Isolasi dan identifikasi saponin pada kecambah kedelai [Glycine max L.] - USD Repository

  ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SAPONIN PADA KECAMBAH KEDELAI (Glycine max L.) SKRIPSI

  Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Ilmu Farmasi Oleh:

  Yustina Sakundita Puspariani NIM : 038114014

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

  A p a k a h s u k s e s i t u ? A p a k a h s u k s e s i t u ? S S e e r r i i n n g g d d a a n n b b a a n n y y a a k k t t e e r r t t a a w w a a

M e n d a p a t k a n r a s a h o r m a t d a r i o r a n g p a n d a i d a n r a s a k a s i h d a r i o r a n g s e k i t a r

  

M e n d a p a t k a n r a s a h o r m a t d a r i o r a n g p a n d a i d a n r a s a k a s i h d a r i o r a n g s e k i t a r

M e r a i h p e n g h a r g a a n k r i t i k u s y a n g j u j u r M e r a i h p e n g h a r g a a n k r i t i k u s y a n g j u j u r M M e e n n g g h h a a r r g g a a i i k k e e i i n n d d a a h h a a n n M M e e n n e e m m u u k k a a n n s s i i f f a a t t b b a a i i k k d d a a l l a a m m d d i i r r i i o o r r a a n n g g l l a a i i n n M e m b u a t d u n i a l e b i h b a i k , d e n g a n s e p e t a k k e b u n M e m b u a t d u n i a l e b i h b a i k , d e n g a n s e p e t a k k e b u n M M e e n n g g e e t t a a h h u u i i b b a a h h w w a a s s e e s s e e o o r r a a n n g g t t e e l l a a h h h h i i d d u u p p l l e e b b i i h h m m u u d d a a h h k k a a r r e e n n a a k k e e b b e e r r a a d d a a a a n n m m u u ; ;

  I I t t u u l l a a h h a a r r t t i i s s u u k k s s e e s s . .

                        (Ralph Waldo Emerson) 

  T u g a s d i h a d a p a n k i t a t i d a k p e r n a h s e b e s a r k e k u a t a n d i b e l a k a n g k i t a T u g a s d i h a d a p a n k i t a t i d a k p e r n a h s e b e s a r k e k u a t a n d i b e l a k a n g k i t a

            (Anonim)    K K u u p p e e r r s s e e m m b b a a h h k k a a n n k k a a r r y y a a k k e e c c i i l l i i n n i i u u n n t t u u k k : : M M a a m m a a & & P P a a p p a a t t e e r r c c i i n n t t a a

  K K a a k k a a k k k k u u t t e e r r s s a a y y a a n n g g O O r r a a - - n n g g o o r r a a n n g g y y a a n n g g m m e e n n y y a a y y a a n n g g i i k k u u d a n A l m a m a t e r k u d a n A l m a m a t e r k u

  

PRAKATA

  Puji syukur penulis panjatkan pada Allah Bapa di Surga, karena atas berkat dan kekuatan yang diberikan-Nya, penulis dapat menyelesaikan tugas skripsi yang berjudul “Isolasi dan Identifikasi Saponin pada Kecambah Kedelai” sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  Dalam pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini, penulis mendapat bantuan, bimbingan, dan dorongan dari berbagai pihak, sehingga penulis berkewajiban untuk menyampaikan terimakasih kepada :

  1. Ibu Rita Suhadi, M.Si, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku dosen pembimbing yang telah memberikan bimbingan, saran, pengarahan, pengetahuan dan kesabaran dalam membimbing selama penelitian dan penulisan skripsi ini.

  3. Bapak Drs. Sulasmono, Apt., selaku dosen penguji yang telah bersedia menguji, memberikan saran dan masukan yang sangat berguna dalam penyelesaian skripsi ini.

  4. Ibu Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah bersedia menguji, memberikan saran dan masukan yang sangat berguna dalam penyelesaian skripsi ini.

  5. My beloved family, Papa dan Mama, serta Kakakku Petra Chanelia, atas cinta, kasih sayang, pengorbanan, dukungan, dan doa yang tak pernah

  6. Mas-ku, Laurentius Dian ‘Ndolith’ Krislianto atas dukungan, perhatian, serta rasa sayang. Terima kasih untuk kebaikan hatimu mengantarku mencari kedelai dan selalu siap menjadi penolongku.

  7. Sahabatku, Raya, atas dukungan dan persahabatan yang menyenangkan.

  Terima kasih juga dapat menjadi andalanku.

  8. Teman seperjuanganku, Yohana, atas kerjasama dan suka duka selama penelitian di laboratorium, juga untuk printernya. Jangan menyerah, kawan!

  9. Teman-teman d’Sindens : Moncee (terima kasih atas pengalaman- pengalaman seru di awal kuliah), Vera, Dita, Rosa, Ana, Sari, Tata, dan Angger. Dunia hiburan kelas A akan sepi tanpa kalian.

  10. Mas Wagiran, Pak Mukmin, Mas Parlan, Mas Sigit, Pak Prapto, Mas Kunto dan Mas Iswandi yang selalu membantu kemudahan penelitian di laboratorium.

  11. Teman-teman angkatan 2003, khususnya kelas A (khususnya lagi Shyu ‘Baby’, Andi ‘Papi’, dan Adi ‘Gondes’), sebagai supporting team, dan atas pelangi penuh warna selama belajar di Farmasi.

