun, jenis respon tergantung pada banyak faktor. Meskipun banyak efek toksik dari senyawa asing memiliki dasar biokimia, ekspresi efeknya mungkin berbeda. Oleh karena itu jenis respon beracun dibedakan menjadi :
1. Tindakan beracun secara langsung, 2. farmakologi, fisiologi, efek biokimia, 3. teratogenesis, 4. imuno toksisitas, dan 5. karsinogenesis (Timbrell, 2008).
Sarana utama dalam mendeteksi respon beracun apabila tidak terdapat kematian seperti organisme atau jaringan adalah :
1. Perubahan biokimia, melibatkan efek pada enzim seperti inhibitor atau perubahan jalur metabolik tertentu. Munculnya enzim atau substansi lain dalam cairan tubuh dapat menunjukkan kebocoran dari jaringan karena merusak dan merupakan indikasi perubahan patologis.
2. Perubahan status normal, terdapat sejumlah penanda toksisitas. Dengan demikian, perubahan berat badan, asupan makanan dan minum, luaran urin, dan berat organ merupakan indikator yang umum dan spesifik untuk toksisitas. Oleh karena itu, hewan yang mengonsumsi lebih sedikit makanan dan kehilangan bobot setelah terpapar senyawa beracun atau peningkatan berat organ karena terpapar senyawa beracun, perubahan ini dikonfirmasi dengan pengukuran kimia, biokimia, dan histopatologi
Ada dua basis yang berbeda untuk jenis farmakologi, fisiologi, dan efek biokimiawi, basis ini dibedakan menjadi farmakokinetika dan farmakodinamika.
Farmakokinetika berbasis pada efek toksik yang disebabkan oleh meningkatnya konsentrasi senyawa atau metabolik aktif di sisi target. Hal ini dikarenakan, peningkatan dosis, perubahan metabolisme, atau kejenuhan proses eliminasi. Basis efek toksik farmakodinamika terdapat respon yang berubah pada sisi target, kemungkinan karena adanya variasi reseptor (Timbrell, 2008).
Untuk penelitian subkronis parameter biokimia yang diuji adalah glutamat piruvat transaminase (GPT). Dan organ atau jaringan yang diperiksa adalah histopatologi hati (Harmita dan Maksum, 2008).
D. Hati Hepar atau hati merupakan organ atau kelenjar terbesar di dalam tubuh.
Disebut kelenjar karena menghasilkan empedu (exokrin) dan juga mengeluarkan hasil produksi dari makanan (endokrin). Hepar terletak di regio hypochondrium kanan dan epigastrium, dan sebagian besar tertutup dinding thorax. Bagian atas
hepar tertutup diafragma dan mencapai ketinggian iga kelima kanan. Hepar
berbentuk seperti segitiga dengan basis di sebelah kanan dan apex di sebelah kiri (Wibowo, Daniel, dan Paryana, Widjaya, 2009).
Hati mempunyai dua facies yaitu facies diaphragmatica dan facies
visceralis yang dipisahkan oleh tepi tajam yang disebut margo inferior atau
margo anterior . Facies diaphragmatica terdapat di sebelah atas dengan bentuk
Permukaan ini terdiri dari bagian anterior dan prosterior yang kadang-kadang disebut juga sebagai facies tersendiri. Facies visceralis atau prosteroinferior menghadap viscera sehingga permukaannya ireguler karena berbatasan dengan
gaster, duodenum, oesophagus, flexura coli dextra, rend extra, dan vesica fellea.
Facies visceralis menghadap ke bawah dan ke belakang; mempunyai fissure dan
fossa ayng bentuknya seperti huruf ‘H’ dengan garis horizontal berupa porta
hepatis . Porta hepatis adalah hilium dari hepar yang merupakan tempat masuk
dan keluar pembuluh darah (vena porta dan arteria hepatica), saluran empedu (ductus hepaticus), pembuluh getah bening, dan plexus nervorum (Wibowo, Daniel, dan Paryana, Widjaya, 2009).
