Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet untuk Estimasi Kadar Flavonoid Total Ekstrak Meniran.

SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF ULTRAVIOLET
UNTUK ESTIMASI KADAR FLAVONOID TOTAL
EKSTRAK MENIRAN

YUDI PRAYUDI HERDIANA

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2007

ABSTRAK
YUDI PRAYUDI HERDIANA. Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet untuk Estimasi
Kadar Flavonoid Total Ekstrak Meniran. Dibimbing oleh LATIFAH KOSIM
DARUSMAN dan MOHAMAD RAFI.
Flavonoid merupakan salah satu golongan senyawa mayor aktif yang terdapat dalam
meniran (Phyllanthus niruri L) dan banyak digunakan sebagai antioksidan,
imunostimulan, antiinflamasi, dan sebagainya. Dalam rangka kendali mutu produk obat
herbal meniran dan penjaminan khasiatnya, maka diperlukan nilai kadar flavonoid total
sebagai penanda golongan senyawa aktif pada meniran. Spektrofotometri derivatif

ultraviolet (SDUV) telah dikembangkan dalam penelitian ini untuk menentukan kadar
flavonoid total dari ekstrak meniran tanpa proses isolasi dan penambahan reagen
pembentuk warna. Metode ini dilakukan berdasarkan pengukuran jarak puncak dari
baseline (Dz) pada spektrum UV derivat ke-3 di panjang gelombang 356 nm dengan
kondisi optimum kecepatan penyapuan 200 nm/menit, orde penghalusan 3, dan jumlah
jendela 91. Estimasi kadar flavonoid total yang diperoleh dari metode SDUV sebesar
1.85 %b/b dengan kurva kalibrasi memiliki koefisien korelasi sebesar 0.9982. Selain itu
ditentukan pula kadar flavonoid total menggunakan metode referensi, yaitu metode AlCl3
dan diperoleh kadarnya sebesar 2.10 %b/b dengan kurva kalibrasi memiliki koefisien
korelasi sebesar 0.9987. Uji statistik antara metode SDUV dengan metode AlCl3
memperlihatkan hasil uji F yang tidak berbeda nyata dan uji t memperlihatkan hasil yang
berbeda nyata.

ABSTRACT
YUDI PRAYUDI HERDIANA. Ultraviolet Derivative Spectrophotometry for Estimation
of Total Flavonoid Content in Meniran Extract. Supervised by LATIFAH KOSIM
DARUSMAN and MOHAMAD RAFI.
Flavonoids is one of the major active constituent in meniran (Phyllanthus niruri L)
and has been widely used as antioxidant, immunostimulant, antiinflamatory agent, etc.
For the quality control of meniran as herbal medicine and to guarantee its effect, total

flavonoid content as an active compound in meniran is needed. In this study,
ultraviolet derivative spectrophotometry (UVDS) was developed to estimate total
flavonoids content in meniran extract without prior isolation and addition of chromogenic
reagent. This method was based on measurement of the distance of peak from the
baseline (Dz) of third derivative spectra at wavelength 356 nm with optimum parameter
such as scan speed 200 nm/minutes, smoothing order 3, and number of point window 91.
The estimated total flavonoids content obtained from UVDS method was 1.85% w/w with
linearity of the calibration curve showed correlation coefficient of 0.9982 as evaluated by
the least square regression method. The total flavonoids content obtained using AlCl3
method as reference methods was 2.10% w/w with linearity of the calibration curve
showed correlation coefficient of 0.9987. Statistical test between UVDS and AlCl3
method showed no significant difference in F-test at 95% confidence level while t-test
showed significant difference at 95% confidence level.

SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF ULTRAVIOLET
UNTUK ESTIMASI KADAR FLAVONOID TOTAL
EKSTRAK MENIRAN

YUDI PRAYUDI HERDIANA

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2007

Judul Skripsi
Nama
NIM

: Spektrofotometri derivatif ultraviolet untuk estimasi kadar flavonoid
total ekstrak meniran
: Yudi Prayudi Herdiana
: G44202050

Menyetujui:

Pembimbing I,

Pembimbing II,

Prof. Dr. Latifah K. Darusman, M.S.
NIP 130536681

Mohamad Rafi, S.Si.
NIP 132321454

Mengetahui:
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

Prof. Dr. Ir. Yonny Koesmaryono, M.S.
NIP 131473999

Tanggal Lulus:

PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala karunia-Nya,
sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Tema yang dipilih dalam penelitian yang
dilaksanakan sejak bulan September 2006 sampai Mei 2007 ini adalah Spektrofotometri
Derivatif Ultraviolet untuk Estimasi Kadar Flavonoid Total Ekstrak Meniran.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Prof. Dr. Ir. Latifah K. Darusman, MS
dan Mohamad Rafi, S.Si selaku pembimbing atas segala arahan serta perhatiannya selama
penelitian dan penulisan skripsi ini. Terima kasih kepada Pusat Studi Biofarmaka yang
telah membantu pendanaan penelitian ini melalui dana penelitian payung Pusat Studi
Biofarmaka. Terima kasih penulis ucapkan kepada kedua orang tua tercinta atas segala
kasih sayang dan didikan yang diberikan serta kepada semua kakak saya tercinta untuk
kebersamaan dan kasih sayangnya. Penghargaan dan terima kasih penulis sampaikan
kepada Om Eman, Mbak Salina, Zaim, Mas Heri, Ibu Nunuk, Ndi, Ibu Enung, Bapak
Ridwan, Bapak Manta, dan Bapak Kosasih atas bantuan dan semangat yang diberikan
kepada penulis.
Ungkapan terima kasih juga disampaikan untuk Tri, Ari, Maya, Away, Yogi, Obie,
Woro, Henny, Miranti, Geril, Dias, Nita, Mirah, Boy, Echa dan teman-teman Kimia
angkatan 39 atas kebersamaan, semangat, bantuan, dan dorongannya.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Juli 2007

Yudi Prayudi Herdiana

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Garut pada tanggal 8 Agustus 1984 dari ayah Mohammad
Mahbub, BA dan ibu A. Siti Rodiah. Penulis merupakan putra kelima dari lima
bersaudara.
Tahun 2002 penulis lulus dari SMA Negeri 1 Leles dan pada tahun yang sama lulus
seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Penulis memilih
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten mata kuliah Spektroskopi
pada tahun ajaran 2005/2006, Kimia Analitik I pada tahun ajaran 2006/2007, Kimia
Analitik III pada tahun ajaran 2006/2007. Tahun 2004 penulis melaksanakan Praktik
Lapangan di PT Coca-Cola Bottling, Sumedang.

DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ............................................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................................ ix
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................................... ix
PENDAHULUAN ............................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA
Meniran .................................................................................................................... 1
Flavonoid ................................................................................................................. 2
Spektrofotometri Ultraviolet .................................................................................... 2
Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet (SDUV) ...................................................... 3
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat ........................................................................................................ 4
Metode Penelitian .................................................................................................... 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Fitokimia Flavonoid .......................................................................................... 6
Pengukuran Flavonoid Total dengan Metode AlCl3 ................................................ 6
Penentuan Kondisi Optimum SDUV ....................................................................... 6
Estimasi Kadar Flavonoid Total dengan Metode SDUV......................................... 7
Perbandingan Metode SDUV dengan MetodeAlCl3................................................ 8
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan .................................................................................................................. 8
Saran ........................................................................................................................ 8

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................................ 8
LAMPIRAN ..................................................................................................................... 11

DAFTAR TABEL
Halaman
1 Kadar flavonoid total sampel meniran menggunakan metode AlCl3 ............................ 6
2 Estimasi kadar flavonoid total sampel meniran menggunakan metode SDUV ............ 8
3 Hasil uji statistik metode SDUV dan AlCl3 .................................................................. 8

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Bentuk tanaman meniran .............................................................................................. 1
2 Rumus struktur umum flavonoid .................................................................................. 2
3 Instrumen spektrofotometer .......................................................................................... 3
4 Spektrum UV dan turunannya ...................................................................................... 3
5 Macam-macam amplitudo dalam SDUV ...................................................................... 4
6 Kurva standar kuersetin ................................................................................................ 6
7 Spektrum serapan standar kuersetin 25 ppm dan sampel setara 25 ppm flavonoid
total ............................................................................................................................... 6
8 Spektrum turunan ketiga (a) dan keempat (b) dari standar kuersetin dan sampel

meniran ......................................................................................................................... 7
9 Spektrum sampel dengan berbagai kecepatan penyapuan ............................................ 7

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ............................................................................................... 12
2 Penetapan kadar flavonoid total menggunakan metode AlCl3.................................... 13
3 Pemilihan orde turunan, penghalusan, dan jumlah jendela optimum ......................... 14
4 Perbandingan kecepatan penyapuan dan pengukuran sampel .................................... 14
5 Spektrum-spektrum untuk estimasi kadar flavonoid total pada kondisi optimum...... 16
6 Penentuan uji F dan uji t antara metode AlCl3 dengan SDUV ................................... 18

PENDAHULUAN
Industri farmasi di Indonesia telah dan
sedang
mengembangkan
obat
herbal
komersial dari ekstrak tanaman yang biasa
digunakan oleh masyarakat sebagai obat

tradisional (Naik et al. 2004). Agar terjamin
khasiatnya, maka diperlukan kontrol kualitas
yang efektif dan efisien terhadap obat herbal
yang dihasilkan tersebut. Salah satu kontrol
kualitas yang penting dilakukan adalah
penentuan kadar senyawa atau golongan
senyawa mayor aktif dalam obat herbal seperti
flavonoid total pada ekstrak meniran
(Phyllanthus niruri L). Meniran diketahui
mempunyai aktivitas antiinflamasi, diuretik,
dan
imunostimulan
sehingga
banyak
digunakan sebagai obat kanker, radang usus,
dan buang air berlebih serta meningkatkan
stamina. Selain itu meniran juga mempunyai
aktivitas antioksidan yang cukup tinggi
dengan IC50 sebesar 3.589 ppm menggunakan
metode DPPH (2,2-difenil-1-pikril-hidrazil)

(Herdiana et al. 2006).
Beberapa metode analisis kadar
flavonoid total yang biasa dilakukan pada
tumbuhan diantaranya adalah spektrofotometri
sinar tampak konvensional (Depkes RI 2000),
kromatografi gas (KG) (Bankova et al. 1992),
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)
(Oliveira et al. 2001), dan elektroforesis
kapiler (Arce et al. 1998; Dadakova et al.
2001). Metode KG, KCKT, dan elektroforesis
kapiler dapat memberikan hasil pengukuran
yang akurat tetapi membutuhkan peralatan
yang relatif mahal serta waktu analisis yang
relatif lama. Teknik spektrofotometri sinar
tampak konvensional dengan pewarna tertentu
lebih sering digunakan untuk analisis
flavonoid total karena lebih sederhana dan
lebih mudah penggunaannya. Kelemahan dari
teknik ini adalah tidak dapat mendeteksi
semua jenis flavonoid serta tidak dapat
digunakan dalam contoh dengan matriks yang
kompleks (Chang et al. 2002). Oleh karena
itu, diperlukan suatu metode analisis yang
lebih cepat, mudah, dan murah tanpa perlu
dilakukan isolasi senyawa sasaran untuk
estimasi kadar flavonoid total, yaitu metode
spektrofotometri derivatif ultraviolet (SDUV).
Metode tersebut kemudian dibandingkan
dengan metode yang biasa dilakukan untuk
menentukan kadar flavonoid total, yaitu
metode spektrofotometri sinar tampak
konvensional dengan pewarna AlCl3.
Teknik
SDUV
merupakan
pengembangan dari spektrofotometri UV
konvensional. Teknik ini digunakan untuk

penentuan jumlah senyawa kimia yang
memiliki matriks
yang kompleks dan tidak
membutuhkan teknik persiapan contoh seperti
isolasi senyawa sasaran. Selain itu metode
SDUV lebih mudah dilakukan dan memiliki
kelebihan antara lain dapat meningkatkan
pemisahan pita serapan dari spektrum yang
tumpang
tindih,
menentukan
panjang
gelombang pemisahan senyawa sasaran dari
spektrum yang kompleks, dan mengurangi
gangguan yang disebabkan penghamburan
dan serapan senyawa lain (Popovic et al.
2000). Tujuan penelitian ini adalah
mengembangkan teknik SDUV dalam
penggunaannya
untuk
estimasi
kadar
flavonoid total ekstrak meniran.

TINJAUAN PUSTAKA
Meniran
Meniran (Phyllanthus niruri L) adalah
tanaman semak yang memiliki tinggi antara
30-100 cm ini memiliki daun majemuk yang
berseling berbentuk bulat telur dengan ujung
tumpul dan pangkal membulat (Gambar 1).
Bunga berwarna putih menggantung dekat
tangkai anak daun dengan buah berbentuk
bulat berwarna hijau keunguan. Akar
tunggang dengan batang berdiameter 3 mm
berwarna hijau dan licin tak berambut. Di
Jawa tanaman ini disebut meniran tetapi
ditempat lain disebut gasau madungi
(Ternate), child pick a back (Inggris), kilanelli
(India) dan ye xia zhu (Cina).

Gambar 1 Bentuk tanaman meniran.
Tanaman yang biasa digunakan seluruh
bagiannya ini memiliki kandungan kimia
seperti saponin, flavonoid, garam kalium, dan
filantiona (Depkes 2001). Khasiat lain dari

tanaman ini adalah sebagai diuretik,
ekspektoran, dan banyak digunakan sebagai
obat haid teratur, batu ginjal, mulas serta sakit
kuning.
Flavonoid
Flavonoid merupakan suatu senyawa
yang temasuk dalam golongan polifenol yang
terdapat di dalam kebanyakan tumbuhan,
tersebar di dalam biji, kulit buah atau kulit,
daun, dan bunga. Kerangka dasar senyawa ini
meliputi dua cincin benzena yang berada di
sebelah cincin tiga karbon (Gambar 2).
Flavonoid dalam tumbuhan jarang ditemukan
dalam bentuk tunggal tetapi dalam bentuk
campuran. Flavonoid merupakan golongan
senyawa yang larut dalam air. Flavonoid
dalam tumbuhan terikat sebagai glikosida dan
aglikon. Oleh karena itu analisis flavonoid
lebih baik dengan memeriksa aglikon.
Penggolongan jenis flavonoid dalam jaringan
tumbuhan mula-mula didasarkan pada telaah
sifat kelarutan dan reaksi warna. Golongan
flavonoid, yaitu antosianin, proantosianin,
flavonol, flavon, glikoflavon, biflavonil,
kalkon, auron, flavonon, dan isoflavon.
Flavonoid mengandung sistem aromatik yang
terkonjugasi sehingga mununjukkan pita
serapan kuat pada daerah spektrum UV dan
spektrum tampak. Flavonoid dapat dipisahkan
dengan kromatografi (Harborne 1996).

