Uji Validasi Spektrofotometri Derivatif Dalam Melakukan Estimasi Terhadap Kandungan Kafein dan Natrium Benzoat Dalam Minuman Berenergi
Lampiran 1. Gambar dan Spesifikasi Sampel serta Gambar Alat
Spektrofotometer Ultraviolet (UV)
Gambar 20. Sampel Minuman Berenergi
Spektrofotometer Ultraviolet (UV)
55
Universitas Sumatera Utara
Kandungan bahan-bahan dalam sampel:
Minuman Berenergi Merek Kratingdaeng® Minuman Berenergi Merek M-150®
Taurine 800 mg
Taurine 1000 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Niasinamid 20 mg
Tartrazin Cl 19140
Niacinamide (vitamin B3) 20 mg
Dexpanthenol (provitamin B5) 5 mg
Vitamin B6 5 mg
Sukrosa 25 g
Pyridoxine HCl (vitamin B6) 5 mg
Vitamin B12 5 mg
Air
Natrium Benzoat
Sukrosa 25 g
Natrium Benzoat
Tartrazin Cl 19140
Asam sitrat
Ponceau 4R Cl 16255
Trisodium sitrat
Panjang gelombang maksimum bahan-bahan dalam sampel:
bahan
Panjang gelombang
Rujukan
maksimum (nm)
Taurine
570
Draganov, dkk., 2014
Kafein
273
Moffat, dkk., 2005
Inositol
261
Moffat, dkk., 2005
Niasinamid
261
Moffat, dkk., 2005
Vitamin B6
290
Moffat, dkk., 2005
Vitamin B12
361
Moffat, dkk., 2005
Sukrosa
190
Sumantri, dkk., 2013
Natrium Benzoat
230
Moffat, dkk., 2005
Tartrazin
425
Moffat, dkk., 2005
Asam sitrat
520
Napitupulu, 2011
Ponceau 4R
506
Kartadarma, dkk., 2007
Vitamin B5
200
Engel, 2009
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Kurva Serapan Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 21. Kurva serapan kafein 8 μg/mL
Gambar 22. Kurva serapan kafein 9 μg/mL
57
Universitas Sumatera Utara
Gambar 23. Kurva serapan kafein 10 μg/mL
Gambar 24. Kurva serapan kafein 11 μg/mL
58
Universitas Sumatera Utara
Gambar 25. Kurva serapan kafein 12 μg/mL
Gambar 26. Kurva serapan asam benzoat 3 μg/mL
59
Universitas Sumatera Utara
Gambar 27. Kurva serapan asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 28. Kurva serapan asam benzoat 5 μg/mL
60
Universitas Sumatera Utara
Gambar 29. Kurva serapan asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 30. Kurva serapan asam benzoat 7 μg/mL
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Kurva Serapan Derivat Pertama Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 31. Kurva serapan derivat pertama kafein 8 μg/mL
Gambar 32. Kurva serapan derivat pertama kafein 9 μg/mL
62
Universitas Sumatera Utara
Gambar 33. Kurva serapan derivat pertama kafein 10 μg/mL
Gambar 34. Kurva serapan derivat pertama kafein 11 μg/mL
63
Universitas Sumatera Utara
Gambar 35. Kurva serapan derivat pertama kafein 12 μg/mL
Gambar 36. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 3 μg/mL
64
Universitas Sumatera Utara
Gambar 37. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 38. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 5 μg/mL
65
Universitas Sumatera Utara
Gambar 39. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 40. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 7 μg/mL
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Kurva Serapan Derivat Kedua Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 41. Kurva serapan derivat kedua kafein 8 μg/mL
Gambar 42. Kurva serapan derivat kedua kafein 9 μg/mL
67
Universitas Sumatera Utara
Gambar 43. Kurva serapan derivat kedua kafein 10 μg/mL
Gambar 44. Kurva serapan derivat kedua kafein 11 μg/mL
68
Universitas Sumatera Utara
Gambar 45. Kurva serapan derivat kedua kafein 12 μg/mL
Gambar 46. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 3 μg/mL
69
Universitas Sumatera Utara
Gambar 47. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 48. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 5 μg/mL
70
Universitas Sumatera Utara
Gambar 49. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 50. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 7 μg/mL
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Kurva Serapan Panjang Gelombang Analisis
Gambar 51. Kurva Serapan Derivatif Kedua Kafein 9 μg/mL (λ= 293,40 nm)
Gambar 52. Kurva Serapan Derivatif Kedua Asam Benzoat 5 μg/mL (λ=213,20
nm)
72
Universitas Sumatera Utara
Gambar 53. Kurva serapan derivat kedua campuran yang di dalamnya terdapat
kafein 9 μg/mL dan asam benzoat 5 μg/mL
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Data Kalibrasi Kafein BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien
Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Kafein pada Panjang Gelombang 293,40 nm
No.
Konsentrasi (μg/mL)(X)
Absorbansi(Y)
1.
0,0000
0,0000
2.
8,0000
0,0023
3.
9,0000
0,0028
4.
10,0000
0,0030
5.
11,0000
0,0032
6.
12,0000
0,0037
Perhitungan Persamaan Garis Regresi
No.
X
Y
X2`
Y2
XY
1.
0,0000
0,0000
0,0000
0,00000000
0,0000
2.
8,0000
0,0023
64,0000
0,00000529
0,0184
3.
9,0000
0,0028
81,0000
0,00000784
0,0252
4.
10,0000
0,0030
100,0000
0,000009
5.
11,0000
0,0032
121,0000
0,00001024
0,0352
6.
12,0000
0,0037
144,0000
0,00001369
0,0444
ΣX = 50
ΣY = 0,015
ΣY2 =
ΣXY =
4.61 x 10-5
0,1532
ΣX = 510
2
�
X = 8,3333
�=
�
Y = 0,0025
(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)/�
(∑ �2 ) −
(∑ �)2
=
�
= 3,0214 . 10−4
0,0300
(0,1532) − (50)(0,015)/6
(510) − (50)²/6
74
Universitas Sumatera Utara
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (0,0025) − (3,0214. 10−4 )(8,3333) = −1,7823. 10−5
Maka, persamaan garis regresinya adalah � = (3,0214� − 0,1782) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi(⥾)
⥾=
⥾=
⥾=
(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�
��(∑ � 2 )−(∑ �)2 /���(∑ � 2 )−(∑ �)2 /��
(0,1532) – (50)(0,015) /6
�[(510)−(50)2 /6][(4,61.10 −5 )−(0,015)2 /6]
0,028
0,02801
⥾ = 0,9996
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kafein pada
panjang gelombang 293,40 nm adalah 0,9996.
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Data Kalibrasi Asam Benzoat BPFI, Persamaan Regresi dan
Koefisien Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Asam Benzoat pada Panjang Gelombang
213,20 nm
No.
Konsentrasi (μg/mL)(X)
Absorbansi(Y)
1.
0,0000
0,0000
2.
3,0000
0,0019
3.
4,0000
0,0024
4.
5,0000
0,0033
5.
6,0000
0,0037
6.
7,0000
0,0042
Perhitungan Persamaan Garis Regresi
No.
X
Y
X2`
Y2
XY
1.
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
2.
3,0000
0,0019
9,0000
3,61.10-6
0,0057
3.
4,0000
0,0024
16,0000
5,76.10-6
0,0096
4.
5,0000
0,0033
25,0000
1,089.10-5
0,0165
5.
6,0000
0,0037
36,0000
1,369.10-5
0,0222
6.
