Aktivitas Senyawa Bioaktif Dari Bakteri Yang Berasosiasi Dengan Spons Terhadap Sel Leukimia.
i
ACTIVITY OF BIOACTIVE COMPOUNDS
FROM SPONGE-ASSOCIATED BACTERIA
ON HUMAN LEUKEMIC CELL LINES
AI KARWATI
GRADUATE SCHOOL
BOGOR AGRICULTURAL UNIVERSITY
BOGOR
2015
i
STATEMENT OF ORIGINALITY
I hereby declare that this thesis entitled “Activity of Bioactive Compounds
from Sponge-Associated Bacteria on Human Leukemic Cell Lines” is the
result of my own work through the guidance from my academic supervisors and
has not been submitted in any form for another degree at any other university.
Sources of information derived from published and unpublished works of other
authors is mentioned in the text and listed in the list of references at the end of this
thesis.
I hereby assign the copyright of my thesis to Bogor Agricultural University.
Bogor, December 2015
Ai Karwati
NIM G351130211
ii
RINGKASAN
AI KARWATI. Aktivitas Senyawa Bioaktif dari Bakteri yang Berasosiasi dengan
Spons terhadap Sel Leukimia. Dibimbing oleh ARIS TRI WAHYUDI,
NAHROWI RAMLI dan JUN NOMURA.
Spons dilaporkan sebagai penghasil utama senyawa alami yang berasal dari
laut. Namun, spons belum siap untuk dikembangkan lebih lanjut terkait dengan
ketersediaannya yang dibutuhkan dalam jumlah besar dan berkelanjutan.
Diketahui hampir 40-60% dari total biomassa spons adalah mikroorganisme,
maka isolasi bakteri yang berasosiasi dengan spons dapat menjadi salah satu
alternatif untuk menghasilkan berbagai senyawa bioaktif dalam jumlah besar
melalui pengkulturan mikroba. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa
mikroorganisme yang berasosiasi dengan spons merupakan penghasil senyawa
bioaktif tersebut. Bioaktif inimemiliki banyak potensi diantaranya sebagai
antibakteri, antifungi, antivirus, immunosupressant, antitumor, dan antikanker.
Kanker merupakan sel abnormal yang tumbuh akibat mutasi genetik baik itu
yang bersifat turunan maupun yang di induksi oleh lingkungan. Leukemia adalah
salah satu sel kanker yang terjadi pada sel darah. Saat ini, kanker berhasil
ditanggulangi dengan cara operasi dan kemoterapi. Meskipun pengangkatan sel
kanker secara fisik melalui operasi merupakan usaha optimal, namun sangat sulit
untuk menghilangkan sel kanker secara menyeluruh dan dapat menyebabkan
penyebaran sel kanker ke organ yang lain. Sementara itu, kemoterapi memiliki
banyak efek samping. Pengembangan antikanker baru yang tidak memiliki efek
samping sangat diperlukan untuk penanggulangan kanker. Beberapa bahan
bioaktif yang diperkirakan memiliki aktivitas melawan kanker ditemukan pada
beberapa organisme, salah satunya adalah bakteri. Tujuan dari penelitian ini
adalahmengisolasi senyawa bioaktif dari bakteri yang berasosiasi dengan spons
dan menguji aktivitasnya melawan sel leukimia.
Bakteri yang berasosiasi dengan spons (SAB) dengan kode SAB E-35, E-38
dan SAB E-40 telah diisolasi dari sponge Jaspis sp. yang berasal dari kepulauan
Raja Ampat menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap Eschericchia coli,
Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida
albicans dan C. tropicalis. Bakteri tersebut juga telah diuji memiliki sitotoksisitas
terhadap Artemia salina melalui uji Brine Shrimp Letality Test (BSLT). Perlu
dilakukan ujilanjutan untuk menganalisis aktivitasnya melawan sel kanker, salah
satunya leukemia.Sel leukemia yang diujikan pada penelitian ini adalah U937,
MOLT4, K562, HL60, Daudi dan CEM6.
