SKRIPSI EFEK PERENDAMAN EKSTRAK Spirulina platensis SEBAGAI IMUNOSTIMULAN TERHADAP JUMLAH LEUKOSIT DAN HITUNG JENIS LEUKOSIT IKAN GURAME (Osphronemus goramy) YANG DIINFEKSI BAKTERI Aeromonas hydrophila

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK Spirulina platensis SEBAGAI IMUNOSTIMULAN
TERHADAP JUMLAH LEUKOSIT DAN HITUNG JENIS LEUKOSIT
IKAN GURAME (Osphronemus goramy) YANG DIINFEKSI
BAKTERI Aeromonas hydrophila

Oleh :
LITTA LASYA EMANINTA SITEPU
NIM 061211133106

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA
2016

i
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

HALAMAN PENGESAHAN
.

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK Spirulina platensis SEBAGAI
IMUNOSTIMULAN TERHADAP JUMLAH LEUKOSIT DAN HITUNG JENIS
LEUKOSIT IKAN GURAME (Osphronemus goramy) YANG DIINFEKSI
BAKTERI Aeromonas hydrophila

Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Kedokteran Hewan
pada
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

Oleh
LITTA LASYA EMANINTA SITEPU
NIM 061211133106
Menyetujui
Komisi Pembimbing,

(Arimbi, drh., M. Kes)
Pembimbing Utama

(Dr. Budi Utomo, drh., M.Si.)
Pembimbing Serta
ii

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi yang berjudul :

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK Spirulina platensis SEBAGAI
IMUNOSTIMULAN TERHADAP JUMLAH LEUKOSIT DAN HITUNG
JENIS LEUKOSIT IKAN GURAME (Osphronemus goramy) YANG
DIINFEKSI BAKTERI Aeromonas hydrophila
Tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan
di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat
karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali
yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Surabaya, 6 Juni 2016

LITTA LASYA EMANINTA SITEPU
NIM 061211133106

iii
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

Telah dinilai pada Seminar Hasil Penelitian
Tanggal : 20 Juli 2016

KOMOSI PENILAI SEMINAR HASIL PENELITIAN
Ketua

: Setya Budhy, drh., M.Si

Sekretaris

: Emy Koestanti Sabdoningrum, drh., M.Kes.

Anggota

: Suryanie Sarudji, drh., M.Kes.

Pembimbing Utama : Arimbi, drh., M.Kes.
Pembimbing Serta

: Dr. Budi Utomo, drh., M.Si

iv
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

Telah diuji pada
Tanggal : 02 Agustus 2016

KOMISI PENGUJI SKRIPSI
Ketua

: Setya Budhy, drh., M.Si

Anggota

: Emy Koestanti Sabdoningrum, drh., M.Kes
Suryanie Sarudji, drh., M.Kes
Arimbi, drh., M.Kes
Dr. Budi Utomo, drh., M.Si

Surabaya,
Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga
Dekan,

Prof. Dr. Pudji Srianto, drh., M.Kes
NIP. 195601051986011001

v
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DIPPING EFFECT OF Spirulina platensis EXTRACT AS
IMUNOSTIMULANT TO THE AMOUNT OF LEUCOCYTES AND TYPE
COUNT OF LEUCOCYTE GURAME FISH (Osphronemus goramy)
INFECTED WITH Aeromonas hydrophila
LITTA LASYA EMANINTA SITEPU
ABSTRACT

The Purpose of this research was to find out the potency of the extract of
Spirulina platensis as immunostimulant on the amount of leucocyte and numbered
kind of leucocyte of gurame fish that infected by Aeromonas hydrophila bacteria.
Twenty gurame fish wis weight of 20 grams and length of 9 – 10 cm randomly

divided into 5 groups. P0(-) as negative control was not submerged by the extract
of Spirulina platensis and was out infected of Aeromonas hydrophila bacteria.
P0(+) as positive control was not submerged in extract of Spirulina platensis but
infected by aeromonas hydrophila 106 cell/ml. The first submersion was done on
the first day for three hours, and the second submersion was done on 7th day for
three hours, and then after 24 hours infected by Aeromonas hydrophila 106cell/ml.
The blood of fish were taken on 4th day after infected, to examine the blood using
calculation room and blood smear. Data would be analyzed by using analysis of
variant (ANOVA). If there were any significant different between the treatment,
analysis continued by using computer software SPSS 18 for windows. The result
of the research showed that the extract of Spiruliana platensis could increase the
amount of leucocyte, neutrophil, and monocyte of gurame fish.
Keywords: Spirulian platensis, Aeromonas hydrophila, amount and leucocyte
appearance, fish blood.

vi
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

UCAPAN TERIMA KASIH
Puji syukur Kepada Tuhan Yesus Kristus karna Anugrahnya saya dapat
melaksanakan

penelitian

PERENDAMAN

(Osphronemus

menyelesaikan

TERHADAP

JUMLAH
gouramy)

EFEK

SEBAGAI

LEUKOSIT

PADA

DIINFEKSI

mengenai

platensis

JUMLAH

LEUKOSIT
YANG

skripsi

Spirulina

EKSTRAK

IMUNOSTIMULAN
GAMBARAN

dan

DAN

IKAN

GURAME

BAKTERI

Aeromonas

hydrophila.
Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada semua pihak yang telah
membantu secara langsung maupun tidak langsung dalam penyusunan skripsi ini,
antara lain:
Kepada Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Prof.
Dr. Pudji Srianto, drh., M.Kes. atas kesempatan mengikuti pendidikan di Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Ibu Arimbi, drh., M.Kes selaku dosen pembimbing utama dan Dr. Budi
Utomo, drh., M. Si selaku dosen pembimbing serta atas segala arahan, informasi,
bimbingan, dan kesabarannya sampai dengan selesainya penelitian ini.
Setya