7,0000
0,0042
49,0000
1,764.10-5
0,0294
ΣX = 25
ΣY = 0,0155
ΣY2 =
ΣXY =
5,159.10-5
0,0834
�
X = 4,1667
�
Y = 2,583.10-3
ΣX2 = 135
76
Universitas Sumatera Utara
�=
(0,0834) − (25)(0,0155)/6
(∑ ��) − (∑ �)(∑ �) /�
=
(135) − (252 )/6
(∑ �2 ) − (∑ �)2 /�
= 6,1027 . 10−4
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (2,583. 10−3 ) − (6,1027. 10−4 )(4,1667) = 0,4019. 10−4
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (6,1027� + 0,4019) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi(⥾)
⥾=
⥾=
⥾=
⥾ =
(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�
��(∑ � 2 )−(∑ �)2 /���(∑ � 2 )−(∑ �)2 /��
(0,0834)−(25)(0,0155)/6
�[(135)−25 2 /6][(5,159.10 −5 )−(0,0155)2 /6]
0,0834−0,06459
�[3,54 � 10 −4 ]
0,01881
0,018814
⥾ = 0,9998
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua asam benzoat
pada panjang gelombang 213,20 nm adalah 0,9998.
77
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Kafein
Persamaan garis regresinya adalah Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
No.
X
Y
Yi (10 -3)
Y-Yi (10 -5)
(Y-Yi)2 (10-9)
1
0,0000
0,0000
-0,0178
1,7820
0,3168
2
8,0000
0,0023
2,3993
-9,9300
9,8605
3
9,0000
0,0028
2,7014
9,8560
9,7141
4
10,0000
0,0030
3,0036
-0,3580
0,0128
5
11,0000
0,0032
3,3057
-0,1057
11,1767
6
12,0000
0,0037
3,6079
9,2140
8,4898
Σ(Y-Yi)2
−9
2
∑(�−��)
39,5707.10
�� = � �−2 = �
6−2
��� =
��� =
3 × ��
�����
=
10 × ��
�����
3 × 9,9462.10−5
3,0214.10−4
39,5707
= 9,9462.10-5
= 0,9875 μg/mL
−5
= 10 × 9,9462.10
= 3,2919 μg/mL
−4
3,0214.10
78
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Asam Benzoat
Persamaan garis regresinya adalah Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
No.
X
Y
Yi (10 -3)
Y-Yi (10 -5)
(Y-Yi)2 (10-9)
1
0,0000
0,0000
0,0402
4,0190
1,6152
2
3,0000
0,0019
1,8710
2,9000
0,8410
3
4,0000
0,0024
2,4813
-8,127
6,6048
4
5,0000
0,0033
3,0915
20,085
43,4556
5
6,0000
0,0037
3,7018
-0,181
0,0032
6
7,0000
0,0042
4,3121
-11, 208
12,562
Σ (Y-Yi)2
−9
2
∑(�−��)
65,0818.10
�� = � �−2 = �
6−2
��� =
��� =
3 × ��
�����
=
10 × ��
�����
3 × 1,2756 .10−4
6,1027.10−4
65,0818
= 1,2756 .10-4
= 0,209 μg/mL
−4
= 10 × 1,2756.10
= 2,0902 μg/mL
−4
6,1027.10
79
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Kurva Serapan Derivat Kedua Sampel
Gambar 54. Kurva Serapan Kratingdaeng® -1
80
Universitas Sumatera Utara
Gambar 55. Kurva Serapan Kratingdaeng® -2
Gambar 56. Kurva Serapan Kratingdaeng® -3
81
Universitas Sumatera Utara
Gambar 57. Kurva Serapan Kratingdaeng® -4
Gambar 58. Kurva Serapan Kratingdaeng® -5
82
Universitas Sumatera Utara
Gambar 59. Kurva Serapan Kratingdaeng® -6
Gambar 60. Kurva SerapanM-150® -1
83
Universitas Sumatera Utara
Gambar 61. Kurva SerapanM-150® -2
Gambar 62. Kurva SerapanM-150® -3
84
Universitas Sumatera Utara
Gambar 63. Kurva SerapanM-150® -4
Gambar 64. Kurva SerapanM-150® -5
85
Universitas Sumatera Utara
Gambar 65. Kurva SerapanM-150® -6
Lampiran 11.Hasil Analisis Kadar Natrium Benzoat dan Kafein dalam Sampel
1. Sampel Merek Kratingdaeng®
No
Vol
A 293,40
A 213,20
(mL)
nm
nm
Kadar
Jumlah
Kafein
Kafein
(µg/mL)
(mg)
Kadar
Kadar
Asam
Natrium
Benzoat
Benzoat
(mg/Kg)
(mg/Kg)
1
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,6607
300,5172
2
0,5
0,0019
0,0032
317,0526
47,5579
246,8486
291,2983
3
0,5
0,0018
0,0036
300,5232
45,0785
278,0971
328,1738
4
0,5
0,0019
0,0041
317,0526
47,5579
317,1578
374,2681
5
0,5
0,0017
0,0026
283,9912
42,5987
199,9758
235,9852
6
0,5
0,0018
0,0029
300,5232
45,0785
223,4122
263,6417
306,0326
45,9049
253,3587
298,9807
�
2. Sampel Merek M-150®
86
Universitas Sumatera Utara
No
Vol
A 293,40
A 213,20
(mL)
nm
nm
Kadar
Jumlah
Kafein
Kafein
(µg/mL)
(mg)
Kadar
Kadar
Asam
Natrium
Benzoat
Benzoat
(mg/Kg)
(mg/Kg)
1
0,5
0,0018
0,0028
300,5232
45,0785
215,1480
253,8895
2
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
3
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
4
0,5
0,0018
0,0032
300,5232
45,0785
246,3311
290,6876
5
0,5
0,0019
0,0028
317,0526
47,5579
215,1480
253,8895
6
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
311,5428
46,7314
239,8346
283,0213
�
Lampiran 12.Contoh Perhitungan Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
SampelKratingdaeng®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0019
Asam Benzoat (213,20 nm) = 0,0033
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel, digunakan subtitusi Y terhadap
87
Universitas Sumatera Utara
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0019 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 6,3474 μg/mL
Kadar Kafein
:
����
�
C
: konsentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Maka, Konsentrasi kafein
=
6,3474 µg/mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 317,37 µg/mL
Konsentrasi kafein dalam sampel
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 317,37 µg/mL x 99,90%
= 317,0526 µg/mL
Volume sampel Kratingdaeng®= 150 mL
Jumlah kafein dalam sampel = kons. kafein dalam sampel x volume sampel
= 317,0526 µg/mL x 150 mL
= 47557,89 µg
88
Universitas Sumatera Utara
= 47,5579 mg
Konsentrasi Asam Benzoat
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
:
0, 0033 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 5,3415 μg/mL
Kadar Asam Benzoat
:
����
�
C
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Konsentrasi asam benzoat
=
5,3415 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 267,0793 µg/mL
Konsentrasi asam benzoat = kons. asam benzoat x persen baku natrium benzoat
= 267,0793 µg/mL x 100,34%
= 267,9873 µg/mL
Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100
mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut:
100 mL sampel setara dengan 105,2331 g sampel
Kadar asam benzoat dalam sampel
= 267,9873µg/mL
= 26798,73µg/100 mL
89
Universitas Sumatera Utara
= 26798,73µg/105,2331 g
= 254,6607 µg/g
= 254,6607 mg/Kg
Kadar natrium benzoat = kadar asam benzoat x
BM natrium benzoat
BM asam benzoat
BM natrium benzoat = 144,11 ; BM asam benzoat = 122,12
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 254,6607 mg/Kg x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 300,5172 mg/Kg
Lampiran 13.Contoh Perhitungan Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel M-150®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0018
Asam Benzoat (213,20 nm) = 0,0028
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel, digunakan subtitusi Y terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
90
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0018 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 6,0164 μg/mL
Kadar Kafein
:
����
�
C
: konsentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Maka, Konsentrasi kafein
=
6,0164 µg/mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 300,82 µg/mL
Konsentrasi kafein dalam sampel
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 300,82 µg/mL x 99,90%
= 300,5232 µg/mL
Volume sampel M-150®
= 150 mL
Jumlah kafein dalam sampel = kons. kafein dalam sampel x volume sampel
= 300,5232 µg/mL x 150 mL
= 45078,48 µg
= 45,0785 mg
91
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Asam Benzoat
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
:
0, 0028 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 4,5223 μg/mL
Kadar Asam Benzoat
:
����
�
C
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Konsentrasi asam benzoat
=
4,5223 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 226,1139 µg/mL
Konsentrasi asam benzoat = kons. asam benzoat x persen baku natrium benzoat
= 266,1139 µg/mL x 100,34%
= 266,8826 µg/mL
Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100
mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut:
100 mL sampel setara dengan 105,4542 g sampel
Kadar asam benzoat dalam sampel
= 266,8826µg/mL
= 26688,26µg/100 mL
= 26688,26µg/105,4542 g
92
Universitas Sumatera Utara
= 215,1480 µg/g
= 215,1480 mg/Kg
Kadar natrium benzoat = kadar asam benzoat x
BM natrium benzoat
BM asam benzoat
BM natrium benzoat = 144,11 ; BM asam benzoat = 122,12
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 215,1480 mg/Kg x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 253,8895 mg/Kg
Lampiran 14.Perhitungan Statistik Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel Merek Kratingdaeng®
1. Jumlah Kafein
X
No.
