Uji toksisitas subkronis infusa daun sirsak (Annona muricata L.) terhadap gambaran histologis testis dan ovarium tikus - USD Repository

  UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP GAMBARAN HISTOLOGIS TESTIS DAN OVARIUM TIKUS SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Niken Ambar Sayekti NIM : 098114117

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA

HALAMAN PERSEMBAHAN

  “Marilah kepada-Ku, semua yang letih lesu dan berbeban berat, Aku akan memberi kelegaan kepadamu.” (Mat 11:28)

  HIDUP adalah bagaimana kita BERJUANG, mewujudkan MIMPI- MIMPI yang telah tertanam dalam angan …

  Dengan penuh syukur dan sukacita, Kupersembahkan karya ini untuk:

  Tuhan Yesus Kristus, sahabat sejati yang selalu ada untukku, Bapak, Ibu, Mbak Galuh, Dhek Puput, dan seluruh keluarga besarku yang selalu mendukung dan mendoakanku,

  

PRAKATA

  Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kuasa atas berkat, kasih, dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang ber judul “Uji Toksisitas Subkronis Infusa Daun Sirsak (Annona muricata L.)

  terhadap Gambaran Histologis Testis dan Ovarium Tikus

  ”, sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Dalam penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini penulis telah banyak memperoleh bantuan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, penulis hendak mengucapkan terimakasih kepada:

  1. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji skripsi, atas kesabaran, bimbingan, pengarahan, saran, dan motivasi yang diberikan kepada penulis selama proses penelitian dan penyusunan skripsi ini.

  2. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah memberikan arahan dan masukan kepada penulis.

  3. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegiharjo M. Si., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah memberikan arahan dan masukan kepada penulis.

  4. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah membantu penulis dalam determinasi tanaman sirsak (Annona muricata L.).

  5. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi ini.

  6. Dokter Ari, Bapak Ratijo, Bapak Parjiman, Bapak Heru, Bapak Kayat, Bapak Wagiran, Mas Andri selaku laboran Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah banyak memberikan bantuan selama proses pelaksanaan penelitian.

  7. Bapak Bambang, Ibu Sitarina, Ibu Asih, Bapak Yon yang telah banyak membantu dalam pemeriksaan dan menentukan diagnosis histologis organ.

  Serta Bapak Lilik dan Bapak Dwi selaku laboran Laboratorium Patologi Fakultas Kedokteran Hewan UGM yang telah banyak membantu dalam pembuatan preparat histologis.

  8. Bapak Antonius Slamet, Ibu Sulistiyani, Mbak Galuh Ambar Sasi, dan Adik Catarina Kartikawati yang tak henti mendoakan, memberi semangat, dan memberikan kasih sayang selama hidupku.

  9. Partner dan sahabatku “Tim Annona”, Apriliawati Galuh Ajeng, Christiana Lambang Kristanti, E. Raras Pramudita, Meita Eryanti, Suster Imelda Korbafo, Veronika Dita Ayuningtyas atas kerjasama, bantuan, dukungan, dan kesabaran selama penelitian dan pengerjaan skripsi.

  10. Sahabat-sahabatku, A.M. Inggrid Silli, Luluk Rahendra Martha, Nanda Chris Nurcahyanti, Novia Sarwoning Tyas, Theresia Garri Windrawati, atas doa, semangat, kesabaran, motivasi, tawa, kebersamaan, dan bantuan selama ini.

  11. Seluruh dosen dan staf Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yang telah banyak memberikan ilmu, pengalaman, dan bantuan kepada penulis.

  12. Teman-teman angkatan 2009 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas bantuan dan kebersamaan dalam suka maupun duka selama melewati tahun-tahun penuh perjuangan.

  13. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu-persatu yang telah banyak berperan selama penyusunan skripsi ini.

  14. Tuhan Yesus Kristus yang kusebut terakhir, karena Dia-lah tujuan akhir dari hidup ini. Bersyukur atas berkat, kasih karunia, kekuatan, kesehatan, dan pendampingan-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

  Penulis menyadari bahwa tak ada manusia yang sempurna. Oleh karena itu, penulis menerima kritik dan saran yang bersifat membangun demi kemajuan penelitian-penelitian dimasa mendatang.

  Harapan penulis, semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat, serta memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian.

  Yogyakarta,

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL ............................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................ ii HALAMAN PENGESAHAN .................................................................. iii HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ..................... vi PRAKATA .............................................................................................. vii DAFTAR ISI ........................................................................................... x DAFTAR TABEL ................................................................................... xv DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xvi DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xix

  INTISARI ................................................................................................ xx

  ABSTRACT .............................................................................................. xxi BAB I. PENGANTAR .............................................................................

  1 A. Latar Belakang ..................................................................................

  1 1. Perumusan masalah ......................................................................

  3 2. Keaslian penelitian .......................................................................

  4 3. Manfaat penelitian ........................................................................

