Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanolik Mint Vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Sojak) secara kualitatif dan kuantitatif dengan metode DPPH - USD Repository
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOLIK MINT
VIETNAM (Persicaria odorata (Lour.) Soják) SECARA KUALITATIF DAN
KUANTITATIF DENGAN METODE DPPH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi Diajukan oleh:
Martina Sipayung NIM : 098114011
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING
HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL
PERSEMBAHAN
Kupersembahkan karya ini untuk: H ati Kudus Tuhan YesusH ati Tersuci Bunda M aria Kongregasi F CJM Keluarga besar Sipayung Pembimbing yang selalu mendampingi, Bpk Yohanes D wiatmaka
Sahabat dan teman seperjuangan Almamaterku U niversitas Sanata D harma
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat- Nya sehingga penulis berhasil menyelesaikan karya tulis “uji aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Soják) secara kualitatif dan kuantitatif dengan metode DPPH”.
Dalam penulisan skripsi ini penulis banyak mendapatkan bantuan dan semangat dari berbagai pihak, maka pada kesempatan ini penulis menyampaikan rasa terima kasih kepada:
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Yohanes Dwiatmaka selaku Dosen Pembimbing yang setia dan sabar dalam membimbing dan mengarahkan serta memberi masukan yang berguna bagi penulis.
3. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji yang selalu memberikan perhatian, arahan, bimbingan dan masukan yang sangat berguna
4. Bapak Enade Perdana Istyastono, Ph.D., Apt. selaku Dosen Penguji yang selalu memberikan perhatian, arahan, bimbingan dan masukan yang berguna.
5. Segenap dosen Fakultas Farmasi Sanata Dharma yang telah membagikan
6. Teman penelitian saya yang istimewa, Indah Kertawati yang membantu dan memberi semangat hingga selesainya penulisan skripsi ini.
7. Kepala dan Staff Laboratorium Farmakognosi Fitokimia serta Staff Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Universitas Sanata Dharma, Mas Wagiran, Mas Sigit, Mas Bimo, Mas Parjiman, Mas Andri, dan Mas Parlan, Mas kunto, yang selalu membantu peneliti dengan sabar.
8. Sahabatku Sr.M.Faustina Korbafo FCJM, Sr.M.Eufrasia FCJM, Sr.Isabella FSE, Maya Nuswantari, Defi Krishartanti, Meita Eryanti, Mayke Prasastia, Filbert Hita Kumaro, Paulus Halek, yang selalu mendengarkan keluh kesah dan memberikan semangat.
9. Seluruh para suster kongregasi FCJM, seluruh anggota Kekanta, seluruh anggota Cor Unum, seluruh anggota FBB yogyakarta.
10. Teman-teman angkatan 2009, khususnya kelas FSM A dan FKK A atas segala kebersamaan selama masa perkuliahan.
11. Semua pihak yang penulis tidak dapat sebutkan satu per satu dalam memberikan bantuan, baik bantuan secara langsung maupun tidak langsung dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini jauh dari sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun.
Semoga skripsi ini dapat berguna dan bermanfaat bagi penulis khususnya dan pembaca pada umumnya.
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL ............................................................................................ i PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................................................ ii HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ......................................... iii PERSEMBAHAN ............................................................................................... iv PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .................... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................. vi PRAKATA ........................................................................................................ vii DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................ xiv DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xvii
INTISARI ....................................................................................................... xviii ABSTRACT ..................................................................................................... xix
BAB I. PENGANTAR ......................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................ 1
1. Permasalahan ....................................................................................... 4
2. Keaslian penelitian ............................................................................... 4
3. Manfaat penelitian ............................................................................... 4
B. Tujuan Penelitian ...................................................................................... 5
1. Tujuan umum ....................................................................................... 5
2. Tujuan khusus ...................................................................................... 5
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 6 A. Mint vietnam ............................................................................................ 6
1. Uraian tanaman .................................................................................... 6
2. Morfologi ............................................................................................ 6
3. Kandungan fitokimia............................................................................ 7
4. Khasiat dan kegunaan .......................................................................... 7
B. Senyawa Fenolik ...................................................................................... 8
C. Antioksidan .............................................................................................. 9
1. Radikal bebas ....................................................................................... 9
2. Antioksidan........................................................................................ 10
3. Manfaat antioksidan ........................................................................... 11
D. Metode pengujian aktivitas antioksidan .................................................. 11 1. metode pengujian aktivtas antioksidan secara umum .......................... 11 2. metode DPPH .................................................................................... 11
4. spektrofotometri ultraviolet (UV) dan sinar tampak (Visibel) ............. 16
E. Ekstraksi ................................................................................................... 19
F. Skrining Fitokimia .................................................................................... 21
1. Alkaloid ............................................................................................ 21
2. Flavonoid ......................................................................................... 22
3. Saponin ............................................................................................. 24
4. Tanin ................................................................................................ 25