Kadar (mg)
1
47,5579
2
47,5579
3
45,0785
4
47,5579
5
42,5987
6
45,0785
� = 45,9049
SD
∑��−��
=�
(� − �)
(� − �)
1,653
1,653
-0,826
1,653
-3,306
-0,826
2,7324
2,7324
0,6829
2,7324
10,9309
0,6829
2
Σ(� − �) = 20,4939
2
�−1
=�
2
20,4939
6−1
= 2,0245
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5,
93
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
−0,826
�= 0,999397
2,0245 ⁄√6
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
−3,306
�= 4,000006
2,0245 ⁄√6
−0,826
�= 0,999397
2,0245 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Jumlah Kafein dalam sampel merek Kratingdaeng®:
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 45,9049 mg ± (4,0321 x 2,0245/√6)
= (45,9049 ± 3,3325) mg
2. Kadar Natrium Benzoat
X
No.
(� − �)
Kadar (μg/g)
1
300,5172
1,5365
2
291,2983
-7,6824
3
328,1738
29,1931
4
374,2681
75,2874
5
235,9852
-62,9955
6
263,6417
-35,339
(� − �)
2
2,3608
59,0193
852,2371
5668,1926
3968,4330
1248,8449
94
Universitas Sumatera Utara
SD
2
� = 298,9807
∑��−��
=�
Σ(� − �) = 11799,0877
2
�−1
=�
11799 ,0877
6−1
= 48,5779
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
1,5365
�= 0,077476
48,5779 ⁄√6
−7,6824
�= 0,387376
48,5779 ⁄√6
29,1931
�= 1,472032
48,5779 ⁄√6
75,2874
�= 3,796288
48,5779 ⁄√6
−62,9955
�= 3,176482
48,5779 ⁄√6
−35,339
�= 1,781932
48,5779 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Kadar natrium benzoat pada sampel merek Kratingdaeng® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 298,9807μg/g ± (4,0321 x 48,5779/√6)
= (298,9807 ± 79,9639) μg/g
95
Universitas Sumatera Utara
= (298,9807 ± 79,9639) mg/Kg
Lampiran 15.Perhitungan Statistik Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel Merek M-150®
1. Jumlah Kafein
X
No.
Kadar (mg)
1
45,0785
2
47,5579
3
47,5579
4
45,0785
5
47,5579
6
47,5579
� = 46,7314
SD
∑��−��
=�
(� − �)
(� − �)
-1,6529
0,8265
0,8265
-1,6529
0,8265
0,8265
2
2,7321
0,6831
0,6831
2,7321
0,6831
0,6831
2
Σ(� − �) = 8,1966
2
�−1
= �8,1966
6−1
= 1,2804
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
96
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
−1,6529
�= 3,162107
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
−1,6529
�= 3,162107
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Jumlah Kafein dalam sampel merek M-150® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 46,7314 mg ± (4,0321 x 1,2804/√6)
= (46,7314 ± 2,1077) mg
2. Kadar Natrium Benzoat
X
No.
(� − �)
Kadar (μg/g)
1
253,8895
-29,1318
2
299,8871
16,8658
3
299,8871
16,8658
4
290,6876
7,6663
5
253,8895
-29,1318
6
299,8871
16,8658
(� − �)
2
848,6618
284,4552
284,4552
58,7722
848,6618
284,4552
97
Universitas Sumatera Utara
SD
2
� = 283,0213
∑��−��
=�
Σ(� − �) = 2609,4614
2
�−1
=�
2609,4614
6−1
= 22,8449
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
−29,1318
�= 3,123588
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
7,6663
�= 0,822001
22,8449 ⁄√6
−29,1318
�= 3,123588
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Kadar natrium benzoat pada sampel merek M-150® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 283,0213μg/g ± (4,0321 x 22,8449/√6)
= (283,0213 ± 37,6049) μg/g
98
Universitas Sumatera Utara
= (283,0213 ± 37,6049) mg/Kg
Lampiran 16. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150®
Gambar 66. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -1
99
Universitas Sumatera Utara
Gambar 67. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -2
Gambar 68. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -3
100
Universitas Sumatera Utara
Gambar 69. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -4
Gambar 70. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -5
101
Universitas Sumatera Utara
Gambar 71. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -6
Lampiran 17. Hasil Uji Perolehan Kembali Kafein dan Natrium Benzoat Setelah
Penambahan Masing-Masing Larutan Standar Pada Sampel M150®
1. Hasil Analisis Kafein Setelah Penambahan Larutan Standar Kafein
Sampel
Volume
sampel
(mL)
Serapan
λ 293,40
nm
Konsentrasi
(µg/mL)
Kadar
(µg/mL)
1
2
3
4
5
6
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,0048
0,0046
0,0047
0,0050
0,0048
0,0049
15,9456
15,2837
15,6149
16,6076
15,9456
16,2766
796,4854
763,4213
779,9533
829,5496
796,4854
813,0175
Persen
Perolehan
Kembali
(%)
101,03
94,14
97,58
107,92
101,03
104,47
�= 101,03
X
2. Hasil Analisis Natrium Benzoat Setelah Penambahan Larutan Standar Natrium
Benzoat
102
Universitas Sumatera Utara
Sampel
Volume
sampel
(mL)
Serapan
λ 213,20
nm
Konsentrasi
(µg/mL)
Kadar
(µg/g)
1
2
3
4
5
6
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,0058
0,0057
0,0055
0,0057
0,0056
0,0055
9,4381
9,2743
8,9465
9,2743
9,1104
8,9465
529,8753
520,6773
502,2740
520,6773
511,4757
502,2740
Persen
Perolehan
Kembali
(%)
104,13
100,25
92,49
100,25
96,37
92,49
�
X= 97,66
Lampiran 18. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali dengan menggunakan
Sampel M-150®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0048
Asam Benzoat (213,20 nm)
= 0,0058
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
103
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0048 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 15,9456 μg/mL
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
Konsentrasi Asam Benzoat :
0, 0058 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 9,4381 μg/mL
1. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Kafein