Isolasi senyawa bioaktif dilakukan melalui dua metode yaitu fraksionasi
senyawa menggunakan Amicon Filter dilanjutkan dengan pemisahan fraksi
berdasarkan pH menggunakan rotofor, serta ekstraksi senyawa bioaktif
menggunakan etil asetat dilanjutkan dengan fraksionasi ekstrak melalui
kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kolom (KK). Selanjutnya, fraksifraksi terisolasi digunakan untuk uji sitotoksisitas terhadap sel leukemia melalui
Cell Counting Kit CCK-8. Fraksi Amicon filter tidak menunjukkan efek
sitotoksisitas terhadap sel leukimia, sebaliknya menunjukkan aktivitas pemicu
pertumbuhan. Fraksi Amicon berukuran >50 kDa memiliki kemampuan terkuat
dalam memicu pertumbuhan sel U937. Ekstrak etil asetat SAB menunjukkan efek
iii
toksisitas yang beragam pada sel kanker leukemia. Berdasarkan nilai IC50, SAB E40 (IC50 = 191.512 μg/ml) memiliki kemampuan paling kuat untuk menghambat
sel U937. SAB E-40 juga menunjukkan penghambatan terkuat pada K562, Daudi
dan CEM6 dengan nilai IC50 berturut-turut 214.467 μg/ml, 222.138 μg/ml dan
233.963 μg/ml. Untuk sel MOLT4, efek toksisitas terkuat ditunjukkan oleh SAB
E-35 dengan nilai IC50 263.93 μg/ml. Untuk sel HL60, efek toksisitas terkuat
ditunjukkan oleh SAB E-38 dengan nilai IC50 sebesar 294.923 μg/ml. Beberapa
fraksi hasil fraksionasi melalui KLT dan KK menunjukkan efektifitas fraksi
dengan nilai IC50 yang lebih rendah daripada ekstrak kasarnya.
Uji apoptosis ditentukan dengan menggunakan Annexin V-FITC Apoptosis
Detection Kit. Selanjutnya, analisis siklus sel ditentukan dengan menggunakan
pewarna DNA Propidium Iodida kemudian dianalisis menggunakan flow
cytometer. SAB E-35 menunjukkan efek apoptosis terkuat pada sel MOLT4
berdasarkan kemampuannya menurunkan jumlah sel yang hidup sampai tersisa
21,6% dan sebanyak 37,3% sel berada pada fase akhir apoptosis. Analisis siklus
sel pada sel-sel yang diinkubasi dengan ekstrak mengakibatkan penurunan jumlah
sel di fase S, G0 / G1 dan G2 fraksi / M, sebaliknya terjadi akumulasi sel dalam
fraksi sub-G1. Akumulasi sel dalam fraksi sub-G1 menunjukkan peningkatan
fragmentasiDNA pada proses apoptosis.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi Amicon dapat memicu
pertumbuhan sel kanker sedangkan ekstrak etil asetat memberikan pengaruh
sitotoksisitas pada sel leukemia. Hal ini mengindikasikan bahwa terdapat
perbedaan jenis senyawa bioaktif yang terisolasi berdasarkan metode yang
digunakan. Hasil lainnya menunjukkan bahwa apoptosis terjadi pada MOLT4
yang diberi perlakuan ekstrak, dikonfirmasi oleh hasil analisis siklus sel. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa efek apoptosis dari SAB terhadap MOLT4 dapat
memberikan kontribusi dalam aktivitas antikanker.
Kata kunci: bakteri spons, MOLT4, antikanker, siklus sel
ii
SUMMARY
AI KARWATI. Activity of Bioactive Compounds from Sponge-Associated
Bacteria Against Leukemic Cell Lines. Supervised by ARIS TRI WAHYUDI,
NAHROWI RAMLI and JUN NOMURA.
Sponge was reported as the best producers of new marine natural
compounds. However, they are mostly not yet ready to be
developedfurtherbecause obtaining continuous and large supplies.Since almost
40-60% total sponge biomass are microorganisms, isolation of sponge-associated
bacteria is an alternative that can be used to produce a wide range of bioactive
compounds in large quantities through the production of microbial culture. It is
hypothesized that symbiotic marine-microorganisms harbored by sponges are the
original producers of these bioactive compounds. Those bioactive compounds
have potential as antibacterial, antifungal, antiviral, immunosuppressant,
antitumor, and anticancer.
Cancer was characterized as abnormal cells that growth from a relatively
small number of inherited or environmentally-induced genetic mutations.
