MICHAEL B G2A009046 Bab4KTI

15 BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Ruang Lingkup Penelitian

Penelitian ini mencakup bidang Ilmu Kedokteran khususnya ilmu Biokimia dan Farmakologi.

4.2 Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium LPPT Universitas Gajahmada Yogyakarta

4.3 Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini adalah penelitian experimental dengan metode randomized pre and post test control group design.

4.4 Populasi dan Sampel 4.4.1 Kriteria sampel

4.4.1.1 Kriteria inklusi

 Tikus Sprague dawley jantan  Umur 6 – 8 minggu

 Berat tubuh 200 – 250 gram

 Gerak aktif dan tidak terdapat kelainan anatomis  Belum pernah digunakan dalam penelitian

4.4.1.2 Kriteria eksklusi

Kriteria eksklusi drop-out adalah tikus mati selama masa adaptasi dan sebelum pengambilan darah dilakukan atau pada saat perlakuan

4.4.2 Besar sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah 30 sampel yang terdiri dari 5 kelompok perlakuan. Tiap kelompok perlakuan terdiri dari 5 sampel hewan coba (tikus Sprague dawley jantan).

Tiap kelompok telah diberi perlakuan sebagai berikut :  Kelompok kontrol (diberi plasebo)

 Kelompok dengan pemberian Vitamin-E 20mg/kgBB  Kelompok dengan pemberian Vitamin-E 30mg/kgBB  Kelompok dengan pemberian Vitamin-E 40mg/kgBB  Kelompok dengan pemberian Vitamin-E 50mg/kgBB

Dan semua kelompok diberi parasetamol dengan dosis yang sama, yaitu 1500mg/kgBB

4.5 Variabel Penelitian 4.5.1Variabel Bebas

Dosis Vitamin-E dan dosis parasetamol 4.5.2Variabel Tergantung

17 4.6 Definisi Operasional

Alkaline Phosphatase : Enzim dalam jaringan hepar yang kadarnya dalam darah meningkat bila terjadi kerusakan pada jaringan hepar. ALP diambil dari serum darah tikus Sprague dawley dengan satuan u/mL. Sampel serum diperoleh dari darah, diambil dengan pipet hematokrit pada regio retroorbital tikus percobaan. Darah retroorbital tanpa antikoagulan segera disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit untuk memperoleh serum.

Induksi Parasetamol : Pemberian parasetamol dengan dosis tunggal sebesar 1500 mg/kgBB secara oral dengan menggunakan sonde selama sehari hingga terjadi kerusakan hepar. Preparat parasetamol diperoleh dengan menghaluskan tablet parasetamol, kemudian dicampur dengan MCNA sampai homogen.

Vitamin-E : Antioksidan Vitamin-E berbentuk kapsul berisi cairan minyak berwarna kuning pucat yang diberikan pada tikus Sprague dawley

jantan dengan dosis 20 mg/kgBB, 30 mg/kgBB, 40 mg/kgBB, dan 50 mg/kgBB. Yang telah digunakan adalah Natur vitamin E 100 IU.

4.7 Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data 4.7.1Rancangan Kerja

Penelitian ini adalah penelitian ekperimental pre and post test control group design. Setelah tikus beradaptasi selama satu minggu, tikus dibagi menjadi 5 kelompok secara acak. Tiap kelompok terdiri dari 6 ekor tikus. Kemudian dilakukan pengukuran variabel sebelum dan sesudah dilakukan perlakuan.

Skema rancangan penelitian :

Gambar 3. Rancangan penelitian

K X0 K’

P1 X1 P1’

P2 X2 P2’

P3 X3 P3’

P4 X4 P4’

R S

19 Tabel 2. Rancangan penelitian

P Persiapan sample

S Sampel setelah adaptasi

R Randomisasi

X0 Perlakuan kelompok control : placebo + parasetamol 1500 mg/kgBB

X1 Perlakuan kelompok 1 : Vitamin-E 20 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X2 Perlakuan kelompok 2 : Vitamin-E 30 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X3 Perlakuan kelompok 3 : Vitamin-E 40 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X4 Perlakuan kelompok 4 : Vitamin-E 50 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

K, P1, P2, P3, P4 Pengukuran kadar ALP sebelum diberi perlakuan K’, P1’, P2’, P3’, P4’ Pengukuran kadar ALP setelah diberi perlakuan

4.7.2 Bahan

 Tikus Sprague dawley jantan  Pakan : Comfeed Ayam Advan II  Preparat parasetamol

 Preparat Vitamin-E 4.7.3 Alat

 Kandang hewan coba  Tabung

 Kit pemeriksaan ALP

 Spuit injeksi untuk pengambilan sampel  Sonde lambung

 Gunting

 Alat tulis untuk pencatatan 4.7.4 Jenis data

Jenis data yang diperoleh adalah data primer.