  5 B. Tujuan Penelitian ..............................................................................

  5

  BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ......................................................

  10 2. Asas toksikologi ...........................................................................

  24 F. Ovarium ............................................................................................

  23 4. Gangguan fungsi testis ..................................................................

  21 3. Pengaturan hormonal ....................................................................

  19 2. Spermatogenesis ...........................................................................

  19 1. Anatomi dan fisiologi testis ..........................................................

  16 E. Testis ...............................................................................................

  14 D. Uji Toksisitas Subkronis. ..................................................................

  11 3. Jenis uji toksikologi ......................................................................

  10 1. Definisi toksikologi ......................................................................

  6 A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.) ..............................................

  10 C. Toksikologi ......................................................................................

  9 B. Infusa ................................................................................................

  8 7. Khasiat dan kegunaan ..................................................................

  7 6. Kandungan ...................................................................................

  6 4. Klasifikasi ……............................................................................ 7 5. Morfologi .....................................................................................

  6 3. Penyebaran ...................................................................................

  6 2. Nama umum .................................................................................

  6 1. Sinonim ........................................................................................

  26

  3. Pengaturan hormonal siklus ovarium ............................................

  30 4. Gangguan fungsi ovarium .............................................................

  33 G. Keterangan Empiris...........................................................................

  34 BAB III. METODE PENELITIAN ..........................................................

  35 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .........................................................

  35 B. Variabel Penelitian ............................................................................

  35 1. Variabel bebas ..............................................................................

  35 2. Variabel tergantung ......................................................................

  35 3. Variabel pengacau ........................................................................

  35 C. Definisi Operasional .........................................................................

  36 1. Infusa daun sirsak .........................................................................

  36 2. Daun sirsak yang digunakan .........................................................

  36 3. Pengaruh efek toksik ....................................................................

  36 4. Sifat efek toksik ............................................................................

  36 D. Alat dan Bahan Penelitian .................................................................

  36 1. Alat penelitian ..............................................................................

  36 2. Bahan penelitian ...........................................................................

  37 E. Tata Cara Penelitian ..........................................................................

  38 1. Determinasi daun sirsak ...............................................................

  38 2. Pengumpulan bahan .....................................................................

  38 3. Pembuatan serbuk ........................................................................

  38

  6. Penentuan peringkat dosis ............................................................

  39 7. Penyiapan hewan uji .....................................................................

  41 8. Pengelompokan hewan uji ............................................................

  41 9. Prosedur pelaksanaan ..................................................................

  42 10. Pengamatan .................................................................................

  42 11. pembuatan preparat dan pemeriksaan histologis ..........................

  43 F. Analisis dan Evaluasi Hasil ...............................................................

  44 1. Pemeriksaan histologis organ ......................................................

  44 2. Uji reversibilitas ..........................................................................

  45 3. Penimbangan berat badan hewan uji ............................................

  45 4. Pengukuran asupan pakan dan minum hewan uji .........................

  45 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................

  46 A. Determinasi Tanaman Sirsak ............................................................

  47 B. Pembuatan Serbuk dan Penetapan Kadar Air ....................................

  47 C. Gambaran Histologis Testis Akibat Pemberian Infusa Daun Sirsak ......................................................................................

  49 D. Gambaran Histologis Ovarium Akibat Pemberian Infusa Daun Sirsak ......................................................................................

  51 E. Reversibilitas ....................................................................................

  55 F. Pengaruh Pemberian Infusa Daun Sirsak Terhadap Perubahan Berat Badan Tikus Jantan dan Betina ................................................

  60

  H. Asupan Minuman Tikus Jantan dan Betina Akibat Pemberian Infusa Daun Sirsak ............................................................................

  65 I. Rangkuman Pembahasan ...................................................................

  67 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................

  69 A. Kesimpulan .......................................................................................

  69 B. Saran .................................................................................................

  69 DAFTAR PUSTAKA ..............................................................................

  70 LAMPIRAN ............................................................................................

  73 BIOGRAFI PENULIS .............................................................................

  99

  

DAFTAR TABEL

  Halaman Tabel I. Hasil pemeriksaan histologis testis tikus kelompok kontrol dan kelompok perlakuan infusa daun sirsak selama 30 hari ....... 49 Tabel II. Hasil pemeriksaan histologis ovarium tikus kelompok kontrol dan kelompok perlakuan infusa daun sirsak selama

  30 hari ...................................................................................... 53 Tabel III. Hasil pemeriksaan histologis testis dan ovarium tikus kelompok kontrol dan kelompok perlakuan uji reversibilitas ..... 57 Tabel IV. Purata berat badan ± SEM tikus jantan pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan infusa daun sirsak ................. 60 Tabel V. Purata berat badan ± SEM tikus betina pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan infusa daun sirsak .................. 61

  