5. Triterpenoid dan steroid .................................................................... 26
G. Validasi Metode Analisis ........................................................................ 27
1. Akurasi ............................................................................................. 27
2. Presisi ............................................................................................... 27
3. Linearitas .......................................................................................... 27
4. Spesifisitas ........................................................................................ 28
H. Landasan Teori ......................................................................................... 29
I. Hipotesis .................................................................................................... 30
BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 31 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 31 B. Variabel Penelitian ................................................................................. 31 C. Bahan penelitian .................................................................................... 32
E. Tata Cara Penelitian ............................................................................... 32
1. Determinasi tanaman mint vietnam .................................................... 32
2. Skrining fitokimia .............................................................................. 33
3. Pembuatan ekstrak etanolik mint vietnam ........................................... 36
4. Pembuatan larutan DPPH, pembanding, dan larutan uji ...................... 37
5. Uji kualitatif DPPH dengan Kromatografi Lapis Tipis ....................... 37
6. Uji kuantitatif DPPH dengan spektrofotometri visibel ........................ 39
7. Validasi metode DPPH ...................................................................... 40
8. Estimasi aktivitas antioksidan ............................................................. 40
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 41 A. Hasil Determinasi Tanaman .................................................................... 41 B. Hasil Pengumpulan Sampel .................................................................... 41 C. Hasil Preparasi Sampel ........................................................................... 42 D. Hasil Skrining Fitokimia ......................................................................... 45 E. Hasil Uji Kualitatif DPPH dengan KLT .................................................. 53
1. Hasil identifikasi golongan flavonoid ................................................. 54
2. Hasil identifikasi golongan tanin ........................................................ 55
F. Hasil Uji Kuantitatif Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanolik Mint
vietnam ................................................................................................... 57
H. Hasil Estimasi Aktivitas Antioksidan dengan Radikal DPPH ................. 67
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.............................................................. 73 A. Kesimpulan ............................................................................................ 73 B. Saran ...................................................................................................... 73 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 74 LAMPIRAN ...................................................................................................... 79 BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 98
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel I. Tingkat kekuatan antioksidan dengan metode DPPH ............................. 13 Tabel II. Hasil %recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan rutin .................... 65 Tabel III. Hasil %recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan ekstrak etanolik. . 65 Tabel IV. Hasil %IC rutin menggunakan radikal bebas DPPH............................ 68 Tabel V. Hasil %IC ekstrak etanolik menggunakan radikal bebas DPPH ............ 69 Tabel VI. Hasil nilai IC ekstrak etanolik mint vietnam dan rutin ...................... 70
50 Tabel VII. Tingkat kekuatan antioksidan senyawa uji dengan metode DPPH ..... 72
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 1. Perubahan warna larutan pada reaksi radikal DPPH ......................... 12 Gambar 2. Reaksi uji Mayer............................................................................... 46 Gambar 3. Hasil uji alkaloid............................................................................... 46 Gambar 4. Reaksi hidrolisis saponin .................................................................. 47 Gambar 5. Hasil uji saponin ............................................................................... 48 Gambar 6. Hasil uji tanin .................................................................................. 49 Gambar 7. Hasil uji triterpenoid dan steroid ..................................................... 52 Gambar 8. Hasil uji flavonid .............................................................................. 53 Gambar 9. Peredaman warna DPPH oleh senyawa antioksidan . ........................ 54 Gambar 10. Hasil KLT identifikasi senyawa flavonoid. ..................................... 55 Gambar 11. Hasil KLT identifikasi senyawa tanin dengan fase gerak n-butanol : acetic acid glasial: water ............................................................... 56 Gambar 12. Hasil KLT identifikasi senyawa tanin dengan fase gerak metanol: asam asetat ................................................................................... 56 Gambar 13. Hasil KLT identifikasi senyawa tanin dengan fase gerak etil asetat: metanol : asam asetat .................................................................... 57 Gambar 14. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan .................................... 59 Gambar 15. Grafik hasil penentuan OT rutin ..................................................... 60 Gambar 16. Grafik hasil penentuan OT ekstrak mint vietnam ............................ 60 Gambar 17. Gugus kromofor dan auksokrom DPPH .......................................... 61 Gambar 18. Kurva regresi linear rutin dengan aktivitas antioksidannya . ............ 63
Gambar 19. Kurva regresi linear ekstrak etanolik mint vietnam dengan aktivitas antioksidannya. .............................................................................. 64 Gambar 20. Struktur rutin ................................................................................. 68 Gambar 21. Donasi proton senyawa antioksidan ke radikal DPPH ..................... 70
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Tanaman mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Soják .............. 79 Lampiran 2. Surat determinasi tanaman mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.)
