Efek Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Alpukat (Persea americana Mill.) Sebagai Bahan Alternatif Irigasi Saluran Akar Terhadap Porphyromonas gingivalis (In Vitro)
Lampiran 1. Skema Alur Pikir
Irigasi: Irigasi saluran akar memiliki peranan penting dalam keberhasilan perawatan
saluran akar. Irigasi saluran akar bertujuan: (1) menghilangkan jaringan nekrotik dan
serpihan dentin dari saluran akar, (2) mencegah penumpukan jaringan keras dan
lunak yang terinfeksi pada bagian periapikal, (3) melarutkan jaringan organik dan
nonorganik, (4) menghilangkan mikroorganisme berupa bakteri dan jamur dari dalam
saluran akar. (Haapasalo M dan Qian W, 2008)
Bahan irigasi yang ideal memiliki ciri-ciri: (1) mempunyai sifat antimikroba, (2)
mampu melarutkan smear layer dan sisa-sia jaringan pada saluran akar, (3) memiliki
tegangan permukaan yang rendah, (4) memiliki toksisitas yang rendah, (5) tidak
mengiritasi jaringann periapikal. (Ema M, 2011)
Bakteri Porphyromonas Gingivalis: (1) bakteri anaerob berpigmen hitam gram
negatif yang pada umumnya ditemukan pada infeksi endodonti primer, (2) aktivitas
proteolitik yang dimiliki porphyromonas gingivalis mengakibatkan bakteri ini terlibat
dalam pembentukan abses di apikal (Peciuliene V et al., 2008), (3) ditemukan
sebanyak 30% - 43,3% pada infeksi endodonti primer (Loo TYW, 2006), (4) Faktor
virulensi tersebut antara lain seperti fimbriae, capsule, extracellular vesicles,
hemagglutinin, gingipain, hydrolytic enzymes dan lipopolysaccharide (LPS). Faktorfaktor virulensi ini dapat memicu mekanisme pertahanan tubuh yang mengarah
kepada kerusakan jaringan (Ferraz CCR et al., 2011)
Beberapa bahan irigasi saluran akar: NaOCl: memiliki daya antibakteri dan
mampu melarutkan jaringan yang baik, namun memiliki bau yang tidak enak, bersifat
toksik, dan tidak mampu menghilangkan smear layer (Venghat S et al, 2014).
EDTA: mampu menghilangkan smear layer dengan baik, namun daya antibakteri
yang dimilikinya rendah (Basrani B, 2011). Klorheksidin: memiliki daya antibakteri
yang baik, namun tidak mampu melarutkan jaringan nekrotik (Basrani B, 2011).
MTAD: kombinasi antara MTAD dan NaOCl menghasilkan produk sampingan yang
bersifat toksik (Basrani B, 2011).
Universitas Sumatera Utara
Biji Alpukat (Persea americana Mill.): Biji alpukat yang merupakan dari buah
alpukat memiliki khasiat antibakteri, antihipertensi, antidiabetes, dan antioksidan
(Dewi dan Sulistowati, 2013).Memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder
seperti alkaloid, triterpenoid, steroid, tanin, dan flavonoid (Marlinda M, 2012). Efek
antibakteri: (1)Flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding
sel bakteri, mikrosom, dan lisosom, (2)Saponin merusak membran sitoplasma
sehingga sitoplasma sel menembus keluar dan mengakibatkan se bakteri mati (Dewi
dan Sulistowati, 2013), (3) Tanin menyebabkan membran sel bakteri mengkerut
sehingga menyebabkan peningkatan permeabilitas membran sel bakteri yang
mengakibatkan metabolisme bakteri terganggu sehingga bakteri lisis dan mati (Asri
D, 2014).
Berdasarkan data yang telah diuraikan, diperlukan suatu bahan alami yang dapat
digunakan sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar yang mempunyai khasiat
antibakteri yang lebih baik, biokompatibel, non toksik, harga terjangkau, dan mudah
diperoleh.
