Pengaruh Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus dan Metabolit Sekunder Pada Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

43

Lampiran 1. Komposisi Media Murashige dan Skoog (MS)

Bahan Kimia
Makro Nutrien (Stok I)
NH4 NO3
KNO3
CaCl2.2H2O
MgSO4.7H2O
KH2PO4
Mikro Nutrien (Stok II)
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
H3BO3
KI
Na2MoO4.2H20
CuSO4.5H2O
CoCl2.6H2O
Iron (Stok III)
FeSO4.7H2O

Na2.EDTA
Vitamin (Stok IV)
Nikotinic acid
Pyridoxin HCL
Thiamine HCL
Myo-inositol
Sukrosa
Agar
(Sumber: Murashige and Skoog, 1962)

Konsentrasi Media (mg/L)
1650,000
1900,000
440,000
370,000
170,000
6,900
8,600
6,200
0,830

0,250
0,025
0,025
27,800
37,200
0,500
0,500
0,100
100,000
30.000,000
7.000,000

Universitas Sumatera Utara

44

Lampiran 2. Kegiatan Penelitian
Jenis Kegiatan
Sterilisasi Alat
Pembuatan Media

Persiapan Ruang Kultur
Sterilisasi Eksplan
Penanaman Eksplan
Pemeliharaan Kultur
Subkultur
Panen
Penimbangan b. basah kalus (g)
Pengeringan
Penimbangan b. kering kalus (g)
Ekstraksi Kalus
Deteksi Metabolit Sekunder
Peubah amatan
Waktu muncul Kalus (HST)
Persentase Terbentuk Kalus
Warna Kalus
Tekstur Kalus
Bobot Basah Kalus (g)
Bobot Kering Kalus (g)
Deteksi Metabolit Sekunder

1
X
X

2

Minggu ke–
3
4
5
6

7

8

X
X
X
X

X

X

X

X

X

X
X

X
X
X
X
X
X

X

X

X

X

X

X
X
X
X
X
X
X

Universitas Sumatera Utara

45

Lampiran 3. Bagan Penelitian
E2Z3

E3Z3

E3Z1

E1Z5

E1Z5

E2Z1

E2Z0

E1Z6

E3Z0

E3Z4

E1Z0

E2Z6

E3Z6

E3Z4

E2Z2

E3Z4

E1Z2

E3Z3

E2Z4

E2Z1

E1Z6

E3Z2

E1Z1

E2Z3

E2Z6

E1Z1

E1Z1

E1Z6

E3Z6

E2Z2

E3Z4

E2Z4

E2Z1

E3Z6

E1Z4

E2Z3

E2Z5

E3Z2

E1Z5

E1Z2

E1Z4

E2ZU

E1Z6

E3Z5

E3Z3

E1Z1

E2Z4

E1Z0

E1Z0

E2Z3

E2Z6

E1Z5

E1Z0

E1Z4

E1Z1

E2Z0

E1Z5

E3Z1

E1Z4

E2Z3

E2Z4

E2Z5

E1Z0

E3Z2

E2Z5

E3Z3

E3Z6

E1Z3

E2Z5

E1Z3

E1Z2

E2Z0

E2Z4

E2Z5

E3Z6

E2Z2

E1Z5

E1Z1

E1Z3

E2Z0

E2Z6

E3Z4

E1Z3

E2Z6

E3Z3

E3Z2

E2Z1

E1Z2

E2Z4

E1Z4

E1Z3

E3Z3

E1Z6

E3Z0

E2Z3

E3Z1

E1Z2

E3Z0

E2Z0

E3Z4

E3Z1

E1Z6

E3Z5

E2Z2

E3Z5

E3Z2

E2Z5

E3Z6

E2Z1

E2Z2

E1Z0

E1Z2

E3Z0

E2Z0

E3Z0

E3Z2

E3Z1

E3Z5

E3Z5

E3Z5

E3Z1

E3Z0

E1Z3

E2Z2

E1Z4

E2Z1

Universitas Sumatera Utara

46

Lampiran 4. Data Pengamatan Persentase Terbentuk Kalus (%)
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

1
0
100
100
100
100
100
100
100
0
100
100
100
1000
83,33

2
0
0
100
0
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
1200
80,00

Ulangan
3
4
0
100
100
100
0
0
100
100
100
100
0
100
100
100
100
100
100
100
0
100
100
100
0
0
0
100
100
100
100
100
1100
1100
68,75 78,57

5
0
0
100
0
0
100
100
100
100
100
0
100
100
100
900
64,29

6
0
100
0
100
100
100
0
100
100
100
100
0
100
100
100
100
1200
75,00

Total

Rataan

0
300
200
400
200
400
400
300
400
400
300
500
400
500
0
100
300
300
400
400
300
6500

0,00
75,00
50,00
80,00
50,00
80,00
80,00
60,00
100,00
100,00
100,00
83,33
100,00
100,00
0,00
33,33
100,00
100,00
100,00
100,00
100,00
74,71

Universitas Sumatera Utara

47

Lampiran 5. Data Transformasi Persentase Terbentuk Kalus Arcsin √
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

1
0
90
90
90
90
90
90
90
0
90
90
90
900
75,00

2
0
0
90
0
90
90
90
90
90
90
90
90
90
90
90
1080
72,00

Ulangan
3
4
0
90
90
90
0
0
90
90
90
90
0
90
90
90
90
90
90
90
0
90
90
90
0
0
0
90
90
90
90
90
990
990
61,88 70,71

5
0
0
90
0
0
90
90
90
90
90
0
90
90
90
810
57,86

6
0
90
0
90
90
90
0
90
90
90
90
0
90
90
90
90
1080
67,50

Total

Rataan

0
270
180
360
180
360
360
270
360
360
270
450
360
450
0
90
270
270
360
360
270
5850

0,00
67,50
45,00
72,00
45,00
72,00
72,00
54,00
90,00
90,00
90,00
75,00
90,00
90,00
0,00
30,00
90,00
90,00
90,00
90,00
90,00
67,24

Lampiran 6. Daftar Sidik Ragam Persentase Terbentuk Kalus
SK
E
Z
EZ
GALAT
TOTAL

db
2
6
12
67
87

FK
KK

393362,07
45,81

JK
KT
F.HIT
12217,67 6108,83 6,437
41707,46 6951,24 7,325
15627,80 1302,32 1,372
63585,00 949,03
133137,93

F.05
3,13
2,24
1,90

F.01
4,94
3,08
2,46

Ket
**
**
tn

Universitas Sumatera Utara

48

Lampiran 7. Data Pengamatan Waktu Muncul Kalus (HST)
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

1
11
11
12
10
9
6
6
8
9
9
91
9,10

2
14
12
11
11
6
6
7
6
7
7
9
10
106
8,83

Ulangan
3
4
10
12
14
14
14
11
10
10
7
6
6
7
7
9
7
9
7
8
7
9
9
8
100
101
9,09
9,18

5
11
7
8
7
7
7
8
9
9
73
8,11

6
11
14
11
10
5
8
7
7
7
6
10
10
106
8,83

Total

Rataan

32
23
53
25
48
42
30
25
27
21
36
27
36
8
22
21
36
36
29
577

10,67
11,50
13,25
12,50
12,00
10,50
10,00
6,25
6,75
7,00
7,20
6,75
7,20
8,00
7,33
7,00
9,00
9,00
9,67
8,88

Universitas Sumatera Utara

49

Lampiran 8. Data Pengamatan Bobot Basah Kalus (g)
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

1
0
0,0017
0,0027
0,003
0,0016
0,007
0,2615
0,0739
0
0,0407
0,0078
0,0133
0,4132
0,0344

2
0
0
0,0018
0
0,0063
0,0008
0,0576
0,1644
0,01
0,026
0,013
0,0243
0,0169
0,009
0,0174
0,3475
0,0232