Gambar 2 Rumus struktur umum flavonoid.
Efek flavonoid terhadap organisme
sangat banyak sehingga dapat menjelaskan
mengapa tumbuhan yang mengandung
flavonoid
dipakai
dalam
pengobatan
tradisional. Flavonoid telah banyak digunakan
dalam produk farmasi, kosmetik, dan
makanan, baik sebagai senyawa murni
maupun sediaan herbal (misalnya ekstrak)
dengan aktivitas biologis tertentu. Flavonoid
sering bertindak sebagai senyawa pereduksi
yang menghambat banyak reaksi oksidasi,
baik secara enzim maupun nonenzim. Selain
itu flavonoid juga bertindak sebagai
penampung radikal hidroksi dan superoksida
sehingga dapat melindungi lipid membran
terhadap reaksi yang merusak.

Aktivitas
antioksidannya
dapat
menjelaskan mengapa flavonoid tertentu
merupakan komponen aktif tumbuhan yang
digunakan secara tradisional untuk mengobati
gangguan fungsi hati (Robinson 1995).
Keadaan stres oksidatif (ketidakseimbangan
antara radikal bebas dan antioksidan)
membawa pada kerusakan oksidatif mulai dari
tingkat sel, jaringan hingga ke organ tubuh
menyebabkan terjadinya percepatan proses
penuaan dan munculnya penyakit (Sauriasari
2006). Selain dapat mencegah rusaknya sel
hidup dalam tubuh, antioksidan juga
mencegah terbentuknya peroksida dan
kerusakan dalam makanan seperti ketengikan
akibat teroksidasinya bahan pangan yang
banyak mengandung lemak (Hadisusilo et al.
1999). Menurut Achmad et al. (1990),
flavonoid mempunyai bioaktivitas sebagai
antialergi,
antihepatotoksik,
antitumor,
fitohormon, antioksidan, estrogenik, dan
insektisida.
Preparasi sampel untuk analisis kadar
flavonoid total menggunakan metode KCKT
adalah sampel harus diekstrak menggunakan
soklet dengan pelarut metanol selama lima
jam kemudian disaring. Sebagian filtrat lalu
diambil untuk dipisahkan menggunakan
kolom silika C18 yang dielusi dengan
metanol. Untuk analisis kuantitatif, filtrat
kemudian diukur menggunakan KCKT
dengan teknik isokratik dan dielusi
menggunakan metanol : air (7:3) pada laju
1 ml/menit dan deteksi pada 339 nm (Oliveira
et al. 2001).
Preparasi sampel menggunakan metode
elektroforesis kapiler dilakukan dengan
menghidrolisis sampel terlebih dahulu, yaitu
sampel dicampurkan dengan larutan asam
askorbat lalu ditambahkan metanol dan HCl.
Setelah itu larutan tersebut dipanaskan
selama dua jam (90oC). Larutan tersebut
setelah
dingin
kemudian
dinetralkan
menggunakan NaHCO3. Larutan asam
tungstofosfat kemudian ditambahkan pada
larutan tersebut lalu disaring menggunakan
saringan fibre glass. Kolom SPE (RP-18)
digunakan untuk mengisolasi kuersetin
dengan laju alir 15 ml/menit (sebelum kolom
tersebut dipakai harus dicuci menggunakan
metanol lalu dengan air) (Dadakova et al..
2001).
Spektrofotometri Ultraviolet
Spektrofotometri
adalah
metode
analisis zat berdasarkan interaksi materi
dengan radiasi elektromagnetik (Khopkar

1990). Dasar dari spektrofotometri UV-VIS
adalah absorpsi. Absorpsi dalam daerah
ultraviolet dapat menyebabkan eksitasi
elektron yang meliputi transisi elektron π, σ,
n, d, f, dan transfer muatan. Panjang
gelombang serapan merupakan perbedaan
ukuran tingkat-tingkat energi dari elektron
yang tereksitasi. Oleh karena itu puncak
absorpsi (λmaks) dapat dihubungkan dengan
jenis-jenis
ikatan
yang
ada
dalam
spesies. Sumber radiasi yang dipancarkan dan
seberapa besar radiasi yang diserap oleh
larutan harus memenuhi hukum Lambert
Beer. Hukum Lambert Beer menyatakan
bahwa fraksi penyerapan sinar tidak
bergantung pada intensitas sumber cahaya
tetapi sebanding dengan banyaknya molekul
yang menyerap (Sudjadi 1985). Dari hukum
Beer dapat diketahui hubungan antara
transmitan, tebal cuplikan, dan konsentrasi
adalah A = ε c b, dengan ε adalah absortivitas
molar, c adalah konsentrasi, dan b adalah tebal
sel.
Spektrofotometer
adalah
suatu
instrumen yang digunakan untuk mengukur
energi secara relatif jika energi tersebut
ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan
sebagai fungsi dari panjang gelombang.
Instrumen ini terdiri atas beberapa komponen
pokok, yaitu sumber radiasi, wadah sampel,
monokromator (prisma atau grating), dan
detektor (Gambar 3). Prinsip kerja alat
tersebut secara umum adalah sebagai berikut:
suatu berkas radiasi dilewatkan melalui
larutan dengan panjang gelombang tertentu
akan diserap (absorpsi) secara selektif dan
radiasi lainnya akan diteruskan (transmisi)
lalu ditangkap oleh detektor sebagai sinyal
listrik yang bisa diukur.
data yang
terbaca

sumber
cahaya

prisma/
grating

sampel

metode SDUV antara lain kemampuannya
dalam meningkatkan pemisahan pita serapan
dari spektrum yang tumpang tindih,
mendeteksi dan menentukan panjang
gelombang pemisahan senyawa sasaran dari
spektrum yang kompleks, dan mengurangi
gangguan yang disebabkan penghamburan
dan serapan senyawa lain (Popovic et al.
2000). Proses isolasi dan preparasi senyawa
aktif yang biasanya diperlukan untuk prosedur
analisis kualitatif dan kuantitatif di dalam
sistem yang kompleks dapat dihindari karena
karakteristik SDUV tersebut.
O’Haver (1979) menyatakan bahwa
SDUV
merupakan
suatu
pengukuran
spektrum yang berasal dari rata-rata
perubahan absorbans dengan panjang
gelombang.
Spektrofotometri
derivatif
dirumuskan sebagai berikut (Skujins 1986):

dA A 2 - A 1
=
λ 2 - λ1
dλ
dengan A adalah absorbans dan λ adalah
panjang gelombang (nm). Alur hubungan
antara dA/dλ terhadap nilai λ menghasilkan
alur spektrum turunan pertama. Nilai alur
spektrum turunan pertama digunakan untuk
menentukan d2A/dλ2 yang apabila dialurkan
terhadap λ maka akan menghasilkan alur
spektrum turunan kedua. Proses ini terus
berulang dengan semakin meningkatnya orde
turunan, untuk n turunan maka dibuat alur
hubungan antara dnA/dλn terhadap λ (Skujins
1986).
Absorbans