DAFTAR GAMBAR

  Halaman Gambar 1. Morfologi daun sirsak (Annona muricata L.) ........................... 7 Gambar 2. Struktur testis ............................................................................ 20 Gambar 3. Skema umum spermatogenesis ................................................. 23 Gambar 4. Kerusakan sel penyusun testis .................................................. 26 Gambar 5. Diagram ovarium ...................................................................... 29 Gambar 6. Kadar hormon dalam darah ...................................................... 31 Gambar 7. Fibrosis pada stroma ovarium ................................................... 34 Gambar 8. Gambaran histologis testis tikus akibat pemberian aquadest 8333 mg/kg dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 100X ...................................................................... 50

  Gambar 9. Gambaran histologis testis tikus akibat pemberian aquadest 8333 mg/kg dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 400X ....................................................................... 51

  Gambar 10. Gambaran histologis ovarium tikus akibat pemberian infusa daun sirsak dosis 180 mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 100X ...................... 54

  Gambar 11. Gambaran histologis ovarium tikus akibat pemberian infusa daun sirsak 180 mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 400X ........................................ 54

  mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 100X ............................................................. 56 Gambar 13. Gambaran histologis testis tikus 14 hari setelah diberhentikan dari pemberian infusa daun sirsak dosis 108 mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 400X ............................................................. 56

  Gambar 14. Gambaran histologis ovarium tikus 14 hari setelah diberhentikan dari pemberian infusa daun sirsak dosis 180 mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 100X ............................................................. 58

  Gambar 15. Gambaran histologis ovarium tikus 14 hari setelah diberhentikan dari pemberian infusa daun sirsak dosis 180 mg/kg selama 30 hari dengan pewarnaan hematoksilin eosin, perbesaran 400X ............................................................. 59

  Gambar 16. Grafik perubahan berat badan tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirsak ..................................................................... 62 Gambar 17. Grafik perubahan berat badan tikus betina akibat pemberian infusa daun sirsak ..................................................................... 62 Gambar 18. Grafik asupan pakan tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirsak ............................................................................... 64 Gambar 19. Grafik asupan pakan tikus betina akibat pemberian infusa

  Gambar 20. Grafik asupan minuman tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirsak ..................................................................... 65 Gambar 21. Grafik asupan minuman tikus betina akibat pemberian infusa daun sirsak ..................................................................... 66

  DAFTAR LAMPIRAN

  Halaman Lampiran 1. Foto Daun Sirsak. .................................................................... .

  74 Lampiran 2. Foto Infusa Daun Sirsak ..........................................................

  74 Lampiran 3. Penetapan Peringkat Dosis Infusa Daun Sirsak dan Dosis Kontrol Aquadest. ..................................................................... .

  75 Lampiran 4. Perhitungan Konversi Dosis untuk Manusia ............................ .

  76 Lampiran 5. Perhitungan Penetapan Kadar Air. ........................................... .

  77 Lampiran 6. Foto Penetapan kadar air .........................................................

  78 Lampiran 7. Surat Pengesahan Determinasi................................................. .

  79 Lampiran 8. Surat Ethics Committee Approval ............................................ .

  80 Lampiran 9. Hasil Diagnosis Histologis. ..................................................... .

  81 Lampiran 10. Hasil Pemeriksaan Histologis Testis Tikus. ........................... .

  83 Lampiran 11. Hasil Pemeriksaan Histologis Ovarium Tikus. ....................... .

  84 Lampiran 12. Analisis Statistik Perubahan Berat Badan Tikus Jantan ..........

  86 Lampiran 13. Analisis Statistik Perubahan Berat Badan Tikus Betina ......... .

  88 Lampiran 14. Langkah-langkah Analisis Data dengan General Linier Model (metode Multivariate) ...............................................

  91

  

INTISARI

  Penelitian ini bertujuan untuk mengungkapkan spektrum efek toksik infusa daun sirsak terhadap testis dan ovarium berdasarkan gambaran histologisnya. Selain itu juga untuk menganalisis kekerabatan antara dosis infusa daun sirsak dengan spektrum efek toksik, serta mengevaluasi sifat efek toksik yang terjadi.

  Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan sebanyak 50 tikus: 25 jantan dan 25 betina, galur Sprague-Dalwey, umur 2-3 bulan. Kemudian dibagi secara acak menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol yang diberi aquadest 8333 mg/kg dan 4 kelompok perlakuan yang diberi infusa daun sirsak dengan dosis berturut- turut 108, 180, 301, dan 503 mg/kg BB. Pada hari ke-31, sebanyak lima tikus dari tiap dosis dikorbankan dan dilakukan pemeriksaan histologis. Selanjutnya dilakukan uji reversibilitas selama 14 hari tanpa pemberian perlakuan. Pada hari ke-15, hewan uji yang tersisa dikorbankan dan dilakukan pemeriksaan histologis.

  Hasil pemeriksaan histologis menunjukkan testis dan ovarium dalam keadaan normal. Maka dapat disimpulkan bahwa pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari tidak menimbulkan efek toksik terhadap testis dan ovarium. Selanjutnya, tidak ada hubungan antara dosis dengan spektrum efek toksik yang terjadi. Sifat efek toksik tidak dapat ditentukan karena gambaran histologis pada perlakuan maupun uji reversibilitas menunjukkan testis dan ovarium dalam keadaan normal.