Ulangan
3
4
0
0,0039
0,0025
0,0061
0
0
0,0091
0,0038
0,0025 0,0032
0
0,0555
0,0628 0,0679
0,0059 0,1003
0,1018
0,0022
0
0,131
0,0234 0,1192
0
0
0
0,0167
0,0512
0,0073
0,0116 0,0346
0,3571 0,4654
0,0223 0,0332

5
0
0
0,0031
0
0
0,0222
0,1128
0,035
0,0782
0,2332
0
0,0115
0,0165
0,0123
0,5248
0,0375

6
0
0,0101
0
0,0027
0,001
0,0051
0
0,199
0,0278
0,1003
0,0199
0
0,0271
0,0476
0,0508
0,0098
0,5012
0,0313

Total

Rataan

0
0,0157
0,0052
0,0137
0,0101
0,0182
0,0081
0,1201
0,3519
0,2984
0,2246
0,4250
0,2421
0,4740
0
0,0167
0,0555
0,1395
0,0406
0,1103
0,0395
2,6092

0,0000
0,0039
0,0013
0,0027
0,0025
0,0036
0,0016
0,0240
0,0880
0,0746
0,0749
0,0708
0,0605
0,0948
0,0000
0,0056
0,0185
0,0465
0,0102
0,0276
0,0132
0,0300

Universitas Sumatera Utara

50

Lampiran 9. Data Transformasi Bobot Basah Kalus √
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

Ulangan
Total Rataan
1
2
3
4
5
6
0,7071 0,7071 0,7071
0,7071 0,7071 3,5355 0,7071
0,7083
0,7099 0,7071 0,7142 2,8395 0,7099
0,7090 0,7071 0,7089
0,7071 2,8321 0,7080
0,7084 0,7114 0,7071 0,7093 0,7090 3,5452 0,7090
0,7071 0,7071 0,7135
0,7078 2,8355 0,7089
0,7092 0,7115
0,7098 0,7071 0,7107 3,5484 0,7097
0,7082 0,7077 0,7089 0,7094 0,7071
3,5413 0,7083
0,7120 0,7467 0,7071 0,7453
0,7071 3,6183 0,7237
0,7502 0,7536 0,7226 0,8361 3,0625 0,7656
0,8151 0,7113 0,7748
0,7265 3,0277 0,7569
0,7141 0,7758
0,7828
2,2727 0,7576
0,8726 0,7253 0,7087 0,7071 0,7314 0,7748 4,5199 0,7533
0,7162 0,7944
0,7604 0,7210 2,9920 0,7480
0,7576 0,7241 0,7235 0,7869 0,8563
3,8483 0,7697
0,7071
0,7071 0,7071
0,7071 2,8284 0,7071
0,7071 0,7188 0,7071
2,1330 0,7110
0,7190
0,7152 0,7260 2,1602 0,7201
0,7353
0,7424
0,7400 2,2178 0,7393
0,7126 0,7134 0,7122
0,7187
2,8570 0,7142
0,7164
0,7153 0,7312
0,7422 2,9050 0,7263
0,7193
0,7158 0,7140 2,1491 0,7164
8,7556 10,8422 11,5559 10,2168 10,2480 11,6507 63,2693
0,7296 0,7228 0,7222 0,7298 0,7320 0,7282
0,7272

Lampiran 10. Daftar Sidik Ragam Bobot Basah Kalus
SK
E
Z
EZ
GALAT
TOTAL
FK
KK

db
2
6
12
67
87

JK
0,0332
0,0037
0,0052
0,0555
0,0977

KT
0,0166
0,0006
0,0004
0,0008

F.HIT
20,05
0,75
0,52

F.05
3,13
2,24
1,90

F.01
4,94
3,08
2,46

Ket
**
tn
tn

46,01
3,96

Universitas Sumatera Utara

51

Lampiran 11. Data Pengamatan Bobot Kering Kalus (g)
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

1
0
0,0001
0,001
0,0012
0,0012
0,0016
0,0252
0,0142
0
0,0059
0,0031
0,0049
0,0584
0,0049

2
0
0
0,001
0
0,0033
0,0003
0,0079
0,0159
0,002
0,0113
0,0056
0,0059
0,0027
0,002
0,0036
0,0615
0,0041

Ulangan
3
4
0
0,0008
0,0008
0,003
0
0
0,0031
0,0027
0,0012 0,0014
0
0,0056
0,0093 0,0072
0,0013 0,0126
0,019
0,0005
0
0,0028
0,0047 0,0149
0
0
0
0,004
0,0065
0,0025
0,0021 0,0047
0,0472 0,0635
0,0030 0,0045

5
0
0
0,0027
0
0
0,0056
0,0211
0,0039
0,0006
0,0196
0
0,0064
0,0046
0,0025
0,067
0,0048

6
0
0,0029
0
0,0009
0,0003
0,0045
0
0,0172
0,0059
0,0062
0,0022
0
0,0052
0,0091
0,0058
0,0001
0,0603
0,0038

Total

Rataan

0
0,0038
0,0018
0,0076
0,0034
0,0117
0,0041
0,0151
0,0393
0,0357
0,0421
0,0471
0,0112
0,0593
0
0,004
0,0143
0,0215
0,0122
0,0175
0,0062
0,3579

0,0000
0,0010
0,0005
0,0015
0,0009
0,0023
0,0008
0,0030
0,0098
0,0089
0,0140
0,0079
0,0028
0,0119
0,0000
0,0013
0,0048
0,0072
0,0031
0,0044
0,0021
0,0041

Universitas Sumatera Utara

52

Lampiran 12. Data Transformasi Bobot Kering Kalus √
Perlakuan
E1Z0
E1Z1
E1Z2
E1Z3
E1Z4
E1Z5
E1Z6
E2Z0
E2Z1
E2Z2
E2Z3
E2Z4
E2Z5
E2Z6
E3Z0
E3Z1
E3Z2
E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6
Total
Rataan

Ulangan
1
2
3
4
0,7071 0,7071 0,7071
0,7072
0,7077
0,7078 0,7071 0,7077
0,7078 0,7092 0,7071
0,7071 0,7071 0,7093
0,7080 0,7094
0,7090
0,7080 0,7073 0,7080 0,7081
0,7082 0,7127 0,7071 0,7111
0,7137 0,7122
0,7183 0,7080 0,7160
0,7085 0,7204
0,7247 0,7151 0,7075 0,7071
0,7111 0,7091
0,7171 0,7113 0,7104 0,7176
0,7071
0,7071 0,7071
0,7071 0,7099
0,7090
0,7113
0,7117
0,7093 0,7085 0,7089
0,7106
0,7086 0,7104
0,7096
8,5263 10,6499 11,3469 9,9442
0,7105 0,7100 0,7092 0,7103

Total Rataan
5
6
0,7071 0,7071 3,5355 0,7071
0,7071 0,7092 2,8311 0,7078
0,7071 2,8297 0,7074
0,7090 0,7077 3,5409 0,7082
0,7073 2,8308 0,7077
0,7071 0,7103 3,5438 0,7088
0,7071
3,5384 0,7077
0,7071 3,5462 0,7092
0,7111 0,7192 2,8561 0,7140
0,7113 2,8535 0,7134
0,7219
2,1508 0,7169
0,7099 0,7115 4,2757 0,7126
0,7075 0,7087 2,8363 0,7091
0,7208
3,5772 0,7154
0,7071 2,8284 0,7071
0,7071
2,1241 0,7080
0,7116 0,7108 2,1314 0,7105
0,7135 2,1365 0,7122
0,7104
2,8370 0,7093
0,7112 2,8408 0,7102
0,7089 0,7072 2,1257 0,7086
9,9465 11,3562 61,7700
0,7105 0,7098
0,7100