4.7.5 Cara kerja 4.7.5.1Persiapan

 Menyusun proposal dan revisi proposal

 Mengajukan ethical clearance dan izin penelitian

 Menyiapkan hewan coba dan adaptasi hewan coba selama satu minggu

 Pembuatan preparat parasetamol dan Vitamin-E

 Preparat parasetamol dibuat dengan menghaluskan tablet parasetamol, kemudian dicampur dengan MCNA hingga homogen.

 Preparat Vitamin-E dibuat dengan menggunakan tablet Natur E.

4.7.5.2Pelaksanaan

Selama satu minggu, tikus Sprague dawley jantan dibiarkan agar beradaptasi dengan lingkungan. Kemudian pada hari

21

kedelapan diambil sampel darah dan dilakukan pengukuran ALP sebelum perlakuan (pretest). Pada hari kesembilan tikus Sprague dawley diberikan perlakuan sesuai kelompok yang telah dirandomisasi. Selama tujuh hari tiap kelompok perlakuan diberi Vitamin-E sesuai yang telah disebutkan, kecuali kelompok kontrol yang hanya diberi plasebo. Pada hari ke 16 tikus dipuasakan tetapi tetap diberi air minum. Pada hari ke 17 seluruh kelompok perlakuan diberi parasetamol dengan dosis 1500mg/kgBB. Setelah 24 jam, kembali diambil sampel darah untuk diukur kadar ALP setelah perlakuan (posttest). Hasil pengukuran variabel dicatat untuk pengolahan data selanjutnya.

4.8Alur Penelitian

Hari ke-8

Hari ke-16

Hari ke-17

Hari ke-18

Gambar 4. Alur penelitian

Hari ke 9-15 Sampel tikus Sprague

dawley sebanyak 30 ekor

Adaptasi selama satu minggu

Pretest pengukuran kadar ALP

Intervensi Vitamin-E 30 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 20 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 40 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 50 mg/kgBB Plasebo (tanpa Vitamin-E) Tikus puasa

Semua kelompok perlakuan diinduksi parasetamol 1500 mg/kgBB

Posttest pengukuran kadar ALP

23 4.9 Analisis Data

Data yang diperoleh diuji normalitasnya dengan menggunakan Shapiro –Wilk. Apabila data berdistribusi normal maka data dianalisis dengan uji one way Anova dan post hoc. Apabila data tidak berdistribusi normal maka data dianalisis dengan uji Kruskal Wallis dan Mann Whitney-U.

Uji Hipotesis dianggap signifikan secara statistik apabila p<0.05 dengan interval kepercayaan sebesar 95%.

4.10Etika Penelitian

Ethical clearance telah dimintakan dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) LPPT UGM Yogyakarta sebelum penelitian dilakukan.

4.11Conflict of Interest

Tidak ada conflict of interest di dalam penulisan ini. Natur E dibeli dengan biaya sendiri.

jantan dengan dosis 20 mg/kgBB, 30 mg/kgBB, 40 mg/kgBB, dan 50 mg/kgBB. Yang telah digunakan adalah Natur vitamin E 100 IU.

4.7 Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data 4.7.1Rancangan Kerja

Penelitian ini adalah penelitian ekperimental pre and post test control group design. Setelah tikus beradaptasi selama satu minggu, tikus dibagi menjadi 5 kelompok secara acak. Tiap kelompok terdiri dari 6 ekor tikus. Kemudian dilakukan pengukuran variabel sebelum dan sesudah dilakukan perlakuan.