Absorbans

Derivatif 1

Derivatif 2

Derivatif 3

Derivatif 4

detektor

Gambar 3 Instrumen spektrofotometer.
Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet
(SDUV)
SDUV merupakan kombinasi dari
spektrofotometri ultraviolet dan kemometrik
yang memerlukan peralatan optik, elektronik,
dan metode matematika untuk menghasilkan
spektrum turunan (Owen 1996). Kelebihan

Gambar 4 Spektrum UV dan turunannya.
Gambar 4 memperlihatkan spektrum
UV dan turunannya. Spektrum turunan orde

pertama berawal dan berakhir dengan nilai
absorbans nol, bernilai nol pada λ yang sama
dengan λmaks orde nol serta mempunyai
puncak positif dan negatif. Hal inilah yang
menjadi karakteristik untuk spektrum turunan
ganjil seperti turunan ketiga, kelima, dan
seterusnya. Spektrum turunan orde kedua
mempunyai puncak negatif pada λ yang sama
dengan λmaks orde nol sedangkan turunan
keempat mempunyai puncak positif pada λ
yang sama dengan λmaks orde nol (Owen
1996).
Kemampuan
untuk
menemukan
puncak absorpsi pada orde turunan yang lebih
tinggi sangat ditentukan oleh rasio sinyal
dengan derau (S/N) pada data spektrum asli.
Hal yang tidak diinginkan adalah penurunan
S/N dengan semakin meningkatnya orde
turunan (Owen 1996). Dalam penurunan
spektrum
yang
terpenting
adalah
meminimalkan derau tanpa mengurangi
informasi yang ada. Proses penghalusan
spektra (smoothing) yang kemudian dilakukan
variasi jumlah jendela (number of point
window) digunakan untuk mengurangi
pengaruh derau tersebut (Popovic et al. 2000).
Namun proses penghalusan data yang terlalu
tinggi akan mengakibatkan penyimpangan
spektrum dengan menurunkan intensitas dan
pemisahan spektrum (Owen 1996).
Analisis kuantitatif spektrum turunan juga
menaati
hukum
Lambert-Beer
yang
dirumuskan sebagai berikut (Owen 1996):
Spektrum orde nol
:A=εbc
dA
dε
Turunan pertama
:
=
bc
dλ
dλ
n
n
d ε
d A
Turunan ke-n
: n =
n bc
dλ
dλ
dengan A adalah absorbans, λ adalah panjang
gelombang, ε adalah absortivitas molar,
c adalah konsentrasi, dan b adalah tebal
sel. Spektrum orde nol menunjukkan
konsentrasi
analat
sebanding
dengan
absorbans pada panjang gelombang tertentu
tetapi pada spektrum turunan konsentrasi
analat sebanding dengan amplitudo.

Gambar 5

Macam-macam amplitudo dalam
SDUV.

Gambar 5 memperlihatkan macam-macam
amplitudo dalam SDUV yaitu DL (amplitudo
puncak ke puncak yang panjang), Ds
(amplitudo puncak ke puncak yang pendek),
dan Dz (amplitudo dari garis nol). Kurva
kalibrasi diperoleh dengan memilih amplitudo
yang memberikan linearitas terbaik (Skujins
1986).
Metode
SDUV
telah
banyak
diaplikasikan untuk analisis kuantitatif
senyawa aktif dalam obat maupun sediaan
herbal seperti hidrokuinon (Garcia et al 2005),
losartan (Ansari et al. 2004), reserpin (Singh
et al. 2004; Rachmanti 2006), teofilin
(Agustina 2006), terfenadin (Yanti 2006),
yohimbin
(Astuti
2006),
flavonoid
total dalam tanaman dari Brazil (Rolim
et al. 2005), asetaminofen (Burns et al. 2005),
dan nordiazepam (Moustafa 2005).

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalah
sediaan herbal ekstrak meniran Pusat Studi
Biofarmaka sebagai sediaan farmasi yang
dianalisis,
standar
kuersetin,
etanol,
heksametilentetramina, aseton, HCl, etil
asetat, serbuk Mg, amil alkohol, AlCl3, asam
asetat glasial, metanol, dan akuades.
Alat-alat yang digunakan adalah neraca
analitik, spektrofotometer UV-Vis 2800
Hitachi, piranti lunak UV solution versi 2.0,
alat pemanas, rotarievaporator, dan alat-alat
kaca.
Metode Penelitian
Metode penelitian yang digunakan dalam
penelitian ini adalah metode eksperimental
yang terdiri atas uji fitokimia flavonoid,
tahap
pengukuran
flavonoid
total
menggunakan metode AlCl3 (Depkes 2000),
dan pengembangan metode analisis flavonoid
total menggunakan SDUV.
Uji Fitokimia Flavonoid
Analisis flavonoid dari ekstrak meniran
yang terdapat dalam kapsul dilakukan dengan
mengambil ekstrak lalu ditambahkan air
secukupnya dan dipanaskan selama lima
menit. Setelah itu ditambahkan serbuk Mg,
0.2 ml HCl pekat dan beberapa tetes amil
alkohol kemudian larutan dikocok dan
dibiarkan memisah. Flavonoid ditandai
dengan terbentuknya warna merah cokelat
pada lapisan amil alkohol.

Pengukuran Flavonoid Total
Metode AlCl3 (Depkes 2000)

dengan

Ekstrak ditimbang sebanyak 100 mg lalu
dimasukkan ke dalam labu alas bulat. Sistem
hidrolisis ditambahkan ke dalamnya, yaitu
1 ml larutan 0.5% b/v heksametilentetramina,
20 ml aseton, dan 20 ml larutan 25% HCl
dalam air. Hidrolisis dilakukan dengan
pemanasan sampai mendidih selama 30 menit.
Campuran hasil hidrolisis disaring ke dalam
labu takar 100 ml. Residu hidrolisis ditambah
20 ml aseton untuk dididihkan kembali
selama 10 menit. Penambahan aseton dan
pendidihan ini dilakukan sebanyak dua kali.
Filtrat dikumpulkan ke dalam labu takar.
Setelah labu takar dingin maka volume
ditepatkan sampai 100 ml dan dikocok hingga
tercampur sempurna. Filtrat hasil hidrolisis
dalam labu takar diambil sebanyak 20 ml,
dimasukkan ke dalam corong pisah dan
ditambahkan 20 ml akuades. Setelah itu
dipartisi dengan 15 ml etilasetat dan
dilanjutkan dengan 10 ml etilasetat sebanyak
dua kali. Fraksi etilasetat dikumpulkan ke
dalam labu takar 50 ml kemudian ditepatkan
dengan etilasetat sampai 50 ml. Prosedur ini
dilakukan sebanyak lima kali ulangan.
Pemeriksaan spektrofotometri diawali
dengan memindahkan 10 ml larutan fraksi
etilasetat ke dalam labu takar 25 ml kemudian
ditambahkan 2 ml larutan 2 g AlCl3 dalam
100 ml larutan asam asetat glasial 5% v/v
(dalam metanol). Larutan asam asetat glasial
5% v/v ditambahkan secukupnya sampai tepat
25 ml. Sebagai standar digunakan kuersetin
murni dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10
ppm kemudian diukur pada λmaks 370.8 nm.
Pengembangan Metode Analisis Flavonoid
Total dengan SDUV
Preparasi sampel dan larutan standar
untuk penentuan kondisi optimum
Sampel meniran dengan kadar
flavonoid totalnya telah diketahui dari metode
AlCl3 kemudian ditimbang dan dibuat
konsentrasinya setara 25 ppm flavonoid total.
Setelah itu sampel tersebut dimasukkan ke
dalam labu alas bulat. Sistem hidrolisis
ditambahkan ke dalamnya, yaitu 1 ml larutan
0.5% b/v heksametilentetramina, 20 ml
aseton, dan 20 ml larutan 25% HCl dalam air.
Hidrolisis dilakukan dengan pemanasan
sampai mendidih selama 30 menit. Campuran
hasil hidrolisis kemudian disaring. Residu
hidrolisis ditambah 20 ml aseton untuk
dididihkan kembali sebentar. Penambahan