Budhi, drh., M.Si

selaku ketua penilai,

Emy Koestanti

Sabdoningrum, drh., M.Kes selaku sekretaris penilai dan Suryanie Sarudji, drh.,
M.Kes selaku anggota penilai atas segala saran dan arahan yang telah diberikan
kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
Prof. Lazuardi selaku dosen wali yang telah memberikan bimbingan
selama menempuh kegiatan perkuliahan dan membantu memberikan masukan

vii
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

yang bermanfaat bagi penulis selama menempuh S1 di Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Airlangga.
Seluruh Bapak Ibu Dosen atau Staf Pengajar yang telah banyak memberi
ilmu dan pengalaman selama menempuh kegiatan perkuliahan di Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Seluruh Bapak Ibu Staf Kependidikan, Bagian Kemahasiswaan, Bagian
Akademik, Bagian Keuangan, Bagian Tata Usaha, dan Bagian Sistem Informasi
yang telah banyak membantu selama penulis menempuh pendidikan di Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Kepada Kedua orangtua: Ita Sry Ulina Kembaren, Alm. Jhonson Sitepu,
Nenek Karo Sinuhaji, kedua adik : Jeremy dan Jericho, dan Bg Hiskia atas
limpahan doa dan pengorbanan yang tak henti-hentinya, kasih sayang, ketulusan
cinta, kepercayaan, semangat serta kebahagiaan selama hidup penulis.
Staf laboratorium Patologi Klinik Bapak Endis dan Mas Rizky serta Ibu
Siti dan Bapak Jum dari Laboratorium Patologi Anatomi di Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Airlangga dan Bapak Yusuf yang selalu membantu saya dalam
pengambilan darah Ikan gurame.
Teman-teman seperjuangan penelitian saya, Cika, Husna, Iga, Husna dan
Lita yang senantiasa bekerja sama, menemani dalam suka maupun duka selama
penelitian berlangsung sehingga menjadi lebih dekat satu sama lain. Rista, Sofia,
Dina, Citra, teman- teman permata yang menyemangati dikala saya selalu tidak
semangat dan membuat hari-hari kuliah menjadi lebih indah dan teman-teman
angkatan 2012 “Bersatu kita Bisa Semangat Pantang Menyerah Phoenix”, kepada

viii
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

angkatan 2010, 2011, 2013, 2014, dan 2015 yang tidak bisa disebutkan satu
persatu yang telah memberikan dukungan dan motivasinya.
Penulis menyadari bahwa masih terdapat kesalahan dan kekurangan pada
skripsi ini, untuk itu mohon kritik dan saran yang membangun demi perbaikan di
masa mendatang. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis khususnya
semua pihak yang membutuhkan.

Surabaya, 06 Juni 2016

Penulis

ix
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .................................................................................................. i
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN.................................................................................. iii
HALAMAN IDENTITAS ........................................................................................ iv
ABSTRACT ............................................................................................................. vi
UCAPAN TERIMA KASIH ................................................................................... vii
DAFTAR ISI ............................................................................................................. x
DAFTAR TABEL ................................................................................................... xii
DAFTAR GAMBAR.............................................................................................. xiii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xiv
SINGKATAN DAN ARTI LAMBANG................................................................. xv
BAB 1 PENDAHULUAN ......................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ........................................................................................ 1
1.2Rumusan Masalah .................................................................................... 3
1.3 Landasan Teori ........................................................................................ 4
1.4 Tujuan Penelitian .................................................................................... 5
1.5 Manfaat Hasil Penelitian ......................................................................... 5
1.6 Hipotesis ................................................................................................. 6
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................ 7
2.1 Ikan Gurame ............................................................................................ 7
2.1.1 Klasifikasi .................................................................................. 7
2.1.2 Habitat Ikan gurame................................................................... 8
2.2 Spirulina platensis ................................................................................... 8
2.2.1 Klasifikasi .................................................................................. 8
2.2.2 Kandungan Nutrisi Spirulina platensis ...................................... 9
2.2.3 Sistem Imun Ikan ..................................................................... 10
2.3 Aeromonas hydrophila .......................................................................... 11
2.3.1 Karaterisktik Aeromonas hydrophila ....................................... 13
2.3.2 Patogenesis dan Gejala Klinis ................................................. 14
2.4 Komponen Darah Ikan .......................................................................... 15
2.4.1 Leukosit Ikan ........................................................................... 15
2.4.1.1 Granulosit..................................................................... 15
2.4.1.2 Agranulosit................................................................... 17
2.4.2 Tinjaun Nilai Normal Gambaran Darah Ikan .......................... 19
BAB 3 MATERI DAN METODE PENELITIAN .................................................. 20
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................... 20
3.2 Waktu Penelitian ................................................................................... 20
3.3 Rancangan Penelitian ............................................................................ 20
3.4 Materi Penelitian ................................................................................... 20
3.4.1 Hewan Coba ............................................................................. 20
3.4.2 Bahan Penelitian ...................................................................... 21
3.4.3 Alat Penelitian.......................................................................... 21
3.5 Metode Penelitian ................................................................................. 21
x
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

3.5.1 Penentuan Dosis Spirulina platensis ............................................ 22
3.5.2 Penentuan Jumlah Sampel ........................................................... 22
3.5.3 Perlakuan Penelitian ................................................................ 22
3.6 Pengambilan Darah untuk Pemeriksaan Jumlah Leukosit dan Hitung
Jenis Sel Leukosit ................................................................................ 23
3.6.1 Punksi Pembuluh Darah Bagian Caudal ...................................... 23
3.6.2 Pemeriksaan Jumlah Leukosit dan Hitung Jenis Sel Leukosit ..... 24
3.6.2.1 Pemeriksaan Jumlah Sel Leukosit ............................... 24
3.6.2.2 Menghitung Jumlah Sel Leukosit ................................ 24
3.6.2.3 Pemeriksaan Hitung Jenis Sel Leukosit ....................... 25
3.7 Variabel Penelitian ................................................................................ 25
3.8 Rancangan Penelitian dan Analisis Data .............................................. 26
3.9 Diagram Alur Penelitian ....................................................................... 27
BAB 4 HASIL PENELITIAN ................................................................................. 28
4.1 Pengamatan Gejala Klinis ..................................................................... 28
4.2 Gambaran Jumlah Leukosit .................................................................. 28
4.3 Hitung Jenis Leukosit............................................................................ 31
BAB 5 PEMBAHASAN ......................................................................................... 33
5.1 Gambaran Pengamatan Gejala Klinis ................................................... 33
5.2 Gambaran Jumlah Leukosit .................................................................. 34
5.3 Gambaran Hitung Jenis Leukosit .......................................................... 35
5.3.1 Neutrofil ....................................................................................... 35
5.3.2 Eosinofil ....................................................................................... 36
5.3.3 Basofil .......................................................................................... 36
5.3.4 Limfosit ........................................................................................ 36
5.3.5 Monosit ........................................................................................ 37
BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................. 39
6.1 Kesimpulan ........................................................................................... 39
6.2 Saran ..................................................................................................... 39
RINGKASAN.......................................................................................................... 40
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 42
LAMPIRAN ............................................................................................................ 48

