Karakterisasi Senyawa Aktif Ekstrak Daun Sirsak (Annona Muricata L) Dan Aktivitas Sitotoksiknya Pada Sel Murin Leukemia P-388
K A R A K T E R IS A S I SE N Y A W A A K T IF E K S T R A K D A U N
S I R S A K ( A n n o n a m u r ic a ta L ) D A N A K T I V I T A S
S I T O T O K S I K N Y A P A D A S E L M U R I N L E U K E M I A P -3 8 8
S Y A M S U L H ID A Y A T
SEK O LA H PA SC A SA R JAN A
IN S T IT U T P E R T A N IA N B O G O R
BOGOR
2016
P E R N Y A T A A N M E N G E N A I T E S IS D A N
S U M B E R IN F O R M A S I S E R T A P E L IM P A H A N H A K C IP T A
D e n g a n i n i s a y a m e n y a t a k a n b a h w a t e s i s b e r j u d u l K a r a k t e r is a s i S e n y a w a
A k t i f E k s t r a k D a u n S i r s a k ( A n n o n a m u r ic a t a L ) d a n A k t i v i t a s S it o t o k s i k n y a p a d a
S e l M u r i n L e u k e m ia P - 3 8 8 a d a la h b e n a r k a r y a s a y a d e n g a n a r a h a n d a r i k o m i s i
p e m b i m b i n g d a n b e l u m d ia j u k a n d a l a m b e n t u k a p a p u n k e p a d a p e r g u r u a n t i n g g i
m a n a p u n . S u m b e r i n f o r m a s i y a n g b e r a s a l a ta u d i k u ti p d a r i k a r y a y a n g d i t e r b it k a n
m a u p u n ti d a k d i t e r b it k a n d a r i p e n u li s l a i n t e l a h d i s e b u t k a n d a la m t e k s d a n
d i c a n t u m k a n d a l a m D a f t a r P u s ta k a d i b a g i a n a k h ir t e s i s i n i .
D e n g a n i n i s a y a m e l im p a h k a n h a k c i p t a d a r i k a r y a t u li s s a y a k e p a d a I n s t it u t
P e rta n ian B o g o r.
B o g o r, A g u stu s2 0 1 6
S y a m su l H id a y a t
N IM G 4 5 1 1 3 0 2 3 1
R IN G K A S A N
S Y A M S U L H I D A Y A T . K a r a k t e r i s a s i S e n y a w a A k ti f E k s t r a k D a u n S i r s a k
( A n n o n a m u r i c a t a L ) d a n A k t i v i t a s S it o t o k s i k n y a p a d a S e l M u r i n L e u k e m i a P 3 8 8 . D i b i m b i n g o le h P U R W A N T I N I N G S I H S U G I T A d a n I R M A H E R A W A T I
SUPAR TO.
K a n k e r h i n g g a s a a t i n i m a s i h m e r u p a k a n p e n y a k it p a l i n g m e m a t i k a n d i
d u n i a .B e r b a g a i ri s e t u n t u k m e n g u r a n g i r e s i k o t e r h a d a p k a n k e r t e r u s g e n c a r
d i l a k u k a n .P e n c e g a h a n t e r h a d a p k a n k e r b i s a d i l a k u k a n d e n g a n m e n g g u n a k a n
s e n y a w a b a h a n a l a m y a n g m e m i li k i a k ti v it a s a n t i k a n k e r . S a l a h s a t u t u m b u h a n
y a n g d i j u l u k i s e b a g a i t h e c a n c e r k il l e r a d a l a h A n n o n a m u r i c a t a L . B e r b a g a i
b a g i a n d a r i t u m b u h a n i n i t e l a h b a n y a k d il a p o r k a n m e m il i k i a k ti v i ta s
p e n g h a m b a t a n t e r h a d a p s e l k a n k e r . N a m u n b e l u m a d a l a p o r a n t e n t a n g a k ti v i ta s
p e n g h a m b a t a n n y a t e r h a d a p s e l k a n k e r m u r i n le u k e m i a P - 3 8 8 . P a d a h a l k e m a m p u a n
s u a t u b a h a n a k ti f s e b a g a i a n t i k a n k e r s e h a r u s n y a t e l a h t e r u ji p a d a b e r b a g a i j e n i s
s e l k a n k e r , t e r m a s u k s e l j e n is s u s p e n s i s e p e r t i m u r i n P - 3 8 8 . O l e h k a r e n a it u
p e n e l it i a n i n i b e r t u j u a n u n t u k m e n g e t a h u i p o t e n s i p e n g h a m b a t a n s e l m u r i n
l e u k e m i a P - 3 8 8 o le h f r a k s i a k t i f e k s tr a k d a u n A . m u r i c a t a L .
S e r b u k d a u n s ir s a k y a n g d i p e r o l e h d a r i k e b u n P u s a t S t u d i B i o f a r m a k a
I n s t it u t P e r t a n i a n B o g o r m e m i li k i k a d a r a i r s e b e s a r 7 .3 0 % . S e r b u k te r s e b u t
d i e k s tr a k s i m e n g g u n a k a n p e l a r u t e t a n o l s e b a n y a k ti g a k a l i 2 4 j a m d i d a la m s u h u
r u a n g . D a r i p r o s e s i n i d i p e r o l e h e k s t r a k k a s a r s e b e r a t 2 8 5 .9 1 g . K a n d u n g a n
k l o r o f i l d a n ta n i n l a l u d i p i s a h k a n d a r i e k s t r a k k a s a r e t a n o l , h i n g g a m e n y i s a k a n
e k s t r a k E t O A c y a n g t e r b e b a s d a r i t a n i n d a n k l o r o f il s e b e r a t 2 7 .5 4 g . S e l a n j u t n y a
e k s t r a k E t O A c d i f r a k s i n a s i m e n g g u n a k a n K r o m a t o g r a f i C a ir V a k u m ( K C V ) a g a r
d ip e ro leh fra k si y a n g le b ih se d e rh a n a . P a d a p ros e s ini d ip e role h s e m bilan fra k si
( A - I ) d a n s e b a g a i p e n a p i s a n t o k s i s i t a s n y a d il a k u k a n d e n g a n m e t o d e B r i n e S h r i m p
L e t h a l it y T e s t ( B S L T ) . H a s il B S L T m e n u n j u k k a n b a h w a f r a k s i A , C d a n F
m a s i n g - m a s i n g m e m i li k i n i la i L C 5 0 s e b e s a r 2 7 5 .5 3 , 3 2 0 .3 5 , d a n 9 4 .5 1 µ g .m l 1
. K e t i g a f r a k s i i n i k e m u d i a n d il a n j u t k a n k e ta h a p p e m u r n ia n m e n g g u n a k a n
K L T P . H a s i l K L T P k e m b a l i d i u ji t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T . B e r d a s a r k a n
n i l a i L C 5 0 d a n k e t e r s e d ia a n r e n d e m e n n y a f r a k s i F 3 d i p il i h u n t u k d il a n j u t k a n k e u ji
a k t i v it a s p e n g h a m b a t a n s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
S e l a i n f r a k s i F 3 , u ji a k ti v it a s p e n g h a m b a t a n s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P 3 8 8 j u g a d i l a k u k a n t e r h a d a p f r a k s i F d a n e k st r a k E t O A c .N i l a i I C 5 0 y a n g d i p e r o l e h
u n t u k e k s t r a k E t O A c , f r a k s i F , d a n f r a k s i F 3 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t a d a l a h s e b e s a r
0 . 1 6 , < 0 . 1 , d a n > 1 0 0 µ g .m l - 1 . I n i m e n u n j u k k a n b a h w a k e m a m p u a n e k s tr a k
E t O A c d a n f r a k s i F d a l a m m e n g h a m b a t p e r t u m b u h a n s e l k a n k e r m u r i n le u k e m i a
P - 3 8 8 l e b i h b a i k d i b a n d i n g k a n d e n g a n k o n t r o l p o s i ti f A r t o n i n E y a n g d i g u n a k a n ,
d e n g a n n i l a i I C 5 0 h a n y a s e b e s a r 0 .7 6 µ g .m l - 1 .