Lampiran 13. Daftar Sidik Ragam Bobot Kering Kalus
SK
E
Z
EZ
GALAT
TOTAL
FK
KK

db
2
6
12
67
87

JK
0,00040
0,00011
0,00016
0,00058
0,00125

KT
0,00020
0,00002
0,00001
0,00001

F.HIT
23,26
2,19
1,60

F.05
3,13
2,24
1,90

F.01
4,94
3,08
2,46

Ket
**
tn
tn

43,86
0,41

Universitas Sumatera Utara

53

Lampiran 14. Foto Penelitian

E1Z0

E1Z1

E1Z2

E1Z3

E1Z4

E1Z5

Universitas Sumatera Utara

54

E1Z6

E2Z0

E2Z1

E2Z2

E2Z3

E2Z4

Universitas Sumatera Utara

55

E2Z5

E2Z6

E3Z0

E3Z1

E3Z2

E3Z3

Universitas Sumatera Utara

56

E3Z4

E3Z5

E3Z6

Universitas Sumatera Utara

57

Lampiran 15. Foto Analisis Kualitatif Metabolit Sekunder Flavonoid dan
Saponin
Keterangan:
Sebelah kiri Flavonoid
Sebelah kanan Saponin

: merah magenta
: adanya busa

E1Z1

E1Z2

E1Z3

E1Z4

E1Z5

E1Z6

Universitas Sumatera Utara

58

E2Z0

E2Z1

E2Z2

E2Z3

E2Z4

E2Z5

E2Z6

Universitas Sumatera Utara

59

E3Z1

E3Z2

E3Z3

E3Z4

E3Z5

E3Z6

Universitas Sumatera Utara

40

DAFTAR PUSTAKA
Arsyad, H. 2015. Isolasi dan Skrining Aktinomisetes Dari Akar Tanaman
Binahong (Anredera cordifolia) Sebagai Penghasil Antimikroba.
Universitas Hasanuddin. Makassar.
Astuti, S. M. 2012. Skrining Fitokimia dan Uji Aktifitas Antibiotika Ekstrak
Etanol Daun, Batang, Bunga dan Umbi Tanaman Binahong (Anredera
cordifolia (Ten) Steenis). Universiti Malaysia Pahang. Pahang.
Baud G. S., M. S. Sangi, dan H. S. J. Koleangan. 2014. Analisis Senyawa
Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman
Patah Tulang (Euphorbia tirucalli L.) Dengan Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT). Universitas Sam Ratulangi. Manado.
Dodds, J. H. and Roberts, L W. 1995. Experiments in Tissue Culture. Third
Edition. Cambridge University Press. Cambridge.
Gangga, E., H. Asriani, dan L. Novita. 2007. Analisis Pendahuluan Metabolit
Sekunder dari Kalus Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.]
Boerl.). J. Ilmu Kefarmasian Indonesia 1(5):17-22.
Gunawan, L. W. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Bogor: Pusat Antar
Universitas Bioteknologi Tanaman Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Harborne, J.B. 2006. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Edisi IV. Kokasih P. dan I. Soediro. (Penterjemah). Institut
Teknologi Bandung. Bandung.
Hatta, M., M. Hayati dan U.Irayani. 2008. Pengaruh IAA dan BAP Terhadap
Pertumbuhan Tanaman Nilam (Pogestemon cablin Benth) In Vitro. J.
Floratek 3: 56 – 60.
Hendaryono, D. A. dan Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan Pengenalan dan
Petunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif-Modern. Kanisius.
Yogyakarta.
Ignacimuthu, S. 1997. Plant Biotechnology. Science Publisher, Inc. New York.
Julianti, M. 2008. Binahong, Tanaman Multikhasiat. Bandung Raya: 17: 25.
Khairunisa, R. 2009. Penggunaan Beberapa Jenis Sitokinin Terhadap Multiplikasi
Tunas Dan Pertumbuhan Binahong (Anredera cordifolia [Ten.] Steenis)
Secara In vitro. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Leovici, H., D. Kastono, dan E. T. S. Putra. 2014. Pengaruh Macam dan
Konsentrasi Bahan Organik Sumber Zat Pengatur Tumbuh Alami
Terhadap Pertumbuhan Awal Tebu (Saccharum officinarum L.). Vegetalik
3(1): 22-34.

Universitas Sumatera Utara

41

Lestari, E. G. 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman
melalui Kultur Jaringan. J. Biogen 7 (1):63-68.
Lubis, R. S. 2015. Isolasi Senyawa Flavonoida Dari Bunga Tumbuhan Mawar
Putih (Rosa hybrida L.). Universitas Sumatera Utara, Medan.
Ma’rufah, D. 2008. Laporan Praktikum
Maret. Surakarta.

Kultur Jaringan. Universitas Sebelas

Manoi, F. 2009. Binahong (Anredera cordifolia) Sebagai Obat. Warta Penelitian
dan Pengembangan Tanaman Industri. Vol 15 No 1 April 2009.
BALITRO. Bogor.
Mardini, U. 2015. Pengaruh Kombinasi 2,4-D dan BAP Terhadap Induksi Kalus
Eksplan Daun dan Batang Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.)
Steenis) Secara In vitro. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Rachmawati, S. 2007. Studi Makroskopi dan Skrining Fitokimia Daun Binahong
(Anredera cordifolia). Universitas Negeri Airlangga. Surabaya.
Rahmawati, Fahmi dan S. H. Bintari. 2014. Studi Aktivitas Antibakteri Sari Daun
Binahong (Anredera cordifolia) Terhadap Pertumbuhan Bacillus cereus
dan Salmonella enteritidis. Unnes J Life Sci 3(2).
Radji M. 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam Pengembangan
Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian. 2 (3): 113-126.
Rahayu, B. Solichatun, dan E. Anggarwulan. 2003. Pengaruh Asam 2,4
Diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap Pembentukan dan Pertumbuhan
Kalus serta Kandungan Flavonoid Kultur Kalus Acalypha indica L..
Biofarmasi 1(1).
Robbiani, D., T. Nurhidayati, dan N. Jadid. 2010. Pengaruh Kombinasi
Naphthalene Acetic Acid (NAA) dan Kinetin Pada Kultur In vitro Eksplan
Daun Tembakau (Nicotiana tabacum L. var. Prancak 95). Institut
Teknologi Sepuluh Nopember. Surabaya.
Sari, Novita, E. Ratnasari, dan Isnawati. 2013. Pengaruh Penambahan Berbagai
Konsentrasi 2,4-Dikhlorofenoksiasetat (2,4-D) dan 6-Bensil Aminopurin
(BAP) pada Media MS terhadap Tekstur dan Warna Kalus Eksplan Batang
Jati (Tectona grandis Linn. F.) JUL. LenteraBio 2(1):70.
Selawa W., M. R. J. Runtuwene, G. Citraningtyas. 2013. Kandungan Flavonoid
dan Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun Binahong
(Anredera cordifolia (Ten.)Steenis.). J. Ilmu Farmasi 2(1):1-6.
Sugiyarto, L. 2012. Pengenalan Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan,
Pembuatan Media dan Metode Sterilisasi. Universitas Negeri Yogyakarta.
Yogyakarta.