Fungsi hati :
1. Mengubah zat makanan yang diabsorpsi dari usus dan yang disimpan di suatu tempat dalam tubuh, dikeluarkan sesuai dengan pemakaiannya dalam jaringan,
2. Mengubah zat buangan dan bahan racun untuk diekskresi dalam empedu dan urine,
3. Menghasilkan enzim glikogenik (glukosa menjadi glikogen),
4. Sekresi empedu, garam empedu dibuat di hati, din=bentuk dalam system retikuloendetelium, dialirkan ke empedu,
5. Pembentukan ureum, hati menerima asam amino diubah menjadi ureum, dikeluarkan dari darah oleh ginjal dalam bentuk urine,
6. Menyiapkan lemak untuk pemecahan terakhir asam karbonat dan air.
E. Patologi Hati
Hati merupakan organ yang sering mengalami kerusakan. Hal ini disebabkan antara lain sebagian besar toksikan memasuki tubuh melalui sistem gastrointestinal, dan setelah diserap toksikan dibawa oleh vena porta ke hati (Lu, 2006). Beberapa kerusakan yang dapat ditemui di hati, antara lain :
1. Nekrosis hati Nekrosis hati adalah kematian hepatosit, dapat bersifat fokal (sentral, pertengahan, perifer) atau difus. Nekrosis hati merupakan suatu manifestasi toksik yang berbahaya tetapi tidak selalu kritis karena hati mempunyai kapasitas regenerasi yang luar biasa (Lu, 2006).
2. Sirosis Sirosis hati adalah penyakit kronis pada hepar dengan inflamasi dan fibrosis hepar dan hilangnya sebagaian besar fungsi hepar. Yang terjadi adalah kematian sel-sel hepar, terbentuknya sel-sel fibrotic (sel mast), regenerasi sel dan jaringan parut yang menggantikan sel normal (Baradero, Dayrit, Siswadi, 2008). Menurut Lu (2006), sirosis ditandai oleh adanya septa kolagen yang tersebar di sebagian besar hati. Kumpulan hepatosit muncul sebagai nodul yang dipisahkan oleh lapisan berserat ini.
3. Degenerasi hidropik Cheville (2006) melaporkan bahwa degenerasi sel dalam bentuk hidropis adalah adanya akumulasi cairan pada sitoplasma sel sehingga tampak membentuk vakuola. Kadang-kadang vakuola kecil bersatu membentuk mikroskopis terlihat bahwa sel mengandung ruang-ruang jernih yang mengelilingi inti.
4. Steatosis (perlemakan hati/degenarasi hati) Perlemakan hati ini bersifat reversible dan ditandai dengan penimbunan trigliserida di hepatosit dan dipercaya terjadi pada hingga 90% pecandu alkohol kronis (Corwin, 2009). Hati dikategorikan mengalami perlemakan bila mengandung berat lipid lebih dari 5% (Lu, 2006).
F. Serum Aminotransferase
Serum aminotransferase merupakan enzim intraseluler yang dikeluarkan dari hepatosit yang luka dan sangat berguna sebagai penanda dari jaringan hati yang luka (inflamasi atau nekrosis sel). Serum aminotransferase terdiri dari 2 yaitu :
1. Aspartate aminotransferase (AST, SGOT [serum glutamic oxaloacetic transaminase]), ditemukan di sitosol dan mitokondria. Terdapat di liver, tulang otot, jantung, ginjal, otak dan pankreas.
2. Alanin aminotransferase (ALT, SGPT [serum glutamic pyruvic transaminase]), ditemukan di sitosol. Konsentrasi tertinggi terdapat di liver (lebih sensitif dari AST untuk inflamasi liver dan hepatosit nekrosis) (Lawrence and Emmet, 2011).
Peningkatan aminotransferase merupakan kelainan biokimia yang pertama kali terdeteksi pada penderita dengan virus, autoimun, atau induksi obat hepatitis, tingkat peningkatan mungkin berkorelasi dengan tingkat kerusakan hati, tetapi umumnya bukan dari prognosis yang signifikan (Lawrence, et.al., 2011).