  12. Semua pihak serta teman-teman yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah banyak memberikan bantuan, dukungan, dan doanya selama ini. God bless you all! Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna. Maka dari itu, penulis dengan senang hati menerima segala saran agar dapat menjadi lebih sempurna dan berguna. Akhir kata semoga skripsi ini dapat memberi manfaat bagi pembacanya dan bagi perkembangan ilmu pengetahuan terutama di bidang kefarmasian.

  Yogyakarta, Oktober 2007 Penulis

  

INTISARI

  Kedelai (Glycine max L.) selain dikonsumsi sebagai sayuran juga dapat digunakan sebagai tanaman obat karena memiliki kandungan kimia yang cukup bermanfaat. Salah satu senyawa kimia yang terkandung dalam kedelai adalah saponin, dimana secara umum kadar saponin meningkat bila kedelai dikecambahkan. Menurut golongannya, saponin terbagi dua yakni steroid dan triterpenoid. Saponin steroid berguna untuk pengembangan hormon kelamin dan kontrasepsi oral. Sedangkan saponin triterpenoid biasa digunakan sebagai ekspektoran, antiinflamasi, larvasida, serta dapat meningkatkan ekskresi kolesterol. Penentuan tipe saponin berguna untuk pemanfaatan selanjutnya dari tanaman yang mengandung tipe saponin tersebut. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui tipe saponin yang terdapat dalam kecambah kedelai serta karakteristik saponin tersebut secara Kromatografi Lapis Tipis dan spektroskopi UV.

  Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian non-eksperimental dengan cara analisis deskriptif komparatif. Uji saponin dilakukan dengan uji busa, reaksi Liebermann-Burchard, dan reaksi Salkowski. Selanjutnya saponin dihidrolisis. Isolasi dilakukan dengan KLT preparatif. KLT dan spektroskopi UV digunakan untuk karakterisasi, dan uji kemurnian menggunakan KLT multi-eluen. Sebagai pembanding digunakan Succus Liquiritae.

  Berdasarkan hasil penelitian, kecambah kedelai mengandung saponin triterpenoid. Isolasi menggunakan KLT preparatif menghasilkan isolat murni berwarna biru-ungu hasil reaksi dengan penampak bercak anisaldehid-asam sulfat. Hasil spektroskopi UV menunjukkan puncak tunggal isolat saponin kecambah kedelai dengan serapan maksimum pada panjang gelombang 280,6 nm.

  Kata kunci : saponin, triterpenoid, kecambah, Glycine max L., isolasi, identifikasi, KLT, KLTP, spektroskopi UV

  

ABSTRACT

  Soybean (Glycine max L.) can be used as medicinal plants, in other side as vegetable because of its benefit constituents. One of the chemical substance in soybean is saponin, when commonly the saponin amount promotes up in the sprout-shape. Saponin are divided into two types, they are steroid and triterpenoid. Steroid saponins are useful for development of sex hormones and oral contraceptions. Meanwhile the triterpenoid saponins generally used for expectorant, antiinflamation, larvacides, and also can increase excretion of cholesterol. Knowing the type of saponin is very helpful for the next preparation of the plants that include the type of the saponin. The purposes of this research are to knowing the type of saponin of soybean sprouts and their characterization based on Thin Layer Chromatography and UV spectroscopy.

  This was a non-experimental research using comparative descriptive analysis. Saponin was tested with foam test, Liebermann-Burchard reaction, and Salkowski reaction. Next, saponin was hydrolysed. The isolation was done through preparative TLC method. Characterization was use TLC and UV spectroscopy, and for purity test used multi-eluen TLC. Succus Liquiritae is used as standard.

  Based on the research, indicate that soybean sprout contains triterpenoid saponins. Isolation result using TLC preparative give blue-violet pure isolate by reaction with anisaldehide-sulphuric acid. The result of UV spectroscopy showed only one peak with maximum absorbance on wave length about 280.6 nm.

  Key words : saponin, triterpenoid, sprout, Glycine max L., isolation, identification, TLC, PTLC, UV spectroscopy

  DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL............................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................... ii

  HALAMAN PENGESAHAN

  ..................................................................... iii

  HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ iv

PRAKATA......................................................................................................... v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ viii

  INTISARI . ........................................................................................................ ix

ABSTRACT......................................................................................................... x

DAFTAR ISI...................................................................................................... xi

DAFTAR TABEL.............................................................................................. xiv

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................... xvii

  .................................................................................. 1

  BAB I . PENGANTAR A. Latar Belakang .................................................................................... 1

  1. Permasalahan ......................................................................... 3 2. ................................................................ 3

  Keaslian penelitian

  3. Manfaat penelitian ................................................................. 4

  B. ................................................................................ 4

  Tujuan Penelitian

  BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .......................................................... 5 A. Kedelai ................................................................................................. 5

  1. ................................................................. 5

  Keterangan botani

  3. Deskripsi ................................................................................. 5 4.

  BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................... 25 A. Jenis dan Rancangan Penelitian

  5. Hidrolisis saponin kecambah kedelai dan Succus Liquiritae............................................................

  4. Uji saponin ............................................................................. 27

  3. Pemeriksaan organoleptik dan makroskopik ..................... 27

  .............. 27

  Pengumpulan bahan dan proses perkecambahan

  1. Identifikasi tanaman .............................................................. 26 2.

  D. Jalan Penelitian ................................................................................... 26

  C. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................. 26

  B. Definisi Operasional .......................................................................... 25

  ....................................................... 25

  ........................................................................... 24

  Khasiat dan kegunaan

  21 H. Keterangan Empiris

  

F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP) ................................. 19

G. Spektroskopi Ultra Violet (UV) .......................................................

  ...................................................... 16

  Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

  D. Kecambah ............................................................................................ 13 E.

  ............................................................................................... 9

  Saponin.

