Alat Dan Bahan METODE PENELITIAN

28

D. Alat Dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: beker glass, pipet, pengaduk, autoklaf, LAF, botol media, kompor gas, gelas ukur, neraca Ohauss dengan tingkat ketelitian, kertas pH, plastik, karet tali gunting, kertas label, pinset Bahan yang digunakan adalah: eksplan dari kentang var. Margahayu steril, air kelapa muda yang berwarna hijau, aquades, larutan NaOH, larutan HCl, gula pasir, agar-agar, pupuk Growmore daun , pupuk Gandasil D E. Prosedur Penelitian 1. Persiapan Media a. Pembuatan Media Padat Alat dan bahan untuk pembuatan media gelas ukur, gelas beker, spatula, pH meter, dan kertas pH disiapkan terlebih dahulu. Pupuk dicampurkan dengan air kelapa 100 mll sebagai sumber hara dan subtitusi ZPT, konsentrasi gula sesuai perlakuan 30gl dimasukkan ke dalam media kemudian ditambahkan aquades hingga volume mencapai 1 liter dan mengaduknya hingga larutan tersebut menjadi homogen. Sambil mengaduk, dilakukan pengukuran pH dengan kertas pH. Bila larutan terlalu asam maka ditambahi dengan larutan NaOH 1 N dan bila terlalu basa maka ditambahi dengan larutan HCL 1 N hingga pH nya mencapai 5,8. Larutan media tersebut dipanaskan kemudian agar dimasukkan sebanyak 7- 7,5 g diaduk hingga homogen. Setelah mendidih, media tersebut dituangkan ke dalam botol yang sudah steril dan sudah diberi label dengan keterangan perlakuan dan tanggal pembuatan kemudian menutup dengan plastik tahan panas dan ikat dengan karet pentil. b. Pembuatan Media Cair Alat dan bahan untuk pembuatan media gelas ukur, gelas beker, spatula, pH meter, dan kertas pH disiapkan terlebih dahulu. Pupuk dicampurkan dengan air kelapa 100 mll sebagai sumber hara dan subtitusi ZPT, konsentrasi gula sesuai perlakuan 40gl, 80gl dimasukkan ke dalam media kemudian ditambahkan aquades hingga volume mencapai 1 liter dan diaduk hingga larutan tersebut menjadi homogen. Sambil mengaduknya, pH diukur dengan menggunakan kertas 1 29 pH. Bila larutan terlalu asam maka ditambahi dengan larutan NaOH 1 N dan bila terlalu basa maka ditambahi dengan larutan HCL 1 N hingga pH nya mencapai 5,8. Larutan media tersebut dipanaskan hingga mendidih, Media tersebut dituangkan kedalam botol yang sudah steril dan sudah diberi label dengan keterangan perlakuan dan tanggal pembuatan kemudian menutup dengan plastik tahan panas dan ikat dengan karet pentil. Gambar 7 media penelitian 2. Sterilisasi Media Media yang akan disterilisasi, dimasukan kedalam autoclave kemudian disterilisasi pada suhu 121 o C selama 20 menit. Media yang telah steril diambil dan didiamkan sebentar kemudian ditaruh ke dalam ruangan kultur dan ditunggu selama 4 sampai 5 hari agar dapat diketahui media tersebut terkontaminasi atau tidak. 3. Penanaman Eksplan Ekplan yang yang steril dipindahkan ke media perlakuan di dalam LAF, sebelumnya LAF disterilisasi dengan sinar UV, setiap botol terdiri atas 3 eksplan planlet kentang masing-masing muncul 1 nodus dan 1 daun. 4. Inkubasi Inkubasi ekplan dilakukan di ruangan steril dengan suhu dan cahaya terkontrol. Dalam tahap ini eksplan yang sudah ditanam di media disimpan di rak penyimpanan dengan suhu ruang inkubasi terjaga sehingga mendukung perkembangan eksplan. Suhu yang digunakan dalam pembentukan mikrotuber secara in vitro adalah 20-23 C selanjutnya diberi perlakuan kondisi terang dengan cahaya lampu TL 40 watt Media cair Media padat 30 5. Penambahan media cair Penambahan media cair dilakukan setelah eksplan mampu membentuk planlet selama 1,5 bulan. Planlet yang telah tumbuh tersebut diberikan perlakuan berupa penambahan media cair dengan konsentrasi sukrosa 40 gl dan 80 gl. Dalam tahap ini planlet diinkubasi pada ruangan dengan suhu 20-23 C selanjutnya diberikan pelakuan kondisi gelap atau tanpa cahaya. Gambar 8 Proses pembentukan mikrotuber dari eksplan satu nodus dan satu helai daun, 1 sumber eksplan planlet kentang var. Margahayu pada media MS, 2 eksplan satu nodus dengan satu daun, 3 subkultur eksplan di media padat, 4 pertumbuhan vegetatif planlet kentang, 5 penambahan media cair dengan variasi sukrosa, 6 Mikrotuber kentang var. Margahayu.

F. Metode Pengumpulan Data dan Analisis Data