Konsentrasi awal setelah penambahan larutan baku = 15,9456 µg/mL
Konsentrasi
=
=
Konsentrasi (µg /mL )
Volume sampel (mL )
× volume (mL) × Faktor pengenceran
15,9456 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 797,2827 µg/mL
CF
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 797,2827 µg/mL x 99,90%
= 796,4854 µg/mL
Kadar kafein setelah ditambah larutan baku (C F ) = 796,4854 µg/mL
Kadar rata-rata kafein sebelum ditambah larutan baku (C A ) = 311,5428 µg/mL
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C*A )
C* A =
=
Konsentrasi baku yang ditambahkan
Volume sampel
200 µg/mL
0,5 mL
×mL yang ditambahkan
×1,2 mL
104
Universitas Sumatera Utara
=480 µg/mL
Maka persen perolehan kembali kafein
=
CF − CA
=
(796,4854 −311,5428) µg /mL
C ∗A
×100%
480 µg /mL
×100%
= 101,03%
2. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat
Konsentrasi awal setelah penambahan larutan baku = 9,4381 µg/mL
Konsentrasi
=
=
Konsentrasi (µg /mL )
Volume sampel (mL )
× volume (mL) × Faktor pengenceran
9,4381 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 471,9067 µg/mL
= 47190,67 µg/100 mL
= 47190,67 µg/105,4542 g
= 447,4992 µg/g
CF
= konsentrasi x persen baku natrium benzoat
= 447,4992 µg/g x 100,34%
= 449,0207 µg/g
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 449,0207 µg/g x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 529,8753µg/g
Kadar natrium benzoat setelah ditambah larutan baku (C F ) = 529,8753 µg/g
Kadar rata-rata na. benzoat sebelum ditambah larutan baku (C A) = 283,0213 µg/g
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C*A )
105
Universitas Sumatera Utara
C* A =
=
Konsentrasi baku yang ditambahkan
×mL yang ditambahkan
Volume sampel
50 µg/mL
0,5 mL
×2,5 mL
= 250 µg/mL
= 25000 µg/100 mL
= 25000 µg/105,4542 g
= 237,0697 µg/g
Maka persen perolehan kembali na. benzoat =
=
CF − CA
C ∗A
×100%
�529,8753 –283 ,0213 � µg /g
237 ,0697 µg /g
×100%
= 104,13%
Lampiran 19. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Jumlah Kafein
No.
1
2
3
4
5
6
SD = �
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
101,03
94,14
97,58
107,92
101,03
104,47
� = 101,03
X
(Xi - �
X)
0
-6,89
-3,45
-6,89
0
3,44
(Xi - �
X )2
0
47,4721
11,9025
47,4721
0
11,8336
∑ = 125,5703
� )2
∑(Xi − X
n−1
106
Universitas Sumatera Utara
=�
125,5703
5
= 5,01
RSD
SD
= � x 100%
X
=
5,0114
101,03
x 100%
= 4,96%
107
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 20. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Kadar Natrium
Benzoat
Persen Perolehan Kembali
�)
� )2
No.
(Xi - X
(Xi - X
(Xi)
1
104,13
6,47
41,8609
2
100,25
2,59
6,7081
3
92,49
-5,17
26,7289
4
100,25
2,59
6,7081
5
96,37
-1,27
1,6641
6
92,49
-5,17
26,7289
�
∑ = 110,399
X= 97,66
SD = �
� )2
∑(Xi − X
=�
n−1
110,399
5
= 4,69
RSD
SD
= � x 100%
X
=
110,399
97,66
x 100%
= 4,81%
108
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N
HCl pekat
= 37% setara dengan 12 N
HCl pekat
= 37% x berat jenis HCl
=
37
100
x 1,19 Kg
= 0,4403 Kg
= 440,3 g
N HCl 37%
=
=
����
BM
440 ,3 g
36,45
= 12 N
Maka, untuk membuat HCl 0,1N, dimasukkan 8,3 mL HCl 37% kedalam labu
tentukur 1000 mL lalu dicukupkan dengan akuades sampai garis tanda.
V1 x N1
=
V2 x N2
V 1 x 12 N
=
1000 mL x 0,1 N
V1
=
1000 mL
x 0,1 N
12 N
=
8,3 mL
109
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 22.
Bagan Alir Prosedur Penelitian
Kafein BPFI
ditimbang 50 mg
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB I Kafein 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB II Kafein 50 μg/mL
diambil 4 mL
Standar 1
8 μg/mL
diambil 5 mL
Standar 2
9 μg/mL
Standar 3
10 μg/mL
diambil 5,5mL
Standar 4
11 μg/mL
diambil 4,5 mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400 nm
diambil 6 mL
Standar 5
12 μg/mL
λkafein=
272,60
nm
110
Universitas Sumatera Utara
Asam Benzoat BPFI
ditimbang 50 mg
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB I Asam Benzoat 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB II Asam Benzoat 50 μg/mL
diambil 1,5 mL
Standar 1
3 μg/mL
diambil 2 mL
Standar 3
5 μg/mL
Standar 2
4 μg/mL
diambil 3 mL
Standar 4
6 μg/mL
diambil 2,5 mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400 nm
diambil 3,5 mL
Standar 5
7 μg/mL
λ asam
benzoat=
230,20 nm
111
Universitas Sumatera Utara
Larutan Standar Kafein
(8; 9; 10; 11; 12μg/mL)
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
dibuat kurva kalibrasi
λkafein = 293,40 nm
Y = (3,0214X – 0,1782) X 10
-4
Larutan Standar Asam Benzoat
(3; 4; 5; 6; 7μg/mL)
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
dibuat kurva kalibrasi
λasam benzoat = 213,20 nm
Y = (6,1027 X + 0,4019) X 10-4
112
Universitas Sumatera Utara
Sampel
diambil 20 mL
dimasukkan ke dalam beaker gelas
dihangatkan di hotplate suhu 70oC selama 3 menit
disaring
didinginkan
diambil 0,5 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N
diukur pada λ 213,20 nm dan 293,40 nm
Hasil Pengukuran Absorbansi
113
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23.
Daftar Nilai Distribusi t
114
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24.
Sertifikat Pengujian Kafein
115
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25.
Sertifikat Pengujian Natrium Benzoat
116
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 26.
SNI 01-6684-2002
117
Universitas Sumatera Utara
118
Universitas Sumatera Utara
119
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 27.