  B. Penyarian ............................................................................................. 6 C.

  5. Kandungan kimia .................................................................. 6

  ........................................................... 6

  28 6. Ekstraksi saponin kecambah kedelai dan

  7. Pemeriksaan pendahuluan saponin dengan KLT……….

  E. Hidrolisis Saponin Kecambah Kedelai dan Succus Liquiritae ..... 38 F.

  DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 59 LAMPIRAN ..................................................................................................... 62 BIOGRAFI PENULIS

  B. Saran .................................................................................................... 58

  A. Kesimpulan ......................................................................................... 58

  ...................................................... 58

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN

  I. Uji Kemurnian dengan KLT multi-eluen ........................................ 47 J. Spektroskopi Ultra Violet (UV) ....................................................... 54

  H. Isolasi Saponin dengan KLTP .......................................................... 44

  G. Pemeriksaan Pendahuluan Saponin dengan KLT .......................... 41

  ...... 40

  Ekstraksi Saponin Kecambah Kedelai dan Succus Liquiritae

  ......................................................................................... 35

  29 8.

  Uji Saponin

  C. Pemeriksaan Organoleptik dan Makroskopik ................................. 34 D.

  B. Pengumpulan Bahan dan Proses Perkecambahan .......................... 33

  .......................................................................... 33

  BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 33 A. Identifikasi tanaman.

  .................................................................... 31

  Tata Cara Analisis Hasil

  10. Spektroskopi Ultra Violet (UV) .......................................... 31 E.

  9. Uji kemurnian dengan KLT multi-eluen……………….. 30

  .............................................. 29

  Isolasi saponin dengan KLTP

  .................................................................................... 72

  DAFTAR TABEL Tabel I . Hasil pemeriksaan organoleptik dan makroskopik terhadap kecambah kedelai ........................................................................ 34

  ...................................

  43 Tabel II . Hasil kromatogram KLT Pendahuluan

  Tabel III . Hasil kromatogram uji kemurnian dengan KLT multi-eluen

  48

  DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Kerangka steroid ................................................................

  10 Gambar 2. Kerangka triterpenoid, α-amirin, β-amirin, dan lupeol ...... 12

  Gambar 3. Bagan spektrofotometer UV berkas ganda ………………….. 21 Gambar 4. Tingkat energi elektron molekul.......................................... 24 Gambar 5. Mekanisme terbentuknya buih ...........................................

  35 Gambar 6. Reaksi Liebermann-Burchard……………………………..

  37 Gambar 7. Reaksi Salkowski ...............................................................

  38 Gambar 8. Kerangka asam glisiretinat .................................................

  40 Gambar 9. Mekanisme hidrolisis Succus Liquiritae dalam suasana asam ...........................................................

  40 Gambar 10. Hasil kromatogram KLT Pendahuluan………………… ..

  42 Gambar 11. Hasil uji kemurnian isolat tahap pertama dengan fase gerak n-butanol:etanol:air (7:2:5 v/v)..........................

  46 Gambar 12. Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak kloroform : metanol (95 : 5 v/v)………

  49 Gambar 13. Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak kloroform:metanol:air (64:50:10 v/v) ..

  50 Gambar 14. Hasil kromatogram KLT multi-eluen dengan fase gerak n-butanol:etanol:air (7:2:5 v/v) ............

  51 Gambar 15. Reaksi antara saponin triterpenoid

  Gambar 16. Gugus kromofor asam glisiretinat………………………… 55 Gambar 17. Spektra saponin kecambah kedelai (sampel) ...................

  56 Gambar 18. Spektra saponin Succus Liquiritae (pembanding)............

  56

  DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1 . Surat keterangan determinasi...........................................

  62 Lampiran 2. Sertifikat analisis Succus Liquiritae…………………….. 64 Lampiran 3 . Foto tanaman kedelai.......................................................

  65 Lampiran 4 . Foto biji kedelai dan kecambah kedelai ..........................

  66 Lampiran 5 . Foto uji saponin dengan uji buih .....................................

  67 Lampiran 6 . Foto uji saponin dengan reagen Liebermann-Burchard ..

  68 Lampiran 7 . Foto reaksi Salkowski......................................................

  69 Lampiran 8 . Foto alat hidrolisa ............................................................

  70 Lampiran 9 . Foto alat menyaring isolat ...............................................

  71

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Gaya hidup back to nature kian diminati sebagai bagian dari kesadaran

  untuk hidup sehat. Masyarakat memanfaatkan berbagai macam tanaman untuk kelangsungan hidupnya. Dalam hal ini, bukan saja tanaman pangan tetapi juga tanaman obat yang mengandung metabolit sekunder yang cukup bermanfaat dalam pengobatan. Tanaman obat merupakan tanaman yang dapat digunakan dalam pengobatan baik sebagai pemeliharaan kesehatan maupun untuk penyembuhan penyakit. Salah satu jenis tanaman obat adalah kedelai (Glycine

  

max L.), walaupun selama ini masyarakat lebih mengenal kedelai sebagai sayuran

dan bahan pangan, bukan sebagai tanaman obat.