Rumusan masalah
Berapakah KHM (Kadar Hambat Minimal) dan KBM (Kadar Bunuh Minimal)
ekstrak etanol biji Alpukat (Persea americana Mill.) sebagai alternatif bahan irigasi
saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis
Universitas Sumatera Utara
Tujuan Penelitan
Untuk mengetahui KHM (Kadar Hambat Minimal) dan KBM (Kadar Bunuh
Minimal) ekstrak etanol biji Alpukat (Persea americana Mill.) sebagai alternatif
bahan irigasi saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis
Judul Penelitian
Efek antibakteri ekstrak etanol biji alpukat (Persea americana Mill.)sebagai alternatif
bahan irigasi saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis (secara in vitro)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Alur Penelitian
1. Alur Ekstraksi Biji Alpukat (Persea americana Mill.)
Biji alpukat (Persea americana Mill.) 2 kg dicuci dan dikeringkan di lemari
pengering
Biji alpukat (Persea americana Mill.) yang telah kering dihaluskan dan ayak
300 gram serbuk simplisia direndam dengan etanol 70% selama 15 menit
Simplisia yang telah direndam dipindahkan ke dalam perkulator dan tambahkan
etanol
Perkulator ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam
Cairan diteteskan dan ulangi sampai jernih
Ekstrak cair
Diuapkan dengan vaccum rotapavor sampai kental
Ekstrak kental berwarna kecoklatan
Disimpan dalam botol kaca tertutup, simpan di tempat sejuk
Diberi label
Universitas Sumatera Utara
2. Pembuatan Media Bakteri
Trypticase Soy Agar 20 gr + Trypticase Soy Broth 30 gr + akuades 1 L
Dipanaskan hingga mendidih
Disterilkan dengan autoklaf selama 15 menit
Disimpan dalam lemari pendingin
Jika digunakan, dipanaskan lagi hingga mendidih
Dituangkan ke dalam cawan petri (20 ml/petri)
Universitas Sumatera Utara
3. Pembuatan Suspensi Bakteri
Cell line Porphyromonas gingivalis yang telah dibiakkan pada TSA
Ambil 1-2 ose dari biakan murni bakteri lalu disuspensikan dalam larutan 0,9 NaCl
Hingga konsentrasi 108CFU/ml atau setara dengan 0,5Mc Farland Standard
Universitas Sumatera Utara
4. Pengujian Efek Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Alpukat
Ekstrak etanol biji alpukat (Persea americana Mill.) direplikasi 4x dengan
konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125% (masing-masing konsentrasi = 1 ml) +
suspensI bakteri Porphyromonas gingivalis (100 µl)
Diinkubasi dalam incubator CO2 dengan suhu 37○C selama 24 jam
Semua konsentrasi ekstrak etanol biji alpukat dibandingkan dengan kekeruhan KHM
Masing-masing kelompok konsentrasi dicampur dengan menggunakan vortex
Ambil 100 µl dan teteskan pada media pada (Trypticase Soy Agar)
Dimasukkan ke dalam inkubator CO2 dengan suhu 37○C selama 24 jam
Hitung jumlah koloni bakteri pada tiap petri KBM
Hasil
Kesimpulan
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Bakteri
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Uji StatistikEkstrak Etanol Biji Alpukat (Persea americanaMill.)
terhadapPorphyromonas gingivalis
Case Processing Summary
Cases
Valid
Konsentrasi
Missing
Total
N
Percent
N
Percent
N
Percent
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
80%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
60%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
50%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
K(-)
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
K(+)
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
Statistic
Std. Error
Koloni 100%
Descriptivesa,b,c,d
Konsentrasi
Koloni
50%
Mean
95% Confidence Interval
for Mean
1.7500
Lower Bound
.9544
Upper Bound
2.5456
.25000
Universitas Sumatera Utara
5% Trimmed Mean
1.7778
Median
2.0000
Variance
.250
Std. Deviation
.50000
Minimum
1.00
Maximum
2.00
Range
1.00
Interquartile Range
K(+)
.75
Skewness
-2.000
1.014
Kurtosis
4.000
2.619
35.5000
1.32288
Mean
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound
31.2900
Upper Bound
39.7100
5% Trimmed Mean
35.5556
Median
36.0000
Variance
Std. Deviation
7.000
2.64575
Minimum
32.00
Maximum
38.00
Universitas Sumatera Utara
Range
6.00
Interquartile Range
5.00
Skewness
-.864
1.014
Kurtosis
-.286
2.619
a. Koloni is constant when Konsentrasi = 100%. It has been omitted.
b. Koloni is constant when Konsentrasi = 80%. It has been omitted.
c. Koloni is constant when Konsentrasi = 60%. It has been omitted.
d. Koloni is constant when Konsentrasi = K(-). It has been omitted.
Tests of Normalityb,c,d,e
Kolmogorov-Smirnova
Konsentrasi Statistic
Shapiro-Wilk
df
Sig.
Statistic
df
Sig.