xi
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DAFTAR TABEL

Tabel

Halaman

2.1 Nilai normal gambaran darah ikan air tawar secara umum
4.1 Rata-rata dan Simpangan Baku Jumlah Leukosit ...............................................28
4.2 Rata-rata dan Simpangan Baku Jenis Leukosit ...................................................30

xii
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DAFTAR GAMBAR

Gambar

Halaman

2.1 Ikan Gurame ......................................................................................................... 7
2.2 Spirulina platensis................................................................................................ 9
2.3 Aeromonas hydrophila .........................................................................................12
2.4 Ikan Gurame yang terserang bakteri Aeromonas hydrophila ..............................14
2.5 Sel Leukosit Silurus glanis L ...............................................................................17
3.1 Diagram Alir Penelitian .......................................................................................26
4.1 Data gambar Ikan Gurame terserang bakteri Aeromonas hydrophila ..................27
4.2 Hasil Pemeriksaan Jumlah Leukosit Ikan Gurame ..............................................28
4.3 Pemeriksaan jumlah leukosit ...............................................................................29
4.4 Hasil Pemeriksaan Jenis Leukosit Ikan Gurame ..................................................31
4.5 Pemeriksaan Darah Ikan Gurame.........................................................................31

xiii
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran

Halaman

1. Perhitungan Dosis ekstrak Spirulina platensis..................................................... 48
2. Metode Pengambilan Darah Ikan Gurame ........................................................... 49
3. Pemeriksaan Jumlah Sel Leukosit ........................................................................ 50
4. Pemeriksaan Hitung Jenis Sel Leukosit ............................................................... 51
5. Data Jumlah Leukosit Ikan Gurame..................................................................... 52
6. Data Jenis Leukosit Ikan Gurame ........................................................................ 53
7

Data Jenis Leukosit Dalam Bentuk Absolut ........................................................ 54

8. Laporan hasil uji bakteri Aeromonas hydrophila ................................................. 55
9. Analisa Statistik Jumlah Leukosit ......................................................................... 56
10. Analisa Statistik Jenis Leukosit ........................................................................... 57
11 Gambar Peralatan dan Bahan Penelitian ............................................................... 62

xiv
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SINGKATAN DAN ARTI LAMBANG

ANOVA

: Analysis of Variant

CFU

: Colony Forming Unit

et al

: et alli, et alia

GLA

: Gamma Linolenic Acid

ID100

: Dosis Infeksi

LPS

: Lipopolisakarida

MAS

: Motile Aeromonas Septicemia

MCA

: Mac Conkey Agar

NK

: Natural Killer

pH

: Derajat Keasaman

TSA

: Tripticase Soya Agar

RAL

: Rancangan Acak Lengkap

SPSS

: Statistical Program of Social Science

WBCs

: White Blood Cells

HE

: Hematoxylin Eosin

ml

: Mililiter

n

: Ulangan

t

: Perlakuan

S

: Signifikan

TS

: Tidak Signifikan

LPS

: Lipopolisakarida

TPC

: Total Plate Count

MGG

: May-Grunwald Giemsa

xv
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang
Ikan gurame (Osphronemus gouramy L.) merupakan ikan air tawar yang
memiliki nilai gizi tinggi dan ekonomi penting serta banyak digemari oleh
masyarakat Indonesia. Ikan gurame banyak terdapat di Jawa Barat, Jawa Tengah,
Sumatra Barat, dan Sulawesi Utara. Saat ini ikan gurame adalah salah satu dari
lima belas jenis komoditas ikan untuk peningkatan produksi dan pendapatan
petani. Ikan gurame tidak memerlukan air mengalir sebagai tempat hidupnya
(Tarwiyah, 2001). Ikan gurame termasuk dari dua belas jenis komoditas untuk
pemenuhan gizi masyarakat (Rukmana, 2005).
Budidaya ikan gurame mudah diusahakan dan hasilnya dapat mencapai 8
ton per hekter (Taufik, 2010). Salah satu kendala yang dihadapi dalam budidaya
intensif adalah penyakit dengan menimbulkan kerugian ekonomi bagi para
pembudidayaan ikan. Salah satu jenis penyakit yang sering dijumpai pada
organisme budidaya adalah penyakit bakterial yang disebabkan oleh bakteri
Aeromonas hydrophila, termasuk bakteri patogen sebagai penyebab penyakit
“Motil Aeromonas Septicemia” (MAS), Bakteri Aeromonas hydrophila sebagai
penyebab penyakit MAS sangat berpengaruh dalam budidaya ikan air tawar dan
sering menimbulkan wabah penyakit dengan tingkat kematian tinggi (80-100%)
dan dalam waktu yg relatif singkat, yakni 1 – 2 minggu (Triyaningsih dkk 2014).
Gejala terinfeksinya bakteri Aeromonas hydrophila adalah luka di bagian
tubuh dan mengeluarkan darah, perut membesar, lendir mencair, sisik
mengelupas, dan timbul luka pada tubuh ikan. Bakteri ini dapat mengakibatkan

1
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

2

kondisi ikan menjadi lemah dalam waktu singkat. Ikan sering muncul ke
permukaan, lalu mati. Serangan penyakit ini perlu di waspadai sebab tak jarang
menimbulkan kematian masal (Sutanto, 2011).
Gambaran darah adalah salah satu indikator dari adanya infeksi (Nuryati
dkk, 2006). Dalam bidang perikanan analisa hematologi bisa diterapkan sebagai
early detection system untuk mencegah terjadinya kematian masal dalam
pembudidayaan ikan (Noercholis, 2013). Manfaat permeriksaan darah antara lain
untuk membantu mendiagnosis suatu penyakit, mengetahui jalan nya suatu
penyakit, menentukan prognosa, mengetahui efek suatu pengobatan, meneliti
sistem imun dan untuk mengetahui status kesehatan hewan (Harvey, 2012).
Upaya pencegahan penyakit Aeromonas pada ikan telah dilakukan oleh
Ravi et al., (2010) dengan menggunakan Spirulina platensis yang merupakan
bahan alami dan aman. Spirulina platensis adalah mikroalga hijau kebiruan, sel
berkoloni dan membentuk filamen terpilih yang menyerupai spiral. Alga ini
mengandung berbagai zat gizi seperti protein dapat mencapai 72 %, lipid 8%,
karbohidrat 16%, vitamin B1, B2, B6, B12, C, niasin, β karotin dan kandungan
asam

amino

yang

seimbang.