Leukemia is a cancer of the blood cells. Recently, cancers can be succesfully
treated by surgery and chemoteraphy. While physically removing a tumor is
optimal, it is difficult for a surgeon to get all of the cancer cell, it made probability
that the cells may spread to other organs. The development of a new anticancer
that lack of side effect would be important in cancer treatment. Many bioactive
compound was expected to have activity against cancer cells have been found in
every species including bacteria. The aims of this study were to isolate bioactive
compounds from sponge associated bacteria and analyze their activities against
human leukemic cell lines.
Sponge associated bacteria (SAB) coded by SAB E-35, SAB E-38 and
SAB-E40 have been isolated from Jaspis sp. taken from Raja Ampat islands
shown antimicrobe activity against Eschericchia coli, Bacillus subtilis,
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans and C.
tropicalis. Those bacteria also have citotoxicity towards Artemia salinathrough
brine shrimp letality test (BSLT). It can be used as samples for analyze their
activities against leukemic cell lines. The cell lines that used in this study were
U937, MOLT4, K562, HL60, Daudi and CEM6.
Isolation of bioacive compounds determined by two methods i.e
fractionation using Amicon filter followed by separation of fraction based on
differences of pH and extraction using ethyl acetate followed by fractionation
through Thin Layer Chromatography (TLC) and Column Chromatography (CC).
The fractions isolated used as samples for cytotoxicity assay using Cell Counting
Kit CCK-8. Fractions of Amicon filter did not showed any cytottoxicity effects,
they gave growth stimulation instead on cell lines. Fractions with molecular size
>50 kDa have the strongest ability as growth stimulator on U937 cell line. Ethyl
acetate extracts from sponge-associated bacteria showed various toxicity effects
on cancer cell lines. Based on IC50 values, SAB E 40 (IC50 = 191,512 µg/ml) was
possessed a stronger capability to inhibit the U937 cells than other samples. SAB
E 40 also showed the strongest inhibitory on K562, Daudi and CEM6 cells with
IC50 values respectively 214.467 µg/ml, 222.138 µg/ml and 233.963 µg/ml. For
iii
the MOLT4T4 cells, the strongest toxicity effect was showed by SAB E 35 with
IC50 value 263.93µg/ml. For the HL60 cells, the strongest toxicity effect was
showed by SAB E 38 with IC50 value 294.923µg/ml. Some of extract fraction
through TLC and CC resulted the fractions that have IC50 lower than the crude
extract.
Apoptosis assay was determined by using Annexin V-FITC Apoptosis
Detection Kit. Further, cell cycle analysis was determined by using DNA specific
dye Propidium Iodide and analyzed by using flowcytometry.SAB E 35 showed
the strongest apoptosis effect on MOLT4 cell line based on its ability to decrease
viable cells, that remained only 21.6 % and 37.3 % cells on their late apoptosis
phase. Cell cycle analysis on cells incubated with extract resulted decrease in the
number of cells in S phase, G0/G1 and G2/M fraction, in addition to the
accumulation of cells population in sub-G1 fraction. The proportion of cells in
sub-G1 fraction were accumulated indicating that apoptotic DNA cleavage was
increased.
The results of this study demonstrated that bioactive compounds from
sponge-associated bacteria could be a growth stimulator or inhibitor on leukemic
cell lines depend on the isolation method carried. Other results indicated that
apoptosis occurred in MOLT4 treated by the ethyl acetate extract, confirmed by
the result of cell cycle analysis. The results suggested that the apoptotic effects of
sponge-associated bacteria on MOLT4 can provide contribution to their claimedanticancer activity.
Keywords : sponge-associated bacteria, MOLT4, anticancer, cell cycle
iv
© Copyrightof IPB, 2015
Copyright Reserved
Prohibited for quoting part or all of this thesis without including or citing the
sources. Citation is only for educational purposes, research, scientific writing,
report writing, criticsm writing, or review of an issue; and citations are not
detrimental on behalf to IPB
Prohibited for announcing and replicating part or all of this thesis in any form
without permission of IPB.