  

Kata kunci: Annona muricata L., infusa, toksisitas, subkronis, testis, ovarium

  

ABSTRACT

  This research aims to examine the aqueous extract Annona muricata L.’s spectrum toxic on testes and ovaries based on histologic. Also to analizes correlation between doses examine and toxic effects’s spectrum, and to evaluate the toxic ef fect’s reversibility.

  This research is purely experimental with one way pattern of completely randomized design. Animals testing are used by 50 rats: 25 males and 25 females, strain Sprague-Dalwey, age 2-3 month. Then devide randomly into 5 groups, control group were given distilled water 8333 mg/kg and 4 treatment groups were given a dose of extract aqueous Annona muricata L. 108, 180, 301, and 503

  st

  mg/kg, respectively. On 31 days, 5 rats from each dose were sacrificed and examined histologically. Furthermore, the reversibility test performed for 14 days

  th

  without giving treatment. On 15 days, the remaining test animals were sacrificed and examined histologically.

  The result of histologic examination indicate that the testes and ovaries in normal state. So, can be concluded that the administration of aqueous extract of

  Annona muricata

  L. for 30 days didn’t cause toxic effects on the testes and ovaries. Futhermore, there are no relations between the amount of doses with toxic’s effect determines. The characteristic of toxic’s effect can’t determined because the treatment and reversibility histological test showed testes and ovaries in normal state.

  

Key words : Annona muricata L., aqueous extract, toxicity, subchronic,

testes, ovaries

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Salah satu tanaman yang banyak digunakan dalam pengobatan tradisional

  adalah tanaman sirsak (Annona muricata L.). Daun sirsak mempunyai banyak khasiat untuk mengatasi berbagai penyakit sehingga banyak digunakan dalam masyarakat diberbagai negara, diantaranya digunakan dalam sistem pengobatan herbal di Afrika sebagai sedatif dan antispasmodik, di Nigeria biasanya digunakan sebagai antiparasit, antispasmodik, adstringen, antikanker, sedatif, insektisida, analgetik, dan mengobati penyakit kulit (Adewole and Ojewole, 2009).

  Penggunaan daun sirsak di Indonesia antara lain untuk mengobati penyakit hipertensi, demam, kecacingan, diare, luka bisul, jerawat, antikolesterol dan sebagai antikanker (Trubus, 2011). Berdasarkan penelitian Adewole dan Ojewole (2009) dilaporkan bahwa ekstrak air daun sirsak mempunyai efek sebagai antidiabetes, sedangkan ekstrak etanolnya mempunyai efek antioksidan (Baskar, Rajeswari, and Kumar, 2007).

  Dalam penggunaan di masyarakat, daun sirsak banyak dikonsumsi dalam bentuk rebusan dengan frekuensi lebih dari satu kali (subkronis). Penelitian mengenai efek dari konsumsi daun sirsak dalam jangka panjang masih terbatas. Oleh karena itu penulis ingin meneliti ketoksikan dan sifat efek toksik dari daun yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji tertentu selama kurang dari tiga bulan (Donatus, 2001).

  Pada penelitian ini, daun sirsak yang diberikan dalam perlakuan dibuat dalam bentuk sediaan infusa. Infusa merupakan sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90 C selama 15 menit (Direktorat Obat Asli Indonesia, 2010). Bentuk sediaan infusa lebih mudah dibuat oleh masyarakat daripada dalam bentuk ekstrak karena infusa lebih mendekati rebusan. Selain itu bentuk sediaan infusa sudah termasuk dalam kategori bentuk sediaan herbal Badan POM Republik Indonesia (Direktorat Obat Asli Indonesia, 2010).

  Pengamatan yang dilakukan meliputi pengamatan dan pemeriksaan terhadap asupan pakan dan minum untuk masing-masing hewan, perubahan berat badan, dan pemeriksaan histologis organ testis dan ovarium. Pengamatan patologi dilakukan terhadap gambaran histologis testis dan ovarium (Lu, 1995). Organ testis dan ovarium termasuk organ yang penting yaitu sebagai organ reproduksi yang berfungsi menghasilkan individu baru dan menghasilkan hormon-hormon tertentu. Fungsi reproduksi ini sangat penting bagi kelangsungan hidup suatu spesies sehingga muncul gagasan untuk mengetahui ketoksikan dan sifat efek toksik infusa daun sirsak jika dikonsumsi secara subkronis.

  Penelitian toksisitas akut dan subkronis dari ekstrak air daun sirsak (Arthur, Woode, Terlabi, and Larbie, 2011) terhadap testis telah dilakukan

  2500 mg/kg tidak menimbulkan efek toksik terhadap testis. Namun penelitian tersebut hanya dilakukan selama 14 hari dan tidak dilakukan uji keterbalikkan.