Spirulina

platensis

juga

mengandung

lipopolisakarida sebesar 1,5% bobot keringnya, kandungan lipopolisakarida inilah
yang menjadikan Spirulina platensis digunakan sebagai immunostimulan yang
potensial dalam meningkatkan respon kekebalan tubuh pada ikan. (Pelizer et al.,
2002).
Komponen utama dinding sel S. platensis sama dengan dinding sel bakteri
gram negatif yang mengandung peptidoglikan dan lipopolisakarida (Sze 1993).
Lipopolisakarida terdiri atas lipid A, polisakarida O (antigen) dan inti

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

3

polisakarida. Lipid A bertanggung jawab terhadap keracunan primer dan bersifat
toksik, sedangkan polisakarida O dan inti polisakarida merupakan antigen
permukaan yang dapat menginduksi kekebalan spesifik dan non spesifik (Jawetz
et al. 1982).
Dari penelitian yang dilakukan oleh Tayag et al., (2010) diketahui bahwa
kandungan senyawa dari ekstrak air panas Spirulina platensis yaitu polisakarida,
dimana polisakarida dapat merangsang kekebalan tubuh pada ikan dan udang.
Selain itu, ekstrak Spirulina plantensis yang diaplikasikan melalui metode injeksi
dan perendaman menunjukkan peningkatan resistensi terhadap bakteri.
Sampai saat ini belum ada informasi tentang pemanfaatan perendaman
ekstrak Spirulina platensis terhadap ikan gurame yang diinfeksi bakteri
Aeromonas hydophila. Hal ini mendorong peneliti untuk melakukan penelitian
tentang efek perendaman ekstrak spirulina plantensis terhadap jumlah leukosit
ikan gurame (Osphronemus goramy Lac.) yang diinfeksi Aeromonas hydrophila
Hasilnya diharapkan dapat memberikan informasi kepada dunia perikanan.

1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas, maka dapat
dirumuskan permasalahan yaitu apakah perendaman ekstrak Spirulina platensis
sebagai imunostimulan dapat meningkatkan jumlah leukosit dan hitung jenis
leukosit ikan gurame yang diinfeksi bakteri Aeromonas hydrophila ?

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

4

1.3 Landasan Teori
Aeromonas hydrophila menyebabkan penyakit pada ikan yang dikenal
sebagai Motile Aeromonas hydrophila (MAS). Kemampuan bakteri menyebar
melalui peredaran darah atau septikemia menyebabkan kerusakan di berbagai
organ tubuh ikan. Kerusakan tersebut antara lain: ulcer pada organ kulit,
kerusakan mata, lesi pada sirip dan insang, pengelupasan sisik dan hemoragik
septikemia. Penyakit yang disebabkan oleh bakteri ini terutama mempengaruhi
ikan air tawar (Kumar and Ramalu, 2013).
Adanya gangguan kesehatan akibat infeksi ataupun perubahan status
fisiologi hewan sering dapat diketahui melalui perubahan yang terjadi pada
komponen darahnya (Meyer and Harvey, 1998). Reaksi imunitas ditunjukkan
dengan adanya kelainan jumlah leukosit dan dapat diketahui melalui pemeriksaan
jumlah total leukosit dan distribusi masing-masing jenis leukosit (differential
counting) yang merupakan bagian dari pemeriksaan fisik rutin pada hewan sakit.
Melalui kedua pemeriksaan tersebut dapat diperoleh gambaran mengenai
kepekaan hewan, pemberian terapi yang tepat dan prognosa dari penyakit (Bijanti
dkk, 2010).
Pemeriksaan jumlah leukosit dan jenis leukosit yang terdiri dari neutrofil,
eosinofil, basofil, monosit, dan limfosit menjadi parameter yang penting untuk
dilakukan karena leukosit berperan penting dalam sistem kekebalan tubuh dan
berhubungan dengan proses infeksi bakteri. Pada infeksi bakteri terjadi perubahan
yaitu berupa peningkatan jumlah leukosit dalam darah (Chairlan, 2011).
Pemberian Spirulina plantensis pada ikan menyebabkan meningkatkan
aktivitas fagositosis dan meningkatkan presentase kelangsungan hidup ikan

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

5

terhadap resiko Aeromonas hydrophila (Ragap et al., 2002). Spirulina platensis
adalah mikroalga hijau-biru. Spirulina platensis mengandung beberapa Vitamin,
seperti vitamin B, vitamin E, vitamin K, phenolic acids, tocopherols, g-linolenic
acid, asam folat; pigmen, seperti b-carotenes, chlorophyll a dan phycocyanin; dan
mineral, teruama zat besi. Spirulina mempunyai fungsi sebagai antioksidan,
antiviral, imunomodulator, meningkatkan hemoglobin, leukosit dan trombosit
serta mampu menstimuasi stem sel di sumsum tulang (Simanjuntak et al., 2004).
Menurut Grzanna et al., (2006) menyatakan bahwa Spirulina platensis
mempunyai efek imunostimulator. Simanjuntak et al., (2004) menunjukkan
bahwa pemberian Spirulina platensis dalam pakan ikan dapat meningkatkan
jumlah eretrosit, total leukosit, dan kadar hemoglobin ikan nilem.

1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh ekstrak Spirulina
platensis sebagai imunostimulan terhadap jumlah leukosit dan hitung jenis
leukosit ikan gurame yang diinfeksi Aeromonas hydophila.

1.5 Manfaat Hasil Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan dapat dikembangkan dan diaplikasikan
pada dunia perikanan sebagai alternatif pencegahan maupun pengobatan
Aeromonas.

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

6

1.6 Hipotesis
Perendaman ekstrak Spirulina platensis sebagai imunostimulan dapat
meningkatkan jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit ikan gurame yang diinfeki
bakteri Aeromonas hydrophila.