i
ACTIVITY OF BIOACTIVE COMPOUNDS
FROM SPONGE-ASSOCIATED BACTERIA
AGAINST HUMAN LEUKEMIC CELL LINES
AI KARWATI
Thesis
As one of the requirements to obtain the degree
Master of Science
on
Microbiology Major
GRADUATE SCHOOL
BOGOR AGRICULTURAL UNIVERSITY
BOGOR
2015
ii
Examiner of Beyond Commission on Thesis Examination :
Dr. Laksmi Ambarsari, MS
(#8)8B )9.#B
!9)
ACTIVITY OF BIOACTIVE COMPOUNDS
FROM SPONGE-ASSOCIATED BACTERIA
ON HUMAN LEUKEMIC CELL LINES
AI KARWATI
GRADUATE SCHOOL
BOGOR AGRICULTURAL UNIVERSITY
BOGOR
2015
i
STATEMENT OF ORIGINALITY
I hereby declare that this thesis entitled “Activity of Bioactive Compounds
from Sponge-Associated Bacteria on Human Leukemic Cell Lines” is the
result of my own work through the guidance from my academic supervisors and
has not been submitted in any form for another degree at any other university.
Sources of information derived from published and unpublished works of other
authors is mentioned in the text and listed in the list of references at the end of this
thesis.
I hereby assign the copyright of my thesis to Bogor Agricultural University.
Bogor, December 2015
Ai Karwati
NIM G351130211
ii
RINGKASAN
AI KARWATI. Aktivitas Senyawa Bioaktif dari Bakteri yang Berasosiasi dengan
Spons terhadap Sel Leukimia. Dibimbing oleh ARIS TRI WAHYUDI,
NAHROWI RAMLI dan JUN NOMURA.
Spons dilaporkan sebagai penghasil utama senyawa alami yang berasal dari
laut. Namun, spons belum siap untuk dikembangkan lebih lanjut terkait dengan
ketersediaannya yang dibutuhkan dalam jumlah besar dan berkelanjutan.
Diketahui hampir 40-60% dari total biomassa spons adalah mikroorganisme,
maka isolasi bakteri yang berasosiasi dengan spons dapat menjadi salah satu
alternatif untuk menghasilkan berbagai senyawa bioaktif dalam jumlah besar
melalui pengkulturan mikroba. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa
mikroorganisme yang berasosiasi dengan spons merupakan penghasil senyawa
bioaktif tersebut. Bioaktif inimemiliki banyak potensi diantaranya sebagai
antibakteri, antifungi, antivirus, immunosupressant, antitumor, dan antikanker.
Kanker merupakan sel abnormal yang tumbuh akibat mutasi genetik baik itu
yang bersifat turunan maupun yang di induksi oleh lingkungan. Leukemia adalah
salah satu sel kanker yang terjadi pada sel darah. Saat ini, kanker berhasil
ditanggulangi dengan cara operasi dan kemoterapi. Meskipun pengangkatan sel
kanker secara fisik melalui operasi merupakan usaha optimal, namun sangat sulit
untuk menghilangkan sel kanker secara menyeluruh dan dapat menyebabkan
penyebaran sel kanker ke organ yang lain. Sementara itu, kemoterapi memiliki
banyak efek samping. Pengembangan antikanker baru yang tidak memiliki efek
samping sangat diperlukan untuk penanggulangan kanker. Beberapa bahan
bioaktif yang diperkirakan memiliki aktivitas melawan kanker ditemukan pada
beberapa organisme, salah satunya adalah bakteri. Tujuan dari penelitian ini
adalahmengisolasi senyawa bioaktif dari bakteri yang berasosiasi dengan spons
dan menguji aktivitasnya melawan sel leukimia.
Bakteri yang berasosiasi dengan spons (SAB) dengan kode SAB E-35, E-38
dan SAB E-40 telah diisolasi dari sponge Jaspis sp. yang berasal dari kepulauan
Raja Ampat menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap Eschericchia coli,
Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida
albicans dan C. tropicalis. Bakteri tersebut juga telah diuji memiliki sitotoksisitas
terhadap Artemia salina melalui uji Brine Shrimp Letality Test (BSLT). Perlu
dilakukan ujilanjutan untuk menganalisis aktivitasnya melawan sel kanker, salah
satunya leukemia.Sel leukemia yang diujikan pada penelitian ini adalah U937,
MOLT4, K562, HL60, Daudi dan CEM6.