Soják .................................................................................................... 80 Lampiran 3. Perhitungan rendemen .................................................................... 81 Lampiran 4. Data penimbangan uji kualitatif aktivitas antioksidan ..................... 81 Lampiran 5. Data penimbangan perekasi semprot ............................................. 81 Lampiran 6. Data penimbangan bahan untuk uji antioksidan .............................. 82 Lampiran 7. Data Perhitungan konsentrasi larutan DPPH, larutan uji, dan larutan pembanding .......................................................................................... 82 Lampiran 8. Scanning pengoreksi ...................................................................... 87 Lampiran 9. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan ...................................... 89 Lampiran 10. Uji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH .................. 91 Lampiran 11. Perhitungan nilai IC ekstrak mint vietnam .................................. 93
50 Lampiran 12. Uji normalitas data dengan program R.......................................... 96
INTISARI
Tanaman mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Soják) digunakan sebagai campuran dalam berbagai masakan serta diyakini sebagai antipiretik, antidiabetes, antiinflamasi, antitumor, dan antioksidan. Mint vietnam mengandung minyak atsiri yang tersusun atas beragam senyawa organik diantaranya senyawa golongan fenol seperti eugenol dan kavikol. Senyawa fenolik ini diketahui memiliki aktivitas menangkal radikal bebas dengan mendonorkan satu elektronnya. Dengan demikian senyawa fenolik dapat bertindak sebagai antioksidan alami yang aman untuk di konsumsi.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental karena subjek uji diberi perlakuan. Metode penangkapan radikal hidroksil yang digunakan adalah metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Prinsip metode ini adalah penurunan intensitas warna atau absorbansi larutan DPPH yang sebanding dengan kenaikan konsentrasi senyawa antioksidan. Analisis fitokimia dilakukan secara kualitatif untuk mengetahui keberadaan senyawa metabolit sekunder mint vietnam berupa alkaloid, saponin, tanin, flavonoid, triterpenoid dan steroid. Dari hasil penelitian diperoleh bahwa mint vietnam mengandung senyawa saponin, tanin dan flavonoid. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan secara kualitatif (kromatografi lapis tipis (KLT)) maupun secara kuantitatif (spektroskopi). Yang digunakan Sebagai pembanding adalah rutin sebagai bahan p.a., uji kualitatif dengan KLT menunjukkan bercak berwarna kuning dengan latar belakang ungu, hal ini dikarenakan ekstrak etanolik mint vietnam memiliki aktivitas antioksidan dengan cara meredam radikal DPPH. Aktivitas antioksidan ditetapkan dengan nilai IC
50
yang menunjukkan konsentrasi suatu senyawa antioksidan yang menghasilkan penangkapan 50% radikal DPPH. Uji kuantitatif menunjukkan bahwa ekstrak etanolik mint vietnam memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan IC
50
sebesar 42,3 ± 0,7 μg/mL.
Kata kunci: ekstrak etanolik mint vietnam, skrining fitokimia, KLT, antioksidan,
DPPH
ABSTRACT
Mint vietnam plants (Persicaria odorata (Lour.) Soják) is used to mixewith any kind of food. People believe that it could be used as antipyretic, antidiabetes, antiinflamasi, antitumor, and antioxidant. Mint vietnam has atsiri oil which consist of various organic chem, for example : fenol class (eugenol and kavikol). Fenolik chem has the activity to avoid radical by donor one of its electron. So that, fenolik chem could be used as natural antioxidant which is safety to be consumed.
This reserch is the experimental reserch because the experimental subjec is given action. Resercher ususes methode 1,1-difenil-2-pikrihideazil (DPPH) as the methode of catching radical hydroxil. The prinsip of this methode is the reduction of color intensity or absorbancy chem DPPH comparable with increment of concentration of antioxidant chem. The analizes of fitokimia is done qualitative to know about the existence secunder metabolit chem in mint vietnam, for example : alkaloid, saponin, tanin, flavonoid, triterpenoid and steroid. The result of this reserch showed that mint vietnam has saponin, tanin and flavonoid chem. The test of antioxide activity is done both qualitative (TLC) and quantitative (spectroscopy). Qualitative test with TLC show the yellow spotted with the background purple. It caused by etanolic extract of mint vietnam has activity of antioxide muffle DPPH radical. Antoxidant activity is setteled by the value IC
50 . This value show that the concentration of one antioxide chem produce
arrest 50% DPPH radical. Quantitative test show that mint vietnam’s etanolic axtract has the strongest antioxidant activity by IC as big as
50 42,3 ± 0,7 μg/mL.
Key words: ethanolic extracts of mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.)
áSoj k), phytochemical screening, TLC, antioxidants, DPPH
BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Perkembangan zaman
menyebabkan semakin tingginya tuntutan terhadap aktivitas dunia kerja. Kondisi ini akan memicu masyarakat untuk bertindak lebih cepat agar tidak ketinggalan dalam persaingan dan akhirnya berpindah kepada hal-hal yang bersifat instant termasuk pola makannya. Makanan instant dapat mengandung xenobiotik (pengawet, zat warna, penyedap rasa, pestisida, logam berat, dan zat kimia lain) yang beresiko akumulasi jangka panjang. Akumulasi jangka panjang di dalam tubuh menyebabkan xenobiotika dapat menjadi radikal bebas di dalam tubuh manusia karena zat-zat ini kemudian akan mengalami reaksi yang dinamakan reaksi oksidasi (Apriandi, 2011).
