III. BAHAN DAN METODE
3.1. Bahan dan Alat
3.1.1. Bahan
Bahan dasar yang digunakan adalah daun jelatang Urtica dioica L. kering yang disuplai oleh Fytagoras BV Plant Science, Belanda. Hewan percobaan yaitu tikus jenis Sprague Dawley diperoleh
dari SEAFAST Center, IPB. Bahan untuk pemeliharaan tikus, meliputi air minum dalam kemasan dan ransum  yang  mengikuti  standar  American  Institute  of  Nutrition  AIN  1976.  Komposisi  ransum
standar AIN 1976 tertera pada Tabel 2.
Tabel 2. Komposisi ransum standar AIN 1976
Bahan Penyusun Jumlah
Protein
a
20 Lemak
b
5 Selulosa
c
5 Campuran vitamin
1 Campuran mineral
3,5 Pati
d
Untuk membuat 100
a
Sebagai sumber protein digunakan tepung kasein
b
sebagai sumber lemak digunakan minyak jagung
c
sebagai sumber selulosa digunakan carboxymethylcellulose
d
sebagai sumber pati digunakan tepung maizena
Ransum standar AIN 1976 menggunakan campuran vitamin dan mineral. Komposisi campuran vitamin dapat dilihat pada Tabel 3 sedangkan komposisi campuran mineralnya pada Tabel 4.
Tabel 3
. Komposisi campuran vitamin
Vitamin Jumlah
Unit
Vitamin A 1000
IU Vitamin B1
1,4 mg
Vitamin B2 1,6
mg Vitamin B6
2 mg
Vitamin B12 3
mg Vitamin C
60 mg
Vitamin D3 100
IU Vitamin E
5 mg
Nikotinamida 9
mg Kalsium pantetonat
5 mg
Sumber: Puspawati 2009
13
Tabel 4. Komposisi campuran mineral
Nama senyawa Jumlah gkg
campuran
NaCl 39,3 Na, 60,7 Cl 74,0
KI 40,7 K, 59,3 I 0,790
KH
2
PO
4
22,8 P, 28,7 K 389,000
MgSO
4.
7H
2
O 57,300
CaCO
3
40 Ca 381,400
FeSO
4.
7H
2
O 20,1 Fe 27,000
MnSO
4.
7H
2
O 4,010
ZnSO
4.
7H
2
O 0,548
CuSO
4
. 5H
2
O 0,477
CoCl
2.
6H
2
O 0,023
Sumber: Puspawati 2009 Bahan  untuk  euthanasia tikus,  yaitu  eter.  Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  pada  pengujian
proliferasi  sel  limfosit  meliputi  bubuk  Rosewell  Park  Memorial  Institute  RPMI-1640  sebagai medium  pertumbuhan  sel  limfosit,  antibiotik  penicilin-streptomisin,  mitogen  lipopolisakarida  LPS
Salmonella typhii, larutan rhodamin B 0.04 mgml, 0.08 mgml, dan 0.12 mgml, larutan karmoisin 0.16  mgml,  0.32  mgml,  0.48  mgml,  NH
4
Cl,  tryphan  blue,  NaHCO
3
,  aquabides,  phosfat  buffer saline  PBS,  fetal  bovine  serum  FBS,  MTT  3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium
bromide, HCl, isopropanol.
3.1.2. Alat