Waktu dan Tempat Penelitian Bahan dan Alat

23

BAB III METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan selama 6 bulan, yaitu pada bulan Juni sampai dengan November 2006. Lokasi penelitian di Sub Laboratorium Biologi Laboratorium Pusat MIPA, Universitas Sebelas Maret Surakarta.

B. Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi bahan tanaman sumber eksplan dan bahan kimia. 1. Bahan tanaman sumber eksplan Sumber eksplan pada penelitian ini adalah daun R. verticillata. Tanaman tersebut berasal dari Balai Penelitian Tanaman Obat BPTO, Tawangmangu, Karanganyar. 2. Bahan Kimia a. Sterilisasi Eksplan Aquades, larutan bleach yang mengandung NaClO 5,25 . b. Pembuatan Media 1 Media MS Murashige Skoog a Komposisi bahan-bahan kimia yang terdapat dalam media MS Lampiran 1. b Bahan pemadat berupa agar 7.000 mgl. c HCl 1 N d KOH 1 N 24 e Aquades 2 Media Inisiasi Kalus Bahan-bahan kimia sama seperti yang digunakan pada pembuatan media MS. Zat pengatur tumbuh ZPT yang digunakan adalah: - NAA : 2 mgl - Kinetin : 2 mgl 3 Media Perlakuan Bahan-bahan kimia hampir sama seperti yang digunakan pada pembuatan media MS, namun ada perbedaan yaitu adanya konsentrasi fosfor KH 2 PO 4 pada media MS dengan konsentrasi sebagai berikut: 0 mgl kontrol ; 42,5 mgl; 85 mgl; 127,5 mgl; 170 mgl. 4 Analisis alkaloid reserpin Ethanol p.a pro analysis; senyawa reserpin murni; double distilled water DDH 2 O; sodium nitrit; asam sulfamat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat untuk pembuatan media, sterilisasi, penanaman eksplan dan analisis reserpin. 1. Sterilisasi Untuk sterilisasi alat dan media digunakan autoclave yang telah diatur pada suhu 121 o C dan tekanan 1,5 atm. 25 2. Pembuatan Media Hot plate dengan magnetic stirrer, pipet tetes, spatula, pH meter, botol kultur, gelas ukur, neraca analitik, erlenmeyer, gelas beker, pipet ukur, kertas alumunium foil total wrap heavy duty 3. Penanaman Eksplan Botol-botol kultur, cawan petri, pinset, alat-alat diseksi, laminar air low cabinet LAF dan lampu bunsen. 4. Analisis Alkaloid Reserpin Spektrofotometer UV-Vis, vortex, pipet ukur, tabung reaksi, mortar, water batch, cuvet, kertas saring, inkubator dan gelas ukur.

C. Rancangan Percobaan