K a t a k u n c i : A n n o n a m u r i c a t a L ,a n ti k a n k e r ,l e u k e m i a , m u r i n P - 3 8 8
SU M M A R Y
S Y A M S U L H I D A Y A T . C h a r a c t e r i z a t i o n o f A c ti v e C o m p o u n d s o n E x t r a c t e d
L e a v e s o f S o u r s o p ( A n n o n a m u r i c a t a L ) a n d C y t o t o x i c it y A s s e s s m e n t o n M u r i n
C e ll L e u k em ia P -3 8 8 . S u p erv ise d b y P U R W A N T IN IN G S IH S U G IT A a n d IR M A
HERAW ATI SUPART O.
C a n c e r i s t h e m o s t d e a d l y d i s e a s e s i n t h e w o r l d . V a r i o u sr e s e a rc h t o r e d u c e t h e
r i s k o f c a n c e r i n t e n s i v e l y c o n d u c te d . P r e v e n t i o n o f c a n c e r c a n b e d o n e b y u s i n g
n a t u r a l c o m p o u n d s t h a t h a v e a n ti c a n c e r a c t i v i t y . T h e p l a n t w a s d i s c r i b e d a s t h e
c a n c e r k il l e r i s A n n o n a m u r i c a t a L , d u e t o it ’ s r e m a r k a b l e c y t o t o x i c it y a g a i n s t
s e v e r a l c a n c e r c e ll l i n e s . S o m e p a r t s o f t h i s p l a n t h a v e b e e n r e p o r t e d h a v i n g a n
i n h i b it o r y a c ti v it y a g a i n s t c a n c e r c e l ls . B u t t h e r e h a s b e e n n o r e p o r t o n t h e
i n h i b it o r y a c ti v it y a g a i n s t c a n c e r c e ll s m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 . Y e t t h e a b i li t y o f
a n a c t i v e c o m p o u n d a s a n ti c a n c e r s h o u l d h a v e b e e n t e s t e d o n v a r i o u s t y p e s o f
c a n c e r c e l l s , i n c l u d i n g c e l l t y p e s u s p e n s i o n a s m u r i n e P - 3 8 8 .T h e r e f o r e , t h i s st u d y
a i m s t o d e t e r m i n e t h e p o t e n t ia l i n h ib i ti o n o f c e ll m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 b y t h e
a c tiv e fra ctio n e xtra ct o f le a v e s o f A . m u ric a ta L .
A . m u ric a ta L lea f p o w d e r is o bta in e d from T h e G a rd e n C e nte r
o f B i o f a r m a k a B o g o r A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y h a s a w a t e r c o n t e n t o f 7 .3 0 % . T h e
p o w d e r w e re m a c e rate in 9 6% e th a n ol fo r th re e tim e s 2 4 h o u rs at ro o m te m p era ture .
F r o m t h i s p r o c e s s , t h e c r u d e e x t r a c t o b t a i n e d w e i g h i n g 2 8 5 .9 1 g . T h e c o n t e n t o f
c h l o r o p h y ll a n d t a n n i n s w e r e s e p a r a t e d f r o m t h e c r u d e e x tr a c t e t h a n o l u n t il
l e a v i n g E t O A c e x t r a c ts a r e f r e e f r o m t a n n i n a n d c h l o r o p h y l l . T h i s p r o c e s s y i e l d e d
2 7 . 5 4 g o f E t O A c e x t r a c t s . F u r t h e r m o r e E t O A c e x t r a c t s w e r e f r a c ti o n a t e d u s i n g
th e K C V in o rd e r to o b ta in a m o re sim ple frac tio ns . In this p ro c es s g a in e d nin e
f r a c ti o n s ( A - I ) a n d a s c r e e n i n g t o x i c it y te s t w a s c o n d u c t e d u s i n g B r i n e S h r im p
L e t h a l it y T e s t ( B S L T ) . B S L T r e s u lt s s h o w e d t h a t t h e f r a c t i o n A , C a n d F h a v e
L C 5 0 v a l u e s o f 2 7 5 .5 3 , 3 2 0 .3 5 a n d 9 4 .5 1 μ g .m l - 1 , r e s p e c t i v e l y . A ll o f t h r e e
f r a c ti o n s t h e n p r o c e e d e d t o n e x t s t e p p u r i f i c a ti o n u s i n g K L T P a n d K L T P
r e s u lt s w e r e t e s t e d f o r t o x i c it y u s i n g B S L T . B a s e d o n t h e L C 5 0 v a l u e a n d q u a n t i t y ,
F 3 f r a c t i o n h a v e t o c o n ti n u e t o t e s t t h e i n h i b i t o r y a c t i v i t y o f c a n c e r c e ll s m u r i n e
le u k e m ia P -3 8 8 .
I n a d d i t i o n t o F 3 f r a c ti o n , t h e i n h i b it o r y a c ti v it y t e s t o f c a n c e r c e ll s m u r i n e
l e u k e m i a P - 3 8 8 i s a ls o m a d e t o t h e F f r a c t i o n a n d E t O A c e x tr a c t . I C 5 0 v a l u e f o r
t h e E t O A c e x t r a c t , F f r a c ti o n , a n d F 3 f r a c t i o n f r o m t h e t e s t a r e 0 .1 6 , < 0 . 1 , a n d >
1 0 0 μ g . m l – 1 , r e s p e c ti v e l y . T h e s e s h o w t h a t t h e a b il i t y E t O A c e x tr a c t s a n d F
f r a c ti o n s i n i n h i b i ti n g t h e g r o w t h o f c a n c e r c e ll s m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 i s f i v e
t i m e s b e tt e r t h a n t h e p o s it i v e c o n t r o l A r t o n i n E u s e d , w it h I C 5 0 v a l u e s o f A r t o n i n
E o n l y 0 .7 6 μ g . m l – 1 .