  Kedelai termasuk dalam jajaran bahan makanan yang ditargetkan sebagai sumber protein nabati untuk memerangi PMN (protein malnutrition) oleh WHO dan FAO. Kecambah kedelai adalah salah satu bentuk penggunaan kedelai, dimana biasa digunakan saat masih mentah maupun dimasak sebagai sayur.

  Hanya saja, lebih dianjurkan mengkonsumsi kecambah kedelai dalam keadaan mentah, misalnya dijadikan lalapan atau diminum sebagai jus, karena zat-zat bermanfaat yang dikandungnya masih utuh. Jika harus dimasak sebagai sayur, sebaiknya kecambah dimasukkan sesaat sebelum masakan matang. Selain dikonsumsi sebagai sayuran, ternyata kedelai juga dapat digunakan untuk pengobatan pada beberapa penyakit, seperti diabetes mellitus, reumatik, sakit

  Kedelai diperkirakan memiliki kandungan kimia berupa protein, lemak, karbohidrat, mineral (Na, K, Fe), vitamin A, vitamin B, saponin, isoflavonoid, lesitin, glisinin peptida, dan fito-estrogen (Dora, 2005).

  Berdasarkan hal tersebut, kedelai memiliki dua fungsi yaitu selain dikonsumsi sebagai sayuran ternyata dapat juga digunakan sebagai tanaman obat karena memiliki kandungan kimia yang cukup bermanfaat. Jika tanaman obat tersebut dapat dimakan sebagai sayuran sekaligus dapat mengobati penyakit seperti yang telah disebutkan diatas, tentu masyarakat akan merasa lebih diuntungkan.

  Dalam setiap bagian tanaman pasti terdapat metabolit sekunder. Salah satu senyawa kimia yang termasuk dalam golongan metabolit sekunder yang terkandung di dalam kedelai adalah saponin. Menurut golongannya, saponin dapat dibedakan menjadi dua macam tipe yaitu tipe steroid dan triterpenoid (Evans, 2002). Penentuan tipe dari saponin ini berguna untuk pemanfaatan selanjutnya dari tanaman yang mengandung tipe saponin tersebut. Saponin steroid berguna untuk mendapatkan prekursor obat jenis kortison serta pengembangan hormon kelamin dan kontrasepsi oral (Evans, 2002). Sedangkan saponin triterpenoid biasa digunakan sebagai ekspektoran (obat batuk), antiinflamasi, larvasida serta dapat menurunkan kadar kolesterol. Menurut penelitian, pada anak ayam yang diberi 0,9% saponin triterpenoid dapat menurunkan konsumsi pakan, menurunkan berat badan, serta meningkatkan ekskresi kolesterol (Anonim, 2006).

  Sebuah penelitian menyatakan bahwa ketika biji-bijian dikecambahkan, dalam kecambah mampu menurunkan kadar lemak LDL (Low Density

  

Lipoprotein) dalam tubuh, tanpa mengganggu lemak HDL (High Density

Lipoprotein). LDL bersifat atherogenik (dapat memicu atherosklerosis atau

  pengerasan pembuluh darah akibat penimbunan lemak) sehingga disebut ’lemak jahat’, sedangkan HDL bersifat anti atherogenik, karena fungsinya mengangkut kolesterol kembali ke hati untuk dikatabolisme sehingga mengurangi simpanan kolesterol. Kadar lemak LDL normal yakni < 130 mg/dl, sedang kadar HDL yang baik adalah > 40 mg/dl (Soeharto, 2000).

  Untuk lebih mendalami dan mengetahui tipe saponin yang terkandung di dalam kedelai, maka dilakukan penelitian mengenai isolasi dan identifikasi saponin pada kecambah kedelai (Glycine max L.) serta karakterisasi saponin tersebut secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan spektrofotometri ultra violet (UV).

  1. Permasalahan

  Berdasarkan latar belakang yang dikemukakan di atas, timbul permasalahan untuk diteliti, yaitu : 1. tipe saponin apakah yang terkandung dalam kecambah kedelai? 2. bagaimana ciri karakteristik saponin kecambah kedelai secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan spektroskopi ultra violet (UV)?

  2. Keaslian Penelitian

  Penelitian tentang isolasi dan identifikasi saponin pada kecambah kedelai pernah dilakukan adalah isolasi dan identifikasi aglikon saponin pada buah lerak (Sapindus rarak D.C.) oleh Yanuarsih (2001), isolasi dan identifikasi glikosida saponin pada herba krokot (Portulaca oleracea L.) oleh Kristianti (2007).

3. Manfaat Penelitian

  Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberi sumbangan baru bagi perkembangan ilmu kefarmasian, kedokteran, maupun kesehatan pada umumnya.

  Hal tersebut dapat berupa manfaat teoritis dan manfaat praktis.

  a. Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat dalam pengembangan ilmu kefarmasian khususnya tentang tipe saponin kecambah kedelai.

  b. Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan dapat melengkapi informasi mengenai kecambah kedelai berdasarkan aktivitas farmakologi golongan saponin yang terkandung dalam kecambah kedelai.

B. Tujuan Penelitian

  1. Tujuan Umum

  Penelitian ini secara umum bertujuan untuk lebih mendalami pengetahuan tentang kecambah kedelai.

  2. Tujuan Khusus

  Penelitian ini secara khusus bertujuan untuk mengetahui tipe saponin kecambah kedelai dan karakteristik saponin kecambah kedelai secara

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Kedelai

  1. Keterangan botani

  Kedelai mempunyai nama ilmiah Glycine max L. dan termasuk dalam suku Leguminosae. Tanaman ini memiliki sinonim yakni, Glycine soja L. dan Soja max Piper (Syamsuhidayat dan Hutapea, 1991 ; Thomas, 1992).