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Ikan Gurame
2.1.1 Klasifikasi
Menurut Ardianto (2012). Ikan gurame dapat diklasifikasikan sebagai
berikut :
Kingdom

: Animalia

Filum

: Chordata

Subfilum

: Vertebrata

Kelas

: Pisces

Sub Kelas

: Teleostei

Ordo

: Perciformes

Sub ordo

: Belontiidae

Famili

: Osphronemidae

Genus

: Osphronemus

Spesies

: Osphronemus gourami

Gambar 2.1. Osphronemus gouramy (Pingstone, 2005).

7
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

8

Ikan gurame termasuk golongan ikan Labyrinthici, yaitu ikan yang
memiliki alat pernafasan tambahan yaitu berupa selaput tambahan berbentuk
tonjolan pada tepi atau lapisan insang pertama yang biasa disebut labyrinth.
Gurame mempunyai bentuk badan agak panjang, pipih, dan tertutup sisik yang
berukuran besar serta terlihat kasar dan kuat (Romero, 2002).
2.1.2

Habitat Ikan gurame
Habitat ikan gurame merupakan air tawar sampai sedikit payau, berair

jernih dan dasar kolam yang kurang lumpurnya. Lokasi pemeliharaan yang cocok
ialah pada kebuntingan 50- 400m di atas permukaan laut, dengan suhu 24-28oC,
sekurang-kurangnya 75 cm. Ikan ini sangat baik di pelihara, walaupun
pertumbuhannya lambat. Untuk pertumbuhan pH-nya berkisar antara 7-8 (Dinas
Perikanan 1997 dalam Sutrisno 2011).
2.2 Spirulina platensis
2.2.1 Klasifikasi
Klasifikasi Spirulina menurut Bold & Wyne (1978) dalam Pamungkas
(2005) adalah sebagai berikut :

SKRIPSI

Kingdom

: Protista

Divisi

: Cyanophyta

Kelas

: Cyanophyceae

Ordo

: Nostocales

Famili

: Oscilatoriaceae

Genus

: Spirulina

Spesies

: Spirulina platensis

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

9

Gambar 2.2 Spirulina sp.
(Sumber: R. Locci dalam Cifferi, 1983 dan Henrickson, 1989)
Spirulina sp. merupakan mikroalga yang menyebar secara luas, dapat
ditemukan di berbagai tipe lingkungan, baik di perairan payau, laut dan tawar
(Ciferri, 1983). Ciri-ciri morfologinya yaitu filament yang tesusun di trikoma
multiseluler berbentuk spiral yang bergabung menjadi satu, tidak seimbang, tidak
bercabang, autrotof, dan berwarna biru kehijauan (Gambar 2.2).
2.2.2

Kandungan Nutrisi Spirulina platensis
Analisis kimia Spirulina sp. dimulai pada tahun 1970 yang menunjukkan

Spirulina sp. sebagai sumber yang sangat kaya protein, vitamin, dan mineral.
Kandungan protein pada Spirulina sp. berkisar antara 60%-70% dari berat kering,
mengandung provitamin A tinggi, sumber β-karoten yang kaya vitamin B12 dan
digunakan dalam pengobatan anemia, kandungan lipid sekitar 4-7%, serta
karbohidrat sekitar 13,6% (Carrieri et al., 2010). Spirulina sp. juga mengandung
kalium, protein dengan kandungan Gomma Linolenic Acid (GLA) yang tinggi
(Tokusoglu dan Uunal, 2006). Spirulina juga kaya akan vitamin diantaranya
vitamin B1, B2, B3, B6, B9, B12, vitamin C, vitamin D dan vitamin E (Tokusglu
and Unal, 2003; Babadzhanov, 2004).

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

10

Komposisi pigmen pada Spirulina sp. merupakan komposisi pigmen yang
kompleks dan umum ditemukan pada alga biru hijau. Kompisisi tersebut
diantaranya

adalah

klorofil-

a,

xanthophyll,

fikosianin

dan

zeaxanthin

(Christwardana dan Hadiyanto, 2012). Spirulina mengandung fikosianin tinggi
sehingga warna cenderung hijau biru (Kebede and Ahlgren, 1996 dalam
Christwardana et al., 2009). Penilitian yang dilakukan Woro dkk., (2014)
menjelaskan bahwa pemberian fikosianin spirulina dapat meningkatkan leukosit,
aktivitas fagositosis dan pertumbuhan pada ikan kerapu bebek juvenil. Abdel et
al., (2008) juga pernah melaporkan bahwa penambahan spirulina pada pakan
meningkatkan jumlah total eritrosit dan leukosit ikan tilapia (Oreochromis
niloticus).
El-Sabagh et al., (2014) dalam penelitiannya melaporkan bahwa
Spirulina platensis dapat meningkatkan konsentrasi Hb dan sel darah putih pada
domba. Peningkatan produksi sel darah putih dikarenakan adanya phycocyanin
dan polisakarida yang terkandung dalam spirulina (Zhang, 1994 dalam El-Sabagh
et al., 2014).
2.2.3

Sistem Imun Ikan
Menurut Rombout et. al. (2005), sistem kekebalan tubuh ikan secara

fisiologis mirip dengan vertebrata yang lebih tinggi, meskipun ada perbedaan
tertentu. Berbeda dengan vertebrata yang lebih tinggi, ikan merupakan organisme
hidup bebas dari tahap embrionik awal kehidupan yang bergantung pada sistem
kekebalan tubuh bawaan mereka untuk bertahan hidup.
Menurut Magnadottir (2006), kekebalan non spesifik adalah mekanisme
pertahanan mendasar pada ikan. Selain itu, memainkan peran kunci dalam respon