K e y w o r d s : A n n o n a m u r i c a t a L , a n ti c a n c e r , l e u k e m i a , m u r i n P - 3 8 8
© H a k C ip ta M ili k I P B , T a h u n 2 0 1 6
H a k C ip ta D i lin d u n g i U n d a n g - U n d a n g
D i l a r a n g m e n g u ti p s e b a g i a n a t a u s e l u r u h k a r y a t u l i s i n i t a n p a m e n c a n t u m k a n
a t a u m e n y e b u t k a n s u m b e r n y a . P e n g u t i p a n h a n y a u n t u k k e p e n ti n g a n p e n d i d i k a n ,
p e n e l it i a n , p e n u l i s a n k a r y a i l m i a h , p e n y u s u n a n l a p o r a n , p e n u l is a n k r it i k , a t a u
t i n j a u a n s u a t u m a s a l a h ; d a n p e n g u t i p a n t e r s e b u t t i d a k m e r u g i k a n k e p e n ti n g a n
IP B
D i l a r a n g m e n g u m u m k a n d a n m e m p e r b a n y a k s e b a g i a n a t a u s e l u r u h k a r y a t u li s i n i
d a la m b e n tu k a p a p u n ta n p a izin IP B
K A R A K T E R IS A S I SE N Y A W A A K T IF E K S T R A K D A U N
S I R S A K ( A n n o n a m u r ic a ta L ) D A N A K T I V I T A S
S I T O T O K S I K N Y A P A D A S E L M U R I N L E U K E M I A P -3 8 8
S Y A M S U L H ID A Y A T
T e sis
s e b a g a i s a l a h s a t u s y a r a t u n tu k m e m p e r o le h g e l a r
M a g i s te r S a i n s
pada
P ro g ra m S tu di K im ia
SEK O LA H PA SC A SA R JAN A
IN S T IT U T P E R T A N IA N B O G O R
BOGOR
2016
P e n g u j i L u a r K o m i s i p a d a U j i a n T e s i s : D r Z a e n a l A l im M a s ’ u d D E A
PRAK ATA
P u j i d a n s y u k u r p e n u li s p a n j a t k a n k e p a d a A l la h s u b h a n a h u w a t a ’ a l a a t a s
s e g a l a k a r u n ia - N y a s e h i n g g a p e n u li s d a p a t m e n y e l e s a i k a n t e s is i n i . J u d u l y a n g
d i p i li h d a l a m p e n e li t ia n i n i i a l a h K a r a k t e r i s a s i S e n y a w a A k t if E k s tr a k D a u n
S i r s a k ( A n n o n a m u r ic a t a L ) d a n A k ti v it a s S it o t o k s i k n y a p a d a S e l M u r i n
L e u k e m i a P - 3 8 8 .P e n e l it i a n i n i m e r u p a k a n s a l a h s a t u p e r s y a r a ta n u n t u k
m e m p e r o l e h g e la r M a g is t e r S a i n s p a d a P r o g r a m S t u d i K im i a d i S e k o l a h
P a s c a s a r j a n a I n s t it u t P e r t a n i a n B o g o r .
T e r i m a k a s i h p e n u l is u c a p k a n k e p a d a P r o f D r P u r w a n ti n i n g s i h S u g it a , M S
d a n D r d r I r m a H e r a w a t i S u p a r t o , M S s e l a k u k o m i s i p e m b im b i n g y a n g t e l a h
b a n y a k m e m b e r i m a s u k a n d a n a r a h a n d a l a m m e n y e l e s a i k a n p e n e l it i a n d a n t e s i s
i n i . T e r i m a k a s i h j u g a k e p a d a P r o f D r D y a h I s w a n t in i M S c A g r s e l a k u K e t u a
P r o g r a m S t u d i M a g is t e r K im ia , ja ja r a n s ta f l a b o r a t o r i u m k im i a o r g a n i k , r e k a n - r e k a n
k e l a s p r o g r a m s t u d i m a g is t e r k im ia , d a n s e l u r u h p ih a k y a n g t e l a h m e m b a n t u h i n g g a
p e n e l it i a n i n i t e r s e l e s a i k a n .U n g k a p a n te r im a k a s i h d a n r a s a h o r m a t s e t i n g g it i n g g i n y a j u g a p e n u li s s a m p a i k a n k e p a d a a y a h , i b u , s e r t a s e l u r u h k e l u a r g a a ta s
s e g a l a d o a d a n k a s i h s a y a n g n y a . T e n t u n y a k e p a d a i s tr i t e r c i n ta y a n g s e l a l u
m e m b e r i k a n d u k u n g a n u n t u k m e n y e l e s a i k a n k a r y a i lm i a h i n i .
A k h i r n y a s e m o g a k a r y a il m i a h i n i d a p a t b e r m a n f a a t b a g i p e n u li s , c i v it a s
a k a d e m i k a d a n p a r a p e m b a c a .S e h i n g g a m a m p u m e m b e r i k a n i n f o rm a si u n t u k
m e m p e r l u a s k h a s a n a h k e il m u a n d i m a s a m e n d a t a n g .
B o g o r, A g u stu s 2 0 1 6
S y a m su l H id a y a t
D A F T A R IS I
DAFT AR T ABEL
vi
DAFT AR G AM BA R
vi
D A F T A R L A M P IR A N
vi
1 PEND AH ULU AN
L a ta r B e la k a n g
P e ru m u sa n M a sa la h
T u j u a n P e n e l it i a n
M a n f a a t P e n e l it i a n
1
1
2
2
3
2 M ETODE
W a k t u d a n T e m p a t P e n e li ti a n
B ahan
A la t
P r o s e d u r P e n e l i ti a n
3
3
3
3
3
3 H A S IL D A N P E M B A H A S A N
K a d a r A ir
E k s t r a k D a u n S i rs a k
K a n d u n g a n M e t a b o li t S e k u n d e r
F r a k s i o n a s i E k s tr a k E t O A c
N i l a i T o k s is it a s p a d a U ji B r i n e S h r i m p L e t h a li t y T e s t
K a r a k t e ri s a si S e n y a w a
A k tiv itas A n tik a n k er terh a d a p S e l M u rin L e u k em ia P-3 8 8
7
7
7
8
9
13
14
18
4 S IM P U L A N D A N S A R A N
S im p u la n
S aran
19
19
19
DAFT AR PUSTA KA
20
L A M P IR A N
23
R IW A Y A T H ID U P
30
DAFTAR TABEL
1 H a s i l u ji f it o k im i a p a d a e k s tr a k e t a n o l , E t O A c , t a n i n d a n
k l o r o fi l
2 N i l a i r e n d e m e n d a n t o k si si t a s fr a k s i h a si l K C V d a r i e k s t ra k E t O A c
d a u n sirsa k
3 N i l a i r e n d e m e n d a n t o k s is it a s f r a k s i h a s il K L T P
4 N i l a i I C 5 0 s a m p e l t e r h a d a p p e r t u m b u h a n s e l m u r i n l e u k e m ia P - 3 8 8
8
10
12
18
DAFTAR G AM BAR
1 P r o f i l K L T d e n g a n e l u e n n - h e k s a n a : E t O A c ( 7 : 3 ) d a ri ( 1 ) e k s t ra k
e t a n o l , ( 2 ) e k s tr a k E t O A c , ( 3 ) ta n i n d a n ( 4 ) k l o r o f il d a u n A n n o n a
m u r i c a t a L d i b a w a h p e n y i n a r a n U V ( λ 25 4 n m ) ( a ) d a n U V ( λ 36 6 n m ) ( b )
2 P r o f i l K L T e k s t r a k E t O A c d a u n s i r s a k d e n g a n g r a d a s i k e p o la r a n e l u e n
n - h e k s a n a : E t O A c ( a ) d i b a w a h si n a r U V ( λ 25 4 n m ) d a n ( b ) U V ( λ 36 6 n m )
3 P ro fil K L T e lu at 1 -1 8 h a sil K C V e k s tra k E tO A c d a u n s irs a k d e n g a n
e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) d i b a w a h si n a r U V ( λ 36 6 n m )
4 P r o f i l K L T h a s i l p e m i s a h a n fr a k s i A e k s t ra k E t O A c d a u n s i r s a k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) (a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
5 P ro fil K L T h a sil p e m isa h a n fra ksi C e k stra k E tO A c d a u n sirsa k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) (a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
6 P r o f i l K L T h a s i l p e m i s a h a n f r a k s i F e k s tr a k E t O A c d a u n s ir s a k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n D C M : M e O H ( 1 9 ,5 : 0 ,5 ) ( a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
7 G ra fik h a sil uji to ks isitas m e n g g u n a k a n B S L T (a ) fra k si A 2 d a n (b ) F 3
8 K r o m a t o g r a m fr a k s i A 2
9 S p e k t r u m m a ss a fr a k si A 2 d a n u su l a n s e n y a w a n y a b e r d a s a r k a n
p u s t a k a W I L L E Y 0 9 T H , ( a ) u n t u k w a k t u r e t e n s i 1 6 ,6 7 m e n i t d a n ( b )
u n t u k w a k t u r e t e n s i 1 7 ,7 4 m e n it
1 0 K r o m a t o g r a m fr a k s i F
1 1 ( a ) K r o m a t o g r a m f ra k s i F 3 ( b ) s p e k t r u m m a s s a fr a k si F 3 d a n u s u l a n
se n y a w a n y a b e rd asa rk a n p u sta k a W IL L E Y 0 9 T H p a d a w a k tu rete n si
2 8 ,6 7 m e n i t
8
9
10
11
12
12
13
14
15
16
17
D A F T A R L A M P IR A N
1
2
3
4
D i a g r a m a l i r p e n e li t ia n
S a l i n a n h a si l d e t e rm i n a s i t u m b u h a n si r s a k
P e r h i t u n g a n k a d a r a i r s i m p li s i a d a u n s i r s a k
P e rh itu n g a n nilai L C 50 p a d a B S L T
24
25
26
27
1 PENDAH ULUAN
L a ta r B e la k a n g
K a n k e r s a m p a i s a a t i n i m e r u p a k a n s a l a h s a t u p e n y a k it p a li n g m e m a ti k a n d i
d u n i a . M e n u r u t d a ta I n te r n a ti o n a l A g e n c y f o r R e s e a r c h o n C a n c e r - W H O , p a d a
t a h u n 2 0 1 2 t e r d a t a 1 4 .1 j u t a p e n d e r i ta k a n k e r , d a n 8 .2 j u t a k e m a ti a n a k i b a t k a n k e r .