Isolasi senyawa bioaktif dilakukan melalui dua metode yaitu fraksionasi
senyawa menggunakan Amicon Filter dilanjutkan dengan pemisahan fraksi
berdasarkan pH menggunakan rotofor, serta ekstraksi senyawa bioaktif
menggunakan etil asetat dilanjutkan dengan fraksionasi ekstrak melalui
kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kolom (KK). Selanjutnya, fraksifraksi terisolasi digunakan untuk uji sitotoksisitas terhadap sel leukemia melalui
Cell Counting Kit CCK-8. Fraksi Amicon filter tidak menunjukkan efek
sitotoksisitas terhadap sel leukimia, sebaliknya menunjukkan aktivitas pemicu
pertumbuhan. Fraksi Amicon berukuran >50 kDa memiliki kemampuan terkuat
dalam memicu pertumbuhan sel U937. Ekstrak etil asetat SAB menunjukkan efek
iii
toksisitas yang beragam pada sel kanker leukemia. Berdasarkan nilai IC50, SAB E40 (IC50 = 191.512 μg/ml) memiliki kemampuan paling kuat untuk menghambat
sel U937. SAB E-40 juga menunjukkan penghambatan terkuat pada K562, Daudi
dan CEM6 dengan nilai IC50 berturut-turut 214.467 μg/ml, 222.138 μg/ml dan
233.963 μg/ml. Untuk sel MOLT4, efek toksisitas terkuat ditunjukkan oleh SAB
E-35 dengan nilai IC50 263.93 μg/ml. Untuk sel HL60, efek toksisitas terkuat
ditunjukkan oleh SAB E-38 dengan nilai IC50 sebesar 294.923 μg/ml. Beberapa
fraksi hasil fraksionasi melalui KLT dan KK menunjukkan efektifitas fraksi
dengan nilai IC50 yang lebih rendah daripada ekstrak kasarnya.
Uji apoptosis ditentukan dengan menggunakan Annexin V-FITC Apoptosis
Detection Kit. Selanjutnya, analisis siklus sel ditentukan dengan menggunakan
pewarna DNA Propidium Iodida kemudian dianalisis menggunakan flow
cytometer. SAB E-35 menunjukkan efek apoptosis terkuat pada sel MOLT4
berdasarkan kemampuannya menurunkan jumlah sel yang hidup sampai tersisa
21,6% dan sebanyak 37,3% sel berada pada fase akhir apoptosis. Analisis siklus
sel pada sel-sel yang diinkubasi dengan ekstrak mengakibatkan penurunan jumlah
sel di fase S, G0 / G1 dan G2 fraksi / M, sebaliknya terjadi akumulasi sel dalam
fraksi sub-G1. Akumulasi sel dalam fraksi sub-G1 menunjukkan peningkatan
fragmentasiDNA pada proses apoptosis.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi Amicon dapat memicu
pertumbuhan sel kanker sedangkan ekstrak etil asetat memberikan pengaruh
sitotoksisitas pada sel leukemia. Hal ini mengindikasikan bahwa terdapat
perbedaan jenis senyawa bioaktif yang terisolasi berdasarkan metode yang
digunakan. Hasil lainnya menunjukkan bahwa apoptosis terjadi pada MOLT4
yang diberi perlakuan ekstrak, dikonfirmasi oleh hasil analisis siklus sel. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa efek apoptosis dari SAB terhadap MOLT4 dapat
memberikan kontribusi dalam aktivitas antikanker.
Kata kunci: bakteri spons, MOLT4, antikanker, siklus sel
ii
SUMMARY
AI KARWATI. Activity of Bioactive Compounds from Sponge-Associated
Bacteria Against Leukemic Cell Lines. Supervised by ARIS TRI WAHYUDI,
NAHROWI RAMLI and JUN NOMURA.
Sponge was reported as the best producers of new marine natural
compounds. However, they are mostly not yet ready to be
developedfurtherbecause obtaining continuous and large supplies.Since almost
40-60% total sponge biomass are microorganisms, isolation of sponge-associated
bacteria is an alternative that can be used to produce a wide range of bioactive
compounds in large quantities through the production of microbial culture. It is
hypothesized that symbiotic marine-microorganisms harbored by sponges are the
original producers of these bioactive compounds. Those bioactive compounds
have potential as antibacterial, antifungal, antiviral, immunosuppressant,
antitumor, and anticancer.
Cancer was characterized as abnormal cells that growth from a relatively
small number of inherited or environmentally-induced genetic mutations.