Koloni 50%
.441
4
.
.630
4
.001
K(+)
.215
4
.
.946
4
.689
a. Lilliefors Significance Correction
b. Koloni is constant when Konsentrasi = 100%. It has been omitted.
c. Koloni is constant when Konsentrasi = 80%. It has been omitted.
d. Koloni is constant when Konsentrasi = 60%. It has been omitted.
e. Koloni is constant when Konsentrasi = K(-). It has been omitted.
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
100%
4
8.50
80%
4
8.50
60%
4
8.50
50%
4
18.50
K(-)
4
8.50
K(+)
4
22.50
Total
24
Universitas Sumatera Utara
Test Statisticsa,b
Koloni
Chi-Square
df
Asymp. Sig.
22.772
5
.000
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
100%
4
8.50
80%
4
8.50
60%
4
8.50
50%
4
18.50
K(-)
4
8.50
K(+)
4
22.50
Total
24
Universitas Sumatera Utara
Test Statisticsa,b
Koloni
Chi-Square
df
Asymp. Sig.
22.772
5
.000
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
Sum of Ranks
100%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.460
Universitas Sumatera Utara
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
4.50
18.00
80%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
18.000
Z
.000
Asymp. Sig. (2-tailed)
1.000
1.000a
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
Universitas Sumatera Utara
Koloni
100%
4
4.50
18.00
60%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
8.000
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
4.50
18.00
60%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
Sum of Ranks
80%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
.000
10.000
Universitas Sumatera Utara
Z
-2.460
Asymp. Sig. (2-tailed)
.014
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
.000
10.000
Universitas Sumatera Utara
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
-2.460
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
50%
4
6.50
26.00
K(-)
4
2.50
10.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
50%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.366
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.018
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
K(-)
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.460
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Lampiran 5. Surat Hasil Identifikasi Biji Alpukat (Persea americanaMill.)
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Irigasi: Irigasi saluran akar memiliki peranan penting dalam keberhasilan perawatan
saluran akar. Irigasi saluran akar bertujuan: (1) menghilangkan jaringan nekrotik dan
serpihan dentin dari saluran akar, (2) mencegah penumpukan jaringan keras dan
lunak yang terinfeksi pada bagian periapikal, (3) melarutkan jaringan organik dan
nonorganik, (4) menghilangkan mikroorganisme berupa bakteri dan jamur dari dalam
saluran akar. (Haapasalo M dan Qian W, 2008)
Bahan irigasi yang ideal memiliki ciri-ciri: (1) mempunyai sifat antimikroba, (2)
mampu melarutkan smear layer dan sisa-sia jaringan pada saluran akar, (3) memiliki
tegangan permukaan yang rendah, (4) memiliki toksisitas yang rendah, (5) tidak
mengiritasi jaringann periapikal. (Ema M, 2011)
Bakteri Porphyromonas Gingivalis: (1) bakteri anaerob berpigmen hitam gram
negatif yang pada umumnya ditemukan pada infeksi endodonti primer, (2) aktivitas
proteolitik yang dimiliki porphyromonas gingivalis mengakibatkan bakteri ini terlibat
dalam pembentukan abses di apikal (Peciuliene V et al., 2008), (3) ditemukan
sebanyak 30% - 43,3% pada infeksi endodonti primer (Loo TYW, 2006), (4) Faktor
virulensi tersebut antara lain seperti fimbriae, capsule, extracellular vesicles,
hemagglutinin, gingipain, hydrolytic enzymes dan lipopolysaccharide (LPS). Faktorfaktor virulensi ini dapat memicu mekanisme pertahanan tubuh yang mengarah
kepada kerusakan jaringan (Ferraz CCR et al., 2011)
Beberapa bahan irigasi saluran akar: NaOCl: memiliki daya antibakteri dan
mampu melarutkan jaringan yang baik, namun memiliki bau yang tidak enak, bersifat
toksik, dan tidak mampu menghilangkan smear layer (Venghat S et al, 2014).
EDTA: mampu menghilangkan smear layer dengan baik, namun daya antibakteri
yang dimilikinya rendah (Basrani B, 2011). Klorheksidin: memiliki daya antibakteri
yang baik, namun tidak mampu melarutkan jaringan nekrotik (Basrani B, 2011).
MTAD: kombinasi antara MTAD dan NaOCl menghasilkan produk sampingan yang
bersifat toksik (Basrani B, 2011).