L e b i h d a r i 5 0 % a n g k a t e r s e b u t t e r j a d i d i n e g a r a - n e g a r a t e r ti n g g a l . D i I n d o n e s i a
s e n d i r i k e m a t i a n a k i b a t k a n k e r m e r e n g g u t 1 9 5 3 0 0 ji w a p a d a t a h u n 2 0 1 4 .
U n t u k m e n g u r a n g i r e s i k o t e r h a d a p k a n k e r , p a r a p e n e l it i t e r u s m e l a k u k a n
b e r b a g a i r is e t . P e n c e g a h a n t e r h a d a p k a n k e r b i s a d il a k u k a n d e n g a n m e n g g u n a k a n
s e n y a w a b a h a n a l a m y a n g m e m i li k i a k ti v it a s a n ti k a n k e r . A n n o n a m e r u p a k a n s a l a h
s a t u g e n u s t u m b u h a n y a n g b a n y a k d il a p o r k a n m e m il i k i a k t i v i t a s a n t i k a n k e r .
B e b e r a p a s p e s i e s tu m b u h a n y a n g b e r a s a l d a r i g e n u s t e r s e b u t a d a l a h A n n o n a
s q u a m o s a , A . m o n t a n a , A . d i o i c a d a n A . m u r i c a t a ( C o n s o l a c i o n e t a l . 2 0 1 2 ; T o r re s
e t a l . 2 0 1 2 ; G u e t a l . 1 9 9 6 ; S u n e t a l . 2 0 1 4 ) .H o p p e t a l . ( 1 9 9 7 ) m e l a p o r k a n b a h w a
d a r i k u li t k a y u A . s q u a m o s a b e r h a s i l d i i s o l a s i s e n y a w a g o l o n g a n a s e t o g e n i n
d e n g a n e f e k t i v i t a s p e n g h a m b a ta n t e r h a d a p s e l k a n k e r p a n k r e a s P A C A - 2 d e n g a n
E D 5 0 s e b e s a r 1 , 2 x 1 0 -4 µ g / m L . S e n y a w a g o l o n g a n a s e t o g e n i n d a n a l k a l o i d j u g a
b e r h a s il d ii s o la s i d a r i d a u n A . m o n t a n a d a n m e n u n j u k k a n a k t i v it a s p e n g h a m b a t a n
t e r h a d a p s e l k a n k e r p a r u - p a r u L L C , A - 5 4 9 , u s u s H T - 2 9 , d a n m u ri n P - 3 8 8 d e n g a n
E D 5 0 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t s e b e s a r 0 .0 8 , 4 .4 6 , 2 .5 1 , d a n 3 .3 3 µ g / m L ( W u e t a l .
1 9 9 3 , W a n g e t a l . 2 0 0 2 ) . S e m e n ta r a it u , s e n y a w a k a e m p f e r o l y a n g m e r u p a k a n
g o l o n g a n f la v o n o i d d il a p o r k a n t e l a h d ii s o l a s i d a r i b a g i a n d a u n A . d i o i c a d a n
m a m p u m e n g h a m b a t s e l m u r i n E r l i c h k a r s i n o m a d e n g a n I C 5 0 s e b e s a r 7 .8
m m o l/ m L ( V e g a e t a l . 2 0 0 7 ) .
M e s k i p u n s p e s i e s y a n g s e g e n u s d e n g a n n y a ju g a m e m i li k i a k ti v it a s
a n t i k a n k e r , n a m u n A . m u r ic a t a L l e b i h d i k e n a l s e b a g a i “ T h e c a n c e r k i l le r ” d a n
s e c a r a e m p i r i s t e la h d i g u n a k a n s e b a g a i o b a t t r a d i s i o n a l u n t u k p e r a w a ta n p e n d e r it a
k a n k e r d a n t u m o r ( M o g h a d a m t o u s i e t a l . 2 0 1 4 ) .A . m u r i c a t a L a t a u y a n g p o p u l e r
d e n g a n s e b u t a n s ir s a k d i I n d o n e s i a b a h k a n t i d a k h a n y a m e m i li k i a k t i v i t a s s e b a g a i
a n t i k a n k e r .E k s t ra k k a s a r d a ri t u m b u h a n s i rs a k j u g a t e l a h d i l a p o r k a n b e r k h a s i a t
s e b a g a i a ntidia b e tes (A d e y e m i e t al. 2 0 0 9 ), a ntio k sid a n (F lo re n c e et a l. 2 0 1 4;
O l a k u n l e e t a l . 2 0 1 4 ; C u e v a s e t a l . 2 0 1 4 ) , a n ti i n f l a m a s i ( F o o n g d a n H a m i d 2 0 1 2 ) ,
d a n a n t ib a k t e r i ( V i j a y a m e e n a e t a l . 2 0 1 3 ) . P e n e l i ti a n y a n g t e l a h d i l a p o r k a n
t e r s e b u t m e n g g u n a k a n b e r b a g a i b a g i a n d a r i t u m b u h a n s i r s a k s e p e r ti b a g i a n a k a r ,
k u l i t b a t a n g , b u a h , b i ji d a n d a u n .
P a d a p e n e l i ti a n i n i y a n g a k a n d i g u n a k a n a d a l a h d a u n n y a . B e b e r a p a
p e n e l it i a n a n t i k a n k e r t e r h a d a p d a u n s ir s a k s e n d i r i b a n y a k d i l a p o r k a n d a l a m
b e n t u k e k s t r a k k a s a r n y a . S e p e r t i y a n g t e l a h d is a m p a i k a n o l e h H a m i z a h e t a l .