Reaksi oksidasi terjadi setiap saat dalam tubuh dan memicu terbentuknya radikal bebas (Damayanthi, Farizal, Khalid, Kustiyah, 2010). Radikal bebas adalah molekul yang pada orbital terluarnya mempunyai satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Akan tetapi sifatnya sangat labil dan sangat reaktif sehingga dapat menimbulkan kerusakan pada komponen sel seperti DNA, lipid, protein, dan karbohidrat (Sie, 2013). Kerusakan pada komponen sel tersebut dapat menginduksi berbagai penyakit degeneratif seperti kardiovaskular, kanker, arteriosklerosis, dan penuaan dini (Kikuzaki dan Nakatani, 1993; Cos, Calomme, Sindambiwe, de Bruyne, Cimanga, Pieters, et al., 2001; Salganik, 2001; Winarsi,
Senyawa antioksidan memegang peranan penting dalam pertahanan tubuh terhadap pengaruh radikal bebas (Kikuzaki dan Nakatani, 1993). Antioksidan dalam arti biologis adalah senyawa yang mampu untuk menangkal atau meredam dampak negatif oksidan dalam tubuh, yang dapat menunda oksidasi lipid atau molekul lain dengan menghambat awal dan propagasi reaksi berantai oksidatif (Winarsi, 2007). Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa oksidan tersebut bisa dihambat. Keseimbangan oksidan dan antioksidan sangat penting karena berkaitan dengan berfungsinya sistem imunitas tubuh. Kondisi tersebut terutama untuk menjaga integritas dan berfungsinya membran lipid, protein sel, dan asam nukleat serta mengontrol transduksi signal dan ekspresi gen dalam sel imun (Damayanthi, Farizal, Khalid, dan Kustiyah, 2010).
Sumber antioksidan dapat berasal dari alam maupun sintesis. Antioksidan alami seperti vitamin C, vitamin E, dan flavonoid terbukti aman dikonsumsi oleh manusia. Sedangkan antioksidan sintesis seperti butyl hydroxy anisol (BHA), propel galat (PG), tert-butyl hydroquinone (tBHQ) mempunyai efektivitas yang lebih tinggi tetapi dapat menyebabkan kanker melalui mutasi pada DNA. Hal inilah yang menyebabkan adanya penelitian eksplorasi sumber antioksidan alam yang berasal dari tumbuhan (Gulcin, Uguz, Oktay, Beydemir, and Kufrevioglu, 2004).
Mint Vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Soják) merupakan tanaman
herba yang sering digunakan oleh masyarakat Asia Tenggara sebagai campuran dalam bidang kesehatan sebagai penurun demam, antiinflamasi, sakit perut, antidiabetes, antimikroba, antitumor, dan antioksidan (Shavandi, Hadadian, and Ismail, 2012).
Kandungan senyawa fenolik mint vietnam berupa eugenol, kavikol, 4vinylphenol (Shavandi, Hadadian, and Ismail 2012), dan tanin (Bown, 2001).
Menurut penelitian Sambada (2011), senyawa yang menyebabkan aktivitas antioksidan berupa senyawa fenolik. Oleh karena mint vietnam mengandung senyawa fenolik, maka penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan mint vietnam.
Untuk mengetahui aktivitas antioksidan mint vietnam, maka perlu dilakukan uji kemampuan menangkap radikal bebas. Dalam penelitian ini dipilih metode DPPH (1,1-difenil-2-pikril hidrazil) baik secara kualitatif (kromatografi lapis tipis (KLT)) maupun kuantitatif (spektrofotometri), karena metode tersebut sederhana, cepat, sensitif, reprodusibel, dan paling sering digunakan pada pengujian antioksidan ekstrak tanaman (Shivaprasad, Mohan, Kharya, Shiradkar, and Lakshman, 2005; Savatovic, Cetkovic, Canadanovic-Brunet, and Djilas, 2012). Metode DPPH memberikan informasi reaktivitas senyawa yang diuji dengan suatu radikal stabil. DPPH memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap. Penangkapan radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah elektron yang diambil oleh DPPH (Sunardi, 2007), sehingga dapat diukur secara spektrofotometri (Jaya,
1. Permasalahan
a. Golongan senyawa apakah yang terdapat dalam ekstrak etanolik mint vietnam?
b. Golongan senyawa apakah yang dalam ekstrak etanolik mint vietnam yang berperan dalam aktivitas antioksidan? c. Berapakah nilai IC ekstrak etanolik mint vietnam yang terhitung melalui
50
metode DPPH?