  2. Nama Daerah

  Di beberapa wilayah Indonesia, kedelai dikenal dengan berbagai nama, antara lain : dele, dangsul, dekeman (Jawa), kacang bulu, kacang rimang (Minangkabau), retak mejong (Lampung), kadhele (Madura), kacang jepun (Sunda) (Thomas,1992).

  3. Deskripsi

  Tumbuhan kedelai mempunyai habitus berupa semak, semusim, tinggi 20- 60 cm. Batang bersegi, berkayu, berambut, bercabang, hijau keputih-putihan.

  Berdaun majemuk, menyirip ganjil, bulat telur, ujung tumpul, tepi rata, pangkal membulat, panjang 2-5 cm, lebar 2-4 cm, pertulangan menyirip, hijau. Bunganya majemuk, bentuk tandan, kelopak 5-7 mm, berambut, bertaju sempit, runcing, ungu. Buah berupa polong, bertangkai pendek, pipih, masih muda hijau setelah tua kuning kecoklatan. Biji berbentuk bulat telur, kuning keputih-putihan. Berakar tunggang, putih kekuningan (Syamsuhidayat dan Hutapea, 1991).

  4. Khasiat kegunaan

  Biji kedelai berkhasiat untuk mencegah kanker, menurunkan tekanan darah tinggi, mencegah dan menurunkan kelebihan kolesterol dalam tubuh, antioksidan, dan mencegah osteoporosis (Dora, 2005).

  5. Kandungan kimia

  Kedelai mengandung protein, lemak, karbohidrat, mineral (Na, K, Fe), vitamin A, vitamin B, saponin, isoflavonoid, lesitin, glisinin peptida, dan fito- estrogen (Dora, 2005).

B. Penyarian 1. Cairan Pelarut

  Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik (optimal) untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau yang aktif, dengan demikian senyawa tersebut dapat terpisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa yang diinginkan. Dalam hal ekstrak total, maka cairan pelarut dipilih untuk melarutkan hampir semua metabolit sekunder yang terkandung (Anonim, 2000).

  Faktor utama untuk pertimbangan pada pemilihan cairan penyari adalah : (1) selektivitas (2) kemudahan bekerja dan proses dengan cairan tersebut (3) ekonomis (4) ramah lingkungan

2. Metode ekstraksi dan pemisahan

  Dalam analisis fitokimia digunakan jaringan tumbuhan yang masih segar (Anonim, 1986). Untuk mendapatkan suatu zat dari bahan tanaman perlu dilakukan penyarian. Metode ekstraksi menggunakan pelarut dapat dibedakan menjadi dua cara yaitu cara dingin dan cara panas.

  (1) cara dingin

  a. maserasi maserasi adalah proses pengekstraksian simplisia menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang terus- menerus. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya.

  b. perkolasi perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Prinsip perkolasi dengan cara serbuk simplisia ditempatkan dalam bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan (Anonim, 1986 ; Anonim, 2000).

  (2) cara panas

  a. refluks refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarutnya terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

  b. soxhlet soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

  c. digesti digesti adalah maserasi kinetik pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40- 50 °C.

  d. infus infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air pada suhu 90 C selama 15 menit (Anonim, 1986).

  e. dekok dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama ( ≥ 30 menit) dan temperatur sampai titik didih air (Anonim, 2000).

  C.

  

Saponin

  Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang dapat membentuk buih jika dikocok dalam air. Saponin juga mempunyai sifat hemolisis, dan jika diinjeksikan langsung ke dalam aliran darah akan sangat toksik, namun akan tidak berbahaya jika digunakan melalui mulut, karena itu saponin biasa dipakai untuk bahan tambahan dalam minuman non-alkohol/beverages (Evans, 2002). Saponin merupakan racun kuat untuk ikan dan amfibi, kemungkinan karena mempunyai sifat mengiritasi mucosa. Saponin dapat membentuk kompleks dengan asam empedu dan kolesterol (Nio, 1990). Pada pangan nabati, saponin memberikan rasa pahit. Saponin larut dalam etanol dan air tetapi tidak larut dalam eter (Robinson, 1991).

  Saponin relatif merupakan senyawa yang stabil, tetapi lama-lama mungkin diubah sebagian ke dalam zat yang tidak aktif. Sarsaparilla yang disimpan selama 50 tahun tetap mempunyai aktivitas penuh seperti aktivitas permulaannya (Evans, 2002).

  Saponin mempunyai berat molekul yang tinggi, dan isolasinya yang membutuhkan kemurnian, cukup sulit. Sebagai glikosida, saponin terhidrolisis oleh asam, memberikan aglikon (sapogenin) triterpenoid atau steroid, bermacam gula (glukosa, galaktosa, pentosa, atau metil pentosa) dan asam uronat (Evans, 2002).

  Berdasarkan struktur sapogenin, dikenal dua macam saponin, yaitu steroid (biasanya tetrasiklik triterpenoid) dan tipe pentasiklik triterpenoid. Keduanya mempunyai ikatan glikosida pada C-3 dan mempunyai asal-usul biogenesis melalui jalur asam mevalonat dan unit isoprenoid (Evans, 2002).