( 2 0 1 2 ) b a h w a e f e k p a p i l o m a g e n e s i s p a d a m e n c i t t e ri n d u k s i 7 ,1 2 d i m e t h y l b e n z ( α ) a n t h r a c e n e s e c a r a t o p i k a l s e la m a s e p u l u h m i n g g u m a m p u d it e k a n
p r o s e s i n i s i a s i t u m o r n y a s e te l a h p e m b e r i a n e k s tr a k e t a n o l d a u n s i r s a k d e n g a n
d o s i s 3 0 , 1 0 0 d a n 3 0 0 m g .k g - 1 b e r a t b a d a n . P a d a p e n e li ti a n l a i n j u g a d i l a p o r k a n
b a h w a e k s t r a k e t a n o l d a u n s ir s a k m a m p u m e n g h a m b a t s e l k a n k e r k a r s i n o m a
2
E r l i c h E A C C , s e l k a n k e r p a y u d a r a M D A d a n S K B R 3 d e n g a n I C 5 0 b e r t u r u t- t u r u t
s e b e s a r 3 3 5 .8 5 , 2 4 8 .7 7 , d a n 2 0 2 .3 3 µ g .m L - 1 ( G a v a m u k u l y a e t a l . 2 0 1 4 ) .
S e d a n g k a n e k s t r a k m e t a n o l d i l a p o r k a n m e m i li k i e f e k s i t o t o k s i k t e r h a d a p s e l
k a n k e r larin g H E p -2 d a n p a ru-p a ru N C I-H 2 9 2 (M elo e t al. 2 0 1 0 ).
S e m e n t a r a i t u , p e n e li t ia n t e r h a d a p a k ti v it a s a n t i k a n k e r y a n g m e n g g u n a k a n
se n y a w a m u rni, b a n y a k b erfo k u s p a da a seto g e n in y a n g m eru p a k a n su atu
p o l i k e ti d a . S e j a u h i n i l e b i h d a r i 4 0 0 je n i s a s e t o g e n i n t e l a h d il a p o r k a n b e r h a s il
d i i s o l a s i ( A m i n i m o g h a d a m f a r o u j e t a l . 2 0 1 1 ) . S e p e r t i y a n g d il a p o r k a n o l e h S u n e t
a l. (2 0 1 4 ), C o n so la c io n e t a l. (2 0 1 2), K im e t al. (1 9 9 8 ), d a n G u e t a l. (1 9 9 6 )
s e n y a w a a s e t o g e n i n d a r i A . m u r i c a t a m e m p u n y a i a k ti v i ta s s it o t o k s i k d a l a m
m e la w a n sel k a n k e r p a n kre a s P A C A -2 , p ro stat P C -3 , p a ru -p aru A -5 4 9 , h e p a tom a
H e p G 2 , p a y u d a ra M C F -7 , g in ja l A -4 9 8 d a n u su s H T -2 9 . S e la in ase to g e nin ,
s e n y a w a g o l o n g a n a l k a l o i d s e p e r t i a n n o n a m i n e d a n a n o n a i n e b e r h a s i l d i is o l a s i
d a r i d a u n s i r s a k d a n m e n u n j u k k a n e f e k s it o t o k s i k t e r h a d a p s e l n e u r o b l a s t o m a S H S Y 5 Y d e n g a n n i l a i I C 5 0 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t s e b e s a r 1 9 5 .8 ± 1 7 d a n 3 4 .6 ± 3 .5
µ M ( M a t s u s h i g e e t a l . 2 0 1 2 ) . E k s tr a k k a e m p f e r o l , s u a t u f l a v o n o i d j u g a d i p e r o l e h
d a r i d a u n s i r s a k d a n m e n u n j u k k a n a k t i v i t a s p e n g h a m b a t a n te r h a d a p s e l R a ji
d e n g a n I C 5 0 s e b e s a r 1 1 0 .8 2 µ g .m L - 1 ( M u s t a r i a n i , 2 0 1 1 ) .M e s k i p u n d e m i k i a n ,
h i n g g a s a a t i n i b e l u m p e r n a h d il a p o r k a n k a ji a n a k t i v it a s a n t i k a n k e r m e t a b o l it
s e k u n d e r d a r i A n n o n a m u r i c a t a t e r h a d a p s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .O l e h k a r e n a
i t u p e n e l it i a n u n t u k m e n c a r i s e n y a w a m e t a b o l it s e k u n d e r d a r i d a u n s i r s a k y a n g
d a p a t b e r p e r a n a k ti f d a l a m m e n g h a m b a t a k t i v i t a s s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8
m e n j a d i p e n ti n g u n t u k d i l a k u k a n .
P e r u m u sa n M a sa la h
T u m b u h a n A . m u r i c a t a L a t a u s i r s a k te l a h d i k e n a l s e b a g a i t u m b u h a n
b e r k h a s i a t o b a t . D i a n t a r a b a n y a k b i o a k t i v it a s y a n g d im il i k i , a n t i k a n k e r
m e r u p a k a n b i o a k t i v i t a s y a n g t e l a h b a n y a k d i l a p o r k a n . P e n e l i ti a n t e r k a it a n t i k a n k e r
d a r i s i r s a k l e b i h s e r i n g d il a p o r k a n m e n g g u n a k a n e k s t r a k k a s a r n y a . S e m e n t a r a it u ,
p e n e l it i a n d e n g a n s e n y a w a m u r n i l e b i h b a n y a k b e r f o k u s p a d a a s e t o g e n i n .D e n g a n
d e m i k ia n , b i o a k ti v it a s s i r s a k s e b a g a i a n t i k a n k e r m e m a n g s e r i n g d ii d e n ti k k a n
d e n g a n a s e t o g e n i n y a n g d i k a n d u n g n y a .M e s k i p u n d e m i k i a n , h i n g g a sa a t i n i b e l u m
p e r n a h d i l a p o r k a n k a j i a n a k ti v it a s a n t i k a n k e r m e ta b o l it s e k u n d e r d a r i A .
m u r i c a t a L t e r h a d a p s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 . O l e h k a r e n a i t u p e r l u d i la k u k a n
p e n c a r i a n s e n y a w a m e t a b o l it s e k u n d e r y a n g b e r p e r a n a k ti f d a l a m m e n g h a m b a t
a k t i v it a s s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
T u ju a n P e n e litia n
P e n e l i ti a n i n i b e r t u j u a n u n t u k m e n g e t a h u i p o t e n s i p e n g h a m b a ta n s e l m u r i n
l e u k e m i a P - 3 8 8 o le h f r a k s i a k t i f e k s tr a k d a u n s ir s a k .
3
M a n f a a t P e n e li t i a n
P e n e l i ti a n i n i d i h a r a p k a n d a p a t m e m b e r i k a n i n f o r m a s i m e n g e n a i p o t e n s i
f r a k s i a k t if e k s t r a k d a u n s i r s a k d a l a m m e n g h a m b a t p e r t u m b u h a n s e l m u r i n
le u k e m ia P -3 8 8 .
2 M ETODE
W a k t u d a n T e m p a t P e n e l i ti a n
P e n e l i ti a n i n i d i l a k u k a n p a d a b u l a n A p r il 2 0 1 5 s a m p a i d e n g a n J a n u a r i
2 0 1 6 d i L a b o r a t o r i u m K im i a O r g a n i k D e p a r t e m e n K im i a I P B , L a b o r a t o r i u m
K im ia O rga n ik B a h a n A la m IT B , d a n P u sa t L a b o rato rium F ore n sik M a rka s B e sar
K e p o lisia n R e p u blik In d o ne sia .