2. Keaslian penelitian
Sejauh penelusuran yang telah dilakukan peneliti, uji aktivitas antioksidan mint vietnam secara kualitatif dan kuantitatif dengan metode DPPH belum pernah dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoretis. Memberikan informasi mengenai aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam.
b. Manfaat metodologi. Memberikan pengetahuan mengenai tata cara pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam secara kualitatif dan kuantitatif dengan metode DPPH.
c. Manfaat praktis. Memberikan informasi mengenai aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam dalam penangkapan radikal bebas.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi dan aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui golongan senyawa yang terdapat dalam ekstrak etanolik mint vietnam .
b. Mengetahui golongan senyawa dalam ekstrak etanolik mint vietnam yang berperan sebagai antioksidan.
c. Mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanolik mint vietnam dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan IC
50 .
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Mint vietnam 1. Uraian tanaman Mint vietnam (Persicaria odorata (Lour.) Soják) merupakan tanaman
herba yang termasuk dalam keluarga Polygonaceae (Katzer, 2006). Tanaman ini dikenal dengan nama yang berbeda di negara yang berbeda. Di Inggris dikenal dengan nama “Vietnamese coriander, cambodian mint, hot mint, Vietnamese mint dan Vietnamese cilantro”. Di Vietnam disebut Rau Rdm atau zow zam, di Malaysia dikenal dengan kesum atau daun kesom yang banyak digunakan sebagai bahan penyedap pada masakan; di Singapura dikenal dengan tanaman laksa, nama-nama ini mencerminkan penggunaan mint vietnam yang terkenal di Cina- Malaysia yaitu mie kari laksa dan di Hindi adalah lakh. Di Amerika Serikat tanaman ini banyak dijual dengan nama “Vietnamese coriander” (Katzer, 2006).
Mint vietnam berasal dari daerah semenanjung Asia Tenggara (Indocina).
Merupakan ramuan kuliner Asia selatan tropis (Katzer, 2006). Tanaman ini dapat tumbuh di daerah dingin sebagai tanaman pot, dapat juga ditanam selama musim
o o
panas, dengan suhu minimum 7 C (45 F) (Bown, 2001).
2. Morfologi
Mint vietnam berupa tanaman herba dengan tinggi batang mencapai
50cm (20in), dapat tumbuh dan berkembang pesat di dataran rendah padang
Eropa utara dan barat Asia. Mint vietnam dalam penampilan, mirip dengan gulma Eropa yang umum dikenal sebagai redshank (P.vulgaris). Baunya hampir sama dengan ketumbar, batang bersendi dan sempit, daun runcing dengan panjang sekitar 10cm (4in) yang memiliki tanda agak kehitaman berbentuk V didekat basis daun. Tanaman dapat menyebar dan akar melebar dibagian manapun ketika batang menyentuh tanah. Bunga berwarna merah muda yang dihasilkan dari waktu ke waktu, tetapi tidak umum, setidaknya tidak dalam budidaya (Katzer, 2006).
3. Kandungan fitokimia Mint vietnam memiliki bau ketumbar yang sangat kuat. Seluruh bagian
tanaman mengandung aldehid seperti dodecanal, decanal, (Z)-3-heksanal, (E) -2
- heksanal dan (Z)-3-Hexen-1-ol, B-caryophyllene, dan seskuiterpen seperti
α- humulene. Selain itu minyak esensial yang terkandung dalam mint vietnam tersusun oleh beragam senyawa organik diantaranya beberapa senyawa turunan fenol seperti eugenol, kavikol, 4vinylphenol, 3,5-di-tert-butylphenol (Shavandi, Hadadian, and Ismail, 2012), dan tanin (Bown, 2001).
4. Khasiat dan kegunaan Mint vietnam diyakini memiliki berbagai khasiat yang bermanfaat dalam
bidang kesehatan sebagai penurun demam, antiinflamasi, sakit perut, antidiabetes, antimikroba, antitumor, dan antioksidan (Shavandi, Hadadian, and Ismail, 2012).
Tanaman digunakan sebagai bumbu masak, campuran puding, tambahan salad, dan untuk memberikan rasa ketumbar. Meskipun sangat astringent, akar mint
vietnam bisa dimakan setelah perendaman dalam air untuk menghilangkan
beberapa tanin yang terkandung didalamnya (Bown, 2001).B. Senyawa Fenolik
Menurut Fessenden dan Fessenden (1982) fenol adalah senyawa yang memiliki gugus OH yang terikat pada cincin aromatik. Fenolik merupakan metabolit sekunder yang terdapat dan tersebar diseluruh bagian tumbuhan. Pembentukan senyawa fenolik melalui jalur asam sikimat dan fenil propanoid dengan struktur cincin aromatik yang terikat dengan salah satu atau lebih subbstituen gugus hidroksil. Senyawa fenolik dalam tumbuhan dapat berupa fenol sederhana, antrakuinon, asam fenolat, flavonoid, lignin, tanin, dan kumarin (Widodo, 2011).
