III. BAHAN DAN METODE
3.1. Bahan dan Alat
3.1.1. Bahan
Bahan dasar yang digunakan adalah daun jelatang Urtica dioica L. kering yang disuplai oleh Fytagoras BV Plant Science, Belanda. Hewan percobaan yaitu tikus jenis Sprague Dawley diperoleh
dari SEAFAST Center, IPB. Bahan untuk pemeliharaan tikus, meliputi air minum dalam kemasan dan ransum yang mengikuti standar American Institute of Nutrition AIN 1976. Komposisi ransum
standar AIN 1976 tertera pada Tabel 2.
Tabel 2. Komposisi ransum standar AIN 1976
Bahan Penyusun Jumlah
Protein
a
20 Lemak
b
5 Selulosa
c
5 Campuran vitamin
1 Campuran mineral
3,5 Pati
d
Untuk membuat 100
a
Sebagai sumber protein digunakan tepung kasein
b
sebagai sumber lemak digunakan minyak jagung
c
sebagai sumber selulosa digunakan carboxymethylcellulose
d
sebagai sumber pati digunakan tepung maizena
Ransum standar AIN 1976 menggunakan campuran vitamin dan mineral. Komposisi campuran vitamin dapat dilihat pada Tabel 3 sedangkan komposisi campuran mineralnya pada Tabel 4.
Tabel 3
. Komposisi campuran vitamin
Vitamin Jumlah
Unit
Vitamin A 1000
IU Vitamin B1
1,4 mg
Vitamin B2 1,6
mg Vitamin B6
2 mg
Vitamin B12 3
mg Vitamin C
60 mg
Vitamin D3 100
IU Vitamin E
5 mg
Nikotinamida 9
mg Kalsium pantetonat
5 mg
Sumber: Puspawati 2009
13
Tabel 4. Komposisi campuran mineral
Nama senyawa Jumlah gkg
campuran
NaCl 39,3 Na, 60,7 Cl 74,0
KI 40,7 K, 59,3 I 0,790
KH
2
PO
4
22,8 P, 28,7 K 389,000
MgSO
4.
7H
2
O 57,300
CaCO
3
40 Ca 381,400
FeSO
4.
7H
2
O 20,1 Fe 27,000
MnSO
4.
7H
2
O 4,010
ZnSO
4.
7H
2
O 0,548
CuSO
4
. 5H
2
O 0,477
CoCl
2.
6H
2
O 0,023
Sumber: Puspawati 2009 Bahan untuk euthanasia tikus, yaitu eter. Bahan-bahan kimia yang digunakan pada pengujian
proliferasi sel limfosit meliputi bubuk Rosewell Park Memorial Institute RPMI-1640 sebagai medium pertumbuhan sel limfosit, antibiotik penicilin-streptomisin, mitogen lipopolisakarida LPS
Salmonella typhii, larutan rhodamin B 0.04 mgml, 0.08 mgml, dan 0.12 mgml, larutan karmoisin 0.16 mgml, 0.32 mgml, 0.48 mgml, NH
4
Cl, tryphan blue, NaHCO
3
, aquabides, phosfat buffer saline PBS, fetal bovine serum FBS, MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium
bromide, HCl, isopropanol.
3.1.2. Alat