1. Saponin steroid

  Saponin steroid lebih sedikit terdistribusi di alam dibandingkan tipe triterpenoid. Survey fitokimia menunjukkan bahwa saponin steroid terdapat dalam banyak tumbuhan monokotil, terutama Dioscoreaceae, Amaryllidaceae, dan Liliaceae. Pada dikotil terdapatnya diosgenin pada Leguminosae dan alkaloid steroida pada Solanum secara potensial sangat penting. Beberapa spesies Strophantus dan Digitalis mengandung saponin steroida disamping glikosida jantung (Evans, 2002). _{21 O 23 26 25}

₁₈

₂₀

  22 _{24 11 12}

₁₃

_{17 15} E _O D ₁₉ C R _{1 2 R 1 10 9 8}

¹⁴

¹⁶ ₂ A _{3 H 4 5} B _{6 7} OH H Gambar 1 : Kerangka steroid

  Saponin steroid mempunyai pengaruh yang penting dikarenakan adanya hubungan dengan beberapa bahan seperti hormon seks, kortison, steroid diuretik, vitamin D, dan glikosida jantung. Beberapa saponin steroid digunakan sebagai senyawa awal untuk sintesis bahan-bahan tersebut (Evans, 2002). Saponin steroid yang penting adalah diosgenin yang terdapat pada akar Dioscorea (yam) dan secara komersial dipergunakan untuk sintesis steroid yang penting bagi pengobatan medis (Mann, 1994). Solasodin (dari Solanum sp.) dan diosgenin biasa digunakan untuk obat kontrasepsi (Yuliani, 2001).

2. Saponin triterpenoid

  Saponin triterpenoid jarang terdapat pada tumbuhan monokotil. Mereka banyak terdapat pada tumbuhan dikotil. Saponin triterpenoid sering dimanfaatkan sebagai ekspektoran karena dapat merangsang keluarnya sekret dari bronkial. Menurut beberapa penelitian, saponin triterpenoid mempunyai aktivitas antiinflamasi, larvasida, serta dapat meningkatkan eksekresi kolesterol (Anonim, 2006).

  Menurut Harborne (1987), banyak triterpenoid dikenal dalam tumbuhan dan secara berkala senyawa baru ditemukan dan dicirikan. Sampai saat ini hanya beberapa saja yang diketahui tersebar luas. Senyawa tersebut adalah triterpena pentasiklik

  α-amirin dan β-amirin serta asam turunannya, yaitu asam ursolat dan asam oleanolat. Senyawa ini dan senyawa sekerabatnya terutama terdapat dalam lapisan malam daun dan dalam buah, seperti apel dan per, dan mungkin mereka berfungsi sebagai pelindung untuk menolak serangga dan serangan mikroba (Harborne, 1987).

  Saponin triterpenoida dapat dibedakan ke dalam tiga golongan yang diwakili oleh α-amirin, β-amirin, dan lupeol.

  29 _{19 20 2 1 30 11}

₁₂

_{13 1 7 1 8} E _{2 2 28} COOH C _{1 25 9 26 14} D _{15 16 2 1 0 8} R ₁ A ²⁷ _{3 4 5} B _{6 7} OH _{23 24} H R _{2 H C 3 C H 3 H C C H 3} (1) _{3 H C C H 2 3} 2 0 1 9

  E 1 3 1 7 _{C H C H 3} D C H _{3 3 C H C H} 1 4 _{3 3 C H 3}

  (2) (3) (4) Gambar 2 : Kerangka triterpenoid (1),

  α-amirin (2), β-amirin (3), dan Lupeol (4) Adanya saponin dalam tanaman juga dapat ditunjukkan dengan beberapa cara antara lain: a . indeks buih (foam index) indeks buih menunjukkan angka pengenceran dari zat atau obat yang diperiksa yang akan memberikan suatu lapisan buih yang tingginya 1 cm sampai 10 cm, bila larutan digojok dalam gelas ukur selama 15 detik dan selanjutnya dibiarkan dulu selama 10 menit sebelum dilakukan pembacaan (Anonim, 1995a).

  b. haemolisa campur bahan yang akan diperiksa dengan larutan dapar fosfat pH 7,4 ,

  Diamkan selama 30 menit, terjadi haemolisa total berarti menunjukkan adanya saponin (Anonim, 1995a).

  c. reaksi warna reaksi warna dapat digunakan untuk menggolongkan saponin (sapogenin) yang digunakan untuk membuktikan identitas dari suatu obat, dan jika perlu untuk memonitor pada waktu pemisahan. Tidak ada reaksi warna yang secara spesifik untuk tiap jenis saponin. Reaksi berikut ini dapat digunakan yaitu: 1) dengan menggunakan asam asetat anhidrat dan asam sulfat (disebut reaksi

  Liebermannn-Burchard). Hasilnya ditunjukkan dengan adanya perubahan warna yang bergantung dari aglikonnya yaitu, merah muda sampai merah berarti termasuk golongan triterpenoid. Sedangkan jika warnanya biru hijau maka menunjukkan adanya senyawa golongan steroid (Bruneton,1999).

  2) dengan menggunakan vanillin, anisaldehid, dan aldehid aromatik lainnya yang ditambah dengan asam mineral kuat. Senyawa yang mengandung saponin akan berwarna kuat, yang kemungkinan hasil reaksi antara aldehid dan aglikon (Bruneton,1999).

  Uji saponin di atas juga ditunjang dengan cara kromatografi lapis tipis (KLT) atau pengukuran spektrum (Harborne, 1987).

D. Kecambah

  Kecambah merupakan tumbuhan kecil yang baru tumbuh dari biji dan masih hidup dari persediaan makanan yang terdapat dalam biji (Tjitrosoepomo,

  2003). Perkecambahan biji ditandai dengan pecahnya kulit biji dan munculnya calon tanaman baru.