Salah satu sumber senyawa antioksidan alami adalah senyawa fenolik yang diakui aman digunakan sehingga menjadi senyawa bioaktif dari suatu tumbuhan. Hal ini menjadi perhatian bagi para peneliti akhir-akhir ini, sehingga banyak dilakukan penelitian untuk mengidentifikasi tumbuhan yang memiliki aktivitas antioksidan yang dapat dikonsumsi manusia sehari-hari (Widodo, 2011).
Mekanisme senyawa fenolik sebagai antioksidan adalah melalui kemampuan gugus fenol untuk menangkap radikal bebas dengan memberikan atom hidrogennya melalui proses transfer elektron, sehingga fenol berubah menjadi radikal fenoksil (Widodo, 2001). Sifat antioksidan senyawa fenolik meningkat sesuai dengan reaktivitasnya sebagai donor elektron atau hidrogen. fenolik dapat menstabilkan dan mendelokalisasikan elektron tidak berpasangan (Rice-Evan, Miller, dan Panganga, 1997).
C. Antioksidan
1. Radikal bebas Radikal bebas adalah suatu senyawa yang mempunyai elektron bebas.
Adanya elektron bebas menyebabkan senyawa sangat reaktif untuk mencari pasangan dengan menyerang dan mengikat elektron senyawa lain yang ada di sekitarnya. Target utama radikal bebas termasuk protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein, serta unsur DNA termasuk karbohidrat. Namun, yang paling rentan menjadi target utama radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh. Terjadinya kerusakan pada ikatan rangkapnya di membran sel membuat dinding sel rapuh. Radikal bebas berpotensi merusak bagian dalam pembuluh darah dan menyebabkan aterosklerosis, merusak basa DNA dan membentuk sel kanker, serta merusak jaringan lipid dan terbentuk peroksida yang memicu berbagai penyakit degeneratif. Radikal bebas dianggap sebagai salah satu oksidan karena terjadi penarikan elektron senyawa lain (Winarsi, 2007).
Radikal bebas secara normal diproduksi terus-menerus dalam jumlah banyak untuk metabolisme dalam tubuh. Radikal bebas dibutuhkan untuk melawan agen infeksi seperti bakteri, fungi, dan parasit. Walaupun berguna bagi tubuh, namun dapat menjadi masalah pada jumlah tertentu. Jika jumlah radikal bebas lebih banyak dibanding antioksidan, maka terjadi kerusakan membran sel
Tubuh manusia dapat menetralisir radikal bebas, hanya saja bila jumlahnya berlebihan, maka kemampuan menetralisirnya akan semakin berkurang. Antioksidan endogen yang diproduksi didalam tubuh adalah enzim superoksida dismutase (SOD), glutation peroksidase (GSH Px), katalase, serta senyawa non enzim, yaitu senyawa protein kecil glutation. Ketiga enzim dan senyawa glutation tersebut bekerja menetralkan radikal bebas. Reaksi tersebut dapat dibantu oleh asupan antioksidan dari luar (eksogen) yang berasal dari bahan makanan. Misalnya vitamin E, C, betakaroten dan senyawa flavonoid yang diperoleh dari tumbuhan (Syukur, Alam, Mufidah, Rahim, Tayeb, 2011).
2. Antioksidan
Menurut Winarsi (2007) antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron (electron donor) atau reduktan yang dapat memerangi aktivitas oksidan dalam tubuh. Antioksidan dianggap sebagai dasar kesehatan dan digunakan selama bertahun-tahun dalam menanggulangi efek berbahaya dari proses oksidatif (Sing, 2007).
Berdasarkan sumbernya, antioksidan dapat digolongkan menjadi dua jenis, yakni antioksidan alami dan antioksidan sintetis. Antioksidan sintetis adalah antioksidan yang dibuat dengan melakukan sintesis kimia seperti tBHQ, BHT, dan propil galat (Gulcin, Uguz, Oktay, Beydemir, and Kufrevioglu, 2004).
Antioksidan alami terdapat pada makanan sehari-hari seperti buah dan sayuran yang mengandung berbagai senyawa fenolik atau nitrogen dan karotenoid.
Antioksidan alami dapat melindungi tubuh manusia dari radikal bebas dan
3. Manfaat antioksidan
Antioksidan bermanfaat dalam mencegah kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas. Antioksidan dapat digunakan dalam pencegahan berbagai macam penyakit seperti penyakit kardiovaskuler, kanker, katarak, degenerasi makula, penurunan fungsi saraf, dan penuaan dini (Mbata, 2010).
D. Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan
1. Metode pengujian aktivitas antioksidan secara umum
Pengujian aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan berbagai macam cara, baik secara kualitatif maupun kuantitatif. Salah satu pengujian secara kualitatif adalah dengan menggunakan metode DPPH pada kromatografi lapis tipis (Masoko and Eloff, 2007).