aseton dan pendidihan ini dilakukan sebanyak
dua kali. Filtrat hasil penyaringan kemudian
digabungkan lalu diuapkan menggunakan
rotarievaporator
untuk
menghilangkan
pelarut aseton. Setelah pelarut asetonnya
hilang
hasilnya
kemudian
dilarutkan
menggunakan etanol lalu dimasukan ke dalam
labu takar setelah itu ditera menggunakan
etanol sampai 100 ml.
Larutan stok standar kuersetin 100 ppm
dibuat dengan cara ditimbang serbuk kuersetin
sebanyak 5 mg lalu dimasukkan ke dalam
gelas piala kemudian dilarutkan dengan etanol
setelah itu dimasukan ke dalam labu takar
50 ml lalu ditera menggunakan etanol.
Sebanyak 6.25 ml dari larutan tersebut
diambil untuk dimasukkan ke dalam labu
takar 25 ml, setelah itu ditera sampai 25 ml
menggunakan etanol.
Penentuan kondisi optimum SDUV
Parameter kondisi optimum yang
dikerjakan adalah kecepatan penyapuan (scan
speed), orde turunan (derivative order),
penghalusan (smoothing), dan jumlah jendela
(number of point window).
Larutan standar dan sampel ekstrak
meniran setara 25 ppm diukur serapannya
pada panjang gelombang 200-600 nm
menggunakan
spektrofotometer
UV-Vis
Hitachi 2800. Spektrum standar dan sampel
yang diperoleh digabungkan ke dalam satu
tampilan (overlay).
Parameter yang dilakukan untuk
optimasi adalah mencari kecepatan penyapuan
terbaik (100, 200, 400, dan 800 nm/menit)
yang diikuti dengan memasukan variasi orde
turunan 1, 2, dan 3, variabel penghalusan 2,
3, dan 4, serta jumlah jendela 7, 9, 11,...,99.
Tujuan dari optimasi ini adalah untuk
mendapatkan puncak spektrum standar dan
sampel meniran yang berhimpit.
Estimasi kadar flavonoid total dalam
sampel
Sampel meniran ditimbang untuk
dibuat larutan setara 15 ppm flavonoid total
yang diekspresikan sebagai kuersetin. Larutan
sampel diukur serapannya pada panjang
gelombang 200-600 nm. Kurva standar yang
dibuat, yaitu 5, 10, 15, 20, dan 25 ppm dengan
mengencerkan larutan stok standar 100 ppm.
Konsentrasi flavonoid total dalam sampel
ditentukan
dengan
memasukkan
nilai
amplitudo sampel ke dalam persamaan garis
kurva standar pada kondisi yang optimum.

Tabel 1 Kadar flavonoid total sampel meniran
menggunakan metode AlCl3

HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Fitokimia Flavonoid

Sampel
1
2
3
4
5
Rerata =
Batas galat =

Penelitian ini dimulai dengan melakukan
uji fitokimia flavonoid terlebih dahulu, yaitu
untuk mengetahui apakah sampel yang akan
digunakan tersebut terdapat flavonoid atau
tidak. Dari hasil uji tersebut terdapat lapisan
berwarna merah cokelat pada lapisan amil
alkohol. Hal ini menandakan bahwa sampel
meniran tersebut mengandung flavonoid.

Kadar flavonoid (%b/b)
2.16
2.20
2.05
2.09
2.01
2.10
0.10

Penentuan kondisi optimum SDUV
Pengukuran Flavonoid Total dengan
Metode AlCl3 (Depkes 2000)

Ab so rban s

Pengukuran flavonoid total ini dimulai
dengan melakukan hidrolisis terhadap sampel.
Hal ini bertujuan flavonoid dalam bentuk
glikosida (flavonoid yang masih terikat
dengan gugus gula) dapat terurai menjadi
flavonoid dalam bentuk aglikon (flavonoid
tunggal) karena analisis flavonoid akan lebih
baik jika berada dalam bentuk aglikonnya
(Harborne 1996).
Prinsip dari metode pewarnaan ini adalah
AlCl3 membentuk kompleks asam yang stabil
dengan C-4 gugus keto, lalu dengan C-3 atau
C-5 gugus hidroksil dari flavon dan flavonol.
Selain itu AlCl3 juga membentuk kompleks
asam yang labil dengan gugus ortodihidroksil
pada cincin A atau B dari flavonoid (Chang et
al. 2002) sehingga akan mempunyai serapan
maksimum pada panjang gelombang 370.8
nm.
Lampiran 2 memperlihatkan kenaikan
nilai absorbans seiring dengan semakin
tingginya konsentrasi standar. Persamaan
garis yang diperoleh adalah y = 0.0528 +
0.011x
dengan koefisien korelasi sebesar
0.9987 (Gambar 6). Kadar flavonoid total
yang didapatkan dari metode ini mempunyai
rerata sebesar 2.10 %b/b (Tabel 1).

y = 0,011x + 0,0528
0,2
R2 = 0,9974
0,15
0,1
0,05
0
0
5
10
Konsentrasi (ppm)

Gambar 6 Kurva standar kuersetin.

Serapan sampel pada orde nol tidak
dapat langsung digunakan untuk mengukur
kadar flavonoid totalnya. Hal ini dikarenakan
di dalam serapan sampel tersebut tidak
sepenuhnya merupakan komponen flavonoid
melainkan banyak senyawa lain seperti
alkaloid, tanin dan lain-lain yang dapat
mengakibatkan serapannya berbeda dengan
standar. Gambar 7 memperlihatkan walaupun
sampel tersebut diukur dalam keadaan setara
25 ppm flavonoid akan tetapi mempunyai
puncak serapan yang berbeda dengan standar
kuersetin 25 ppm.
Penentuan kondisi optimum yang meliputi
orde turunan, penghalusan, jumlah jendela dan
kecepatan penyapuan (nm/menit) ini adalah
untuk mencari keadaan standar dan sampel
yang memiliki konsentrasi sama dalam
keadaan berhimpit pada kisaran panjang
gelombang tertentu.
3 .0
2 .5
2 .0
1 .5
1 .0
0 .5
0 .0
200

Gambar 7

15

300

400

500

600

nm

Serapan standar kuersetin 25
ppm ( ) dan sampel setara 25
ppm flavonoid total (
).