SNI 01-0222-1995
120
Universitas Sumatera Utara
121
Universitas Sumatera Utara
Spektrofotometer Ultraviolet (UV)
Gambar 20. Sampel Minuman Berenergi
Spektrofotometer Ultraviolet (UV)
55
Universitas Sumatera Utara
Kandungan bahan-bahan dalam sampel:
Minuman Berenergi Merek Kratingdaeng® Minuman Berenergi Merek M-150®
Taurine 800 mg
Taurine 1000 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Niasinamid 20 mg
Tartrazin Cl 19140
Niacinamide (vitamin B3) 20 mg
Dexpanthenol (provitamin B5) 5 mg
Vitamin B6 5 mg
Sukrosa 25 g
Pyridoxine HCl (vitamin B6) 5 mg
Vitamin B12 5 mg
Air
Natrium Benzoat
Sukrosa 25 g
Natrium Benzoat
Tartrazin Cl 19140
Asam sitrat
Ponceau 4R Cl 16255
Trisodium sitrat
Panjang gelombang maksimum bahan-bahan dalam sampel:
bahan
Panjang gelombang
Rujukan
maksimum (nm)
Taurine
570
Draganov, dkk., 2014
Kafein
273
Moffat, dkk., 2005
Inositol
261
Moffat, dkk., 2005
Niasinamid
261
Moffat, dkk., 2005
Vitamin B6
290
Moffat, dkk., 2005
Vitamin B12
361
Moffat, dkk., 2005
Sukrosa
190
Sumantri, dkk., 2013
Natrium Benzoat
230
Moffat, dkk., 2005
Tartrazin
425
Moffat, dkk., 2005
Asam sitrat
520
Napitupulu, 2011
Ponceau 4R
506
Kartadarma, dkk., 2007
Vitamin B5
200
Engel, 2009
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Kurva Serapan Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 21. Kurva serapan kafein 8 μg/mL
Gambar 22. Kurva serapan kafein 9 μg/mL
57
Universitas Sumatera Utara
Gambar 23. Kurva serapan kafein 10 μg/mL
Gambar 24. Kurva serapan kafein 11 μg/mL
58
Universitas Sumatera Utara
Gambar 25. Kurva serapan kafein 12 μg/mL
Gambar 26. Kurva serapan asam benzoat 3 μg/mL
59
Universitas Sumatera Utara
Gambar 27. Kurva serapan asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 28. Kurva serapan asam benzoat 5 μg/mL
60
Universitas Sumatera Utara
Gambar 29. Kurva serapan asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 30. Kurva serapan asam benzoat 7 μg/mL
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Kurva Serapan Derivat Pertama Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 31. Kurva serapan derivat pertama kafein 8 μg/mL
Gambar 32. Kurva serapan derivat pertama kafein 9 μg/mL
62
Universitas Sumatera Utara
Gambar 33. Kurva serapan derivat pertama kafein 10 μg/mL
Gambar 34. Kurva serapan derivat pertama kafein 11 μg/mL
63
Universitas Sumatera Utara
Gambar 35. Kurva serapan derivat pertama kafein 12 μg/mL
Gambar 36. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 3 μg/mL
64
Universitas Sumatera Utara
Gambar 37. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 38. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 5 μg/mL
65
Universitas Sumatera Utara
Gambar 39. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 40. Kurva serapan derivat pertama asam benzoat 7 μg/mL
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Kurva Serapan Derivat Kedua Kafein dan Asam Benzoat
Gambar 41. Kurva serapan derivat kedua kafein 8 μg/mL
Gambar 42. Kurva serapan derivat kedua kafein 9 μg/mL
67
Universitas Sumatera Utara
Gambar 43. Kurva serapan derivat kedua kafein 10 μg/mL
Gambar 44. Kurva serapan derivat kedua kafein 11 μg/mL
68
Universitas Sumatera Utara
Gambar 45. Kurva serapan derivat kedua kafein 12 μg/mL
Gambar 46. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 3 μg/mL
69
Universitas Sumatera Utara
Gambar 47. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 4 μg/mL
Gambar 48. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 5 μg/mL
70
Universitas Sumatera Utara
Gambar 49. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 6 μg/mL
Gambar 50. Kurva serapan derivat kedua asam benzoat 7 μg/mL
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Kurva Serapan Panjang Gelombang Analisis
Gambar 51. Kurva Serapan Derivatif Kedua Kafein 9 μg/mL (λ= 293,40 nm)
Gambar 52. Kurva Serapan Derivatif Kedua Asam Benzoat 5 μg/mL (λ=213,20
nm)
72
Universitas Sumatera Utara
Gambar 53. Kurva serapan derivat kedua campuran yang di dalamnya terdapat
kafein 9 μg/mL dan asam benzoat 5 μg/mL
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Data Kalibrasi Kafein BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien
Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Kafein pada Panjang Gelombang 293,40 nm
No.
Konsentrasi (μg/mL)(X)
Absorbansi(Y)
1.
0,0000
0,0000
2.
8,0000
0,0023
3.
9,0000
0,0028
4.
10,0000
0,0030
5.
11,0000
0,0032
6.
12,0000
0,0037
Perhitungan Persamaan Garis Regresi
No.
X
Y
X2`
Y2
XY
1.
0,0000
0,0000
0,0000
0,00000000
0,0000
2.
8,0000
0,0023
64,0000
0,00000529
0,0184
3.
9,0000
0,0028
81,0000
0,00000784
0,0252
4.
10,0000
0,0030
100,0000
0,000009
5.
11,0000
0,0032
121,0000
0,00001024
0,0352
6.
12,0000
0,0037
144,0000
0,00001369
0,0444
ΣX = 50
ΣY = 0,015
ΣY2 =
ΣXY =
4.61 x 10-5
0,1532
ΣX = 510
2
�
X = 8,3333
�=
�
Y = 0,0025
(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)/�
(∑ �2 ) −
(∑ �)2
=
�
= 3,0214 . 10−4
0,0300
(0,1532) − (50)(0,015)/6
(510) − (50)²/6
74
Universitas Sumatera Utara
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (0,0025) − (3,0214. 10−4 )(8,3333) = −1,7823. 10−5
Maka, persamaan garis regresinya adalah � = (3,0214� − 0,1782) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi(⥾)
⥾=
⥾=
⥾=
(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�
��(∑ � 2 )−(∑ �)2 /���(∑ � 2 )−(∑ �)2 /��
(0,1532) – (50)(0,015) /6
�[(510)−(50)2 /6][(4,61.10 −5 )−(0,015)2 /6]
0,028
0,02801
⥾ = 0,9996
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kafein pada
panjang gelombang 293,40 nm adalah 0,9996.
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Data Kalibrasi Asam Benzoat BPFI, Persamaan Regresi dan
Koefisien Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Asam Benzoat pada Panjang Gelombang
213,20 nm
No.
Konsentrasi (μg/mL)(X)
Absorbansi(Y)
1.
0,0000
0,0000
2.
3,0000
0,0019
3.
4,0000
0,0024
4.
5,0000
0,0033
5.
6,0000
0,0037
6.
7,0000
0,0042
Perhitungan Persamaan Garis Regresi
No.
X
Y
X2`
Y2
XY
1.
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
2.
3,0000
0,0019
9,0000
3,61.10-6
0,0057
3.
4,0000
0,0024
16,0000
5,76.10-6
0,0096
4.
5,0000
0,0033
25,0000
1,089.10-5
0,0165
5.
6,0000
0,0037
36,0000
1,369.10-5
0,0222
6.
7,0000
0,0042
49,0000
1,764.10-5
0,0294
ΣX = 25
ΣY = 0,0155
ΣY2 =
ΣXY =
5,159.10-5
0,0834
�
X = 4,1667
�
Y = 2,583.10-3
ΣX2 = 135
76
Universitas Sumatera Utara
�=
(0,0834) − (25)(0,0155)/6
(∑ ��) − (∑ �)(∑ �) /�
=
(135) − (252 )/6
(∑ �2 ) − (∑ �)2 /�
= 6,1027 . 10−4
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (2,583. 10−3 ) − (6,1027. 10−4 )(4,1667) = 0,4019. 10−4
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (6,1027� + 0,4019) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi(⥾)
⥾=
⥾=
⥾=
⥾ =
(∑ ��)−(∑ �)(∑ �)/�
��(∑ � 2 )−(∑ �)2 /���(∑ � 2 )−(∑ �)2 /��
(0,0834)−(25)(0,0155)/6
�[(135)−25 2 /6][(5,159.10 −5 )−(0,0155)2 /6]
0,0834−0,06459
�[3,54 � 10 −4 ]
0,01881
0,018814
⥾ = 0,9998
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua asam benzoat
pada panjang gelombang 213,20 nm adalah 0,9998.