Shivaprasad et al. (2005) melaporkan bahwa uji kuantitatif antioksidan dapat dilakukan dengan menggunakan spektrofotometri secara invitro. Salah satu metode yang digunakan adalah metode DPPH.
2. Metode DPPH
Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikril hidrazil) merupakan metode yang paling sering dilakukan sebagai metode pengujian antioksidan pada ekstrak tanaman (Shivaprasad et al., 2005). Metode DPPH dapat digunakan baik pada pengujian kualitatif maupun kuantitatif (Sarker, Latif, and Gray, 2005). Metode DPPH merupakan metode yang sederhana, cepat, sensitif, dan reprodusibel untuk pengujian aktivitas antioksidan (Savatovic et al., 2012).
Prinsip metode DPPH adalah reduksi larutan metanolik radikal bebas berwarna (DPPH) dengan cara penangkapan radikal bebas (Shivaprasad et al., 2005). DPPH merupakan senyawa radikal bebas stabil yang dapat berubah warna dari ungu ke kuning dengan adanya reduksi melalui proses pemberian (donor) hidrogen atau elektron. Oleh karena itu, senyawa yang dapat mereduksi DPPH disebut sebagai antioksidan atau penangkap radikal bebas (Dehpour, Ebrahimzadeh, Fazel, and Mohammad, 2009).
Untuk pengujian secara kualitatif, pengujian antioksidan dengan metode DPPH dilakukan secara kromatografi lapis tipis. Zat yang telah terelusi disemprot dengan reagen DPPH 0,2% dalam metanol (Masoko and Eloff, 2007).
Berdasarkan berbagai jurnal acuan, panjang gelombang yang dapat digunakan sebagai working wavelength adalah 515-520 nm. Operating Time (OT) yang optimal adalah 30 menit, namun dapat digunakan waktu yang lebih singkat (5 atau 10 menit) pada jenis substrat yang berbeda. Sehingga pemilihan OT tergantung pada hasil optimasi (Molyneux, 2003).
(a) (b) Gambar 1. (a) DPPH (radikal), berwarna ungu; (b) DPPH (non-radikal), berwarna kuning (Molyneux, 2003).
Aktivitas antioksidan ditetapkan berdasarkan kadar efektif senyawa Concentration” EC
50 (juga disebut “Inhibitory Concentration” IC 50 ) yang
didefinisikan sebagai kadar penyebab hilangnya aktivitas DPPH sebanyak 50% (Molyneux, 2003). Nilai itu dapat diketahui dengan memplotkan nilai serapan terhadap kadar ekstrak pada kurva atau dengan menghitung kemiringan kurva menggunakan regresi linier (Marxen et al., 2007). Nilai EC berbanding terbalik
50
dengan aktivitas antioksidan (Molyneux, 2003). Menurut Ariyanto (2006) tingkat kekuatan antioksidan menggunakan metode DPPH dapat digolongkan berdasarkan nilai IC 50 (tabel 1).
Tabel 1. Tingkat Kekuatan Antioksidan Dengan Metode DPPH (Ariyanto,
2006).
Intensitas Sangat kuat Kuat Sedang Lemah Nilai IC 50 < 50 µg/mL 50 – 100 µg/mL 101 – 150 µg/mL > 150 µg/mL3. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan Schraiber pada tahun 1938. KLT merupakan bentuk kromatografi planar, selain kromatografi kertas dan elektroforesis (Gandjar dan Rohman, 2007). Teknik kromatogarafi lapis tipis menggunakan suatu adsorben yang disalutkan pada satu lempeng kaca sebagai fase stasionernya dan pengembangan kromatogram terjadi ketika fase mobil tertapis melewati adsorben itu. Seperti dikenal baik, kromatografi lapis tipis mempunyai kelebihan yang nyata dibandingkan dengan kromatografi kertas karena nyaman dan cepatnya, ketajaman pemisahan yang lebih besar dan kepekaannya yang tinggi (Basset, Denney, Jeffery, dan Medham, 1994).
Dalam kromatografi lapis tipis bahan penyalut yang beraneka macam, meskipun gel silika digunakan lebih sering daripada bahan lain. Namun pemisahan kation pada gel silika tak selalu memuaskan karena banyak kation yang mempunyai nilai Rf yang hampir sama dan tetap terkelompok pada adsorben ini. Bubuk selulosa disarankan sebagai adsorben untuk pemisahan kation dengan KLT meskipun pemisahan mungkin lebih lambat dibandingkan dengan yang diperoleh dengan gel silika. Penggunaan bubuk selulosa dapat diangggap sebagai pengganti untuk kromatografi kertas anorganik dan data untuk kromatografi kertas umumnya dapat diterapkan pada KLT anorganik pada selulosa (Basset, et al, 1994).
