Cara Pengambilan Jaringan dan Fiksasi Cara pemotongan blok sectioning Pewarnaan HE

Lampiran 2. Metode Baku Histologi Pemeriksaan Jaringan

A. Cara Pengambilan Jaringan dan Fiksasi

1 Mengambil jaringan sesegera mungkin setelah tikus wistar diterminasi dengan cara dislokasi leher kurang dari 2 jam dengan ukuran 1 cm 3. 2 Kemudian memasukan ke dalam larutan fikasasi dengan urutan sebagai berikut : a Fiksasi dalam larutan formalin 10 b Dehidrasi dengan alkohol 30 selama 20 menit I, 20 menit II, dan 20 menit ke III.  Lalu lanjutkan dengan alkohol 40 1 jam  Alkohol 50 1 jam  Alkohol 60 1 jam  Alkohol 70 1 jam  Alkohol 80 1 jam  Alkohol 90 1 jam alkohol 70 -80 dapat ditunda sampai keesokan harinya. c Larutan xylol 1 : 1 dengan waktu kurang lebih 24 jam. d Clearing dengan larutan xylol 1, 2, 3 dengan waktu masing-masing 20 menit, sehingga jaringan terlihat tembus pandang. e Xlol parafin 1 : 1 selama 20 menit24 jam dengan dipanaskan dalam oven 60 C. f Embeding dan bloking: parafin 1, 2, 3 selama 20 menit, lalu jaringan dicetak blok parafin kemudian didinginkan, sehingga cetakan dapat dibuka. g Trimming: memotong balok-balok parafin sehingga jaringan mudah dipotong dengan mikrotom.

B. Cara pemotongan blok sectioning

1 Menyiapkan kaca objek bersih. 2 Kaca objek diberi albumin ditengahnya dan direkatkan. 3 Blok yang sudah disiapkan dipotong dengan ketebalan 5 mikron, lalu dimasukkan dalam air panas kurang lebih 60 C. Setelah jaringan mengembang, jaringan diambil dengan kaca objek yang sudah diberi albumin. 4 Kemudian dikeringkan 5 Parafin yang ada pada kaca objek atau jaringan dihilangkan dengan dipanaskan dalam oven 60 C atau dengan tungku.

C. Pewarnaan HE

Slide jaringan dimasukkan kedalam : 1 Xylol 1, 2, 3 masing-masing 10 menit. 2 Rehidrasi dengan alkohol xylol selama 5 menit. 3 Bilas alkohol 30-96 masing-masing kurang lebih 30 menit. 4 Bilas aquades 1x kurang lebih 10 menit. 5 Rendam dalam hematosiklin kurang lebih 10 menit. 6 Bilas dengan air mengalir sampai bersih. 7 Bilas aquades, lalu acid alcohol alkohol+NaCl 0,9. 8 Bilas alkohol 50-96 9 Eosin kurang lebih 2-5 10 Bilas alkohol 96 sebanyak 2x 11 Bilas alkohol xylol. 12 Keringkan dengan kertas saring, langsung dibersihkan kotoran-kotoran yang ada disekitar jaringan. 13 Xlol 1 5 menit, xylol 2 5 menit tetesi asam canada, langsung ditutup kaca penutup. 14 Preparat sudah siap untuk diamati di atas mikroskop. Lampiran 3 : Hasil Gambaran Histopatologi Ginjal Kelompok Kontrol Kelompok P1 Kelompok P2 Kelompok P3 Keterangan : Sel normal Sel degenerasi Sel nekrosis lampiran 4. Hasil Skoring Penelitian Tabel 13 . Hasil skoring Pengamatan Gambaran Histopatologi Sel Tubulus Ginjal Tikus Wistar Kelompok Degenerasi D Nekrosis N I II III IV V I II III IV V Kontrol 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Kontrol 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Kontrol 3 1 1 1 1 1 1 1 1 Kontrol 4 1 1 1 1 1 1 1 1 Kontrol 5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Perlakuan 1-A 3 3 4 3 3 1 2 1 2 2 Perlakuan 1-B 3 3 3 4 4 1 3 1 3 3 Perlakuan 1-C 4 2 3 2 3 2 3 1 3 2 Perlakuan 1-D 4 3 3 4 4 2 1 1 3 3 Perlakuan 1-E 3 3 2 2 2 2 2 3 2 3 Perlakuan 2-A 4 4 4 3 3 1 1 1 2 1 Perlakuan 2-B 3 3 3 2 2 3 3 1 1 1 Perlakuan 2-C 1 2 1 2 3 1 2 1 2 3 Perlakuan 2-D 2 2 2 3 3 3 3 3 2 2 Perlakuan 2-E 4 3 2 2 3 1 1 1 2 1 Perlakuan 3-A 4 4 3 4 4 1 1 2 1 1 Perlakuan 3-B 3 3 4 4 3 2 2 1 1 2 Perlakuan 3-C 3 3 4 3 4 1 1 1 1 1 Perlakuan 3-D 4 4 3 4 4 1 1 1 1 1 Perlakuan 3-E 3 3 3 3 2 3 1 1 2 2 Keterangan : 1 = lesi kurang dari 25 total lapangan pandang 2= lesi 25- ˂50 total lapangan pandang 3= lesi 50-70 total lapangan pandang 4= lesi lebih dari sama dengan 75 total lapangan pandang Lampiran 5 . Hasil Analisis SPSS Degenerasi Case Summaries Degenerasi 5 .8800 .10954 .8000 .80 1.00 5 3.0800 .48166 3.2000 2.40 3.60 5 2.6400 .65422 2.6000 1.80 3.60 5 3.4400 .40988 3.4000 2.80 3.80 20 2.5100 1.09251 2.8000 .80 3.80 Kelompok Kontrol P1 P2 P3 Total N Mean Std. Dev iat ion Median Minimum Maximum Tests of Normali ty .367 5 .026 .684 5 .006 .198 5 .200 .957 5 .787 .203 5 .200 .976 5 .914 .261 5 .200 .862 5 .236 Kelompok Kontrol P1 P2 P3 Degenerasi Stat istic df Sig. Stat istic df Sig. Kolmogorov -Smirnov a Shapiro-Wilk This is a lower bound of the true signif icance. . Lillief ors Signif icance Correct ion a. Test of Homogeneity of Variance 1.627 3 16 .223 1.326 3 16 .301 1.326 3 10.707 .317 1.605 3 16 .228 Based on Mean Based on Median Based on Median and with adjusted df Based on trimmed mean Degenerasi Lev ene Stat istic df 1 df 2 Sig. Box Plot Kruskal-Wallis Test Mann-Whitney Test Ranks 5 3.00 5 12.80 5 10.20 5 16.00 20 Kelompok Kontrol P1 P2 P3 Total Degenerasi N Mean Rank Test Statistics

a,b