Universitas Sumatera Utara
Biji Alpukat (Persea americana Mill.): Biji alpukat yang merupakan dari buah
alpukat memiliki khasiat antibakteri, antihipertensi, antidiabetes, dan antioksidan
(Dewi dan Sulistowati, 2013).Memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder
seperti alkaloid, triterpenoid, steroid, tanin, dan flavonoid (Marlinda M, 2012). Efek
antibakteri: (1)Flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding
sel bakteri, mikrosom, dan lisosom, (2)Saponin merusak membran sitoplasma
sehingga sitoplasma sel menembus keluar dan mengakibatkan se bakteri mati (Dewi
dan Sulistowati, 2013), (3) Tanin menyebabkan membran sel bakteri mengkerut
sehingga menyebabkan peningkatan permeabilitas membran sel bakteri yang
mengakibatkan metabolisme bakteri terganggu sehingga bakteri lisis dan mati (Asri
D, 2014).
Berdasarkan data yang telah diuraikan, diperlukan suatu bahan alami yang dapat
digunakan sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar yang mempunyai khasiat
antibakteri yang lebih baik, biokompatibel, non toksik, harga terjangkau, dan mudah
diperoleh.
Rumusan masalah
Berapakah KHM (Kadar Hambat Minimal) dan KBM (Kadar Bunuh Minimal)
ekstrak etanol biji Alpukat (Persea americana Mill.) sebagai alternatif bahan irigasi
saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis
Universitas Sumatera Utara
Tujuan Penelitan
Untuk mengetahui KHM (Kadar Hambat Minimal) dan KBM (Kadar Bunuh
Minimal) ekstrak etanol biji Alpukat (Persea americana Mill.) sebagai alternatif
bahan irigasi saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis
Judul Penelitian
Efek antibakteri ekstrak etanol biji alpukat (Persea americana Mill.)sebagai alternatif
bahan irigasi saluran akar terhadap Porphyromoas gingivalis (secara in vitro)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Alur Penelitian
1. Alur Ekstraksi Biji Alpukat (Persea americana Mill.)
Biji alpukat (Persea americana Mill.) 2 kg dicuci dan dikeringkan di lemari
pengering
Biji alpukat (Persea americana Mill.) yang telah kering dihaluskan dan ayak
300 gram serbuk simplisia direndam dengan etanol 70% selama 15 menit
Simplisia yang telah direndam dipindahkan ke dalam perkulator dan tambahkan
etanol
Perkulator ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam
Cairan diteteskan dan ulangi sampai jernih
Ekstrak cair
Diuapkan dengan vaccum rotapavor sampai kental
Ekstrak kental berwarna kecoklatan
Disimpan dalam botol kaca tertutup, simpan di tempat sejuk
Diberi label
Universitas Sumatera Utara
2. Pembuatan Media Bakteri
Trypticase Soy Agar 20 gr + Trypticase Soy Broth 30 gr + akuades 1 L
Dipanaskan hingga mendidih
Disterilkan dengan autoklaf selama 15 menit
Disimpan dalam lemari pendingin
Jika digunakan, dipanaskan lagi hingga mendidih
Dituangkan ke dalam cawan petri (20 ml/petri)
Universitas Sumatera Utara
3. Pembuatan Suspensi Bakteri
Cell line Porphyromonas gingivalis yang telah dibiakkan pada TSA
Ambil 1-2 ose dari biakan murni bakteri lalu disuspensikan dalam larutan 0,9 NaCl
Hingga konsentrasi 108CFU/ml atau setara dengan 0,5Mc Farland Standard
Universitas Sumatera Utara
4. Pengujian Efek Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Alpukat
Ekstrak etanol biji alpukat (Persea americana Mill.) direplikasi 4x dengan
konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125% (masing-masing konsentrasi = 1 ml) +
suspensI bakteri Porphyromonas gingivalis (100 µl)
Diinkubasi dalam incubator CO2 dengan suhu 37○C selama 24 jam
Semua konsentrasi ekstrak etanol biji alpukat dibandingkan dengan kekeruhan KHM
Masing-masing kelompok konsentrasi dicampur dengan menggunakan vortex
Ambil 100 µl dan teteskan pada media pada (Trypticase Soy Agar)
Dimasukkan ke dalam inkubator CO2 dengan suhu 37○C selama 24 jam
Hitung jumlah koloni bakteri pada tiap petri KBM
Hasil
Kesimpulan
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Bakteri
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Uji StatistikEkstrak Etanol Biji Alpukat (Persea americanaMill.)