Lapisan-lapisan tipis selulosa dapat dibuat dengan menebarkan bubur bubuk selulosa dalam air dengan menggunakan salah satu aplikator yang tersedia di pasar. Larutan contoh yang akan diaplikasikan hendaknya berisi antara 0,1 dan
3
10 mg kation per cm dan dapat bersifat netral dan asam encer; sekitar 1 µg larutan ditotolkan dengan sebuah spuit mikro atau mikropipet didekat salah satu ujung lempeng kromatografi (sekitar 1,5-2,0 cm dari pinggir lempeng) dan kemudian dibiarkan kering diudara (Basset et al, 1994).
Fase gerak dalam KLT menurut Gandjar dan Rohman (2007) dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah campuran dua pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal (Basset et al,
Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak sedikit mungkin (akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai yang telah ditentukan). Untuk melakukan penjenuhan fase gerak, biasanya bejana dilapisi dengan kertas saring. Setelah fase gerak mencapai ujung kertas saring, maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh. Selama proses elusi, bejana kromatografi harus ditutup rapat, misalnya dengan lembar aluminium dan sebagainya (Gandjar dan Rohman, 2007).
Biasanya kromatografi itu dikembangkan dengan teknik menaik dalam mana lempang dicelupkan ke dalam pelarut pengembang sedalam 0,5 cm.
Pengembangan dibiarkan berlangsung sampai garis depan pelarut menjalani jarak yang diinginkan (biasanya 10-15 cm), lempeng kemudian diambil dari dalam bilik dan garis depan pelarut segera ditandai dengan garis pensil (Gandjar dan Rohman, 2007).
Posisi zat-zat terlarut yang telah terpisah dapat dilacak dengan pelbagai metode. Zat-zat berwarna dapat dilihat langsung bila dipandang dengan fase stasioner sebagai latar belakang. Spesi tak berwarna biasanya dapat dideteksi dengan menyemprot lempeng itu dengan suatu reagensia yang tepat yang menghasilkan bercak berwarna dalam derah-daerah spesi-spesi itu berada. Beberapa senyawa yang akan berpendar dalam cahaya ultraviolet dan dapat ditemukan tempatnya dengan cara demikian. Cara lain, jika bahan berpendar dimasukkan dalam adsorben, maka zat terlarut dapat diamati sebagai bercak gelap pada latar belakang berpendar bila diperiksa dibawah cahaya ultraviolet (Gandjar
4. Spektrofotometri ultraviolet (UV) dan sinar tampak (visibel)
Spektrofotometri UV-Vis merupakan bagian dari teknik analisis spektroskopik yang menggunakan sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan instrument spektrofotometri (Mulja dan Suharman, 1995).
Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah spektrum ultraviolet dan terlihat tergantung pada struktur elektronik dari molekul. Spektrum ultraviolet dan terlihat dari senyawa-senyawa organik berkaitan erat dengan transisi-transisi diantara tingkatan-tingkatan tenaga elektronik. Maka dari itu, serapan radiasi UV- Vis sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Dalam praktek, spektrometri ultraviolet digunakan terbatas pada sistem-sistem terkonjugasi (Sastrohamidjojo, 2001).
Absorbsi cahaya UV-Vis mengakibatkan transisi elektronik, yaitu promosi elektron-elektron dari orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke orbital keadaan tereksitasi yang berenergi lebih tinggi. Transisi ini memerlukan 40-300 kkal/mol (Fessenden dan Fessenden, 1994). Jenis-jenis transsisi ini antara lain:
1. Transisi σ σ* Energi yang diperlukan untuk transisi ini besarnya sesuai dengan energi sinar yang frekuensinya terletak diantara UV vakum (kurang dari 180 nm). Jenis transisi ini terjadi pada daerah ultraviolet vakum sehingga kurang begitu bermanfaat untuk analisis dengan cara spektrofotometri UV-Vis (Gandjar dan
2. Transisi n σ* Jenis transisi ini terjadi pada senyawa organik jenuh yang mengandung atom-atom yang memiliki elektron bukan ikatan (elektron n). Energi yang diperlukan untuk transisi jenis ini lebih kecil dibanding transisi sigma-sigma star sehingga sinar yang diserappun mempunyai panjang gelombang lebih panjang, yakni sekitar 150-250 nm. Kebanyakan transisi ini terjadi pada panjang gelombang kurang dari 200 nm (Gandjar dan Rohman, 2007).
Nilai absorbtivitas molar yang menimbulkan transisi ini besarnya antara
- 1 -1
100-3000 liter.cm .mol . Pengaruh pelarut pada transisi jenis ini adalah pergeseran puncak serapan ke panjang gelombang yang lebih pendek dalam pelarut yang lebih polar. Pergeseran ke panjang gelombang yang lebih pendek ini disebut dengan pergeseran biru (Hypsochromic Shift) (Gandjar dan Rohman, 2007).