77
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Kafein
Persamaan garis regresinya adalah Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
No.
X
Y
Yi (10 -3)
Y-Yi (10 -5)
(Y-Yi)2 (10-9)
1
0,0000
0,0000
-0,0178
1,7820
0,3168
2
8,0000
0,0023
2,3993
-9,9300
9,8605
3
9,0000
0,0028
2,7014
9,8560
9,7141
4
10,0000
0,0030
3,0036
-0,3580
0,0128
5
11,0000
0,0032
3,3057
-0,1057
11,1767
6
12,0000
0,0037
3,6079
9,2140
8,4898
Σ(Y-Yi)2
−9
2
∑(�−��)
39,5707.10
�� = � �−2 = �
6−2
��� =
��� =
3 × ��
�����
=
10 × ��
�����
3 × 9,9462.10−5
3,0214.10−4
39,5707
= 9,9462.10-5
= 0,9875 μg/mL
−5
= 10 × 9,9462.10
= 3,2919 μg/mL
−4
3,0214.10
78
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Asam Benzoat
Persamaan garis regresinya adalah Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
No.
X
Y
Yi (10 -3)
Y-Yi (10 -5)
(Y-Yi)2 (10-9)
1
0,0000
0,0000
0,0402
4,0190
1,6152
2
3,0000
0,0019
1,8710
2,9000
0,8410
3
4,0000
0,0024
2,4813
-8,127
6,6048
4
5,0000
0,0033
3,0915
20,085
43,4556
5
6,0000
0,0037
3,7018
-0,181
0,0032
6
7,0000
0,0042
4,3121
-11, 208
12,562
Σ (Y-Yi)2
−9
2
∑(�−��)
65,0818.10
�� = � �−2 = �
6−2
��� =
��� =
3 × ��
�����
=
10 × ��
�����
3 × 1,2756 .10−4
6,1027.10−4
65,0818
= 1,2756 .10-4
= 0,209 μg/mL
−4
= 10 × 1,2756.10
= 2,0902 μg/mL
−4
6,1027.10
79
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Kurva Serapan Derivat Kedua Sampel
Gambar 54. Kurva Serapan Kratingdaeng® -1
80
Universitas Sumatera Utara
Gambar 55. Kurva Serapan Kratingdaeng® -2
Gambar 56. Kurva Serapan Kratingdaeng® -3
81
Universitas Sumatera Utara
Gambar 57. Kurva Serapan Kratingdaeng® -4
Gambar 58. Kurva Serapan Kratingdaeng® -5
82
Universitas Sumatera Utara
Gambar 59. Kurva Serapan Kratingdaeng® -6
Gambar 60. Kurva SerapanM-150® -1
83
Universitas Sumatera Utara
Gambar 61. Kurva SerapanM-150® -2
Gambar 62. Kurva SerapanM-150® -3
84
Universitas Sumatera Utara
Gambar 63. Kurva SerapanM-150® -4
Gambar 64. Kurva SerapanM-150® -5
85
Universitas Sumatera Utara
Gambar 65. Kurva SerapanM-150® -6
Lampiran 11.Hasil Analisis Kadar Natrium Benzoat dan Kafein dalam Sampel
1. Sampel Merek Kratingdaeng®
No
Vol
A 293,40
A 213,20
(mL)
nm
nm
Kadar
Jumlah
Kafein
Kafein
(µg/mL)
(mg)
Kadar
Kadar
Asam
Natrium
Benzoat
Benzoat
(mg/Kg)
(mg/Kg)
1
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,6607
300,5172
2
0,5
0,0019
0,0032
317,0526
47,5579
246,8486
291,2983
3
0,5
0,0018
0,0036
300,5232
45,0785
278,0971
328,1738
4
0,5
0,0019
0,0041
317,0526
47,5579
317,1578
374,2681
5
0,5
0,0017
0,0026
283,9912
42,5987
199,9758
235,9852
6
0,5
0,0018
0,0029
300,5232
45,0785
223,4122
263,6417
306,0326
45,9049
253,3587
298,9807
�
2. Sampel Merek M-150®
86
Universitas Sumatera Utara
No
Vol
A 293,40
A 213,20
(mL)
nm
nm
Kadar
Jumlah
Kafein
Kafein
(µg/mL)
(mg)
Kadar
Kadar
Asam
Natrium
Benzoat
Benzoat
(mg/Kg)
(mg/Kg)
1
0,5
0,0018
0,0028
300,5232
45,0785
215,1480
253,8895
2
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
3
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
4
0,5
0,0018
0,0032
300,5232
45,0785
246,3311
290,6876
5
0,5
0,0019
0,0028
317,0526
47,5579
215,1480
253,8895
6
0,5
0,0019
0,0033
317,0526
47,5579
254,1268
299,8871
311,5428
46,7314
239,8346
283,0213
�
Lampiran 12.Contoh Perhitungan Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
SampelKratingdaeng®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0019
Asam Benzoat (213,20 nm) = 0,0033
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel, digunakan subtitusi Y terhadap
87
Universitas Sumatera Utara
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0019 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 6,3474 μg/mL
Kadar Kafein
:
����
�
C
: konsentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Maka, Konsentrasi kafein
=
6,3474 µg/mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 317,37 µg/mL
Konsentrasi kafein dalam sampel
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 317,37 µg/mL x 99,90%
= 317,0526 µg/mL
Volume sampel Kratingdaeng®= 150 mL
Jumlah kafein dalam sampel = kons. kafein dalam sampel x volume sampel
= 317,0526 µg/mL x 150 mL
= 47557,89 µg
88
Universitas Sumatera Utara
= 47,5579 mg
Konsentrasi Asam Benzoat
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
:
0, 0033 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 5,3415 μg/mL
Kadar Asam Benzoat
:
����
�
C
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Konsentrasi asam benzoat
=
5,3415 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 267,0793 µg/mL
Konsentrasi asam benzoat = kons. asam benzoat x persen baku natrium benzoat
= 267,0793 µg/mL x 100,34%
= 267,9873 µg/mL
Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100
mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut:
100 mL sampel setara dengan 105,2331 g sampel
Kadar asam benzoat dalam sampel
= 267,9873µg/mL
= 26798,73µg/100 mL
89
Universitas Sumatera Utara
= 26798,73µg/105,2331 g
= 254,6607 µg/g
= 254,6607 mg/Kg
Kadar natrium benzoat = kadar asam benzoat x
BM natrium benzoat
BM asam benzoat
BM natrium benzoat = 144,11 ; BM asam benzoat = 122,12
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 254,6607 mg/Kg x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 300,5172 mg/Kg
Lampiran 13.Contoh Perhitungan Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel M-150®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0018
Asam Benzoat (213,20 nm) = 0,0028
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel, digunakan subtitusi Y terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
90
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0018 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 6,0164 μg/mL
Kadar Kafein
:
����
�
C
: konsentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Maka, Konsentrasi kafein
=
6,0164 µg/mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 300,82 µg/mL
Konsentrasi kafein dalam sampel
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 300,82 µg/mL x 99,90%
= 300,5232 µg/mL
Volume sampel M-150®
= 150 mL
Jumlah kafein dalam sampel = kons. kafein dalam sampel x volume sampel
= 300,5232 µg/mL x 150 mL
= 45078,48 µg
= 45,0785 mg
91
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Asam Benzoat
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
:
0, 0028 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 4,5223 μg/mL
Kadar Asam Benzoat
:
����
�
C
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
V
: volume larutan pengenceran (mL)
Fp
: faktor pengenceran
W
: volume sampel (mL)
Konsentrasi asam benzoat
=
4,5223 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 226,1139 µg/mL
Konsentrasi asam benzoat = kons. asam benzoat x persen baku natrium benzoat
= 266,1139 µg/mL x 100,34%
= 266,8826 µg/mL
Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100
mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut:
100 mL sampel setara dengan 105,4542 g sampel
Kadar asam benzoat dalam sampel
= 266,8826µg/mL
= 26688,26µg/100 mL
= 26688,26µg/105,4542 g
92
Universitas Sumatera Utara
= 215,1480 µg/g
= 215,1480 mg/Kg
Kadar natrium benzoat = kadar asam benzoat x
BM natrium benzoat
BM asam benzoat
BM natrium benzoat = 144,11 ; BM asam benzoat = 122,12
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 215,1480 mg/Kg x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 253,8895 mg/Kg
Lampiran 14.Perhitungan Statistik Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel Merek Kratingdaeng®
1. Jumlah Kafein
X
No.