Skema rancangan penelitian :

Gambar 3. Rancangan penelitian

K X0 K’

P1 X1 P1’

P2 X2 P2’

P3 X3 P3’

P4 X4 P4’

R S

Tabel 2. Rancangan penelitian

P Persiapan sample

S Sampel setelah adaptasi

R Randomisasi

X0 Perlakuan kelompok control : placebo + parasetamol 1500 mg/kgBB

X1 Perlakuan kelompok 1 : Vitamin-E 20 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X2 Perlakuan kelompok 2 : Vitamin-E 30 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X3 Perlakuan kelompok 3 : Vitamin-E 40 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

X4 Perlakuan kelompok 4 : Vitamin-E 50 mg/kgBB + parasetamol 1500 mg/kgBB

K, P1, P2, P3, P4 Pengukuran kadar ALP sebelum diberi perlakuan K’, P1’, P2’, P3’, P4’ Pengukuran kadar ALP setelah diberi perlakuan

4.7.2 Bahan

 Tikus Sprague dawley jantan  Pakan : Comfeed Ayam Advan II  Preparat parasetamol

 Preparat Vitamin-E 4.7.3 Alat

 Kandang hewan coba  Tabung

 Kit pemeriksaan ALP

 Spuit injeksi untuk pengambilan sampel  Sonde lambung

 Gunting

 Alat tulis untuk pencatatan 4.7.4 Jenis data

Jenis data yang diperoleh adalah data primer.

4.7.5 Cara kerja 4.7.5.1Persiapan

 Menyusun proposal dan revisi proposal

 Mengajukan ethical clearance dan izin penelitian

 Menyiapkan hewan coba dan adaptasi hewan coba selama satu minggu

 Pembuatan preparat parasetamol dan Vitamin-E

 Preparat parasetamol dibuat dengan menghaluskan tablet parasetamol, kemudian dicampur dengan MCNA hingga homogen.

 Preparat Vitamin-E dibuat dengan menggunakan tablet Natur E.

4.7.5.2Pelaksanaan

Selama satu minggu, tikus Sprague dawley jantan dibiarkan agar beradaptasi dengan lingkungan. Kemudian pada hari

kedelapan diambil sampel darah dan dilakukan pengukuran ALP sebelum perlakuan (pretest). Pada hari kesembilan tikus Sprague dawley diberikan perlakuan sesuai kelompok yang telah dirandomisasi. Selama tujuh hari tiap kelompok perlakuan diberi Vitamin-E sesuai yang telah disebutkan, kecuali kelompok kontrol yang hanya diberi plasebo. Pada hari ke 16 tikus dipuasakan tetapi tetap diberi air minum. Pada hari ke 17 seluruh kelompok perlakuan diberi parasetamol dengan dosis 1500mg/kgBB. Setelah 24 jam, kembali diambil sampel darah untuk diukur kadar ALP setelah perlakuan (posttest). Hasil pengukuran variabel dicatat untuk pengolahan data selanjutnya.

4.8Alur Penelitian

Hari ke-8

Hari ke-16

Hari ke-17

Hari ke-18

Gambar 4. Alur penelitian

Hari ke 9-15 Sampel tikus Sprague

dawley sebanyak 30 ekor

Adaptasi selama satu minggu

Pretest pengukuran kadar ALP

Intervensi Vitamin-E 30 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 20 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 40 mg/kgBB Intervensi Vitamin-E 50 mg/kgBB Plasebo (tanpa Vitamin-E) Tikus puasa

Semua kelompok perlakuan diinduksi parasetamol 1500 mg/kgBB

Posttest pengukuran kadar ALP

4.9 Analisis Data

Data yang diperoleh diuji normalitasnya dengan menggunakan Shapiro –Wilk. Apabila data berdistribusi normal maka data dianalisis dengan uji one way Anova dan post hoc. Apabila data tidak berdistribusi normal maka data dianalisis dengan uji Kruskal Wallis dan Mann Whitney-U.

Uji Hipotesis dianggap signifikan secara statistik apabila p<0.05 dengan interval kepercayaan sebesar 95%.

4.10Etika Penelitian

Ethical clearance telah dimintakan dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) LPPT UGM Yogyakarta sebelum penelitian dilakukan.

4.11Conflict of Interest

Tidak ada conflict of interest di dalam penulisan ini. Natur E dibeli dengan biaya sendiri.