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

11

kekebalan yang diperoleh dan homeostasis melalui sistem protein reseptor.
Protein

reseptor

mengidentifikasi

pola-pola

molekuler

yang

khas

dari

mikroorganisme patogen termasuk polisakarida, lipopolisakarida (LPS), DNA
bakteri peptidoglikan, RNA virus, dan molekul lain yang tidak normal pada
permukaan organisme multi seluler. Tanggapan ini dibagi menjadi hambatan fisik
dan respon kekebalan seluler dan humoral. Parameter immunological terdiri dari
inhibitor pertumbuhan, enzim litik, jalur komplemen klasik, alternatif dan jalur
lektin, aglutinin dan precipitin (opsonin dan lektin primer), antibodi, sitokin,
kemokin, dan peptida antibakteri. Berbagai faktor internal dan eksternal dapat
mempengaruhi parameter respon kekebalan bawaan. Perubahan suhu, manajemen
stres, dan kepadatan memiliki efek penekanan pada jenis respon, sedangkan
beberapa aditif makanan dan imunostimulan dapat meningkatkan efisiensi
mereka. Peningkatan sel eritrosit sangat berhubungan dengan pengangkutan
oksigen keseluruh tubuh dan peningkatan leukosit sangat berhubungan dengan
sistem kekebalan tubuh ikan. Leukosit berperan penting dalam imunitas nonspesifik atau jumlahnya di jadikan sebagai indikator kerentanan terhadap penyakit
(Matanovic et al., 2007).
2.3 Aeromonas hydrophila
Aeromonas hydrophila merupakan bakteri yang banyak ditemukan di
lingkungan air tawar, terutama pada lingkungan yang kaya bahan organic. Suhu
optimal untuk pertumbuhan Aeromonas hydrophila adalah 20-37C. Penelitian
pada udang kurang karang yang hamper mati menunjukkan bahwa luas nekrotik

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

12

inti ditemukan pada jaringan termasuk insang, jantung, hepatopankreas dan sistem
peredaran darah (Pathol et al., 2009)
Kelompok Bakteri dari genus Aeromonas merupakan bakteri yang dapat
ditemukan di daerah perairan tawar, Gram Negatif dan berbentuk batang
(Gardenia dkk., 2010). (Gambar 2.3) Morfologi batang pendek dengan ukuran
bervariasi antara leber 0,8 sampai 1,0 mikron dengan panjang 1,0 sampai 3,5
mikron, tidak memiliki spora, bakteri bersifat motil karena mempunyai flagella
monotrichous. (Herupradoto dan Yuliani, 2010).
Pertumbuhan optimal terjadi setelah 24 jam pada suhu 28oC pada media
TSA (Tripticase Soya Agar). Pada pewarnaan gram menunjukkan warna merah,
tidak menunjukkan reaksi positif pada pewarnaan Ziel dan Nelsen dan Giemsa.
Tumbuh pada blood agar pada suhu 37oC selama 18 jam menunjukkan zona beta
hemolysis 4 mm, tidak berwarna hingga keabu-abuan. Media MCA suhu 37oC
selama 24 jam menunjukkan koloni berwarna pink ( Akkoc et al., 2008).
Uji biokimia isolat Aeromonas hydrophila pada media Sulfide Indol
Motility (SIM) menunjukkan bakteri motil yang ditandai kekeruhan, indol positif
dengan adanya cincin merah, dan menghasilkan H2S positif, pada media Simon
Citrat Agar (SCA) bereaksi positif ditandai warna biru pada media dan urase
positif ditandai warna merah muda (Yogananth et al., 2009).

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

13

Gambar 2.3 Aeromonas hydrophila dengan Pewarnaan Gram dan perbesaran
1000x (Park, 2011)

2.3.1

Karaterisktik Aeromonas hydrophila
Salah satu bakteri yang umum dijumpai pada ekosistem perairan dan

mempunyai peranan sebagai microbial flora bagi organisme air pada kondisi
lingkungan yang stabil yaitu bakteri Aeromonas hydrophila. Dimana bakteri
tersebut bersifat patogen pada ikan air tawar seperti ikan nila pada kondisi kualitas
air yang buruk. Selain itu bakteri Aeromonas hydrophila memiliki kemampuan
osmoregulasi yang tinggi dimana mampu bertahan hidup pada perairan tawar,
perairan payau dan laut yang memiliki kadar garam tinggi dengan penyebaran
melalui air, kotoran burung, saluran pencernaan hewan darat dan hewan amfibi
serta reptil (Mangunwardoyo et al., 2010).
Aeromonas hydrophila menginfeksi semua jenis ikan air tawar Infeksi
biasanya berkaitan dengan kondisi stres kepadatan, malnutrisi, infeksi parasit,
kualitas air yang buruk dan flutuasi suhu air yang ekstrim. Serangan bersifat akut.

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

14

Jika kualitas lingkungan air terus menurun, kematian yang ditimbulkan bisa
mencapai 100% (Bachtiar 2010).
Aeromonas hydrophila

menyebabkan penyakit

Motile Aeromonas

Septicemia (MAS) atau penyakit bercak merah. Bakteri ini menyerang berbagai
jenis ikan air tawar seperti lele dumbo (Clarius gariepinus), ikan mas (Cyprinus
carpio), gurame (Osphronemus gouramy) dan udang galah (Macrobrachium
rosenbergii). Pengendalian bakteri ini sulit karena memiliki banyak strain dan
selalu ada di air serta dapat menjadi resisten terhadap obat-obatan (Kamiso dan
Triyanto 1993).
2.3.2

Patogenesis dan Gejala Klinis
Proses invasi bakteri patogen ke dalam tubuh di awali dengan melekatnya

bakteri pada permukaan kulit. Flagella yang dimiliki oleh bakteri digunakan untuk
bergerak, sedangkan pili digunakan untuk melekat kuat pada lapisan terluar tubuh
ikan yaitu sisik yang dilindungi oleh zat khitin. Jika organisme melekat pada
reseptor spesifik akan membentuk koloni, meluas membentuk toksin yang
membantu dalam proses penetrasi sehingga timbul penyakit. (Lee et al., 2000).
Menurut Lubis, et al., (2014), ikan yang terserang bakteri Aeromonas
hydrophila memiliki gejala klinis berupa luka, warna tubuh pucat, geripis pada
sirip-siripnya dan bergerak lambat. Selain itu, ciri-ciri ikan yang terserang bakteri
ini biasanya warna tubuh gelap, mata rusak, bernafas di atas permukaan air,
insang rusak berwarna merah keputihan, sehingga kesulitan bernafas. Serangan
bakteri ini pada kulit menyebabkan kulit menjadi kesat, timbul pendarahan yang
selanjutnya diikuti dengan hemoragi, perut kembung serta terjadi pendarahan pada

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

15

hati, ginjal dan limfa saat dilakukan pembedahan. seperti yang terlihat pada
gambar 2.4

Gambar 2.4. Terdapat bentukan-bentukan lesi dan terdapat pendarahan
pada kulit ikan gurame (Osphronemus goramy Lec.) yan terserang bakteri
Aeromonas hydrophila (Tanjung dkk., 2011).