Leukemia is a cancer of the blood cells. Recently, cancers can be succesfully
treated by surgery and chemoteraphy. While physically removing a tumor is
optimal, it is difficult for a surgeon to get all of the cancer cell, it made probability
that the cells may spread to other organs. The development of a new anticancer
that lack of side effect would be important in cancer treatment. Many bioactive
compound was expected to have activity against cancer cells have been found in
every species including bacteria. The aims of this study were to isolate bioactive
compounds from sponge associated bacteria and analyze their activities against
human leukemic cell lines.
Sponge associated bacteria (SAB) coded by SAB E-35, SAB E-38 and
SAB-E40 have been isolated from Jaspis sp. taken from Raja Ampat islands
shown antimicrobe activity against Eschericchia coli, Bacillus subtilis,
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans and C.
tropicalis. Those bacteria also have citotoxicity towards Artemia salinathrough
brine shrimp letality test (BSLT). It can be used as samples for analyze their
activities against leukemic cell lines. The cell lines that used in this study were
U937, MOLT4, K562, HL60, Daudi and CEM6.
Isolation of bioacive compounds determined by two methods i.e
fractionation using Amicon filter followed by separation of fraction based on
differences of pH and extraction using ethyl acetate followed by fractionation
through Thin Layer Chromatography (TLC) and Column Chromatography (CC).
The fractions isolated used as samples for cytotoxicity assay using Cell Counting
Kit CCK-8. Fractions of Amicon filter did not showed any cytottoxicity effects,
they gave growth stimulation instead on cell lines. Fractions with molecular size
>50 kDa have the strongest ability as growth stimulator on U937 cell line. Ethyl
acetate extracts from sponge-associated bacteria showed various toxicity effects
on cancer cell lines. Based on IC50 values, SAB E 40 (IC50 = 191,512 µg/ml) was
possessed a stronger capability to inhibit the U937 cells than other samples. SAB
E 40 also showed the strongest inhibitory on K562, Daudi and CEM6 cells with
IC50 values respectively 214.467 µg/ml, 222.138 µg/ml and 233.963 µg/ml. For
iii
the MOLT4T4 cells, the strongest toxicity effect was showed by SAB E 35 with
IC50 value 263.93µg/ml. For the HL60 cells, the strongest toxicity effect was
showed by SAB E 38 with IC50 value 294.923µg/ml. Some of extract fraction
through TLC and CC resulted the fractions that have IC50 lower than the crude
extract.
Apoptosis assay was determined by using Annexin V-FITC Apoptosis
Detection Kit. Further, cell cycle analysis was determined by using DNA specific
dye Propidium Iodide and analyzed by using flowcytometry.SAB E 35 showed
the strongest apoptosis effect on MOLT4 cell line based on its ability to decrease
viable cells, that remained only 21.6 % and 37.3 % cells on their late apoptosis
phase. Cell cycle analysis on cells incubated with extract resulted decrease in the
number of cells in S phase, G0/G1 and G2/M fraction, in addition to the
accumulation of cells population in sub-G1 fraction. The proportion of cells in
sub-G1 fraction were accumulated indicating that apoptotic DNA cleavage was
increased.
The results of this study demonstrated that bioactive compounds from
sponge-associated bacteria could be a growth stimulator or inhibitor on leukemic
cell lines depend on the isolation method carried. Other results indicated that
apoptosis occurred in MOLT4 treated by the ethyl acetate extract, confirmed by
the result of cell cycle analysis. The results suggested that the apoptotic effects of
sponge-associated bacteria on MOLT4 can provide contribution to their claimedanticancer activity.
Keywords : sponge-associated bacteria, MOLT4, anticancer, cell cycle
iv
© Copyrightof IPB, 2015
Copyright Reserved
Prohibited for quoting part or all of this thesis without including or citing the
sources. Citation is only for educational purposes, research, scientific writing,
report writing, criticsm writing, or review of an issue; and citations are not
detrimental on behalf to IPB
Prohibited for announcing and replicating part or all of this thesis in any form
without permission of IPB.
i
ACTIVITY OF BIOACTIVE COMPOUNDS
FROM SPONGE-ASSOCIATED BACTERIA
AGAINST HUMAN LEUKEMIC CELL LINES
AI KARWATI
Thesis
As one of the requirements to obtain the degree
Master of Science
on
Microbiology Major
GRADUATE SCHOOL
BOGOR AGRICULTURAL UNIVERSITY
BOGOR
2015
ii
Examiner of Beyond Commission on Thesis Examination :
Dr. Laksmi Ambarsari, MS
(#8)8B )9.#B
!9)