Kadar (mg)
1
47,5579
2
47,5579
3
45,0785
4
47,5579
5
42,5987
6
45,0785
� = 45,9049
SD
∑��−��
=�
(� − �)
(� − �)
1,653
1,653
-0,826
1,653
-3,306
-0,826
2,7324
2,7324
0,6829
2,7324
10,9309
0,6829
2
Σ(� − �) = 20,4939
2
�−1
=�
2
20,4939
6−1
= 2,0245
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5,
93
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
−0,826
�= 0,999397
2,0245 ⁄√6
1,653
�= 2,000003
2,0245 ⁄√6
−3,306
�= 4,000006
2,0245 ⁄√6
−0,826
�= 0,999397
2,0245 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Jumlah Kafein dalam sampel merek Kratingdaeng®:
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 45,9049 mg ± (4,0321 x 2,0245/√6)
= (45,9049 ± 3,3325) mg
2. Kadar Natrium Benzoat
X
No.
(� − �)
Kadar (μg/g)
1
300,5172
1,5365
2
291,2983
-7,6824
3
328,1738
29,1931
4
374,2681
75,2874
5
235,9852
-62,9955
6
263,6417
-35,339
(� − �)
2
2,3608
59,0193
852,2371
5668,1926
3968,4330
1248,8449
94
Universitas Sumatera Utara
SD
2
� = 298,9807
∑��−��
=�
Σ(� − �) = 11799,0877
2
�−1
=�
11799 ,0877
6−1
= 48,5779
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
1,5365
�= 0,077476
48,5779 ⁄√6
−7,6824
�= 0,387376
48,5779 ⁄√6
29,1931
�= 1,472032
48,5779 ⁄√6
75,2874
�= 3,796288
48,5779 ⁄√6
−62,9955
�= 3,176482
48,5779 ⁄√6
−35,339
�= 1,781932
48,5779 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Kadar natrium benzoat pada sampel merek Kratingdaeng® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 298,9807μg/g ± (4,0321 x 48,5779/√6)
= (298,9807 ± 79,9639) μg/g
95
Universitas Sumatera Utara
= (298,9807 ± 79,9639) mg/Kg
Lampiran 15.Perhitungan Statistik Jumlah Kafein dan Natrium Benzoat dalam
Sampel Merek M-150®
1. Jumlah Kafein
X
No.
Kadar (mg)
1
45,0785
2
47,5579
3
47,5579
4
45,0785
5
47,5579
6
47,5579
� = 46,7314
SD
∑��−��
=�
(� − �)
(� − �)
-1,6529
0,8265
0,8265
-1,6529
0,8265
0,8265
2
2,7321
0,6831
0,6831
2,7321
0,6831
0,6831
2
Σ(� − �) = 8,1966
2
�−1
= �8,1966
6−1
= 1,2804
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
96
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
−1,6529
�= 3,162107
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
−1,6529
�= 3,162107
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
0,8265
�= 1,581149
1,2804 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Jumlah Kafein dalam sampel merek M-150® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 46,7314 mg ± (4,0321 x 1,2804/√6)
= (46,7314 ± 2,1077) mg
2. Kadar Natrium Benzoat
X
No.
(� − �)
Kadar (μg/g)
1
253,8895
-29,1318
2
299,8871
16,8658
3
299,8871
16,8658
4
290,6876
7,6663
5
253,8895
-29,1318
6
299,8871
16,8658
(� − �)
2
848,6618
284,4552
284,4552
58,7722
848,6618
284,4552
97
Universitas Sumatera Utara
SD
2
� = 283,0213
∑��−��
=�
Σ(� − �) = 2609,4614
2
�−1
=�
2609,4614
6−1
= 22,8449
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
=�
−29,1318
�= 3,123588
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
7,6663
�= 0,822001
22,8449 ⁄√6
−29,1318
�= 3,123588
22,8449 ⁄√6
16,8658
�= 1,808395
22,8449 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Kadar natrium benzoat pada sampel merek M-150® :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD/√n)
= 283,0213μg/g ± (4,0321 x 22,8449/√6)
= (283,0213 ± 37,6049) μg/g
98
Universitas Sumatera Utara
= (283,0213 ± 37,6049) mg/Kg
Lampiran 16. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150®
Gambar 66. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -1
99
Universitas Sumatera Utara
Gambar 67. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -2
Gambar 68. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -3
100
Universitas Sumatera Utara
Gambar 69. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -4
Gambar 70. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -5
101
Universitas Sumatera Utara
Gambar 71. Kurva Serapan Uji Perolehan KembaliM-150® -6
Lampiran 17. Hasil Uji Perolehan Kembali Kafein dan Natrium Benzoat Setelah
Penambahan Masing-Masing Larutan Standar Pada Sampel M150®
1. Hasil Analisis Kafein Setelah Penambahan Larutan Standar Kafein
Sampel
Volume
sampel
(mL)
Serapan
λ 293,40
nm
Konsentrasi
(µg/mL)
Kadar
(µg/mL)
1
2
3
4
5
6
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,0048
0,0046
0,0047
0,0050
0,0048
0,0049
15,9456
15,2837
15,6149
16,6076
15,9456
16,2766
796,4854
763,4213
779,9533
829,5496
796,4854
813,0175
Persen
Perolehan
Kembali
(%)
101,03
94,14
97,58
107,92
101,03
104,47
�= 101,03
X
2. Hasil Analisis Natrium Benzoat Setelah Penambahan Larutan Standar Natrium
Benzoat
102
Universitas Sumatera Utara
Sampel
Volume
sampel
(mL)
Serapan
λ 213,20
nm
Konsentrasi
(µg/mL)
Kadar
(µg/g)
1
2
3
4
5
6
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,0058
0,0057
0,0055
0,0057
0,0056
0,0055
9,4381
9,2743
8,9465
9,2743
9,1104
8,9465
529,8753
520,6773
502,2740
520,6773
511,4757
502,2740
Persen
Perolehan
Kembali
(%)
104,13
100,25
92,49
100,25
96,37
92,49
�
X= 97,66
Lampiran 18. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali dengan menggunakan
Sampel M-150®
Volume sampel yang digunakan
= 0,5 mL
Absorbansi analisis (Y) :
Kafein (293,40 nm)
= 0,0048
Asam Benzoat (213,20 nm)
= 0,0058
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (λ=293,40 nm) :
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam benzoat
(λ= 213,20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10-4
103
Universitas Sumatera Utara
Konsentrasi Kafein
Y = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
:
0, 0048 = (3,0214X – 0,1782) . 10-4
X = 15,9456 μg/mL
Y = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
Konsentrasi Asam Benzoat :