Universitas Sumatera Utara

42

Sugiyarto L. dan P. C. Kuswandi. 2014. Induksi Kalus Daun Binahong (Anredera
Cordifolia L.) Dalam Upaya Pengembangan Tanaman Obat Tradisional. J.
Sains Dasar 3(1):56 – 60.
Sumardi, 1996. Penggunaan Arang Aktif Pada Beberapa Komposisi NAA dan
BAP dalam Kultur Durian (Durio zibethinus Murr.) Secara In Vitro.
Universitas Andalas. Padang.
Suseno, 2013. Kandungan binahong. http : www.jurnal.stkipgarut.ac.id. Diakses
Tanggal 29 Maret 2016.
Suyitno, A. dan V. Henuhili. 2011. Induksi Kalus dan Organogenesis Tanaman
Ngukilo (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.) Dengan 2,4 D dan
Kombinasi NAA - Air Kelapa Secara In vitro. Universitas Negeri
Yogyakarta. Yogyakarta.
Tjitrosoepomo, G. 1999. Morfologi Tumbuhan. Gadjah Mada University Press.
Yogyakarta.
Triana, F. 2015. Induksi Kalus Pada Eksplan Daun Tanaman Binahong (Anredera
Cordifolia) Secara In vitro Dengan Konsentrasi 2,4-D Dan BAP yang
Berbeda. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Utami, P. dan D. E. Puspaningtyas. 2013. The Miracle Of Herb (Daun, Umbi,
Buah, dan Batang Tanaman Ajaib Penakluk Aneka Penyakit). PT.
AgroMedia Pustaka. Jakarta.
Verpoorte, R. and A.W. Alfermann. 2000. Metabolic Engineering Of Plant
Secondary Metabolism. Springer. 1-3pp
Wahyudi, A. 2011. Zat Aktif Pada Binahong. Pusat Penelitian dan Pengembangan
Tanaman Perkebunan. Sukabumi.
Wattimena, G. A., L. W. Gunawan, NA Mattjik, E Syamsudin, N. M. A. Wendi,
dan A. Ernawati. 1992. Bioteknologi Tanaman. Laboratorium Kultur
Jaringan Tanaman Pusat Antar Universitas Bioteknologi Insititut Pertanian
Bogor. Bogor.
Wardani, D. P, Solichatun, A. D. Setyawan. 2004. Pertumbuhan dan Produksi
Saponin Kultur Kalus Talinum paniculatum Gaertn. pada Variasi
Penambahan Asam 2,4 Diklorofenoksi Asetat (2,4-D) dan Kinetin.
Biofarmasi 2 (1): 35-43.
Wardani, N. E. K., 2015. Pengaruh Pemberian Daun Binahong Terhadap Kualitas
Luka Perineum Pada Ibu Nifas di Rumah Sakit Syarifah Ambarni Rato
Ebuh Bangkalan. Salemba Medika. Jakarta.
Widyawati, G. 2010. Pengaruh Variasi Konsentrasi NAA dan BAP Terhadap
Induksi Kalus Jarak Pagar. Tesis. Universitas Sebelah Maret. Surakarta.

Universitas Sumatera Utara

17

BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan UPT, Benih
Induk Hortikultura Gedung Johor, Dinas Pertanian, Sumatera Utara dan
Laboratorium Bahan Alam, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sumatera Utara. Penelitian ini dimulai pada bulan Juli sampai dengan
September 2016.
Bahan dan Alat Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun, batang,
dan tangkai daun binahong hijau yang masih muda sebagai eksplan, larutan stok
media MS (Murashige and Skoog) sebagai media, 2,4 D dan BAP sebagai zat
pengatur tumbuh, agar, aquadest steril, alkohol, NaOH 1 N, HCl 1 N, label,
aluminium foil, detergen, air, dithane, klorox 10%, tween, kertas saring, HCl
pekat, HCl 2 N, serbuk Mg, metanol 80%, dan bahan-bahan lainnya yang
mendukung penelitian ini.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Laminar Air Flow
Cabinet (LAFC), autoclave, botol kultur, cawan petri, gelas ukur, erlenmeyer,
dissecting set, timbangan analitik, rak kultur, hot plate, magnetic stirer, lampu
bunsen, pH meter, oven, saringan dan alat-alat lainnya yang mendukung
penelitian ini.
Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap
(RAL) Faktorial, yaitu:
Faktor 1: Jenis Eksplan

Universitas Sumatera Utara

18

E1 : Daun
E2 : Batang
E3 : Tangkai daun
Faktor 2: Zat Pengatur Tumbuh
Z0 : MS
Z1 : MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP
Z2 : MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP
Z3 : MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP
Z4 : MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP
Z5 : MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP
Z6 : MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP
Sehingga diperoleh kombinasi perlakuan, yaitu:
E1Z0

E2Z0

E3Z0

E1Z1

E2Z1

E3Z1

E1Z2

E2Z2

E3Z2

E1Z3

E2Z3

E3Z3

E1Z4

E2Z4

E3Z4

E1Z5

E2Z5

E3Z5

E1Z6

E2Z6

E3Z6

Diperoleh kombinasi perlakuan

: 21

Jumlah ulangan

:6

Jumlah eksplan tiap botol

:1

Jumlah seluruh eksplan

: 126

Jumlah sampel/botol

:1

Universitas Sumatera Utara

19

Jumlah sampel seluruhnya

: 126

Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan sidik ragam
berdasarkan model linier sebagai berikut:
Yijk = µ + αi + βj + (αβ )ij +

ijk

Dimana :
Yijk

: Hasil pengamatan pada ulangan ke-k yang mendapat perlakuan jenis
eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j

µ

: Nilai tengah

αi

: Efek jenis eksplan pada taraf ke-i

βj

: Efek zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j

(αβ)ij

: Interaksi antara jenis eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur tumbuh
pada taraf ke-j

ijk

: Galat dari perlakuan jenis eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur
tumbuh pada taraf ke-j pada ulangan ke-k.
Jika perlakuan berbeda nyata dalam sidik ragam maka dilanjutkan dengan

Uji Jarak Berganda Duncan (Duncan Multiple Range Test) pada α = 5%
(Steel and Torrie, 1995).

Universitas Sumatera Utara

20

PELAKSANAAN PENELITIAN
Sterilisasi Alat
Semua alat-alat glassware seperti botol kultur, cawan petri, gelas ukur,
erlenmeyer, dan dissecting-set yang akan digunakan untuk kultur dicuci dengan
detergen dan dibilas dengan air mengalir, selanjutnya dikeringkan. Kemudian alatalat dibungkus dan disterilkan dengan autoclave pada suhu 121oC dengan tekanan
17,5 psi selama 60 menit.
Pembuatan Media
Media yang digunakan adalah media MS padat dengan menggunakan zat
pengatur tumbuh yaitu 2,4 D dan BAP. Media MS yang digunakan sebanyak 1000
ml. Media tersebut ditambahkan 30 g sukrosa dan 7 g agar, dimasak diatas hot
plate, lalu diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer sebagai pengaduk sampai
larutan mendidih dan bening (larut dan homogen). Keasaman diukur dengan pH
meter sampai 5,6-5,8, untuk mengatur pH yaitu menaikkan atau menurunkan pH
dapat digunakan larutan NaOH dan HCl.
Media MS yang telah siap dimasukkan ke dalam botol kultur yang telah
disterilkan dan ditutup dengan aluminium foil. Kemudian media MS di sterilisasi
dengan tekanan 17,5 psi pada suhu 121°C selama 20 menit di autoclave. Setelah
proses sterilisasi selesai, media dimasukkan ke ruang kultur dan dimasukkan ke
Laminar Air Flow Cabinet (LAFC). Selanjutnya disimpan dalam ruang kultur
sebelum digunakan.
Persiapan Ruang Kultur
Seluruh permukaan LAFC sebelumnya di lap menggunakan alkohol 96%
lalu disterilkan dengan sinar Ultra Violet selama 1 jam sebelum proses penanaman