G. Sediaan Infusa
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90 C selama 15 menit. Pembuatan infus merupakan sediaan herbal dari bahan lunak seperti daun dan bunga. Dapat diminum panas atau dingin. Serkai selagi panas melalui kain flanel, lalu menambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume infus yang dikehendaki (BPOM RI, 2010).
H. Keterangan Empiris
Penelitian ini merupakan penelitian eksploratif untuk mendapatkan bukti adanya efek toksisitas subkronis dari infusa daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) terhadap kadar SGPT darah serta gambaran mikroskopis hati tikus jantan dan betina.
BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental murni dengan
rancangan acak pola searah. Eksperimental murni adalah penelitian dengan cara mengendalikan variabel pengacau. Rancangan acak merupakan cara menetapkan sampel yang digunakan dalam penelitian dengan pengacakan agar setiap sampel memperoleh kesempatan yang sama untuk dapat masuk ke dalam kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Pola searah ditunjukkan dengan diberikannya perlakuan yang sama pada kelompok perlakuan, yaitu pemberian infusa daun sirih merah secara per oral dengan dosis yang berbeda.
B. Variabel Penelitian 1. Variabel utama
a. Variabel bebas : Varibel bebas dari penelitian ini adalah dosis infusa daun sirih merah perberat badan tikus (g/Kg BB).
b. Variabel tergantung Variabel tergantung dari penelitian ini adalah kadar SGPT dan hisotopatologi hati setelah pemberian infusa daun sirih merah.
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali Variabel pengacau terkendali dari penelitian ini adalah subyek uji berupa tikus (umur 2-3 bulan, jenis kelamin betina, galur Wistar, berat badan 100 – 200 g) dan bahan uji berupa daun sirih merah (daun sirih merah diambil yang masih muda dan waktu pengambilannya pagi hari, diperoleh di kaliurang).
b. Variabel pengacau tak terkendali Variabel pengacau tak terkendali dari penelitian ini adalah kondisi patologis dan fisiologis hewan uji.
C. Definisi Operasional
1. Infusa
a. Infusa yang dianalisis merupakan ekstraksi simplisia daun sirih merah (Piper crocatum) sebanyak 20 g pada suhu 90 C dengan akuadest, selama 15 menit, sehingga menghasilkan infusa daun sirih merah dengan konsentrasi 20% b/v.
b. Dosis infusa daun sirih merah yang diberikan pada kelompok perlakuan yaitu sebesar 1,38 ; 2,07 ; 3,105 g/kgBB.
2. Kriteria efek toksisitas subkronis meliputi histopatologi hati dan kadar SGPT.
a. Kadar SGPT (Serum Glutamic Piruvic Transaminase) merupakan salah satu serum aminotransferase yang paling banyak terdapat di hati untuk mendeteksi inflamasi liver dan hepatosit nekrosis.
b. Histopatologi hati adalah kerusakan jaringan dari organ tertentu dalam hal ini hati. Kerusakan ini dapat diketahui dengan cara membuat preparat dari hati.
D. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah empat puluh tikus putih galur Wistar, 20 jantan dan 20 betina berumur 2-3 bulan, berat badan 100 – 200 gram. Daun sirih merah diambil yang masih muda dan waktu pengambilannya pagi hari, diperoleh dari Pak Yohanes Dwiatmaka M.Si.,. Aquadest untuk asupan minum dan sebagai pelarut dalam pembuatan infusa. Pelet BR-2 untuk asupan pakan.
E. Alat dan Instrumen Penelitian
Alat – alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah
1. Alat Alat-alat pembuatan serbuk kering daun sirih merah antara lain : mesin penyerbuk Retsch bv, timbangan, oven.
2. Alat-alat pembuatan infusa daun sirih merah antara lain : Bekker glass, timbangan, batang pengaduk, gelas ukur, panci infusa, heater, stopwatch, kain flanel.