terhadapPorphyromonas gingivalis
Case Processing Summary
Cases
Valid
Konsentrasi
Missing
Total
N
Percent
N
Percent
N
Percent
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
80%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
60%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
50%
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
K(-)
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
K(+)
4
100.0%
0
.0%
4
100.0%
Statistic
Std. Error
Koloni 100%
Descriptivesa,b,c,d
Konsentrasi
Koloni
50%
Mean
95% Confidence Interval
for Mean
1.7500
Lower Bound
.9544
Upper Bound
2.5456
.25000
Universitas Sumatera Utara
5% Trimmed Mean
1.7778
Median
2.0000
Variance
.250
Std. Deviation
.50000
Minimum
1.00
Maximum
2.00
Range
1.00
Interquartile Range
K(+)
.75
Skewness
-2.000
1.014
Kurtosis
4.000
2.619
35.5000
1.32288
Mean
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound
31.2900
Upper Bound
39.7100
5% Trimmed Mean
35.5556
Median
36.0000
Variance
Std. Deviation
7.000
2.64575
Minimum
32.00
Maximum
38.00
Universitas Sumatera Utara
Range
6.00
Interquartile Range
5.00
Skewness
-.864
1.014
Kurtosis
-.286
2.619
a. Koloni is constant when Konsentrasi = 100%. It has been omitted.
b. Koloni is constant when Konsentrasi = 80%. It has been omitted.
c. Koloni is constant when Konsentrasi = 60%. It has been omitted.
d. Koloni is constant when Konsentrasi = K(-). It has been omitted.
Tests of Normalityb,c,d,e
Kolmogorov-Smirnova
Konsentrasi Statistic
Shapiro-Wilk
df
Sig.
Statistic
df
Sig.
Koloni 50%
.441
4
.
.630
4
.001
K(+)
.215
4
.
.946
4
.689
a. Lilliefors Significance Correction
b. Koloni is constant when Konsentrasi = 100%. It has been omitted.
c. Koloni is constant when Konsentrasi = 80%. It has been omitted.
d. Koloni is constant when Konsentrasi = 60%. It has been omitted.
e. Koloni is constant when Konsentrasi = K(-). It has been omitted.
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
100%
4
8.50
80%
4
8.50
60%
4
8.50
50%
4
18.50
K(-)
4
8.50
K(+)
4
22.50
Total
24
Universitas Sumatera Utara
Test Statisticsa,b
Koloni
Chi-Square
df
Asymp. Sig.
22.772
5
.000
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
100%
4
8.50
80%
4
8.50
60%
4
8.50
50%
4
18.50
K(-)
4
8.50
K(+)
4
22.50
Total
24
Universitas Sumatera Utara
Test Statisticsa,b
Koloni
Chi-Square
df
Asymp. Sig.
22.772
5
.000
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
Sum of Ranks
100%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.460
Universitas Sumatera Utara
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
4.50
18.00
80%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
18.000
Z
.000
Asymp. Sig. (2-tailed)
1.000
1.000a
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
Universitas Sumatera Utara
Koloni
100%
4
4.50
18.00
60%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
8.000
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
100%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
4.50
18.00
60%
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
80%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank
Sum of Ranks
80%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
.000
10.000
Universitas Sumatera Utara
Z
-2.460
Asymp. Sig. (2-tailed)
.014
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
2.50
10.00
50%
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
4.50
18.00
K(-)
4
4.50
18.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
8.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
18.000
.000
1.000
1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
60%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
Wilcoxon W
.000
10.000
Universitas Sumatera Utara
Z
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
-2.460
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
50%
4
6.50
26.00
K(-)
4
2.50
10.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.530
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.011
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
50%
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.366
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.018
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Universitas Sumatera Utara
NPar Tests
Descriptive Statistics
N
Mean
Std. Deviation Minimum Maximum
Koloni
24
6.2083
13.43253
.00
38.00
Konsentrasi
24
3.50
1.745
1
6
Mann-Whitney Test
Ranks
Koloni
Konsentrasi
N
Mean Rank Sum of Ranks
K(-)
4
2.50
10.00
K(+)
4
6.50
26.00
Total
8
Test Statisticsb
Koloni
Mann-Whitney U
.000
Universitas Sumatera Utara
Wilcoxon W
10.000
Z
-2.460
Asymp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.014
.029a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: Konsentrasi
Lampiran 5. Surat Hasil Identifikasi Biji Alpukat (Persea americanaMill.)
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara