Produksi Katekin Pada Kultur In Vitro Kalus Teh (Camellia sinensis L.) Dengan Elisitasi Saccharomyces Cerevisiae
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Komposisi Medium MS (Murashige & Skoog), pH = 5,6-5,8
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (mg/L)
Makronutrien
NH4NO3
1.650,000
KNO3
1.900,000
CaCl2.H2O
440,000
MgSO4.7H2O
370,000
KH2PO4
170,000
Iron
Na2EDTA
37,000
FeSO4.7H2O
27,800
Mikro Nutrien
MnSO4.4H2O
22,300
ZnSO4.7H2O
8,600
H3BO3
6,200
KI
0,830
NaMoO4.2H2O
0,250
CuSO4.5H2O
0,025
CoCl.6H2O
0,025
Vitamin
Myo-inositol
100,000
Glisin
2,000
Niasin
0,500
Piridoksin-HCl
0,500
Tiamin-HCl
0,100
30.000,000
Sukrosa
7.000,000
Agar
(Zulkarnain, 2009).
Universitas Sumatera Utara
33
Lampiran 2. Komposisi Medium GYE (Glucose Yeast Extract), pH = 6,2
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (g/L)
Glukosa
40
Ekstrak Yeast
5
Pepton
5
Agar
15
(www.mbc.ki.si/list_of_media.htm, diakses Maret, 2014).
Universitas Sumatera Utara
34
Lampiran 3. Komposisi Medium PCA (Plate Count Agar), pH = 7
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (g/L)
Pepton-Casein
5,0
Ekstrak Yeast
2,5
D (+) Glukosa
1,0
Agar
15,0
(www.mbc.ki.si/list_of_media.htm, diakses Maret, 2014).
Universitas Sumatera Utara
35
Lampiran 4. Data Berat Basah Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
A. Sebelum Dielisitasi pada Medium Induksi (Medium MS dengan penambahan
zat pengatur tumbuh 1 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin)
Perlakuan
Berat Basah (g)
SD
2,26
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,051
2,44
Elisittor 0,25%
0,042
2,29
Elisittor 0,50%
0,145
2,39
Elisittor 1,00%
0,067
2,37
Elisittor 2,00%
0,197
2,32
Elisittor 4,00%
0,072
B. Setelah Dielisitasi pada Medium Perlakuan (Medium MS dengan
penambahan zat pengatur tumbuh 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + elisitor)
Perlakuan
Berat Basah (g)
SD
2,45
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,081
2,55
Elisittor 0,25%
0,031
2,34
Elisittor 0,50%
0,206
2,52
Elisittor 1,00%
0,075
2,54
Elisittor 2,00%
0,195
2,39
Elisittor 4,00%
0,075
Uji Statistik Berat Basah Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
,047
5
,009
Within Groups
,009
12
,001
Total
,056
17
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,50%
Elisitor 4,00%
Elisitor 0,25%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Elisitor 0,00%
(Kontrol)
Sig.
N
3
3
3
3
3
3
1
,0500
,0700
,394
F
12,233
Subset for alpha = 0.05
2
3
4
,0700
,1067
,131
,1067
,1333
,261
,1333
,1700
,131
Sig.
,000
5
,1700
,1933
,322
Universitas Sumatera Utara
36
Lampiran 5. Data Berat Kering Kalus Teh (Camellia sinensis L.) pada Medium
Elisitasi (Medium MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh
1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + elisitor)
Perlakuan
Berat Kering (g)
SD
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,28
0,006
Elisittor 0,25%
0,25
0,021
Elisittor 0,50%
0,28
0,012
Elisittor 1,00%
0,30
0,012
Elisittor 2,00%
0,31
0,015
Elisittor 4,00%
0,29
0,010
Uji Statistik Berat Kering Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
,006
5
,001
Within Groups
,002
12
,000
Total
,009
17
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,00% (Kontrol)
Elisitor 0,50%
Elisitor 4,00%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Sig.
N
3
3
3
3
3
3
F
7,175
Sig.
,003
Subset for alpha = 0.05
1
2
3
,2533
,2833
,2833
,2900
,2900
,3033
,3033
,3133
1,000
,114
,063
Universitas Sumatera Utara
37
Lampiran 6. Data Pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae pada Medium GYE
Jumlah koloni
Rata-Rata
Waktu (Jam)
Ulangan 1
Ulangan 2
0
0
0
0
2
1
1
1
4
2
4
3
6
14
16
15
8
39
41
40
10
58
62
60
12
65
71
68
14
74
76
75
16
79
81
80
18
75
89
82
20
78
86
82
22
80
82
81
24
79
80
79,5
Estimasi jumlah sel = Jumlah Koloni x
1
Faktor pengenceran
(CFU/ml)
Kurva Pertumbuhan S. cerevisiae
Universitas Sumatera Utara
38
Lampiran 7. Data Waktu Retensi dan Luas Area Katekin Standar
Konsentrasi Katekin
Waktu Retensi
Luas Area
Standar (ppm)
(menit)
U1
U2
U1
U2
3,314
258414
50
3,310
261043
100
3,322
3,327
462233
454066
150
3,336
3,338
668682
665489
200
3,345
3,347
900666
906617
250
3,351
3,354
1227505
1193028
300
3,364
3,362
1389662
1515897
350
3,375
3,374
1533494
1495287
400
3,379
3,378
1741831
1739080
Rata-rata waktu retensi
3,349
Contoh Profil Kromatogram Katekin Standar pada Perangkat HPLC
Kurva Kaliberasi Katekin
y = a + bx
R2 = 0,994
Y = 44919,214 + 4359,524 x.
Universitas Sumatera Utara
39
Lampiran 8. Data Waktu Retensi dan Luas Area Katekin Sampel
Waktu Retensi
Luas Area
(menit)
Perlakuan (ppm)
U1
U2
U1
U2
Elisitor 0,00%(Kontrol)
3,419
3,415
391316
403071
Elisitor 0,25%
3,396
3,388
1594019
1396304
Elisitor 0,50%
3,408
1526124
3,405
1621866
Elisitor 1,00%
3,417
3,434
1071983
1096319
Elisitor 2,00%
3,437
3,431
396983
425861
Elisitor 4,00%
3,412
3,423
485066
442378
Rata-rata waktu retensi
3,415
Contoh Profil Kromatogram Katekin Sampel pada Perangkat HPLC
Kandungan Katekin Di Dalam Kalus Teh
Perlakuan (ppm)
Elisitor 0,00%(Kontrol)
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,50%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Elisitor 4,00%
Rata-rata Kandungan Katekin
mg/L
mg/ g BK
a
80,805
0,485
332,660c
1,996
c
350,754
2,105
b
238,382
1,430
84,070a
0,504
a
96,066
0,547
Contoh Perhitungan Kandungan Katekin (mg/ g BK)
Kontrol =
Kontrol =
Konsentrasi sampel (mg/L) x volume sampel (L)
Berat sampel (g)
80,805 mg/L x 0,003L
0,5 g
Kontrol = 0,485 mg/ g BK
Universitas Sumatera Utara
40
Uji Statistik Kandungan Katekin Di dalam Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
F
Between Groups
160396,722
5
32079,344
141,713
Within Groups
1358,212
6
226,369
Total
161754,934
11
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,00% (Kontrol)
Elisitor 2,00%
Elisitor 4,00%
Elisitor 1,00%
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,50%
Sig.
N
2
2
2
2
2
2
Sig.
,000
Subset for alpha = 0.05
1
2
3
80,8050
84,0695
96,0660
238,3815
332,6600
350,7535
,364
1,000
,274
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 1. Komposisi Medium MS (Murashige & Skoog), pH = 5,6-5,8
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (mg/L)
Makronutrien
NH4NO3
1.650,000
KNO3
1.900,000
CaCl2.H2O
440,000
MgSO4.7H2O
370,000
KH2PO4
170,000
Iron
Na2EDTA
37,000
FeSO4.7H2O
27,800
Mikro Nutrien
MnSO4.4H2O
22,300
ZnSO4.7H2O
8,600
H3BO3
6,200
KI
0,830
NaMoO4.2H2O
0,250
CuSO4.5H2O
0,025
CoCl.6H2O
0,025
Vitamin
Myo-inositol
100,000
Glisin
2,000
Niasin
0,500
Piridoksin-HCl
0,500
Tiamin-HCl
0,100
30.000,000
Sukrosa
7.000,000
Agar
(Zulkarnain, 2009).
Universitas Sumatera Utara
33
Lampiran 2. Komposisi Medium GYE (Glucose Yeast Extract), pH = 6,2
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (g/L)
Glukosa
40
Ekstrak Yeast
5
Pepton
5
Agar
15
(www.mbc.ki.si/list_of_media.htm, diakses Maret, 2014).
Universitas Sumatera Utara
34
Lampiran 3. Komposisi Medium PCA (Plate Count Agar), pH = 7
Bahan kimia
Konsentrasi dalam medium (g/L)
Pepton-Casein
5,0
Ekstrak Yeast
2,5
D (+) Glukosa
1,0
Agar
15,0
(www.mbc.ki.si/list_of_media.htm, diakses Maret, 2014).
Universitas Sumatera Utara
35
Lampiran 4. Data Berat Basah Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
A. Sebelum Dielisitasi pada Medium Induksi (Medium MS dengan penambahan
zat pengatur tumbuh 1 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin)
Perlakuan
Berat Basah (g)
SD
2,26
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,051
2,44
Elisittor 0,25%
0,042
2,29
Elisittor 0,50%
0,145
2,39
Elisittor 1,00%
0,067
2,37
Elisittor 2,00%
0,197
2,32
Elisittor 4,00%
0,072
B. Setelah Dielisitasi pada Medium Perlakuan (Medium MS dengan
penambahan zat pengatur tumbuh 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + elisitor)
Perlakuan
Berat Basah (g)
SD
2,45
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,081
2,55
Elisittor 0,25%
0,031
2,34
Elisittor 0,50%
0,206
2,52
Elisittor 1,00%
0,075
2,54
Elisittor 2,00%
0,195
2,39
Elisittor 4,00%
0,075
Uji Statistik Berat Basah Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
,047
5
,009
Within Groups
,009
12
,001
Total
,056
17
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,50%
Elisitor 4,00%
Elisitor 0,25%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Elisitor 0,00%
(Kontrol)
Sig.
N
3
3
3
3
3
3
1
,0500
,0700
,394
F
12,233
Subset for alpha = 0.05
2
3
4
,0700
,1067
,131
,1067
,1333
,261
,1333
,1700
,131
Sig.
,000
5
,1700
,1933
,322
Universitas Sumatera Utara
36
Lampiran 5. Data Berat Kering Kalus Teh (Camellia sinensis L.) pada Medium
Elisitasi (Medium MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh
1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + elisitor)
Perlakuan
Berat Kering (g)
SD
Elisittor 0,00% (Kontrol)
0,28
0,006
Elisittor 0,25%
0,25
0,021
Elisittor 0,50%
0,28
0,012
Elisittor 1,00%
0,30
0,012
Elisittor 2,00%
0,31
0,015
Elisittor 4,00%
0,29
0,010
Uji Statistik Berat Kering Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
,006
5
,001
Within Groups
,002
12
,000
Total
,009
17
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,00% (Kontrol)
Elisitor 0,50%
Elisitor 4,00%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Sig.
N
3
3
3
3
3
3
F
7,175
Sig.
,003
Subset for alpha = 0.05
1
2
3
,2533
,2833
,2833
,2900
,2900
,3033
,3033
,3133
1,000
,114
,063
Universitas Sumatera Utara
37
Lampiran 6. Data Pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae pada Medium GYE
Jumlah koloni
Rata-Rata
Waktu (Jam)
Ulangan 1
Ulangan 2
0
0
0
0
2
1
1
1
4
2
4
3
6
14
16
15
8
39
41
40
10
58
62
60
12
65
71
68
14
74
76
75
16
79
81
80
18
75
89
82
20
78
86
82
22
80
82
81
24
79
80
79,5
Estimasi jumlah sel = Jumlah Koloni x
1
Faktor pengenceran
(CFU/ml)
Kurva Pertumbuhan S. cerevisiae
Universitas Sumatera Utara
38
Lampiran 7. Data Waktu Retensi dan Luas Area Katekin Standar
Konsentrasi Katekin
Waktu Retensi
Luas Area
Standar (ppm)
(menit)
U1
U2
U1
U2
3,314
258414
50
3,310
261043
100
3,322
3,327
462233
454066
150
3,336
3,338
668682
665489
200
3,345
3,347
900666
906617
250
3,351
3,354
1227505
1193028
300
3,364
3,362
1389662
1515897
350
3,375
3,374
1533494
1495287
400
3,379
3,378
1741831
1739080
Rata-rata waktu retensi
3,349
Contoh Profil Kromatogram Katekin Standar pada Perangkat HPLC
Kurva Kaliberasi Katekin
y = a + bx
R2 = 0,994
Y = 44919,214 + 4359,524 x.
Universitas Sumatera Utara
39
Lampiran 8. Data Waktu Retensi dan Luas Area Katekin Sampel
Waktu Retensi
Luas Area
(menit)
Perlakuan (ppm)
U1
U2
U1
U2
Elisitor 0,00%(Kontrol)
3,419
3,415
391316
403071
Elisitor 0,25%
3,396
3,388
1594019
1396304
Elisitor 0,50%
3,408
1526124
3,405
1621866
Elisitor 1,00%
3,417
3,434
1071983
1096319
Elisitor 2,00%
3,437
3,431
396983
425861
Elisitor 4,00%
3,412
3,423
485066
442378
Rata-rata waktu retensi
3,415
Contoh Profil Kromatogram Katekin Sampel pada Perangkat HPLC
Kandungan Katekin Di Dalam Kalus Teh
Perlakuan (ppm)
Elisitor 0,00%(Kontrol)
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,50%
Elisitor 1,00%
Elisitor 2,00%
Elisitor 4,00%
Rata-rata Kandungan Katekin
mg/L
mg/ g BK
a
80,805
0,485
332,660c
1,996
c
350,754
2,105
b
238,382
1,430
84,070a
0,504
a
96,066
0,547
Contoh Perhitungan Kandungan Katekin (mg/ g BK)
Kontrol =
Kontrol =
Konsentrasi sampel (mg/L) x volume sampel (L)
Berat sampel (g)
80,805 mg/L x 0,003L
0,5 g
Kontrol = 0,485 mg/ g BK
Universitas Sumatera Utara
40
Uji Statistik Kandungan Katekin Di dalam Kalus Teh (Camellia sinensis L.)
Sum of Squares
df
Mean Square
F
Between Groups
160396,722
5
32079,344
141,713
Within Groups
1358,212
6
226,369
Total
161754,934
11
Uji DNMRT 5%
Perlakuan
Elisitor 0,00% (Kontrol)
Elisitor 2,00%
Elisitor 4,00%
Elisitor 1,00%
Elisitor 0,25%
Elisitor 0,50%
Sig.
N
2
2
2
2
2
2
Sig.
,000
Subset for alpha = 0.05
1
2
3
80,8050
84,0695
96,0660
238,3815
332,6600
350,7535
,364
1,000
,274
Universitas Sumatera Utara