  Arthur et al. (2011) juga tidak meneliti tentang efek toksik daun sirsak terhadap organ reproduksi pada hewan betina (ovarium). Hal ini mendorong penulis untuk melakukan penelitian mengenai ketoksikan dan sifat efek toksik daun sirsak terhadap ovarium dan testis dengan jangka waktu yang lebih lama. Dalam penelitian ini dilakukan uji toksisitas subkronis infusa daun sirsak selama 30 hari dengan uji keterbalikkan selama 14 hari terhadap tikus putih galur Sprague-

  

Dalwey untuk mengetahui apakah infusa daun sirsak yang diberikan selama

  perlakuan memberikan pengaruh atau efek toksik terhadap testis dan ovarium dan apakah efek toksik yang ditimbulkan dapat kembali normal jika pemejanan dihentikan, dilihat dari gambaran histologisnya. Hasil penelitian ini diharapkan dapat diaplikasikan untuk mengetahui ketoksikan dan sifat efek toksik daun sirsak pada organ reproduksi manusia.

1. Perumusan masalah

  Berdasarkan latar belakang diatas, dapat dirumuskan permasalahan sebagai berikut: a.

  Apakah pemberian infusa daun sirsak secara subkronis mempunyai efek toksik terhadap testis dan ovarium tikus? b.

  Apakah ada hubungan antara dosis dengan spektrum efek toksik yang terjadi?

2. Keaslian penelitian

  Penelitian yang pernah dilakukan antara lain sebagai berikut: a. Evaluasi toksisitas akut dan subkronis ekstrak air Annona muricata L. pada hewan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa A. muricata pada dosis rendah bersifat hipoglikemik dan hipolipidemia. Namun pada dosis tinggi menyebabkan kerusakan ginjal dan menimbulkan efek negatif pada fungsi rahim (Arthur, et al., 2011).

  b. Efek perlindungan ekstrak daun Annona muricata L. (Annonaceae) terhadap profil serum lipid dan kerja oksidatif hepatosit pada tikus diabetes terinduksi Streptozotocin menunjukkan hasil bahwa pemberian streptozotocin berkaitan dengan stress oksidatif pada jaringan hati dan ekstrak air daun A. muricata menunjukkan aktivitas antioksidan yang dapat menghambat/mencegah kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh pemberian streptozocin (Adewole and Ojewole, 2009).

  c. Aktivitas antimikroba secara in vitro dan analisis fitokimia daun Annona

  muricata. Hasil menunjukkan bahwa A. muricata dapat digunakan pada

  penyakit yang disebabkan oleh organisme uji yang digunakan pada penelitian ini yaitu Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes,

  Bacillus subtilis , Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Klebsiella

  pneumonia, Proteus vulgaris, dan Salmonella typhimurium (Pathak, Saraswathy, Vora, and Savai, 2010).

  Sepengetahuan penulis, penelitian tentang uji toksisitas subkronis infusa daun sirsak terhadap gambaran histologis organ testis dan ovarium tikus belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis

  Hasil penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi pengembangan ilmu kefarmasian dan pengobatan tradisional khususnya tentang daun sirsak

b. Manfaat praktis

  Hasil penelitian ini diharapkan dapat dijadikan sebagai bahan informasi mengenai toksisitas infusa daun sirsak terhadap organ testis dan ovarium pada pemakaian berturut-turut B.

   Tujuan Penelitian

  1. Tujuan umum

  Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan ada tidaknya potensi efek toksik dari infusa daun sirsak terhadap testis dan ovarium tikus

  2. Tujuan khusus

  a. Dari penelitian ini dapat diketahui spektrum efek toksik dari infusa daun sirsak terhadap testis dan ovarium tikus b. Mengungkapkan hubungan antara dosis yang diberikan dengan spektrum efek toksik yang terjadi

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.) 1. Sinonim Annona bonplandiana Kunth, Annona cearensis Bard. Rodr., Annona Werckle, Annona muricata var borinquensis Morales, guanabanus

  macrocarpa muricatus Gomez (Pinto et al., 2005).

  2. Nama umum Annona muricata L. merupakan tanaman buah tropis yang banyak

  dikenal dengan nama guanabana (Spanish), Graviola (Brazil), pawpaw, corossolier (Perancis), guanavana, toge-banreisi, nangka blanda, dan nangka londa, zuurzak (Jerman), munolla (India), mullu ramaphala (Kanada), durian belanda (Malaysia) (Romero, Beristain, Gabas, and Tellis, 2007; Pinto et al., 2005). Indonesia: Sirsak, nangka sabrang, nangka walanda. Inggris: Soursop. Melayu: Durian Belanda, Durian Benggala. Vietnam: Mang Cau Xiem. Thailand: Thurian Thet, Thurian Khaek. Pilipina: Guyabano, Atti, Illabanos (Plantamor, 2008).