Bahan
B a h a n y a n g d i g u n a k a n d a l a m p e n e l it i a n i n i a d a l a h s e r b u k s i m p l i s i a d a u n
s i r s a k y a n g d i a m b i l d a ri k e b u n U n i t K o n s e r v a s i d a n B u d i d a y a B i o f a rm a k a
( U K B B ) P u s a t S t u d i B i o f a rm a k a I P B b e rl o k a si d i C i k a b a y a n K a b u p a t e n
B o g o r . P e l a r u t y a n g d i g u n a k a n a d a l a h e t a n o l 9 6 % , m e t a n o l , e t il a s e t a t ,
d i k l o r o m e t a n a , a s e t o n , k l o r o f o r m , a s a m s u lf a t , a s a m k l o r i d a , h e k s a n a , a ir l a u t ,
r e a g e n M e y e r , W a g n e r , D r a g e n d o r f , s e r b u k m a g n e s i u m d a n t e l u r A r t e m i a s a li n a .
A d a p u n s i l i k a g e l y a n g d i g u n a k a n a d a l a h s il i k a g e l M e r c k 6 0 G u n t u k
K ro m a to g rafi C a ir V a k u m (K C V ), silik a g e l M erc k 6 0 K ie se l G F 254 u n tu k
K r o m a t o g r a f i L a p is T i p i s P r e p a r a t i f ( K L T P ) , d a n p e l a t s il i k a g e l M e r c k 6 0 F 2 5 4
u k u ra n 2 0 x 2 0 c m u n tu k K ro m a to gra fi L a pis T ip is (K L T ). B a h a n m e d ia k u ltur
s e l , y a it u D u l b e c c o ’ s M o d if i e d E a g l e M e d i u m ( D M E M ) , f e t a l b o v i n e s e r u m ( F B S ) ,
S D S , H C l d a n b u f f e r f o s f a t p H 7 . 4 ,M T T ( 3 - ( 4 , 5 - D i m e t h y l t h i a z o l- 2 - y l ) - 2 , 5 d i p h e n y lt e t r a z o li u m b r o m i d e ) , a r t o n i n E d a n s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
A la t
P e r a l a ta n y a n g d i g u n a k a n p a d a p e n e li ti a n i n i a d a l a h p e r a l a t a n g e l a s y a n g
u m u m d i g u n a k a n d i l a b o r a t o r i u m o r g a n i k , n e r a c a d i g it a l a n a l i ti k G R - 2 0 0 ,
p e n g u a p p u t a r R - 1 1 4 , d e t e k t o r s i n a r t a m p a k H e r a e u s W - G e r m a n y n o m o r s e ri
9 3 1 1 0 1 7 . S e p e r a n g k a t a l a t K r o m a t o g r a f i L a p i s T i p is ( K L T ) , K r o m a t o g r a f i C a ir
V a k u m ( K C V ) , K r o m a t o g r a f i L a p is T i p i s P r e p a r a t if ( K L T P ) . A d a p u n
s p e k t o m e t e r m a s s a y a n g d i g u n a k a n d e n g a n k o l o m k a p il e r m o d e l A g il e n t 1 9 0 9 1 S 436.
P r o s e d u r P e n e l i ti a n
S e c a r a g a r i s b e s a r , p e n e li ti a n i n i d i b a g i d a l a m e m p a t t a h a p a n , y a it u
p e n y i a p a n s a m p e l d a u n s i r s a k , f r a k s i n a s i , u j i s i t o t o k s i s it a s m e n g g u n a k a n l a r v a
4
A r t e m i a s a li n a d a n s e l m u r i n l e u k e m ia P - 3 8 8 , s e r t a k a r a k t e r i s a s i m e n g g u n a k a n
k r o m a t o g r a f i g a s - s p e k t r o m e te r m a s s a ( G C - M S ) .
P e n y i a p a n S a m p e l P e n e li t i a n
S a m p e l d a u n s i r s a k y a n g te l a h te r i d e n t if i k a s i s e b a g a i s p e s i e s A . m u r i c a t a L
o le h H e rb a rium B o g o rie n se , B o g o r d ik u m p ulk a n d a ri k e b u n P u sa t S tu di
B i o f a r m a k a I P B . S a m p e l d a u n y a n g t e r k u m p u l l a l u d i k e r i n g k a n d a n d i g i li n g
m e n j a d i s e r b u k s i m p l i s i a d a u n s ir s a k .S e r b u k y a n g d i p e r o l e h l a l u d i s i m p a n d i
w ad ah y an g k ed ap u d ara.
P e n g u k u r a n K a d a r A ir
C a w a n p o r s e l e n t e rl e b i h d a h u l u d i k e r i n g k a n d a l a m o v e n p a d a s u h u 1 0 0 o C
s e l a m a 3 0 m e n i t , k e m u d i a n d i d i n g i n k a n d a la m d e s i k a t o r d a n d i ti m b a n g . S e b a n y a k
2 g s i m p l is i a d a u n s ir s a k d il e t a k k a n d a l a m c a w a n t e r s e b u t , k e m u d i a n d i p a n a s k a n
d a l a m o v e n p a d a s u h u 1 0 0 ± 1 o C s e l a m a 5 j a m .S e l a n j u t n y a c a w a n b e r i si
s i m p l i s i a d i d i n g i n k a n d a l a m d e s i k a t o r k e m u d i a n d it im b a n g . P e n g e r i n g a n d a n
p e n i m b a n g a n d i u la n g i s e t ia p 1 j a m h i n g g a d i d a p a t k a n b o b o t k o n s t a n ( A O A C
2 0 0 5 ) . P r e s e n t a s i k a d a r a ir d i h i t u n g d e n g a n m e n g g u n a k a n p e r s a m a a n b e r i k u t :
D e n g a n a d a la h b o b o t s am p e l se b e lum d ik erin g k a n d a n
s e t e l a h d i k e ri n g k a n .
a d a la h b o b o t sa m p el
E k stra k si S a m p el
S a m p e l b e r u p a s i m p li s i a d a u n s i r s a k d i s i a p k a n s e b a n y a k 2 k g u n t u k
d i e k s tr a k s i d e n g a n c a r a m a s e r a s i m e n g g u n a k a n p e l a r u t e t a n o l s e l a m a 2 4 j a m p a d a
s u h u r u a n g d e n g a n ti g a k a li u l a n g a n . H a s i l m a s e r a s i k e m u d i a n d i s a r i n g , s e h i n g g a
d i p e r o l e h f il tr a t d a n r e s i d u . S e m u a f il tr a t y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p e k a t k a n
m e n g g u n a k a n p e n g u a p p u t a r u n t u k m e m p e r o l e h e k s t ra k k a s a r e t a n o l d a n
d i t e n t u k a n j u m l a h r e n d e m e n n y a . E k s t r a k e t a n o l k e m u d ia n d i p is a h k a n d a r i k l o r o f il
d a n t a n i n . U n t u k m e n g h il a n g k a n k l o r o f i l , e k s t r a k e t a n o l t o t a l d it a m b a h k a n p e l a r u t
M e O H : H 2 O ( 1 : 1 ) s e l a m a 7 2 j a m d a n k e m u d ia n d is a r i n g , s e h i n g g a d i p e r o l e h
e n d a p a n d a n f il tr a t . E n d a p a n y a n g d i p e r o l e h m e r u p a k a n k l o r o f il , s e d a n g k a n f i lt r a t
k e m u d i a n d i p a r t is i c a ir - c a i r m e n g g u n a k a n E t O A c u n t u k m e m p e r o l e h t a n i n d a n
e k s t r a k E t O A c .K e d u a f a s a y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p e k a t k a n d a n d i t e n t u k a n
re n d e m e n n y a (m o difik asi M in a rni d a n O k e k e 2 0 1 4 ).