Universitas Sumatera Utara

21

dilakukan. Semua alat yang akan digunakan harus disemprot dengan alkohol 96%.
Hal ini dilakukan untuk menghindari terjadinya kontaminasi.
Sterilisasi Eksplan
Eksplan yang digunakan untuk menginduksi kalus diambil langsung dari
tanaman. Eksplan yang telah diambil dari lapangan kemudian dicuci
menggunakan detergen dan dibilas di bawah air bersih yang mengalir sebanyak 3
kali. Sterilisasi eksplan dilakukan dengan memberikan dithane 2 g/L sebagai
fungisida yang dicampurkan dengan air selama 30 menit, kemudian dibilas
dengan aquadest steril sebanyak 3 kali. Selanjutnya direndam dalam klorox 10%
selama 15 menit, lalu dibilas dengan aquades steril sebanyak 3 kali. Eksplan
kembali direndam dengan tween 20 selama 10 menit, dibilas lagi dengan
menggunakan aquades steril sebanyak 3 kali, lalu ditiriskan dengan menggunakan
kertas saring.
Penanaman Eksplan
Eksplan ditanam pada botol kultur yang sudah berisi media sebanyak
30 ml/botol kultur di LAFC yang telah disemprot alkohol. Eksplan yang telah
disterilisasi dikeluarkan dengan menggunakan pinset. Ukuran eksplan yang
digunakan adalah daun dengan ukuran 1x1 cm, batang dengan panjang 1 cm, dan
tangkai daun dengan panjang ±1 cm. Eksplan yang akan dikulturkan ke dalam
media tanam diletakkan di atas petridish steril dan telah dilapisi dengan kertas
plano. Kemudian eksplan ditanam ke dalam botol kultur sesuai dengan perlakuan
dengan menggunakan pinset. Setiap botol kultur terdiri dari 1 eksplan. Kemudian
botol kultur ditutup dengan aluminium foil. Kemudian botol kultur diletakkan di
rak kultur di bawah cahaya dan suhu yang telah ditetapkan.

Universitas Sumatera Utara

22

Pemeliharaan Kultur
Botol-botol yang telah berisi eksplan diletakkan pada rak kultur sesuai
dengan bagan penelitian di ruang kultur. Rak kultur disemprot dengan alkohol
96% setiap hari agar tidak terjadi kontaminasi. Suhu ruangan kultur diatur
±20-250C, dengan penyinaran lampu fluorencent (neon) dengan intensitas cahaya
2.000 lux.
Subkultur
Subkultur dilakukan setelah empat minggu setelah muncul kalus, Proses
perbanyakan dilakukan dengan memasukkan kalus ke dalam botol kultur pada
medium baru sesuai dengan perlakuan. Kegiatan penanaman dilakukan di LAFC
dan di bawah api Bunsen, kemudian diletakkan di rak kultur di bawah cahaya dan
ruangan memiliki air conditioner dengan suhu yang sesuai.
Panen
Panen kalus yang telah disubkulturkan dilakukan setelah enam minggu
masa inkubasi di ruang kultur.
Penimbangan bobot basah kalus (g)
Kalus yang telah dipanen diambil menggunakan spatula dan pinset dengan
hati-hati, kemudian ditimbang menggunakan timbangan analitik.
Pengeringan
Kalus yang telah ditimbang bobot basahnya dikeringkan pada suhu ruang
24o C sampai bobot kering konstan (3x24 jam).
Penimbangan bobot kering kalus (g)
Kalus yang telah dikering pada suhu ruang ditimbang menggunakan
timbangan analitik.

Universitas Sumatera Utara

23

Ekstraksi Kalus
Masing-masing sampel dimasukkan ke dalam gelas ukur dan diekstraksi
dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol. Gelas ukur ditutup dengan
plastik dan karet dan didiamkan selama ± 4 jam. Hasil maserasi disaring dan
menjadi stok ekstrak.
Deteksi Metabolit Sekunder
Uji Flavonoid
Uji flavonoid dilakukan dengan mengambil ekstrak dan dimasukkan ke
dalam gelas ukur. Kemudian ditambahkan 1 tetes HCl pekat dan bubuk Mg.
Uji Saponin
Uji saponin dilakukan dengan mengambil ekstrak, dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, kemudian ditambahkan aquadest dan dikocok, ditambahkan alkohol
96% dan dikocok, dan ditambahkan 1 tetes HCl 2 N.
Peubah Amatan
Persentase Terbentuk Kalus (%)
Persentase terbentuk kalus dihitung pada akhir penelitian dengan rumus:
Persentase terbentuk kalus = Jumlah kalus yang terbentuk
x 100 %
Jumlah eksplan seluruhnya (per perlakuan)
Waktu Muncul Kalus (HST)
Pengamatan dilakukan dengan mencatat hari saat kalus pertama kali
muncul. Kalus mulai muncul ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan berjejal
pada permukaan eksplan.
Warna kalus
Warna kalus dilihat dari ada atau tidaknya kemunculan warna yang
berbeda atau tidak dari kalus. Dilihat pada akhir percobaan secara visual.

Universitas Sumatera Utara

24

Tekstur Kalus
Ditentukan pada akhir penelitian apakah kalus yang terbentuk kalus
bertekstur kompak atau friable (remah).
Bobot Basah Kalus (g)
Diukur pada akhir penelitian dengan mengambil kalus dari botol kultur
dan ditimbang sebelum dikeringkan.
Bobot Kering Kalus (g)
Diukur pada akhir penelitan dengan menimbang kalus setelah dikeringkan.
Deteksi Metabolit Sekunder
Uji Flavonoid
Hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah magenta dalam
waktu 3 menit.
Uji Saponin
Uji positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil setinggi 1-10
cm selama tidak kurang dari 10 menit.

Universitas Sumatera Utara

25

HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Berdasarkan hasil analisis data yang dilakukan, diperoleh bahwa perlakuan
jenis eksplan memberikan pengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus,
bobot basah kalus, dan bobot kering kalus. Pada perlakuan komposisi zat pengatur
tumbuh memberikan pengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus.
Persentase Terbentuk Kalus (%)
Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter persentase
terbentuk kalus pada perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
(Lampiran 6) menunjukkan pengaruh yang nyata, sedangkan interaksi antara
perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh belum memberikan
pengaruh yang nyata terhadap persentase terbentuk kalus. Rataan persentase
terbentuk kalus dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi media dapat dilihat
pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
terhadap rataan persentase terbentuk kalus (%)
c)

Eksplan

b)

E1
E2
E3
Rataan

a)

ZPT
Z0
Z1
Z2
Z3
Z4
0
75
50
80
50
60
100
100
100
83,33
0
33,33
100
100
100
20,00d 69,44c 83,33b 93,33a 77,78b

Z5
80
100
100
93,33a

Z6
80
100
100
93,33a

Rataan

a)

59,29b
91,90a
76,19b

Keterangan: a) Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada baris dan kolom yang sama
menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%.
b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.
c) Perlakuan Z0: MS; Z1: MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z2: MS + 2 mg/L
2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z3: MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z4: MS + 1 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP; Z5: MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z6: MS + 3 mg/L 2,4
D + 1 mg/L BAP.

Tabel 1 memperlihatkan persentase terbentuk kalus tertinggi pada
perlakuan jenis eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 91,90
dan terendah pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 59,29. Perlakuan jenis

Universitas Sumatera Utara

26

eksplan dengan perlakuan E1 dan E3 berbeda nyata dengan perlakuan E2. Untuk
perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh yang berbeda memperlihatkan
persentase terbentuk kalus tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4
D + 0,5 mg/L BAP), Z5 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 1mg/L BAP), dan Z6 (MS + 3
mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP) dengan rataan 93,33, sedangkan terendah pada
perlakuan Z0 (MS) dengan rataan 20,00. Komposisi zat pengatur tumbuh Z3, Z5
dan Z6 berbeda nyata terhadap perlakuan Z0, Z1, Z2 dan Z4.
Gambar eksplan membentuk kalus pada perlakuan dapat dilihat pada
gambar 5, 6, dan gambar 7

Gambar 5. Daun

Gambar 6. Batang

Gambar 7. Tangkai

Waktu muncul Kalus (HST)
Hasil pengamatan terhadap parameter waktu muncul kalus pada perlakuan
komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 7). Rataan waktu muncul kalus dari
perlakuan jenis eksplan dan komposisi media dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
terhadap rataan lama muncul kalus (hari setelah kultur / HST)
ZPTb)
a)
Eksplan
Rataan
Z0
Z1
Z2
Z3
Z4
Z5
Z6
E1
10,67 11,50 13,25 12,50 12,00 10,50
11,74
E2
10,00 6,25
6,75 7,00
7,20
6,75
7,20
7,31
E3
8,00
7,33 7,00
9,00
9,00
9,67
8,33
10,00 8,31
8,53 9,08
9,57
9,25
9,12
Rataan
Keterangan: a) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.
b) Perlakuan Z0: MS; Z1: MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z2: MS + 2 mg/L
2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z3: MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z4: MS + 1 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP; Z5: MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z6: MS + 3 mg/L 2,4
D + 1 mg/L BAP.