  3. Penyebaran Tanaman ini banyak tersebar di Amerika, Afrika, dan Asia tenggara.

  Sirsak popular di Cuba, Bahama, Colombia, dan timur laut Brazil (Lorenzi,

  4. Klasifikasi

  Kingdom : Plantae (Tumbuhan) Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh) Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji) Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga) Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil) Sub Kelas : Magnolidae Ordo : Magnoliales Famili : Genus : Spesies : Annona muricata L.

  (Plantamor, 2008).

  5. Morfologi

  Daun sirsak berbentuk elips memanjang atau bulat menyempit dengan bagian ujung yang meruncing. Daun ini memiliki panjang ±6-20 cm dan lebar ±2- 6 cm. Permukaan daun halus dan mengkilat, dengan warna hijau yang lebih tua dari bagian permukaan atas dibandingkan dengan permukaan bawah, seperti ditunjukkan pada gambar 1 (Orwa, Mutua, Kindt, Jamnadass, and Simons, 2009).

  Buahnya berbentuk oval, kadang-kadang bentuknya bulat tidak beraturan, panjangnya 10-30 cm dan lebarnya 15 cm dengan berat 4,5-6,8 kg.

  Buah ini dilapisi dengan kulit berduri yang tampak tajam namun halus jika disentuh. Buah yang belum matang berwarna hijau tua dan lama-kelamaan semakin menguning (Enweani, Obroku, Enahoro, and Omoifo, 2004). Daging buah berwarna putih, sangat lembut, agak masam, dan beraroma segar, cocok untuk dibuat minuman seperti jus atau dimakan langsung. Daging buah soursop banyak digunakan untuk membuat jus, sirup, nastar, jelly, es krim dan selai (Romero et al., 2007).

6. Kandungan

  Beberapa komponen kimia telah diisolasi dari bagian-bagian tanaman (akar, batang, daun, buah, dan biji). Sirsak mengandung karbohidrat, protein, asam folat, kalsium, fosfor, besi, vitamin C, dan banyak mengandung vitamin B1 dan B2 (Enweani et al., 2004). Pathak et al. pada tahun 2010 melaporkan bahwa ekstrak air dan ekstrak methanol dari daun sirsak mengandung steroid, glikosida jantung, tannin, dan gula.

  Dari skrining fitokimia yang dilakukan oleh Arthur et al. (2011), diketahui bahwa ekstrak air daun sirsak mengandung saponin, tannin, glikosida, dan flavonoid. Kandungan lain dalam daun sirsak adalah acetogenin yang memiliki kemampuan untuk membunuh sel kanker. Acetogenin sejatinya merupakan kumpulan senyawa aktif dalam daun sirsak. Beberapa senyawa

7. Khasiat dan kegunaan

  Dalam pengobatan tradisional, tanaman ini digunakan pada pengobatan disentri, kardiovaskuler, konstipasi, hemoragi, infeksi bakteri, antivirus, demam, antiinflamasi, dan gangguan lambung. Juga digunakan untuk antitumor, antifertilitas, sedatif, antispasmodik, dan hipotensi (Rajeswari, Gajalakshmi, and Vijayalakshmi, 2012; Yuan et al., 2003).

  Bioaktivitas fraksinasi dari daun sirsak yang telah diisolasi menunjukkan adanya kandungan acetogenin, yaitu muricoreacin, dan murihexocin yang menunjukkan efek sitotoksik yang signifikan terhadap sel tumor manusia (Watson and Preedy, 2009). Berdasarkan hasil penelitian Baskar et al. (2007), ekstrak etanol daun Annona muricata menunjukkan aktivitas antioksidan yang paling poten secara in vitro dengan persen penghambatan yang paling besar dibandingkan dengan daun Annona squamosa dan Annona reticulata. Hal ini mungkin dikarenakan adanya kandungan acetogenin yang memegang peran sebagai penghalau radikal bebas yang efektif dan juga sebagai agen antitumor.

  Hasil penelitian mengungkapkan sirsak memiliki kemampuan sebagai pembunuh alami sel kanker, yaitu 10.000 kali lebih kuat dari kemoterapi. Sirsak juga dikenal sebagai antibakteri dan antijamur. Bahkan, dapat mengobati tekanan darah tinggi, diabetes, dan asam urat (Annasahmad, 2011).

B. Infusa

  Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90 C selama 15 menit. Pembuatan infuas merupakan cara yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak seperti daun dan bunga (Direktorat Obat asli Indonesia, 2010).

  Pembuatan sediaan infusa adalah dengan mencampur simplisia yang telah diayak dengan derajat halus yang sesuai dalam panci dengan air secukupnya, panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung mulai suhu mencapai 90 C sambil sekali-sekali diaduk-aduk. Diserkai selagi masih panas dengan kain flanel, jika volume belum memenuhi dapat ditambahkan air panas pada ampas sampai didapat volume yang dikehendaki (Direktorat Obat asli Indonesia, 2010).