U j i F i t o k im i a
U j i F l a v o n o i d d a n S e n y a w a F e n o l i k . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g m a s i n g s a m p e l d it a m b a h k a n a i r k e m u d i a n d i d i d i h k a n s e la m a 2 m e n it d a n d i s a r i n g .
U n t u k p e n g u j i a n f la v o n o i d , 5 m L f il tr a t n y a d it a m b a h H 2 S O 4 a t a u s e t e l a h
d i p a n a s k a n 5 m l f i lt r a t d it a m b a h k a n 0 .2 5 g s e r b u k M g d a n d i t a m b a h k a n 1 m l H C l
p e k a t d a n 1 m l a m il a l k o h o l . T e r b e n t u k n y a w a r n a m e r a h a k i b a t p e n a m b a h a n
5
H 2 S O 4 m e n u n ju k k a n a d a n y a se n y a w a a n fla v o n oid d a n terb e n tu k n y a w a rn a m e ra h,
k u n i n g , a t a u ji n g g a p a d a l a p is a n a m i l a l k o h o l m e n u n j u k k a n a d a n y a
f l a v o n o i d . P e n g u j i a n s e n y a w a f e n o l i k s e b a n y a k 5 m L f i lt r a t d i t a m b a h k a n F e C l 3
1 % (b /v ) terb e n tu k n ya w a rn a h ija u a ta u biru m e n u nju k k a n a d a n y a se n y a w a
fe n o lik .
U j i T e r p e n o i d d a n S t e r o i d . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g
s a m p e l d it a m b a h 5 m l e t a n o l l a l u d i p a n a s k a n p a d a 5 0 ° C d a n d is a r i n g . F i lt r a t n y a
d i u a p k a n h i n g g a k e r i n g k e m u d i a n d i l a r u t k a n d e n g a n e t e r . L a p i s a n e t e r d it a m b a h 3
t e t e s a s e t a t a n h i d r i d a d a n 1 t e t e s H 2 S O 4 p e k a t .W a r n a m e r a h a t a u u n g u
m e n u n ju k k a n a d a n ya te rpe n o id d a n w a rn a hija u m e n u n ju k ka n a d a n y a ste roid .
U j i A l k a l o i d . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s tr a k d a r i m a s i n g - m a s i n g s a m p e l
d i t a m b a h k a n 2 .5 m L k l o r o f o r m d a n b e b e r a p a te t e s a m o n i a k . K e m u d i a n c a m p u r a n
d i a s a m k a n d e n g a n 5 t e t e s H 2 S O 4 2 M .F r a k s i a s a m d i b a g i m e n j a d i t i g a t a b u n g
k e m u d i a n m a s i n g - m a s i n g d it a m b a h k a n p e r e a k s i M e y e r , W a g n e r , d a n
D r a g e n d r o f . A d a n y a a l k a l o i d d i ta n d a i d e n g a n t e r b e n t u k n y a e n d a p a n p u ti h p a d a
p e re a k si M e y er, e n d a p a n c o k e lat p a d a p e re a ksi W a g n e r, d a n terb e n tu k w a rn a
m e r a h ji n g g a p a d a p e r e a k s i D r a g e n d r o f .
U j i S a p o n i n . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g s a m p e l d it a m b a h
a i r s e c u k u p n y a d a n d i p a n a s k a n s e l a m a l im a m e n i t . L a r u t a n t e r s e b u t d i d i n g i n k a n
k e m u d i a n d i k o c o k . T i m b u l n y a b u s a s e l a m a s e k it a r 1 0 m e n i t m e n u n j u k k a n a d a n y a
sa p o n in .
U j i T a n i n . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g b a g i a n d i ta m b a h k a n
a i r k e m u d i a n d i d i d i h k a n s e l a m a 2 m e n i t l a l u d is a r i n g . S e b a n y a k 5 m l f i lt r a t
d i t a m b a h k a n l a r u t a n F e C l 3 1 % ( b / v ) . U j i p o s i ti f d i ta n d a i d e n g a n m u n c u l n y a w a r n a
b iru tu a a ta u hija u k e hitam a n (H a rb orn e 1 9 8 7 ).
F r a k s i o n a s i E k s t r a k E tO A c
F r a k s i o n a s i te r h a d a p e k s t r a k E t O A c d i a w a li d e n g a n p e n c a r i a n e l u e n t e r b a i k
m e n g g u n a k a n b e b e r a p a e l u e n t u n g g a l y a i t u n - h e k s a n a , e t il a s e t a t , d i k l o r o m e t a n ,
k l o r o f o rm , e t a n o l d a n m e t a n o l .E l u e n t e rs e b u t k e m u d i a n d i k o m b i n a si k a n u n t u k
m e m p e r o l e h e l u e n c a m p u r a n t e r b a i k y a n g m e n g h a s il k a n n o d a t e r b a n y a k d e n g a n
p o l a p e m i s a h a n y a n g t e r b a i k . S e t e l a h i t u e k s tr a k t e r s e b u t d ii m p r e g n a s i d e n g a n
s i li k a g e l K C V 6 0 G ( n i s b a h 1 : 2 ) d a n d i f r a k s i n a s i d e n g a n K C V . E l u a t K C V
s e la n jutn y a d ia n alisis p o la p em is a h a n n ya m e n g g u n a k a n K L T , e lu a t d e n g a n p o la
p e m i s a h a n y a n g s a m a a k a n d i g a b u n g k a n k e d a l a m s a t u f r a k s i k e m u d i a n d il i h a t
k e m b a li p o l a p e m is a h a n n y a d e n g a n K L T . S e t e l a h it u d i p e k a t k a n d e n g a n p e n g u a p
p u t a r d a n d i u ji t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T . F r a k s i d e n g a n p r o f i l K L T d a n
h a s i l u ji t o k s i s it a s y a n g b a i k d i l a n j u t k a n k e t a h a p a n p e m is a h a n l e b i h l a n j u t
m e n g g u n a k a n K L T P . H a s i l K L T P k e m b a l i d i l i h a t p o l a p e m i s a h a n n y a , u n t u k p r o f il
n o d a y a n g t u n g g a l d i u j i k e m b a li t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T d a n
d i k a r a k te r is a s i m e n g g u n a k a n G C - M S ( m o d if i k a s i M o g h a d a m t o u s i e t a l . 2 0 1 4 ) .
U j i T o k s i s it a s M e n g g u n a k a n M e t o d e B r i n e S h r i m p L e t h a l it y T e s t ( B S L T )
S e b a n y a k 2 0 m g t e l u r A . s a li n a d im a s u k k a n d a l a m w a d a h b e r i s i a i r l a u t,
k e m u d i a n d i si n a ri l a m p u d a n d i a e r a si s e c a ra k o n s t a n s e l a m a 4 8 j a m .S e t e l a h t e l u r
m e n e t a s , l a r v a A . s a l i n a s i a p d i g u n a k a n u n t u k u j i t o k s i s it a s . L a r u t a n i n d u k f r a k s i
y a n g d i u j i d i b u a t d e n g a n k o n s e n t r a s i 1 0 0 0 p p m , k e m u d ia n d i e n c e r k a n m e n j a d i
6
b e b e r a p a v a r i a s i k o n s e n tr a s i y a i t u 0 , 3 1 .2 5 , 6 2 .5 , 1 2 5 , 2 5 0 , d a n 5 0 0 p p m y a n g
d i m a s u k k a n k e d a l a m s u m u r b e r i s i 1 0 l a r v a d a l a m a i r l a u t . P e r l a k u a n d i la k u k a n
s e b a n y a k t i g a k a li d a n d i d ia m k a n s e la m a 2 4 ja m d a n t e t a p d i s i n a r i l a m p u . S e t e l a h
i t u j u m l a h l a r v a y a n g m a ti d i h it u n g d a n d it e n t u k a n p e r s e n k e m a t ia n n y a
b e r d a s a r k a n p e r s a m a a n b e r i k u t:
N i l a i L C 5 0 k e m u d i a n d i p e r o le h d a r i p e r s a m a a n r e g r e s i p a d a g r a f i k h u b u n g a n
a n t a r a l o g a r it m a k o n s e n tr a s i s a m p e l u j i t e r h a d a p a n g k a p r o b it . A n g k a p r o b it
d i p e r o l e h s e b a g a i h a s il k o n v e r s i d a r i p e r s e n k e m a t i a n y a n g d i p e r o l e h ( M e y e r , e t
a l .1 9 8 2 ) .