Universitas Sumatera Utara

27

Warna Kalus
Warna kalus yang terbentuk dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi
zat pengatur tumbuh adalah putih kecoklatan.
Tekstur Kalus
Hasil pengamatan terhadap parameter tekstur kalus pada perlakuan jenis
eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh menunjukkan bahwa tekstur kalus
pada semua perlakuan bertekstur remah atau friable.
Bobot Basah Kalus (g)
Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter berat basah kalus
pada perlakuan jenis eksplan (Lampiran 10) menunjukkan pengaruh yang nyata,
tetapi belum memberikan pengaruh yang nyata pada komposisi zat pengatur
tumbuh begitu pula dengan interaksi antara perlakuan jenis eksplan dengan
komposisi zat pengatur tumbuh. Rataan bobot basah kalus dari perlakuan jenis
eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
terhadap rataan bobot basah kalus (g)
ZPTc)
Eksplanb)
Rataana)
Z0
Z1
Z2
Z3
Z4
Z5
Z6
E1
0,000 0,004 0,001 0,003 0,003 0,004 0,002
0,002c
E2
0,024 0,088 0,075 0,075 0,071 0,061 0,095
0,070a
E3
0,000 0,006 0,019 0,047 0,010 0,028 0,013
0,017b
a)
0,008 0,032 0,031 0,041 0,028 0,031 0,037
Rataan
Keterangan: a) Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada baris dan kolom yang sama
menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%.
b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.
c) Perlakuan Z0: MS; Z1: MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z2: MS + 2 mg/L
2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z3: MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z4: MS + 1 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP; Z5: MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z6: MS + 3 mg/L 2,4
D + 1 mg/L BAP.

Tabel 3 memperlihatkan bobot basah kalus tertinggi pada perlakuan jenis
eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 0,070 g dan terendah

Universitas Sumatera Utara

28

pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 0,002 g. Perlakuan jenis eksplan dengan
perlakuan E1, E2, dan E3 memberikan pengaruh saling berbeda nyata. Untuk
perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh yang berbeda memperlihatkan bobot
basah kalus tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L
BAP) dengan rataan 0,041 g, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan
rataan 0,008 g.
Bobot Kering Kalus (g)
Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter bobot kering kalus
pada perlakuan jenis eksplan (Lampiran 15) menunjukkan pengaruh yang nyata,
tetapi belum memberikan pengaruh yang nyata pada komposisi zat pengatur
tumbuh serta pada interaksi antara perlakuan jenis eksplan dengan komposisi zat
pengatur tumbuh. Rataan bobot kering kalus dari perlakuan jenis eksplan dan
komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Pengaruh perlakuan jenis eksplan
terhadap bobot kering kalus (g)
ZPTc)
b)
Eksplan
Z0
Z1
Z2
Z3
E1
0,000 0,001 0,001 0,002
E2
0,003 0,010 0,009 0,014
E3
0,000 0,001 0,005 0,007
a)
0,001 0,004 0,005 0,008
Rataan

dan komposisi zat pengatur tumbuh

Z4
0,001
0,008
0,003
0,004

Z5
0,002
0,003
0,004
0,003

Z6
0,001
0,012
0,002
0,005

Rataana)
0,001c
0,008a
0,003b

Keterangan: a) Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada baris dan kolom yang sama
menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%.
b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.
c) Perlakuan Z0: MS; Z1: MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z2: MS + 2 mg/L
2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z3: MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z4: MS + 1 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP; Z5: MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z6: MS + 3 mg/L 2,4
D + 1 mg/L BAP.

Tabel 4 memperlihatkan bobot kering kalus tertinggi pada perlakuan jenis
eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 0,008 g dan terendah
pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 0,001 g. Perlakuan jenis eksplan dengan

Universitas Sumatera Utara

29

perlakuan E1, E2, dan E3 memberikan pengaruh saling berbeda nyata. Untuk
perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh memperlihatkan bobot kering kalus
tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP)
dengan rataan 0,008 g, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan
rataan 0,001 g.
Deteksi Metabolit Sekunder
Flavonoid
Hasil pengamatan terhadap parameter deteksi metabolit sekunder pada
perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 15)
menunjukkan flavonoid terdapat pada E2Z1 yaitu E2 (batang) dan Z1 (MS + 1
mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP) dan E2Z4 yaitu E2 (batang) dan Z4 (MS + 1 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP). Deteksi metabolit sekunder flavonoid dari perlakuan jenis
eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
terhadap deteksi metabolit sekunder flavonoid
Keterangan*
Perlakuan
Flavonoid
E1Z0
Kuning pudar
E1Z1
Putih
E1Z2
Merah pudar
E1Z3
Orange pudar
E1Z4
Merah pudar
E1Z5
Orange pudar
E1Z6
Bening
E2Z0
Merah magenta
E2Z1
+
Orange kemerahan
E2Z2
Orange kemerahan
E2Z3
Merah magenta
E2Z4
+
Orange
E2Z5
Orange kemerahan
E2Z6
E3Z0
Bening
E3Z1
Orange pudar
E3Z2
-

Universitas Sumatera Utara

30

E3Z3
E3Z4
E3Z5
E3Z6

-

Merah pudar
Orange pudar
Orange pudar
Orange pudar

Keterangan: *Flavonoid: dicirikan oleh warna merah magenta

Saponin
Hasil pengamatan terhadap parameter deteksi metabolit sekunder pada
perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 17)
menunjukkan saponin terdapat pada perlakuan E2Z2 yaitu E2 (batang) dan Z2
(MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP). Deteksi metabolit sekunder saponin dari
perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada
Tabel 6.
Tabel 6. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
terhadap deteksi metabolit sekunder saponin
Keterangan*
Perlakuan
Saponin
tidak berbusa
E1Z0
tidak berbusa
E1Z1
tidak berbusa
E1Z2
tidak berbusa
E1Z3
tidak berbusa
E1Z4
tidak berbusa
E1Z5
tidak berbusa
E1Z6
tidak berbusa
E2Z0
tidak berbusa
E2Z1
berbusa
E2Z2
+
tidak berbusa
E2Z3
tidak berbusa
E2Z4
tidak berbusa
E2Z5
tidak berbusa
E2Z6
tidak berbusa
E3Z0
tidak berbusa
E3Z1
tidak berbusa
E3Z2
tidak berbusa
E3Z3
tidak berbusa
E3Z4
tidak berbusa
E3Z5
tidak berbusa
E3Z6
Keterangan: *Saponin: dicirikan oleh adanya busa