Penghalusan dan jumlah jendela yang
optimum diperlukan untuk mengatasi efek
derau yang diakibatkan oleh matriks sampel
dengan semakin besarnya orde turunan.
Apabila orde turunan terlalu rendah, derau
sulit dibedakan dari analat di dalam spektrum
yang kasar sedangkan apabila terlalu tinggi,
maka dapat mengakibatkan berkurangnya
intensitas dan resolusi spektrum (Brereton
2003). Kondisi optimum orde turunan,
penghalusan dan jumlah jendela yang dipilih
adalah turunan 3, penghalusan 3 dan jumlah

jendela 91 pada panjang gelombang 356 nm
(Lampiran 3). Kondisi tersebut dipilih setelah
mendapatkan spektrum standar dan sampel
yang berhimpit (Gambar 8), lalu hasilnya
dibandingkan dari bentuk spektrum dan
linieritasnya yang paling tinggi. Panjang
gelombang yang dipilih tersebut untuk
mengukur amplitudo adalah pada 356 nm
karena
panjang
gelombang
tersebut
merupakan puncak yang menandakan
terjadinya serapan oleh komponen flavonoid
di dalam sampel.
0 .0 0 0 0 5

0 .0 0 0 0 0

-0 .0 0 0 0 5

200

300

400

500

600

nm

(a)
0 .0 0 0 1 0
0 .0 0 0 0 5
0 .0 0 0 0 0
-0 .0 0 0 0 5

200

300

400

500

600

nm

(b)
Standar kuersetin
Sampel meniran

Gambar 8

Spektrum turunan ketiga (a) dan
keempat (b) dari standar
kuersetin dan sampel meniran.

Perbandingan kecepatan penyapuan
antara 100, 200, 400, dan 800 nm/menit,
ternyata kecepatan 800 nm/menit terlihat
sangat berbeda bentuk spektrum yang
dihasilkannya sehingga tidak dipilih (Gambar
9). Berbeda dengan kecepatan 800 nm/menit,
ternyata kecepatan 100, 200, dan 400 terlihat
tidak berbeda antara satu dengan yang lain.
0.00006
0.00005
0.00004
0.00003
0.00002
0.00001
0.00000
- 0.00001
- 0.00002
- 0.00003
- 0.00004
- 0.00005
nm
200

Gambar 9

300

400

500

Spektrum
serapan
sampel
dengan kecepatan penyapuan
100 ( ), 200 ( ), 400 ( )
dan 800 nm/menit ( ).

Walaupun pada saat mencari keadaan
sampel dan standar yang berhimpit pada
kecepatan penyapuan 100, 200, dan 400
nm/menit terlihat hampir sama akan tetapi
ketika
pengukuran
sampel
dengan
dimasukannya parameter optimasi (turunan,
orde penghalusan dan jumlah jendela) ternyata
pada 400 nm/menit terlihat ada beberapa
konsentrasi yang berada diluar rentang
konsentrasi kurva standar sehingga kecepatan
tersebut tidak dipilih. Kecepatan penyapuan
yang dipilih untuk estimasi kadar flavonoid
total ini adalah 200 nm/menit karena nilai
konsentrasi yang dihasilkan tidak berbeda
nyata secara statistik dengan 100 nm/menit
(Lampiran 4), dan memerlukan waktu yang
lebih singkat. Kecepatan penyapuan artinya
kecepatan interval pembacaan data panjang
gelombang per satuan menit sehingga semakin
besar nilai kecepatan penyapuan maka
semakin banyak informasi yang hilang
sedangkan apabila kecepatan penyapuan
terlalu kecil maka waktu yang diperlukan
untuk pengukuran terlalu lama.
Amplitudo yang dipilih yaitu Dz, yaitu
jarak antara puncak ke baseline. Hal ini
dikarenakan puncak serapan yang dihasilkan
hanya terdapat satu puncak saja (Lampiran 5)
sedangkan untuk mengukur DL dan Ds
diperlukan puncak serapan yang lebih dari
satu.
Estimasi Kadar Flavonoid Total dengan
Metode SDUV
Spektrum dari sampel setelah diukur pada
kondisi optimum menghasilkan rerata estimasi
kadar flavonoid total sebesar 1.85 %b/b
(Tabel 2). Persamaan garis yang diperoleh
adalah y = 0.074x + 0.015 dengan koefisien
korelasi sebesar 0.9982 (Lampiran 4). Nilai
kemiringan memberi informasi tentang
kepekaan suatu metode. Metode SDUV
mempunyai kemiringan yang kecil, artinya
perubahan
konsentrasi
menyebabkan
perbedaan pembacaan yang tidak terlalu
besar. Titik potong terhadap sumbu y
(intersep) menunjukkan adanya pengaruh
matriks pada larutan blanko. Pengaruh matriks
akan mempengaruhi kemampuan metode
untuk mengukur konsentrasi yang terkecil
(limit deteksi). Metode ini memberikan
estimasi kadar flavonoid dengan batas galat
(tingkat kepercayaan 95%) 0.08 %b/b. %SBR
yang dihasilkan adalah 4.29 %. Nilai %SBR
tersebut menurut AOAC termasuk dalam
kategori sedang.

Tabel 2 Estimasi kadar flavonoid total sampel
meniran
menggunakan
metode
SDUV
Sampel
1
2
3
4
5
6
Rerata =
Batas galat

Kadar flavonoid %b/b
1,87
1,79
1,83
1,93
1,73
1,93
1,85
0.08

Perbandingan Metode SDUV dengan
MetodeAlCl3
Hasil analisis estimasi kadar flavonoid
total menggunakan SDUV dibandingkan
secara statistika dengan metode AlCl3 sebagai
metode referensi menggunakan uji t dan uji F
(Lampiran 6 dan Tabel 3). Hasil uji F
memperlihatkan bahwa kedua metode tersebut
tidak berbeda nyata akan tetapi pada uji t
kedua metode tersebut berbeda nyata
dengan tingkat kepercayaan 95 %. Nilai t
hitung yang didapat adalah 5.2461 lebih besar
daripada t tabel sebesar 2.262. Perbedaan
konsentrasi yang berbeda nyata dari kedua
metode tersebut bisa diakibatkan karena
matriks yang terdapat dalam sampel masih
sangat kompleks sehingga serapan flavonoid
pada kondisi optimum menjadi terhambat.
Kemungkinan lain bisa diakibatkan karena di
dalam meniran tersebut terdapat senyawasenyawa flavonoid selain kuersetin yang bisa
menggeser serapan maksimumnya (Gambar
7). Hal tersebut bisa menghasilkan serapan
yang tidak identik antara sampel dengan
standar
sehingga
penentuan
kondisi
optimumnya menjadi kurang tepat. Validasi
metode tidak dapat dilakukan karena kedua
metode memberikan hasil yang berbeda nyata
secara statistik.
Tabel 3 Hasil uji statistik metode SDUV dan
metode AlCl3
Parameter
statistika
Persamaan
Koefisien korelasi
Kadar flavonoid
total (%b/b)
Uji F
Uji t

Metode SDUV

Metode

y=0.074x+0.015
0.9982

AlCl3
y=0.011x+0.0528
0.9987

1.85

2.10
0.9625
5.2461

SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Rerata estimasi kadar flavonoid total
yang diperoleh menggunakan metode SDUV
adalah 1.85 %b/b yang diukur dengan
amplitudo Dz pada panjang gelombang 356
nm dengan kondisi optimum kecepatan
penyapuan 200 nm/menit, orde turunan 3,
penghalusan 3, dan jumlah jendela 91. Uji
statistik antara metode AlCl3 dan SDUV
memperlihatkan
hasil uji F yang tidak
berbeda nyata dengan nilai F hitung 0.9625,
sedangkan uji t memperlihatkan hasil yang
berbeda nyata dengan nilai t hitung 5.2461.
Pemilihan
kondisi
optimum
belum
memberikan hasil yang baik.
Saran
Perlu dilakukan penentuan kondisi
optimum lebih lanjut seperti jenis ekstraksi,
pemilihan pelarut, dan waktu ekstraksi yang
lebih tepat terhadap sampel meniran tersebut,
sehingga
menghsilkan
ketelitian
dan
sensitifitas lebih baik untuk dilakukan validasi
matode.