C. Toksikologi

1. Definisi toksikologi

  Toksikologi dapat didefinisikan sebagai cabang ilmu yang mempelajari tentang racun. Sedangkan racun dapat didefinisikan sebagai substansi yang dapat menimbulkan efek berbahaya terhadap kehidupan organisme (Hodgson, 2004). Donatus (2001) mendefinisikan toksikologi sebagai ilmu yang mempelajari aksi berbahaya zat kimia atas sistem biologi. Definisi ini menunjukkan bahwa obyek yang dipelajari dalam toksikologi adalah antaraksi zat kimia atau senyawa asing dengan sistem biologi atau makhluk hidup, yang pusat perhatiannya terletak pada

2. Asas toksikologi

  Peristiwa timbulnya efek toksik racun atas makhluk hidup terjadi melalui beberapa proses, diawali dengan terjadinya pemejanan racun atas makhluk hidup.

  Setelah mengalami absorpsi dari tempat pemejanannya, racun atau metabolitnya didistribusikan ketempat aksi (sel sasaran atau reseptor) tertentu yang ada di dalam makhluk hidup. Ditempat aksi ini terjadi antaraksi antara racun atau metabolitnya dengan komponen penyusun sel sasaran atau reseptor, yang menyebabkan terjadinya serangkaian peristiwa biokimia dan biofisika yang menimbulkan efek toksik dengan wujud dan sifat tertentu (Donatus, 2001).

  Berdasarkan alur peristiwa timbulnya efek toksik suatu racun, maka ada empat asas utama yang perlu dipahami dalam toksikologi yaitu kondisi efek toksik, mekanisme aksi, wujud, dan sifat efek toksik.

  a. Kondisi efek toksik Kondisi efek toksik adalah keadaan atau faktor yang mempengaruhi keefektifan absorpsi, distribusi, dan eliminasi zat beracun didalam tubuh sehingga menentukan keberadaan (kadar dan lama tinggal) senyawa atau metabolitnya ditempat aksi dan keefektifan antaraksinya (mekanisme aksi).

  Keadaan ini bergantung pada kondisi pemejanan dan kondisi makhluk hidup (Donatus, 2001).

  b. Mekanisme efek toksik Mekanisme aksi toksik racun dapat digolongkan menjadi tiga, yakni antara racun dan tempat aksinya, dan berdasarkan risiko penumpukan racun dalam gudang penyimpanan tubuh (Donatus, 2001).

  Mekanisme aksi berdasarkan sifat dan tempat kejadian dibedakan menjadi mekanisme luka intrasel dan ekstrasel. Mekanisme luka intrasel disebut juga mekanisme langsung atau primer, yaitu luka sel yang diawali oleh aksi racun pada tempat aksinya didalam sel. Sedangkan mekanisme aksi ekstrasel terjadi secara tidak langsung atau mekanisme sekunder, dimana tempat kejadian awalnya di lingkungan ekstrasel (Donatus, 2001).

  Mekanisme aksi berdasarkan sifat antaraksi digolongkan menjadi dua, yaitu aksi toksik yang didasarkan atas antaraksi yang terbalikkan dan yang tak terbalikkan antara racun dan tempat aksinya. Antaraksi yang terbalikkan artinya bila kadar racun yang ada di reseptor habis, maka reseptor akan kembali kekedudukan semula, sehingga efek toksik yang ditimbulkan oleh racun akan hilang bila pemejanan racun dihentikan. Antaraksi tak terbalikkan memungkinkan penumpukan efek. Artinya, kerusakan yang terjadi sifatnya sama, sehingga akan terjadi penumpukan efek toksik. Maka pemejanan dengan takaran yang sangat kecil dalam jangka panjang akan menimbulkan efek toksik yang seefektif dengan yang ditimbulkan oleh pemejanan racun takaran besar dalam jangka pendek (Donatus, 2001).

  Mekanisme aksi berdasarkan penumpukan. Senyawa-senyawa yang sangat lipofil dan sulit dimetabolisme, di dalam tubuh cenderung akan senyawa tersebut akhirnya terlepas ke sirkulasi darah dan meningkatkan kadar senyawa yang ada dicairan tubuh. Bila kadar tersebut melebihi harga kadar toksik minimum (KTM) senyawa tersebut, maka akan menimbulkan efek toksik yang tidak diinginkan (Donatus, 2001).

  c. Wujud efek toksik Wujud efek toksik adalah hasil akhir dari aksi dan respon toksik. Respon toksik merupakan suatu proses di mana sel, jaringan, atau organ menanggapi adanya luka dalam komponen-komponen tubuhnya. Respon yang terjadi merupakan hasil dari (1) perubahan biokimia terhadap luka sel akibat antaraksi racun dan tempat aksinya. Termasuk efek toksik jenis ini diantaranya penghambatan respirasi selular, perubahan keseimbangan cairan dan elektrolit, dan gangguan pasok energi. Perubahan biokimia pada umumnya bersifat terbalikkan. (2) perubahan fisiologi (fungsional) yang berkaitan dengan antaraksi racun dengan reseptor atau tempat aktif enzim sehingga mempengaruhi fungsi homeostasis tertentu. Perubahan ini bersifat terbalikkan.