Universitas Sumatera Utara

31

Pembahasan
Pengaruh Jenis Eksplan Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong
Berdasarkan hasil analisis data secara statistik diketahui bahwa perlakuan
jenis eksplan memberikan pengaruh yang nyata terhadap persentase terbentuk
kalus, bobot basah kalus, dan bobot kering kalus.
Pada peubah amatan persentase terbentuk kalus tertinggi pada perlakuan
jenis eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 91,90% dan
terendah pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 59,29%. Kalus ini dapat
terbentuk sesuai dengan teori totipotensi yang menyatakan bahwa setiap sel
mempunyai kemampuan untuk tumbuh menjadi individu baru jika berada pada
lingkungan yang sesuai. Menurut Sugiyarto (2012) menyatakan bahwa kondisi
lingkungan untuk kultur jaringan harus terkontrol, baik dari segi suhu,
kelembaban dan cahaya. Selain kondisi lingkungan yang terkontrol, suplai nutrisi
dan penambahan zat pengatur tumbuh juga sangat penting.
Bobot basah kalus tertinggi pada perlakuan jenis eksplan terdapat pada
perlakuan E2 (batang) dengan rataan 0,070 g dan terendah pada perlakuan E1
(daun) dengan rataan 0,002 g. Batang memiliki bobot basah kalus yang tinggi
diantara ketiga jenis eksplan. Hal ini dikarenakan adanya penyusun dari kalus
tersebut yang mudah menguap seperti air dan lebih banyak terdapat pada batang.
Hal ini didukung Rahayu et al (2003) tentang bobot basah kalus yang besar
dihasilkan karena kandungan air yang tinggi. Bobot basah yang dihasilkan sangat
tergantung pada kecepatan sel-sel tersebut membelah diri, memperbanyak diri,
dan dilanjutkan dengan membesarnya kalus.

Universitas Sumatera Utara

32

Selain didasarkan pada bobot basah, pertumbuhan kalus juga didasarkan
pada bobot keringnya. Bobot kering kalus tertinggi pada perlakuan jenis eksplan
terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 0,008 g dan terendah pada
perlakuan E1 (daun) dengan rataan 0,001 g. Kalus kering yang dihasilkan pada
masing-masing jenis eksplan berbeda satu sama lain.. Bobot kering kalus
mempunyai nilai rentang yang sangat berbeda dengan bobot basah kalus. Kalus
pada ekplan daun sangat sedikit, bahkan ada eksplan daun yang tidak
menghasilkan kalus, melainkan akar. Kondisi ekplan juga mempengaruhi
terbentuk kalus. Hal ini didukung oleh Suyitno dan Henuhili (2011) yang
menyatakan bahwa keberhasilan kultur jaringan tidak hanya tergantung pada
faktor lingkungan melainkan juga pada faktor endogen dari eksplan. Faktor
endogen meliputi kondisi eksplan seperti umur, keadaan fisiologis dan hormon,
jenis organ dan ukuran eksplan.
Pada penelitian ini diperoleh bahwa induksi kalus tanaman binahong dari
jenis eksplan daun, batang, dan tangkai daun menghasilkan kalus dengan warna
putih kecoklatan, namun setelah dilakukan subkultur, kalus berubah menjadi
coklat tua. Menurut Widyawati (2010), warna kalus yang bermacam-macam
diakibatkan oleh adanya pigmentasi cahaya dan asal eksplan. Pigmentasi bisa
merata keseluruh permukaan kalus atau hanya sebagian saja, bisa dilihat adanya
perbedaan warna dalam satu kalus.
Karakteristik pada setiap kalus berbeda-beda, terdapat kalus dengan
tekstur lembut (soft), dan remah (friable), keras dan kompak. Namun dari hasil
penelitian yang dilakukan diperoleh bahwa dalam induksi kalus tanaman binahong
dari jenis eksplan daun, batang, dan tangkai daun menghasilkan kalus dengan

Universitas Sumatera Utara

33

tekstur remah. Menurut Sugiyarto dan Kuswandi (2014), berdasarkan tekstur dan
komposisi selnya, kalus dapat dibedakan menjadi kalus yang kompak dan remah.
Kalus kompak mempunyai tekstur padat dan keras, yang tersusun dari sel-sel kecil
yang sangat rapat, sedangkan kalus remah mempunyai tekstur lunak dan tersusun
dari sel-sel dengan ruang antar sel yang banyak. Perbedaan struktur kalus
menimbulkan adanya perbedaan kemampuan memproduksi metabolit sekunder.
Pengaruh Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus
Tanaman Binahong
Berdasarkan hasil analisis data secara statistik diketahui bahwa perlakuan
zat pengatur tumbuh memberikan pengaruh yang nyata terhadap persentase
terbentuk kalus, namun belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap bobot
basah kalus dan bobot kering kalus.
Pada peubah amatan persentase terbentuk kalus tertinggi pada perlakuan
komposisi zat pengatur tumbuh terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D +
0,5 mg/L BAP), Z5 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 1mg/L BAP), dan Z6 (MS + 3 mg/L
2,4 D + 1 mg/L BAP) dengan rataan 93,33%, sedangkan terendah pada perlakuan
Z0 (MS) dengan rataan 20,00%. Terbentuknya kalus tersebut sangat dipengaruhi
oleh adanya auksin dan sitokinin. ZPT golongan auksin yang digunakan adalah
2,4 diklorofenoksi asetat (2,4D), sedangkan golongan ditokininnya adalah
Benzylaminopurin (BAP) atau Benzyladenine. Suyitno dan Henuhili (2011)
menyatakan bahwa auksin berperan merangsang pembelahan dan pembesaran sel,
pembentukan kalus dan akar, sedang sitokinin akan memacu pembentukan tunas.
ZPT berperan sebagai pengatur metabolisme, mitosis dan deferensiasi sel.
Induksi kalus dapat menghasilkan warna kalus yang berbeda-beda. Dari
hasil penelitian yang dilakukan diperoleh bahwa pada perlakuan komposisi zat

Universitas Sumatera Utara

34

pengatur tumbuh menghasilkan kalus dengan warna putih kecoklatan, namun
setelah dilakukan subkultur, kalus berubah menjadi coklat tua. Warna kalus yang
kecoklatan terjadi pada hampir semua perlakuan yang terbentuk kalus. Hal ini
serupa dengan penelitian Sugiyarto dan Kuswandi (2014) bahwa penampakan
kalus pada media 2,4-D (1 dan 2ppm), awalnya berwarna putih bening hingga
minggu ke-4, kemudian memasuki minggu ke-5 warna kalus berubah warnanya
menjadi coklat muda dan akhirnya kehitaman setelah di subkultur. Hal ini
disebabkan adanya metabolisme senyawa fenol yang berlebihan pada jaringan
yang mulai terbentuk.
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan diperoleh bahwa pada
perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh dalam induksi kalus tanaman binahong
menghasilkan kalus dengan tekstur remah. Menurut Sugiyarto dan Kuswandi
(2014), karakteristik kalus sendiri tergantung pada komposisi media pengulturan,
khususnya zat pengatur tumbuh, dan jenis eksplan. Kalus yang remah juga dapat
diperoleh dengan cara melakukan subkultur berulang-ulang dengan media padat.
Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh
Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong
Interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur
tumbuh belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap semua peubah amatan
seperti persentase terbentuk kalus, bobot basah kalus dan bobot kering kalus.
Pada penelitian ini interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan zat
pengatur tumbuh belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap semua peubah
amatan Hal ini menunjukkan bahwa eksplan dan media dengan tambahan zat
pengatur tumbuh belum berpengaruh terhadap pembentukan kalus. Hal ini diduga
karena kondisi eksplan, perbandingan antara konsentrasi zat pengatur tumbuh