DAFTAR PUSTAKA
Achmad SA, EH Hakim, Makmur. 1990.
Flavonoid dan phyto medica, kegunaan
dan prospek. Phyto Medica 1:120-127.
Agustina I. 2006. Metode cepat untuk
kuantifikasi teofilin dalam sediaan farmasi
secara
spektrofotometri
derivatif
ultraviolet [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Ansari M, Kazemipour M, Baradaran M,
Jalalizadeh
H.
2004.
Derivative
spectrophotometric
method
for
determination losartan in pharmaceutical
formulations. J Pharm Biomed Anal
30:1183-1189.
Arce L, Rios A, Valcarcel M. 1998.
Determination
of
anticarcinogenic
polyphenols present in green tea using
capillary electrophoresis coupled to a flow
injection system. J Chromatogr A 872:
113-120.
Astuti W. 2006. Metode cepat untuk
penentuan
kadar
yohimbin
dalam

Pausinystalia yohimbe dan produk
komersialnya secara spektrofotometri
derivatif ultraviolet [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Bankova V, Christov R, Stoev G, Popov S.
1992.
Determination
of
phenolics
from
propolis
by
capillary
gas
chromatography. J Chromatogr 307: 150153.
Brereton RG. 2003. Data Analysis for the
Laboratory
and
Chemical
Plant.
Chichester: John Wiley & Sons.
Burns DT, Tungkananuruk N, Kasemsumran
S. 2005. Derivative spectrophotometric
determination of acetaminophen by the
Formation of [Fe(II)-(2,2'-bipyridyl)3]2+.
Chem Anal (Warsaw) 50: 475
Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern JC.
2002. Estimation of total flavonoid content
in propolis by two complementary
colorimetric methods. J Food Drug Anal
10: 178-182.
Dadakova E, Prochazkova E, Krizek M. 2001.
Application of micellar electrokinetic
capillary chromatography for quantitative
analysis of quercetin in plant materials.
Electrophoresis 22: 1573-1578.
Depkes. 2000. Penentuan Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Depkes
RI.
Depkes. 2001. Inventaris Tanaman Obat
Indonesia (1). Jakarta : Badan Penelitian
dan Pengembangan Kesehatan.
Garcia PL, Santoro MIRM, Hackman ERMK,
Singh AK. 2005. Development and
validation of a HPLC and a UV derivative
spectrophotometric methods for determination of hydroquinone in gel and cream
preparations. J Pharm Biomed Anal 39:
764-768.
Hadisusilo S, Komalasari L, Kosela S. 1999.
Uji Aktivitas Antioksidan Biji Kluwek.
Seminar Nasional Kimia Bahan Alam.
M46: 371-377.
Harborne J B. 1996. Metode Fitokimia. Edisi
Kedua. Padmawinata dan Soediro,

penerjemah. Bandung : ITB. Terjemahan
dari: Phytochemicals Method.
Herdiana YP, Pagudiharto G, Siman MH,
Febrianti R, Zamri RJ. 2006. Daya
Antioksidan Ekstrak Tumbuhan Meniran
(Phyllanthus niruri Linn), Daun Sendok
(Plantago major Linn) dan Som Jawa
(Talinum paniculatum (jack) Gaertn)
dengan Metode Tiosianat dan DPPH
[laporan PKMP]. Bogor: IPB.
Khopkar SM. 1990. Konsep Dasar Kimia
Analitik. Saptorahardjo A, penerjemah.
Jakarta: UI Press. Terjemahan dari: Basic
Concepts of Analytical Chemistry.
Moustafa NM. 2005. Direct derivative
spectrophotometric
determination
of
nordiazepam in presence of its degradation
product. J Saudi Pharm 13: 333-338.
Naik GH, Priyadarsini KI, Mohan H. 2004.
Evaluating the antioxidant activity of
different plant extracts and herbal
formulations. Res Chem Intermed 31: 145151.
Oliveira BH, Nakashima T, Filho JDS, Frehse
FL. 2001. HPLC analysis of flavonoid in
Eupatorium Littorale. J Braz Chem Soc
12: 243-246.
Owen T. 1996. Fundamentals of UV-visible
Spectroscopy.
Waldbronn:
HewlettPackard.
O’Haver TC. 1979. Potential clinical
applications of derivative and wavelength
modulation spectrometry. Clin Chem 25:
1548-1553.
Popovic GV, Pfendt LB, Stefanovic VM.
2000. Analytical application of derivative
spectrophotometry. J Serb Chem Soc 6:
457-472.
Rachmanti WD. 2006. Metode cepat untuk
kuantifikasi reserpin dalam obat dan
ekstrak Rauwolfia serpentina secara
spektrofotometri derivatif ultraviolet (UV)
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Robinson T. 1995. Kandungan Organik
Tumbuhan Tinggi. Ed ke-6. Padmawinata
K,
penerjemah.
Bandung:
ITB.

Terjemahan dari The Organic Constituent of
Higher Plants.
Rolim A et al. 2005. Total flavonoids
quantification from O/W emulsion with
extract of Brazilian plants. Int J Pharm
308: 107-114.
Sauriasari R. 2006. Mengenal dan menangkal
radikal bebas. www.hmetro.com.my/Current_News/HM/Sunday/Kesihatan/20060205
132221/Article/indexs_html - 52k.
Singh DK, Srivastava B, dan Sahu A. 2004.
Spectrophotometry
determination
of
Rauwolfia
Alkaloids:Estimation
of
reserpine in pharmaceuticals. Anal Sci
20:571-573.
Skujins S. 1986. Application of UV-Visible
Derivatif Spectrophotometry. Steinhausertasse: Varian AG.
Sudjadi. 1985. Penentuan Struktur Senyawa
Organik. Jakarta: Ghalia Indonesia.
Yanti N. 2006. Metode cepat analisis
terfenadin dalam sediaan farmasi secara
spektrofotometri
derivatif
ultraviolet
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.

