BAB III METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Juni sampai dengan Desember 2006, di Laboratorium Kultur Jaringan, Sublaboratorium Biologi, Laboratorium
Pusat MIPA, Universitas Sebelas Maret Surakarta.
B. Bahan dan Alat
1. Bahan Tanaman Sumber Eksplan
Sumber eksplan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun ke dua dari pucuk tanaman pule pandak R. verticillata Lour. Baillon berumur 2 tahun.
Tanaman diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Obat BPTO Tawangmangu, Jl. Lawu Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah.
2. Bahan Kalus
Kalus yang digunakan untuk perlakuan dalam penelitian adalah kalus dengan berat basah antara 0,7-1,0 gram.
3. Bahan Elisitor
Bahan elisitor yang digunakan dalam penelitian ini berupa elisitor biotik, yaitu isolat murni cendawan Pythium sp. Isolat diperoleh dari Laboratorium
Klinik, Jurusan Hama dan Penyakit Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
20
4. Bahan Kimia
Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini meliputi: a. Bahan kimia untuk sterilisasi eksplan, yaitu: deterjen cair, aquades steril,
agrept anti bakteri 5, dithane anti fungi 5, dan etanol 70. b. Bahan kimia untuk pembuatan media, yaitu:
1 Media inisiasi kalus Bahan yang digunakan untuk membuat satu liter media inisiasi
kalus adalah: komposisi bahan kimia yang terdapat dalam media MS Lampiran 4, 7,5 gram bahan pemadat agar, 2 mg kinetin, 2 mg NAA,
KOH 1 N, HCl 1 N, dan aquades. 2 Media perlakuan
Bahan yang digunakan untuk membuat satu liter media perlakuan adalah seperti yang digunakan dalam pembuatan media inisiasi kalus.
Media perlakuan sedikit berbeda dengan media inisiasi kalus, yaitu tanpa menggunakan KNO
3,
KH
2
PO
4
dikurangi menjadi 100 mgL, tidak menggunakan NAA, dan zat pengatur tumbuh ZPT yang digunakan
adalah kinetin 5 mgL Aryati et al., 2005. 3 Media kultur cendawan Pythium sp.
a Media agar Bahan yang digunakan untuk membuat satu liter media agar
adalah: 39 gram Potato Dextrosa Agar dan aquades.
b Media cair broth Bahan yang digunakan untuk membuat satu liter media cair
Potato Dextrose Broth PDB cendawan Pythium sp. adalah: 250 g
kentang putih, 20 g dextrose, dan 1L aquades Burgess et al., 1994.
c. Analisis kandungan reserpin Bahan yang digunakan untuk analisis kandungan reserpin adalah:
etanol p.a. ethanol pure analysis, akuabides DDH
2
Odouble distillated water, asam sulfamat 0,5, sodium nitrit 0,3, dan senyawa reserpin murni.
5. Alat