0, 0058 = (6,1027X + 0,4019) . 10-4
X = 9,4381 μg/mL
1. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Kafein
Konsentrasi awal setelah penambahan larutan baku = 15,9456 µg/mL
Konsentrasi
=
=
Konsentrasi (µg /mL )
Volume sampel (mL )
× volume (mL) × Faktor pengenceran
15,9456 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 797,2827 µg/mL
CF
= konsentrasi kafein x persen baku kafein
= 797,2827 µg/mL x 99,90%
= 796,4854 µg/mL
Kadar kafein setelah ditambah larutan baku (C F ) = 796,4854 µg/mL
Kadar rata-rata kafein sebelum ditambah larutan baku (C A ) = 311,5428 µg/mL
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C*A )
C* A =
=
Konsentrasi baku yang ditambahkan
Volume sampel
200 µg/mL
0,5 mL
×mL yang ditambahkan
×1,2 mL
104
Universitas Sumatera Utara
=480 µg/mL
Maka persen perolehan kembali kafein
=
CF − CA
=
(796,4854 −311,5428) µg /mL
C ∗A
×100%
480 µg /mL
×100%
= 101,03%
2. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat
Konsentrasi awal setelah penambahan larutan baku = 9,4381 µg/mL
Konsentrasi
=
=
Konsentrasi (µg /mL )
Volume sampel (mL )
× volume (mL) × Faktor pengenceran
9,4381 µg /mL × 25 mL × 1
0,5 mL
= 471,9067 µg/mL
= 47190,67 µg/100 mL
= 47190,67 µg/105,4542 g
= 447,4992 µg/g
CF
= konsentrasi x persen baku natrium benzoat
= 447,4992 µg/g x 100,34%
= 449,0207 µg/g
Kadar natrium benzoat dalam sampel
= kadar asam benzoat x
= 449,0207 µg/g x
BM Na benzoat
BM asam benzoat
144,11
122,12
= 529,8753µg/g
Kadar natrium benzoat setelah ditambah larutan baku (C F ) = 529,8753 µg/g
Kadar rata-rata na. benzoat sebelum ditambah larutan baku (C A) = 283,0213 µg/g
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C*A )
105
Universitas Sumatera Utara
C* A =
=
Konsentrasi baku yang ditambahkan
×mL yang ditambahkan
Volume sampel
50 µg/mL
0,5 mL
×2,5 mL
= 250 µg/mL
= 25000 µg/100 mL
= 25000 µg/105,4542 g
= 237,0697 µg/g
Maka persen perolehan kembali na. benzoat =
=
CF − CA
C ∗A
×100%
�529,8753 –283 ,0213 � µg /g
237 ,0697 µg /g
×100%
= 104,13%
Lampiran 19. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Jumlah Kafein
No.
1
2
3
4
5
6
SD = �
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
101,03
94,14
97,58
107,92
101,03
104,47
� = 101,03
X
(Xi - �
X)
0
-6,89
-3,45
-6,89
0
3,44
(Xi - �
X )2
0
47,4721
11,9025
47,4721
0
11,8336
∑ = 125,5703
� )2
∑(Xi − X
n−1
106
Universitas Sumatera Utara
=�
125,5703
5
= 5,01
RSD
SD
= � x 100%
X
=
5,0114
101,03
x 100%
= 4,96%
107
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 20. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Kadar Natrium
Benzoat
Persen Perolehan Kembali
�)
� )2
No.
(Xi - X
(Xi - X
(Xi)
1
104,13
6,47
41,8609
2
100,25
2,59
6,7081
3
92,49
-5,17
26,7289
4
100,25
2,59
6,7081
5
96,37
-1,27
1,6641
6
92,49
-5,17
26,7289
�
∑ = 110,399
X= 97,66
SD = �
� )2
∑(Xi − X
=�
n−1
110,399
5
= 4,69
RSD
SD
= � x 100%
X
=
110,399
97,66
x 100%
= 4,81%
108
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N
HCl pekat
= 37% setara dengan 12 N
HCl pekat
= 37% x berat jenis HCl
=
37
100
x 1,19 Kg
= 0,4403 Kg
= 440,3 g
N HCl 37%
=
=
����
BM
440 ,3 g
36,45
= 12 N
Maka, untuk membuat HCl 0,1N, dimasukkan 8,3 mL HCl 37% kedalam labu
tentukur 1000 mL lalu dicukupkan dengan akuades sampai garis tanda.
V1 x N1
=
V2 x N2
V 1 x 12 N
=
1000 mL x 0,1 N
V1
=
1000 mL
x 0,1 N
12 N
=
8,3 mL
109
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 22.
Bagan Alir Prosedur Penelitian
Kafein BPFI
ditimbang 50 mg
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB I Kafein 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB II Kafein 50 μg/mL
diambil 4 mL
Standar 1
8 μg/mL
diambil 5 mL
Standar 2
9 μg/mL
Standar 3
10 μg/mL
diambil 5,5mL
Standar 4
11 μg/mL
diambil 4,5 mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400 nm
diambil 6 mL
Standar 5
12 μg/mL
λkafein=
272,60
nm
110
Universitas Sumatera Utara
Asam Benzoat BPFI
ditimbang 50 mg
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB I Asam Benzoat 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 mL
dilarutkan dan dicukupkan
dengan HCL 0,1N
LIB II Asam Benzoat 50 μg/mL
diambil 1,5 mL
Standar 1
3 μg/mL
diambil 2 mL
Standar 3
5 μg/mL
Standar 2
4 μg/mL
diambil 3 mL
Standar 4
6 μg/mL
diambil 2,5 mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400 nm
diambil 3,5 mL
Standar 5
7 μg/mL
λ asam
benzoat=
230,20 nm
111
Universitas Sumatera Utara
Larutan Standar Kafein
(8; 9; 10; 11; 12μg/mL)
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
dibuat kurva kalibrasi
λkafein = 293,40 nm
Y = (3,0214X – 0,1782) X 10
-4
Larutan Standar Asam Benzoat
(3; 4; 5; 6; 7μg/mL)
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
dibuat kurva kalibrasi
λasam benzoat = 213,20 nm
Y = (6,1027 X + 0,4019) X 10-4
112
Universitas Sumatera Utara
Sampel
diambil 20 mL
dimasukkan ke dalam beaker gelas
dihangatkan di hotplate suhu 70oC selama 3 menit
disaring
didinginkan
diambil 0,5 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N
diukur pada λ 213,20 nm dan 293,40 nm
Hasil Pengukuran Absorbansi
113
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23.
Daftar Nilai Distribusi t
114
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24.
Sertifikat Pengujian Kafein
115
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25.
Sertifikat Pengujian Natrium Benzoat
116
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 26.
SNI 01-6684-2002
117
Universitas Sumatera Utara
118
Universitas Sumatera Utara
119
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 27.
SNI 01-0222-1995
120
Universitas Sumatera Utara
121
Universitas Sumatera Utara