Universitas Sumatera Utara

35

auksin dan sitokinin pada media belum saling sesuai untuk mendukung
pertumbuhan kalus. Menurut Sumardi (1996), pertumbuhan kalus dipengaruhi
oleh beberapa faktor terutama yang berhubungan langsung dengan eksplan seperti
ketersediaan energi, tempat eksplan tumbuh dan kehadiran zat pengatur tumbuh
terutama auksin dan sitokinin dalam media kultur dengan keseimbangan tertentu.
Menurut Robbiani et al. (2010) menyatakan bahwa perbandingan
konsentrasi yang tepat antara sitokinin dan auksin akan memacu pertumbuhan
eksplan kultur in vitro. Oleh karena itu, konsentrasi zat pengatur tumbuh perlu
diperhatikan untuk keberhasilan teknik kultur jaringan. Dalam penelitian ini
waktu muncul kalus tercepat adalah 5 hari setelah kultur (HST) dan waktu muncul
kalus terlambat adalah 14 hari setelah kultur (HST). Umur muncul kalus tercepat
terdapat pada perlakuan jenis eksplan batang dalam media MS + 1 mg/L 2,4 D +
0,5 mg/L BAP. Hal ini dikarenakan auksin yang lebih tinggi dibandingkan
sitokinin mengakibatkan terbentuknya kalus pada eksplan. Hal ini didukung oleh
Dodds dan Roberts (1995) yang menyatakan bahwa organ yang berbeda
menunjukkan kecepatan pembelahan yang berbeda. Pada umumnya kalus muncul
pada bagian yang terluka.
Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh
Terhadap Metabolit Sekunder Tanaman Binahong
Kultur jaringan merupakan salah satu teknik yang dapat digunakan untuk
induksi kalus binahong untuk menghasilkan metabolit sekunder. Dari hasil
penelitian yang dilakukan diperoleh bahwa flavonoid terdapat pada perlakuan
E2Z1 yaitu E2 (batang) dan Z1 (MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP) dan E2Z4
yaitu E2 (batang) dan Z4 (MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP). Adanya flavonoid
tersebut ditandai dengan perubahan warna pada ektsrak etanol menjadi warna

Universitas Sumatera Utara

36

merah magenta. Hal ini didukung oleh Astuti (2012) yang menyatakan bahwa
sampel tumbuhan yang telah diekstrak ditambah beberapa tetes HCl pekat dan
bubuk Mg menghasilkan hasil positif terhadap flavonoid jika timbul warna merah
tua (magenta) dalam waktu 3 menit.
Pada penelitian ini diperoleh bahwa saponin terdapat pada perlakuan E2Z2
yaitu E2 (batang) dan Z2 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP). Adanya saponin
ini ditandai dengan adanya busa pada ekstrak yang telah dikocok kuat-kuat,
namun dalam penelitian ini hanya ada satu kombinasi perlakuan yang
mengandung saponin. Baud et al (2014) menyatakan bahwa ekstrak tumbuhan
yang dikocok kuat-kuat selama 10 detik lalu ditambahkan 1 tetes HCl 2 N akan
menghasilkan buih jika terdapat saponin di dalamnya.
Tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat memiliki zat-zat penting yang
sangat berperan dalam menentukan aktivitas kerja tumbuhan obat tersebut, salah
satunya yaitu flavonoid yang umumnya terdapat pada tumbuhan seperti tanaman
binahong. Secara empiris beragam khasiat binahong telah diakui, untuk mengatasi
beberapa penyakit seperti luka bakar, kanker, dan jantung. Pada penelitian Selawa
et al. (2013) diperoleh bahwa sampel segar dan kering daun binahong yang
diekstraksi dengan etanol serta dianalisis akan menunjukkan adanya flavonoid.
Flavonoid yang terkandung pada ekstrak daun binahong dari sampel segar dan
kering adalah 7,81 mg/kg dan 11,23 mg/kg.
Pada penelitian Astuti (2012) diperoleh bahwa hasil uji dari fitokimia
ekstrak daun, batang, bunga dan umbi tanaman binahong menunjukkan bahwa
terdapat senyawa bioaktif pada daun, batang, bunga dan umbi adalah
mengindikasikan adanya senyawa saponin. Senyawa saponin pada tanaman

Universitas Sumatera Utara

37

binahong menunjukkan reaksi kimia yang sangat kuat dan jelas. Pada tanaman
binahong kandungan metabolit sekunder yang tinggi adalah total saponin, total
fenol, dan total flavonoid. Kandungan senyawa ini mempunyai aktifitas sebagai
antioksidan dan antimikroba/antibiotik, sehingga binahong sangat baik dipakai
sebagai bahan baku untuk obat tradisional. Menurut Jeong dan Ji Wong (2005),
saponin pada akar tanaman dapat digunakan sebagai obat generik yang dapat
mengobati penyakit diabetes.
Ignacimuthu (1997) menyatakan bahwa kultur in vitro dapat digunakan
sebagai sarana penghasil senyawa metabolit sekunder. Hal ini disebabkan karena
metabolit sekunder merupakan hasil dari proses-proses biokimia yang terjadi pada
tubuh tanaman secara utuh, sedang proses-proses tersebut juga terjadi pada kultur
in vitro. Pada kultur in vitro, senyawa ini terdapat pada kalus atau bagian lain
seperti daun, akar, dan batang. Saponin banyak digunakan sebagai bahan baku
obat tradisional. Saponin ini merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder
yang terdapat dalam beberapa tanaman obat contohnya Talinum paniculatum
Gaertn. Pada penelitian Wardani et al. (2004) menunjukkan bahwa zat pengatur
tumbuh yang ditambahkan pada media kultur jaringan memberikan hasil yang
berbeda-beda. Penambahan 2,4-D dan kinetin dalam media dapat meningkatkan
kadar saponin kalus T. paniculatum secara in vitro. Penambahan 1,5 mg/L 2,4-D
dan 1,5 mg/L kinetin dalam media merupakan konsentrasi yang optimum untuk
meningkatkan kadar saponin kalus T. paniculatum secara in vitro.
Pada penelitian Gangga et al. (2007) diperoleh bahwa selain untuk
perbanyakan varietas tanaman, saat ini kultur jaringan diarahkan untuk beberapa
tujuan, antara lain untuk memproduksi metabolit sekunder (alkaloid, flavonoid,

Universitas Sumatera Utara

38

dll). Hasil uji penapisan fitokimia menunjukkan bahwa golongan metabolit
sekunder yang dihasilkan kalus mahkota dewa hasil kultur jaringan dengan
menggunakan media 2 ppm 2,4 D dan 1 ppm BAP mempunyai kesamaan dengan
metabolit sekunder yang dihasilkan oleh serbuk daun mahkota dewa yaitu
flavonoid.

Universitas Sumatera Utara

39

KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
1.

Eksplan batang merupakan eksplan yang terbaik untuk persentase terbentuk
kalus, bobot basah kalus, dan bobot kering kalus.

2.

Medium MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L
BAP, dan MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP merupakan medium yang
terbaik untuk persentase terbentuk kalus.

3.

Interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh
belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap semua peubah amatan.

4.

Flavonoid terdeteksi dalam kalus yang diperoleh dari eksplan batang dalam
media MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP dan MS + 1 mg/L 2,4 D + 1
mg/L BAP serta saponin terdeteksi dalam kalus yang diperoleh dari eksplan
batang dalam media MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP.

Saran
Sebaiknya dilakukan penelitian lanjutan dengan menggunakan selang atau
interval konsentrasi zat pengatur tumbuh yang lebih sesuai untuk menghasilkan
kalus yang lebih banyak sehingga cukup untuk melakukan skrining fitokimia
metabolit sekunder.

Universitas Sumatera Utara

5

TINJAUAN PUSTAKA
Botani Tanaman
Menurut Tjitrosoepomo (1999) klasifikasi tanaman binahong adalah
sebagai berikut Kingdom : Plantae ; Sub kingdom : Tracheobionta; Superdivisio :
Spermatophyta; Divisio : Angiospermae; Kelas : Magnoliopsida Dicotyledoneae;
Subkelas : Hamamelidae; Ordo : Caryophyllales; Familia : Basellaceae; Genus :
Anredera; Species : Anredera cordifolia (Ten) Steenis.

Gambar 1. Akar binahong
Tanaman binahong memilki akar tunggang yang berdaging lunak dan
berwarna coklat kotor (Manoi, 2009).