23
BAB III METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan selama 6 bulan, yaitu pada bulan Juni sampai dengan November 2006. Lokasi penelitian di Sub Laboratorium Biologi
Laboratorium Pusat MIPA, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi bahan tanaman sumber eksplan dan bahan kimia.
1. Bahan tanaman sumber eksplan Sumber eksplan pada penelitian ini adalah daun R. verticillata. Tanaman
tersebut berasal dari Balai Penelitian Tanaman Obat BPTO, Tawangmangu, Karanganyar.
2. Bahan Kimia a. Sterilisasi Eksplan
Aquades, larutan bleach yang mengandung NaClO 5,25 . b. Pembuatan Media
1 Media MS Murashige Skoog a Komposisi bahan-bahan kimia yang terdapat dalam media MS
Lampiran 1. b Bahan pemadat berupa agar 7.000 mgl.
c HCl 1 N d KOH 1 N
24
e Aquades 2 Media Inisiasi Kalus
Bahan-bahan kimia sama seperti yang digunakan pada pembuatan media MS. Zat pengatur tumbuh ZPT yang digunakan adalah:
- NAA : 2 mgl
- Kinetin : 2 mgl 3 Media Perlakuan
Bahan-bahan kimia hampir sama seperti yang digunakan pada pembuatan media MS, namun ada perbedaan yaitu adanya konsentrasi
fosfor KH
2
PO
4
pada media MS dengan konsentrasi sebagai berikut: 0 mgl kontrol ; 42,5 mgl; 85 mgl; 127,5 mgl; 170 mgl.
4 Analisis alkaloid reserpin Ethanol p.a pro analysis; senyawa reserpin murni; double distilled water
DDH
2
O; sodium nitrit; asam sulfamat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat untuk pembuatan media, sterilisasi, penanaman eksplan dan analisis reserpin.
1. Sterilisasi Untuk sterilisasi alat dan media digunakan autoclave yang telah diatur pada
suhu 121
o
C dan tekanan 1,5 atm.
25
2. Pembuatan Media Hot plate dengan magnetic stirrer, pipet tetes, spatula, pH meter, botol kultur,
gelas ukur, neraca analitik, erlenmeyer, gelas beker, pipet ukur, kertas alumunium foil total wrap heavy duty
3. Penanaman Eksplan Botol-botol kultur, cawan petri, pinset, alat-alat diseksi, laminar air low
cabinet LAF dan lampu bunsen. 4. Analisis Alkaloid Reserpin
Spektrofotometer UV-Vis, vortex, pipet ukur, tabung reaksi, mortar, water batch, cuvet, kertas saring, inkubator dan gelas ukur.
C. Rancangan Percobaan