  Proses perkecambahan benih merupakan suatu rangkaian kompleks dari perubahan-perubahan morfologi, fisiologi, dan biokimia. Tahap-tahap perkecambahan meliputi :

  1. tahap pertama dari perkecambahan benih dimulai dengan proses penyerapan air oleh benih, melunaknya kulit benih dan hidrasi dari protoplasma. 2. tahap kedua dimulai dengan kegiatan-kegiatan sel dan enzim-enzim serta naiknya tingkat respirasi benih.

  3. tahap ketiga merupakan tahap dimana terjadi penguraian bahan-bahan seperti karbohidrat, lemak dan protein menjdi bentuk-bentuk yang melarut dan ditranslokasikan ke titik-titik tumbuh. 4. tahap keempat adalah asimilasi dari bahan-bahan yang telah diuraikan tadi di daerah meristematik untuk menghasilkan energi bagi kegiatan pembentukan komponen dan petumbuhan sel-sel baru. 5. tahap kelima adalah pertumbuhan dari kecambah melalui proses pembelahan, pembesaran dan pembagian sel-sel pada titik-titik tumbuh. Sementara daun belum dapat berfungsi sebagai organ fotosintesa maka pertumbuhan kecambah sangat tergantung pada persediaan makanan yang ada dalam biji (Sutopo, 1985). Kecambah memperlihatkan bagian-bagian seperti lembaga, karena memang kecambah berasal dari lembaga. Lembaga adalah calon tumbuhan baru, yang nantinya akan tumbuh menjadi tumbuhan baru, setelah biji memperoleh syarat- syarat yang diperlukan. Lembaga memperlihatkan ketiga bagian utama tubuh tumbuhan, yaitu:

  a. akar lembaga atau calon akar (radicula / hipokotil)

  b. daun lembaga atau calon daun (cotyledon)

  c. batang lembaga (cauliculus) Batang lembaga beserta calon-calon daun merupakan bagian lembaga yang dinamakan pucuk lembaga / plumula (Sutopo, 1985 ; Tjitrosoepomo, 2003).

  Syarat biji dapat berkecambah bila biji berada dalam keadaaan yang memenuhi syarat perkecambahan, meliputi kadar air, suhu, cahaya, dan oksigen (Tjitrosoepomo, 2003). Suhu optimal untuk perkecambahan antara 10-30°C. Oksigen diperlukan untuk respirasi yang merupakan reaksi pembongkaran atau pemecahan cadangan makanan. Sedang cahaya diperlukan selama berlangsungnya perkecambahan. Namun demikian biji dapat berkecambah dengan baik dengan atau tanpa cahaya.

  Faktor-faktor yang mempengaruhi perkecambahan benih :

  a. faktor dalam, antara lain : tingkat kemasakan benih, ukuran benih, dormansi.

  b. faktor luar, antara lain : air, temperatur, oksigen, cahaya, dan medium. Kandungan zat gizi pada biji sebelum dikecambahkan berada dalam bentuk Peningkatan zat-zat gizi pada kecambah mulai tampak sekitar 24-48 jam saat perkecambahan (Rukmana, 1997).

  Pada saat perkecambahan, terjadi hidrolisis karbohidrat, protein, dan lemak menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana sehingga mudah dicerna, selain itu juga terjadi peningkatan jumlah protein, sedangkan kadar lemaknya mengalami penurunan. Ketika biji-bijian dikecambahkan, secara umum kadar saponinnya meningkat 450%, bahkan meningkatkan jumlah vitamin A sebanyak 300 % (Wahyuni, 2006). Menurut Arisandi dan Andriani (2006), kandungan gizi yang terdapat pada 100 g biji kedelai yakni protein (34,9 g), kalori (331 kal), lemak (18,1 g), hidrat arang (34,8 g), kalsium (227 mg), saponin (200 mg), fosfor (585 mg), vitamin A (110 SI), dan vitamin B1 (1,07 mg).

  E.

  

Kromatografi Lapis Tipis

  KLT merupakan metode pemisahan komponen-komponen atas dasar perbedaan adsorbsi atau partisi oleh fase diam di bawah pergerakan pelarut pengembang atau pelarut pengembang campur. Pemilihan pelarut pengembangan atau pelarut pengembangan campur sangat dipengaruhi oleh macam dan polaritas zat-zat kimia yang dipisahkan (Mulja dan Suharman, 1995).

  Menurut Gritter, Bobbitt, dan Schwarting (1991), pada hakikatnya KLT melibatkan dua peubah: sifat fase diam, dan sifat fase gerak atau campuran pelarut pengembang. Fase diam dapat berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penjerap atau berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair. Hampir segala macam serbuk dapat dipakai sebagai penjerap pada KLT, tetapi yang paling umum dipakai adalah sebagai berikut : a. silika gel (asam silikat) silika gel merupakan penjerap yang paling banyak dipakai dalam KLT. Sebagian besar silika gel bersifat sedikit asam, maka asam sering agak mudah dipisahkan, jadi meminimumkan reaksi asam-basa antara penjerap dan senyawa yang dipisahkan.

  b. alumina berbeda dengan silika gel, alumina bersifat sedikit basa dan sering dipakai untuk pemisahan basa. Cara ini juga meminimumkan reaksi asam-basa.

  c. kiselgur dan selulosa kiselgur dan selulosa merupakan bahan penyangga lapisan zat cair yang dipakai dalam sistem kromatografi cair-cair. Kromatografi jenis ini selalu dipakai untuk pemisahan senyawa polar seperti asam amino, karbohidrat, nukleotida, dan berbagai senyawa hidrofil alam lainnya.