LAMPIRAN

Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Ekstrak meniran

Uji Fitokimia
Flavonoid

Hidrolisis

Ekstrak hasil
hidrolisis

Metode AlCl3

Metode SDUV

Uji Statistik

Lampiran 2 Penetapan konsentrasi flavonoid total menggunakan metode AlCl3

Absorbans

Data absorbans kurva standar kuersetin
Standar kuersetin (ppm)
Absorbans
2
0.077
4
0.095
6
0.117
8
0.141
10
0.164

0.2
0.15
0.1
0.05
0

y = 0.011x + 0.0528
R2 = 0.9974

0

5

10

15

Kons e ntras i (ppm )

Kurva standar kuersetin
Data konsentrasi flavonoid total dalam simplisia kapsul meniran
sampel bobot simplisia (gram) absorbans
flavonoid (ppm)
%b/b
1
0.1004
0.148
8.6545
2.16
2
0.1003
0.150
8.8364
2.20
3
0.1009
0.144
8.2909
2.05
4
0.1008
0.150
8.8364
2.09
5
0.1009
0.142
8.1091
2.01
Rerata =
2.10
Simpangan Baku =
0.0779
ket: bobot simplisia yang ditimbang: 1 = 0.1004 g
4 = 0.1008 g
2 = 0.1003 g
5 = 0.1009 g
3 = 0.1009 g
Contoh perhitungan pada sampel 1:
y
= bx + a
y
= 0.011x + 0.0528
0.148 = 0.011x + 0.0528
x
= 8.6545 ppm
%b/b = [flav. total]ppm x 10 ml x 100/20 x 50/10 x 100%
bobot simplisia (mg)
= 8.6545 mg/1000ml x 10 ml x 25 x 100 %
100.4 mg
= 2.16 %b/b
Batas galat (selang kepercayaan 95%) =

t × SB
n

= 2.776 × 0.0779 = 0.10 %b/b
5

Simpangan Baku Relatif (%SBR) = SB × 100 = 0.0779 ×100 = 3.71 %
x

2.10

Lampiran 3 Pemilihan orde turunan, penghalusan, dan jumlah jendela optimum
turunan

Penghalusan

3

3

jumlah
jendela
85
87
89
91
85
87
89
91

4

λ (nm)

persamaan garis

regresi

356.0
356.0
356.0
356.0
356.5
356.5
356.5
356.5

y = 0.0785x+0.0375
y = 0.076x + 0.04
y = 0.0745x+0.0325
y = 0.073x+0.025
y = 0.0785x+0.0325
y = 0.0755x+0.0525
y = 0.074x+0.03
y = 0.074x+0.01

0.9979
0.9986
0.9978
0.9992
0.9983
0.9984
0.9989
0.9981

Lampiran 4 Perbandingan kecepatan penyapuan dan pengukuran sampel
•

Kecepatan penyapuan 100 nm/menit

Data amplitudo kurva standar
Standar
standar kuersetin (ppm)
1
5
2
10
3
15
4
20
5
25

amplitudo
0.375
0.750
1.150
1.500
1.825

y = 0,073x + 0,025

2

2

Amplitudo

R = 0,9985
1,5
1
0,5
0
0

5

10

15

20

25

30

Konsentrasi (ppm)

kurva standar kuersetin
Data kadar flavonoid total sampel meniran
Sampel
amplitudo
konsentrasi (ppm)
1
1.000
13.3562
2
0.950
12.6712
3
0.975
13.0137
4
1.000
13.3562
5
0.975
13.0137
6
1.050
14.0411
Rerata =
Simpangan Baku =

%b/b
1.88
1.79
1.84
1.89
1.83
1.98
1.87
0.0655

Lanjutan Lampiran 4
Batas galat (selang kepercayaan 95%) =

t × SB
n

= 2.571 × 0.0655 = 0.07 %b/b
6

Simpangan Baku Relatif (%SBR) = SB ×100 = 0.0655 ×100 = 3.50 %
1.87

x

•

Kecepatan penyapuan 200 nm/menit

Amplitudo

Data amplitudo kurva standar
Standar
standar kuersetin (ppm)
1
5
2
10
3
15
4
20
5
25

2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0

Amplitudo
0.350
0.775
1.150
1.525
1.825

y = 0,074x + 0,015
R2 = 0,9965

0

5

10

15

20

25

30

Konsentrasi (ppm)

Kurva standar kuersetin
Data kadar flavonoid total sampel meniran
sampel
amplitudo
1
1.000
2
0.950
3
0.975
4
1.025
5
0.925
6
1.025

konsentrasi (ppm)
13.3108
12.6351
12.9730
13.6486
12.2973
13.6486
rerata =
Simpangan Baku =

Batas galat (selang kepercayaan 95%) =

t × SB
n

%b/b
1.87
1.79
1.83
1.93
1.73
1.93
1.85
0.0794

= 2.571 × 0.0794 = 0.08

6
0
.
0794
SB
Simpangan Baku Relatif (%SBR) =
×100 =
× 100 = 4.29 %
x
1.85

Uji t dan uji F antara kecepatan penyapuan 100 dan 200 nm/menit
S1 (SB kecepatan penyapuan 100 nm/menit) = 0.0655
S2 (SB kecepatan penyapuan 200 nm/menit) = 0.0794

Lanjutan Lampiran 4
2
2
F hitung = (SB sc 100) = (0.0655) = 0.6805

(0.0794) 2

(SB sc 200) 2

F tabel untuk n-1 pada selang kepercayaan 95% = 5.050
F hitung < F tabel (tidak berbeda nyata)

(n1 − 1) s1 + (n2 − 1) s 2
= 0.0728
(n1 + n 2 − 2)
2

S

=

t hitung =

( x1 − x 2 )
1
1
s
+
n1 n 2

2

=

(1.87 − 1.85)
1 1
0.0728
+
6 6

= 0.4784

t tabel untuk n1+n2-2 = 10 pada selang kepercayaan 95% = 2.228
t hitung < t tabel (tidak berbeda nyata)

Lampiran 5
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

Spektrum-spektrum untuk estimasi kadar flavonoid total pada kondisi
optimum
5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
2 0 0

3 0 0

4 0 0

n m

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 1
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
2 0 0

3 0 0

4 0 0

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 2

n m

Lanjutan Lampiran 5
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
200

300

400

nm

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 3
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
2 0 0

3 0 0

4 0 0

n m

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 4
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
200

300

40 0

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 5

nm

Lanjutan Lampiran 5
0
0
0
0
0
0
-0
-0
-0
-0
-0

.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0
.0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

5
4
3
2
1
0
1
2
3
4
5
200

300

400

Gambar spektrum serapan sampel ulangan 6
Ket :

sampel
standar 5 ppm
standar 10 ppm
standar 15 ppm
standar 20 ppm
standar 25 ppm

Lampiran 6 Penentuan uji t dan uji F antara metode SDUV dengan metode AlCl3
S1 (SB metode AlCl3) = 0.0862
S2 (SB metode SDUV) = 0.0784
2
2
F hitung = (SB metode AlCl3) = (0.0779) = 0.9625

(SB metode SDUVf) 2

(0.0794) 2

F tabel pada selang kepercayaan 95% = 5.192
F hitung < F tabel (tidak berbeda nyata)

(n1 − 1) s1 + (n 2 − 1) s 2
= 0.0787
(n1 + n2 − 2)
2

S

=

t hitung =

( x1 − x 2 )
1
1
s
+
n1 n 2

2

=

(2.10 − 1.85)
1 1
0.0787
+
5 6

= 5.2461

t tabel pada selang kepercayaan 95% = 2.262
t hitung > t tabel (berbeda nyata)

nm

SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF ULTRAVIOLET
UNTUK ESTIMASI KADAR FLAVONOID TOTAL
EKSTRAK MENIRAN

YUDI PRAYUDI HERDIANA

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2007

ABSTRAK
YUDI PRAYUDI HERDIANA. Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet untuk Estimasi
Kadar Flavonoid Total Ekstrak Meniran. Dibimbing oleh LATIFAH KOSIM
DARUSMAN dan MOHAMAD RAFI.
Flavonoid merupakan salah satu gol