2.4 Komponen Darah Ikan
2.4.1 Leukosit Ikan
Ikan mempunyai sel darah putih (leukosit) yang cukup banyak antara
137.000/mm3 – 798.000/mm3. Leukosit ikan dibagi menjadi 2 bagian besar yaitu
Granulosit dan Agranulosit (Bijanti, 2005).
2.4.1.1 Granulosit
Pada ikan granulosit terbentuk secara embrionik yang dikenal dengan
nama granuloblast yang terdapat di ginjal. Granulosit terbagi atas 3 tipe yaitu
neutrofil, eosinofi, dan basofil. Fungsi utama granulosit adalah respon
perlindunungan tubuh yang non-spesifik melalui proses fagositosis maupun
respon sitotoksik. Granulosit bersifat responsive terhadap benda asing yang masuk
ke dalam tubuh, tetapi tidak memiliki kemampuan untuk mengenakan antigen
yang spesifik. Sel darah putih/granulosit yang berfungsi sebagai fagositosis adalah
eosinophil dan neutrofil (Bijanti, 2005).

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

16

a. Neutrofil
Neutrofil merupakan fagositas kuat. Fagositosis neutrofil dilakukan
dengan cara mendekati partikel asing/bakteri dan mengeluarkan pseudopodi ke
segala arah sekitar partikel, satu neutrofil dapat memfagosit 5-20 bakteri sebelum
neutrofil tersebut menjadi tidak aktif (Bijanti, 2005).
Neutrofil ikan berbentuk bulat sampai oval dengan eksentrik. Homogen.
Nukleus neutrofil yang matang mempunyai bermacam bentuk, butir kromatinnya
memadat dan pewarnaannya lebih basofilik. Neutrofil beberapa jenis ikan seperti
ikan Mas, mempunyai granulosit dengan granula sitoplasma yang lebih asidofilik,
sitoplasma tidak berwarna dan inti eksentrik dan selnya lebih digolongkan sebagai
heterofil. Diameter berukuran kurang lebih 10 µm (Bijanti dkk., 2010).
b. Eosinofil dan Basofil
Eosinofil pada hapusan jarang dijumpai pada ulasan darah ikan. Eosinofil
hanya dijumpai pada beberapa spesies ikan misalnya ikan Mas. Eosinofil dijumpai
sebagai granulosit yang berukuran sedang sampai besar dengan granula
eosinofilik. Nukleus bervariasi mulai dari yang bulat sampai segmented dan
letaknya eksentrik. Eosinofil ikan Mas berukuran kurang lebih 7,5 µm.
peningkatan jumlah eosinophil pada ikan akan mengindikasikan adanya respon
inflamasi yang dikaitkan dengan infeksi parasit atau stimulasi antigenik (Bijanti
dkk., 2010).
Basofil dikenali sebagai sel yang berbentuk bulat dengan granula
sitoplasma yang basofilik. Nukleusnya besar, ekstrensik dan bulat. Butir kromatin
intinya lebih Homogen. Basofil ikan Mas berukuran 10-20 µm (Bijanti dkk.,
2010).

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

17

2.4.1.2 Agranulosit
Kelompok leukosit agranulosit terdiri dari limfosit dan monosit. Pada ikan
limfosit didapatkan dalam jumlah yang paling banyak diantara jenis leukosit yang
lainnya (Bijanti, 2005).
a. Limfosit
Limfosit memiliki jumlah sekitar 20-35% dari sel darah putih yang beredar
(Tambayong, 2002). Limfosit banyak ditemukan pada hapusan darah ikan, ukuran
diameternya berkisar antara 5-8 µm. limfosit berbentuk bulat dengan inti yang
besar dan sitoplasma yang sedikit (Bijanti dkk., 2010).
Limfosit tidak bersifat fagosit tetapi memegang peranan penting dalam
pembentukkan atibodi. Fungsi limfosit sendiri adalah sebagai mediator respon
imun humoral dan seluler. Penurunan jumlah limfosit dapat menurunkan
konsentrasi antibody dan menyebabkan penurunan pertahanan tubuh terhadap
serangan penyakit (Bijanti, 2005).
b. Monosit
Monosit merupakan sel darah yang terbesar dengan diameter kurang lebih
12-15 µm, dan bahkan kadang-kadang mencapai 20 µm. Jumlahnya terdiri 2-8
% dari seluruh jumlah leukosit (Amindariati, 2005).
Monosit merupakan leukosit mononuklear yang berukuran besar dengan
sitoplasmanya terkadang tidak rata karena adanya pseudopodia. Intinya
berbentuk bulat seperti ginjal atau bilobus dan ukurannya bermacam-macam,
pada umumnya mencapai 50% dari volume sitoplasmanya, bentuknya tidak
teratur. Dengan pengecatan Giemsa inti sel akan berwarna biru tua / ungu
dengan sitoplasma berwarna biru kepucatan. Kromatin inti monosit umumnya

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

18

lebih bergranuler dan kurang memadat jika dibandingkan inti limfosit (Bijanti
dkk., 2010).
Monosit bersifat fagositosis yang lebih kuat dibandingkan dengan neutrofil
dan dapat memfagosit partikel yang lebih besar. Oleh sebab itu monosit yang
matang disebut makrofag dan beredar pada jaringan (Bijanti, 2010). seperti
yang terlihat pada gambar 2.5

B

L

M
N

Gambar 2.5. Sel Leukosit (1000x,MGG). Limfosit (L), Neutrofil (N), Monosit
(M), Basofil (B)
(Doncan et al., 2010).

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

19

2.4.2

Tinjaun Nilai Normal Gambaran Darah Ikan
Menurut Salsia dkk (2011), hasil pemeriksaan nilai normal gambaran darah

ikan secara umum ditunjukkan dalam tabel di bawah ini :
Tabel 2.1. Nilai normal gambaran darah ikan air tawar secara umum.

SKRIPSI

NO

Pemeriksaan

Nilai / Jumlah

1

Eritrosit

40,76-94,37 (106 / mm3 )

2

Kadar Hb

5,05-8,33g/dl

3

PCV

28,00-35,13%

4

TPP

3,32-5,10g/dl

5

Ukuran eritrosit

8,10×8,25-14,94×10,06 mm

6

Jumlah leukosit

3390-14200 (/mm3 )

7

Neutrofil

3,25-8,40%

8

Eosinofil

2,40-8,00%

9

Limfosit

60,2 – 81,00%

10

Monosit

7,75-29,20%

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

BAB 3 MATERI DAN METODE PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Tempat penelitian dilaksanakan di Fakultas Perikanan dan Kelautan
Universitas Airlangga. Pembuatan ekstrak Spirulina platensis dilakukan di
Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga.
Proses pembuatan hapusan darah, penghitungan jumlah leukosit di Laboratorium
Patologi Klinik Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga
Surabaya.