  Termasuk efek toksik jenis ini diantaranya anoksia, gangguan pernapasan, perubahan kontraksi dan relaksasi otot, dan gangguan sistem saraf pusat. (3) perubahan structural, yang biasanya diawali oleh perubahan biokimia atau fungsional. Termasuk dalam jenis ini diantaranya perlemakan, nekrosis, karsinogenesis, dan teratogenesis (Donatus, 2001).

  d. Sifat efek toksik kembali seperti keadaan normal atau seperti sebelum terjadi efek toksik. Keterbalikkan ini tergantung dari sejumlah faktor, termasuk tingkat paparan (waktu dan jumlah racun) dan kemampuan jaringan yang terkena untuk memperbaiki diri atau beregenerasi. Sifat tak terbalikkan adalah jika efek toksik yang terjadi menetap atau tidak dapat kembali seperti keadaan normal (Williams, James, and Roberts, 2000).

3. Jenis uji toksikologi

  Jenis uji toksikologi dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu uji ketoksikan tak khas dan uji ketoksikan khas.

  a. Uji ketoksikan tak khas Uji ketoksikan tak khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi keseluruhan atau spektrum efek toksik suatu senyawa pada aneka ragam jenis hewan uji. Termasuk dalam uji ketoksikan tak khas adalah: 1) Uji ketoksikan akut, yaitu uji yang dirancang untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang terjadi dalam waktu yang singkat setelah pemejanan atau pemberian dalam jumlah tertentu. Biasanya pengamatan dilakukan selama 24 jam. Data kuantitatif yang diperoleh adalah nilai LD

  50

  sedangkan data kualitatif berupa penampakan klinis dan morfologis efek toksik senyawa uji (Klaassen, 2001).

  2) Uji ketoksikan subkronis disebut juga uji ketoksikan sub akut, ialah uji ketoksikan suatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada memperlihatkan apakah spektrum efek toksik tersebut berkaitan dengan takaran dosis. Hasil uji memberikan informasi tentang efek toksik utama senyawa uji dan organ-organ yang dipengaruhi, efek toksik lambat yang tidak diamati pada uji ketoksikan akut, kekerabatan antara dosis dan efek toksik, dan reversibilitas (Donatus, 2001). 3) Uji ketoksikan kronis merupakan uji ketoksikan suatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji selama lebih dari tiga bulan (selama sebagian besar masa hidup hewan uji) (Klaassen, 2001).

  b. Uji ketoksikan khas Uji ketoksikan khas adalah uji toksikologi yang dirancang untuk mengevaluasi secara rinci efek khas suatu senyawa pada aneka ragam jenis hewan uji. Termasuk dalam uji ketoksikan khas adalah:

  1) Uji potensiasi adalah uji untuk menentukan efek suatu senyawa dengan adanya senyawa lain yang kemungkinan meningkatkan ketoksikan salah satu senyawa tersebut. Uji potensiasi dilakukan mengikuti tata cara uji ketoksikan akut dengan melibatkan dua atau lebih senyawa uji. 2) Uji kekarsinogenikan adalah uji yang ditujukan untuk menentukan kemampuan senyawa dalam menimbulkan efek pertumbuhan sel yang lebih cepat dari keadaan normal, yang biasa disebut dengan kanker.

  4) Uji keteratogenikan adalah uji yang ditujukan untuk menentukan pengaruh suatu senyawa terhadap janin dalam hewan bunting.

  5) Uji reproduksi adalah uji yang ditujukan untuk menentukan pengaruh senyawa atas kapasitas reproduksi hewan uji.

  6) Uji kulit dan mata adalah uji yang ditujukan untuk menentukan berbagai efek lokal senyawa bila bersentuhan langsung pada kulit dan mata. 7) Uji perilaku adalah uji yang ditujukan untuk mengevaluasi aktivitas lokomotor hewan uji atas pengaruh suatu senyawa

  (Donatus, 2001; Hodgson, 2004).

D. Uji Toksisitas Subkronis

  Uji ketoksikan subkronis biasanya disebut juga subakut merupakan uji ketoksikan suatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji tertentu, selama kurang dari tiga bulan. Uji ini ditujukan untuk mengungkapkan spektrum efek toksik senyawa uji, serta untuk memperlihatkan apakah spektrum efek toksik itu berkaitan dengan takaran dosis (Donatus, 2001).

  Uji toksisitas subkronis dilakukan dengan pemberian dosis berulang pada periode tertentu, misalnya 28-90 hari pada pemberian senyawa uji secara oral pada tikus atau anjing. Toksisitas subkronis memberikan informasi tentang regimen dosis yang dapat digunakan untuk merancang uji toksisitas kronis atau