  Lapisan penjerap sering mengandung indikator fluoresensi yang ditambahkan untuk membantu penampakan bercak tidak berwarna pada lapisan yang telah dikembangkan. Indikator fluoresensi adalah senyawa yang memancarkan sinar tampak jika disinari dengan sinar berpanjang gelombang lain, biasanya sinar ultraviolet. Dan biasanya penjerap yang dicampur dengan indikator fluoresensi diberi tanda F, misalnya silica gel GF. Jika senyawa pada bercak yang ditampakkan mengandung ikatan rangkap terkonjugasi atau cincin aromatis, maka tidak ada cahaya yang dipancarkan. Dengan demikian hasilnya ialah bercak gelap dengan latar belakang yang bersinar. Cara ini sangat peka dan tidak merusak senyawa yang ditampakkan. Indikator fluoresensi yang paling sering digunakan adalah sulfida anorganik, yang dapat memancarkan cahaya jika disinari pada 254 nm (Gritter, 1985).

  Menurut Mulja dan Suharman (1995), pada sistem KLT dikenal istilah kecepatan rambat suatu senyawa dan diberi simbol R

  f. Harga R f ini ditentukan

  oleh jarak rambat senyawa dari titik awal dan jarak rambat pelarut dari titik awal, ditulis dengan rumus : Rf =

  Angka Rf berkisar antara 0,00 – 1,00 dan hanya dapat ditentukan dengan dua desimal. HRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 (h), menghasilkan nilai berkisar antara 0 – 100 (Harborne, 1987 ; Stahl, 1973).

  Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan bercak dalam KLT yang juga mempengaruhi harga Rf adalah struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan, sifat dari penjerap dan derajat aktifitasnya, tebal dan kerataan dari lapisan penjerap, derajat kemurnian fase gerak, derajat kejenuhan uap dalam bejana pengembangan, jumlah cuplikan yang digunakan, suhu, kesetimbangan antara atmosfer dalam bejana jenuh dengan uap pelarut (Sastrohamidjojo, 2002).

  Densitometri adalah metode analisis instrumental yang berdasarkan interaksi radiasi elektromagnetik dengan analit yang merupakan noda pada KLT.

  Interaksi radiasi elektromagnetik dengan noda pada KLT yang ditentukan adalah radiasi semula. Densitometri lebih dititikberatkan untuk analisis kuantitatif analit- analit dengan kadar sangat kecil yang perlu dilakukan pemisahan terlebih dahulu dengan KLT. Prinsip analisis kuantitatif dengan metode densitometri hampir sama dengan metode spektrofotometri penentuan kadar analit yang dikorelasikan dengan area noda pada KLT akan lebih terjamin kesahihannya dibanding metode KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) atau KGC (Kromatografi Gas Cair), sebab area noda kromatogram diukur pada posisi diam (Mulja dan Suharman, 1995).

  F.

  

KLT Preparatif

  KLT preparatif adalah salah satu metode yang paling mudah dan murah yang digunakan untuk isolasi komponen suatu senyawa. Tetapi membutuhkan kerja yang lebih intensif dan tiap-tiap fraksi yang diperoleh hanya dalam jumlah kecil. Sebenarnya prinsip dasar KLTP sama dengan KLT pada umumnya. Tetapi ada perbedaan yang paling mendasar yaitu tentang ukuran ketebalan penjerap dan metode penotolannya. Pada KLTP, cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan berupa garis lurus mendatar pada salah satu sisi pelat lapisan besar dan dikembangkan secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga campuran akan terpisah menjadi beberapa pita. Pita akan nampak dengan cara yang tidak merusak jika senyawa itu berwarna. Setelah itu penjerap yang mengandung pita dikerok dari pelat kaca. Kemudian cuplikan dielusi dari penjerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna untuk memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni (Gritter, 1991).

  Berbagai penelitian telah dilakukan untuk memeriksa pengaruh ketebalan penjerap terhadap kualitas pemisahan tetapi ketebalan yang paling sering dipakai adalah 0,5 – 2 mm. Ukuran pelat kromatografi biasanya 20 x 20 cm atau 20 x40 cm. Pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran pelat sudah tentu mengurangi jumlah bahan yang dipisahkan dengan KLTP. Penjerap yang paling umum ialah silika gel dan dipakai untuk pemisahan campuran senyawa lipofil maupun campuran senyawa hidrofil.

  Keefisienan pemisahan dapat ditingkatkan dengan cara pengembangan berulang. Jika pemisahan secara KLTP telah dicapai, pelat dikeringkan dan kemudian dimasukkan lagi ke dalam bejana. Bergantung pada Rf pita, proses ini dapat diulang beberapa kali, walaupun ada kerugian waktu.

  Kebanyakan penjerap KLTP mengandung indikator fluoresensi yang membantu kedudukan pita yang terpisah sepanjang senyawa yang dipisahkan menyerap sinar UV. Untuk senyawa yang tidak menyerap sinar UV, ada beberapa pilihan: a) menyemprot dengan air,

  b) menutup pelat dengan sepotong kaca menyemprot salah satu sisi dengan pereaksi semprot, c) menambahkan senyawa pembanding (Hostettmann, 1995).