3.2 Waktu Penelitian
Waktu Penelitian berlangsung selama satu bulan Bulan April sampai
Bulan Mei 2016

3.3 Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium. Pada
penelitian ini variable yang diamati adalah jumlah leukosit ikan gurame.
Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL),
karena kondisi lingkungan dan berat badan yang bersifat homogen, serta sampel
dilakukan secara acak dengan empat macam kelompok perlakuan.

3.4 Materi Penelitian
3.4.1

Hewan Coba
Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah ikan gurame

(Oshpronemus gouramy) sebanyak 20 ekor dengan berat badan rata-rata 20 gram

20
SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

21

dan panjang tubuh 9-10 cm dari kolam yang sama. Hewan coba diperoleh dari
Kolam Minazas, Desa bakung, Kecamatan Udan Awu, Blitar.
3.4.2

Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang diperlukan antara lain pakan ikan standar berbentuk

pellet (Takari®_PT. Central Proteinaprima., Tbk, kode produksi PCP401), air
Sumur, Ekstrak Spirulina platensis, bakteri Aeromonas hydrophila yang
berjumlah 106 CFU/ml didapat dari Balai Karantina Perikanan Surabaya, dengan
pengenceran 100 ml. Bahan untuk pembuatan ekstrak Spirulina platensis adalah
tepung Spirulina platensis yang di dapat dari Balai Besar Pengembangan
Budidaya Air Payau Jepara.
Bahan-bahan untuk pengambilan darah, pembuatan hapusan darah, dan
penghitungan jumlah leukosit pada ikan gurame adalah Heparin, larutan Dacies,
methanol 95%, zat warna Giemsa beserta Larutan Buffer Pro Giemsa, dan minyak
emersi.
3.4.3

Alat Penelitian
Peralatan yang digunakan untuk penelitian ini adalah akuarium (ukuran

volume 5 L) sebanyak 5 buah, mesin aerator, selang aerator, filter pembersih air,
batu zeloit, timbangan milligram digital, dan jaring ikan kecil. Peralatan untuk
Pengambilan darah diperlukan spuit insulin 1 ml dengan jarumnya, tabung
ependorf. pembuatan hapusan darah diperlukan glas obyek, dan rak tempat
pemulas glas obyek. Penghitungan jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit pada
ikan gurame diperlukan kamar hitung Improved Neubauer, Pipet Pasteur,, counter,
gelas penutup, mikroskop, gelas obyek, rak tempat pemulas gelas obyek.
3.5 Metode Penelitian

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

22

3.5.1

Penentuan Dosis Spirulina platensis
Penentuan dosis berdasarkan penelitian pendahuluan yang telah dilakukan

yaitu dengan bentuk ekstrak air panas Spirulina plantensis. Dosis penelitian
tersebut adalah 200 mg/L, 400 mgL, 600 mg/L. Tayag et al., (2010) Perhitungan
dosis Spirulina platensis di uraikan pada Lampiran 1.
3.5.2

Penentuan Jumlah Sampel
Rumus besaran sampel adalah t(n-1)> 15, dimana t adalah banyaknya

perlakuan dan n adalah banyaknya ulangan (Kusriningrum, 2010). Dalam
penelitian ini digunakan 5 perlakuan. Dari rumus tersebut maka ulangan terkecil
yang digunakan adalah 4 ekor ikan dalam setiap perlakuan. Untuk menghindari
bias maka ditambah 1 ekor pada setiap kelompok perlakuan, sehingga seluruh
ulangan tiap perlakuan 5 ekor ikan gurame.

3.5.3

Perlakuan Penelitian
Setelah adaptasi selama satu minggu, semua kelompok perlakuan dari

hewan coba di Dipping ekstrak spirulina dengan dosis disetiap perlakuan dan
diinfeksi bakteri Aeromonas hydrophila, kecuali PO(-)
P0-

: Kelompok perlakuan kontrol negatif
Ikan tanpa direndam ektrak Spirulina platensis dan tanpa diinfeksi
bakteri Aeromonas hydrophila.

P0+

: Kelompok perlakuan kontrol positif
Ikan tanpa direndam ektrak Spirulina platensis, selanjutnya
diinfeksi Aeromonas hydrophila 106 sel/ml pada hari ke-15

SKRIPSI

EFEK PERENDAMAN EKSTRAK…

LITTA LASYA E. SITEPU

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

23

P1

: Ikan direndam ekstrak air Spirulina platensis konsentrasi 200
mg/L secara dipping selama 3 jam pada hari pertama dan pada
hari ke tujuh, selanjutnya diinfeksi Aeromonas hydrophila 106
sel/ml pada hari ke-15

P2

: Ikan direndam ekstrak air Spirulina platensis konsentrasi 400
mg/L secara dipping selama 3 jam pada hari pertama dan pada
hari ke tujuh, selanjutnya diinfeksi Aeromonas hydrophila 106
sel/ml pada hari ke-15

P3

: Ikan direndam ekstrak air Spirulina platensis konsentrasi 600
mg/L secara dipping selama 3 jam pada hari hari pertama dan
pada hari ke tujuh, selanjutnya diinfeksi Aeromonas hydrophila
106 sel/ml pada hari ke-15

Pada hari ke-3 setelah perlakuan, darah ikan diambil sesuai proses
kemudian diamati gambaran jumlah leukosit dan hitung jenis leukosit.

3.6 Pengambilan Darah untuk Pemeriksaan Jumlah Leukosit dan Hitung
Jumlah Sel Leukosit
3.6.1

Punksi Pembuluh Darah Bagian Caudal
Setelah perlakuan selesai, ikan dikorbankan untuk memulai pengambilan

darah dengan teknik Punksi Pembuluh Darah Bagian Caudal. Teknik ini biasa
dipergunakan untuk pengambilan sampel darah ikan berukuran besar (>10 cm).
Teknik ini mempunyai kelebihan yaitu bisa dipergunakan berulang pada satu ikan.
Pengambil darah ikan dengan menggunakan teknik ini yaitu dengan men