K a r a k te risa si S e n y a w a M e n g g u n a k a n G C -M S
F r a k s i a k ti f d ii n j e k s i k a n k e d a l a m G C - M S S h i m a d z u Q P - 5 0 5 0 A d e n g a n
k o l o m k a p il e r m o d e l a g i l e n t 1 9 0 9 1 S - 4 3 6 H P - 5 M S b e r u k u r a n 0 . 2 5 m m x 6 0 m x
0 . 2 5 µ m d a n g a s p e m b a w a h e l i u m d e n g a n l a j u a li r 1 . 0 m L / m e n i t . S u h u
m a k s im u m k o l o m s e b e s a r 3 5 0 o C , s u h u o v e n 7 0 o C d e n g a n s u h u m a k s i m u m
3 2 5 o C d a n w a k t u p r o s e s s e l a m a 5 9 . 6 7 m e n it d e n g a n p e n u n d a a n s e l a m a 5 m e n it
a w a l . S u h u i n j e k t o r 2 9 0 o C d e n g a n te k a n a n 1 8 . 1 2 p s i . S p e k tr o m e t e r m a s s a
m e n g g u n a k a n e n e r g i i o n i s a s i 6 9 .9 2 e V d e n g a n a r e a d e t e k s i p a d a r e n t a n g 4 0 – 8 0 0
m / z . I d e n t if i k a s i t e r h a d a p p u n c a k y a n g m u n c u l d a l a m k r o m a t o g r a m d i o l a h
m e n g g u n a k a n p e r a n g k a t l u n a k M S D C h e m S t a t i o n E .0 2 .0 2 .1 4 3 1 l a l u
d i b a n d i n g k a n k e m ir i p a n n y a t e r h a d a p p u s t a k a W I L L E Y 0 9 T H .
U ji b io a k tiv ita s a n tik a n k er seca ra in vitro ter h a d a p sel m u rin
leu k em ia P - 3 8 8
S u s p e n s i s e l d i b u a t s e k i ta r 3 x 1 0 3 s e l / m L d a la m m e d i a R P M I 1 6 4 0 . S e l
d i i n o k u l a s i k a n d a l a m p e l a t m i k r o 9 6 b e r l u b a n g d a s a r r a t a d a n d i k u lt i v a s i d a l a m
in k u b a to r C O 2 sela m a 2 4 ja m u n tu k m e n u m b u h k a n sel.
H a r i k e d u a d i l a k u k a n p e n a m b a h a n s a m p e l y a n g d il a r u t k a n d a l a m p e l a r u t
D M S O . S a m p e l d ie n c erk a n d e n g a n m e n a m b a h ka n laru ta n b uffe r fo sfat (P B S ) p H
7 , 3 0 – 7 , 6 5 . S a m p e l d e n g a n k o n s e n t r a s i b e r a g a m ( 0 , 0 .1 , 0 . 3 , 1 , 3 , 1 0 , 3 0 , d a n 1 0 0
µ g . m L -1 ) d i t a m b a h k a n k e d a l a m p l a t m i k r o l a l u d i k o c o k d e n g a n p e n g a d u k p l a t
m i k r o d a n d i s im p a n k e m b a l i d a l a m i n k u b a t o r C O 2 . S e b a g a i k o n t r o l n e g a t if
d i g u n a k a n D M S O d a n k o n t r o l p o s i ti f d i g u n a k a n s e n y a w a s t a n d a r a r t o n i n E . S e l
d i i n k u b a s i s e l a m a 4 8 j a m , k e m u d ia n d it a m b a h k a n r e a g e n M T T [ 3 - ( 4 , 5 - d i m e t il
t i a z o l - 2 - i l) - 2 , 5 - d i f e n i l t e t r a z o l i u m b r o m i d a ] d a n d i k o c o k d e n g a n p e n g a d u k p l a t
m i k r o . I n k u b a s i d i la n j u t k a n s e la m a 4 j a m , k e m u d i a n d i t a m b a h k a n l a r u t a n
p e n g h e n ti (S D S -H C l) d a n d ik o c o k d e n g a n b a ik ta n pa m e n in g g alk a n b u sa y a n g
d a p a t m e n g g a n g g u p e n g a m a ta n , s e t e l a h it u p l a t m i k r o k e m b a li d ii n k u b a s i s e l a m a
2 4 ja m .
P e n g u k u r a n r a p a ta n o p t i s ( O D ) d i l a k u k a n d e n g a n p e m b a c a p l a t m i k r o p a d a
p a n j a n g g e l o m b a n g 5 4 0 n m , s e te l a h 2 4 j a m p e n a m b a h a n l a r u t a n p e n g h e n t i ( A ll e y
e t a l . 1 9 8 8 ) .D a t a O D k e m u d i a n d i m a s u k k a n d a l a m p r o g r a m o r i g i n 8 u n t u k
m e n g h i t u n g n i la i I C 5 0 .
7
3 H A S IL D A N P E M B A H A S A N
K a d a r A ir
S a m p e l d a u n s ir s a k y a n g d i p e r o l e h d a r i k e b u n U n i t K o n s e r v a s i d a n
B u d i d a y a B i o f a r m a k a ( U K B B ) P u s a t S t u d i B i o f a r m a k a I P B t e l a h t e r i d e n t if i k a s i
s p e s i e s n y a s e b a g a i A n n o n a m u r i c a t a L d i H e r b a r i u m B o g o r ie n s e , B o g o r
( L a m p i r a n 2 ) .S a m p e l d a u n s i r s a k d i k e r i n g k a n l a l u d i g il i n g h i n g g a b e r b e n t u k
s e r b u k s i m p l i s i a . P e n g g il i n g a n d im a k s u d k a n u n t u k m e m p e r k e c il u k u r a n p a r t i k e l
s i m p l i s i a s e h i n g g a p e r m u k a a n k o n ta k d e n g a n p e la r u t s a a t e k s tr a k s i m e n j a d i l u a s
d a n s i m p l i s i a d a p a t t e r e k s tr a k d e n g a n b a i k .
S e b e l u m k e t a h a p e k s t r a k s i , k a d a r a i r d a r i s i m p l i s i a d it e n t u k a n te r le b i h
d a h u l u . K a d a r a i r d i p e r o l e h s e b e s a r 7 .3 0 % ( L a m p ir a n 3 ) , n il a i i n i a k a n m e n j a d i
f a k t o r k o r e k s i d a la m m e n e n t u k a n j u m l a h r e n d e m e n e k s t r a k . P e r s e n t a s e k a d a r a ir
m e n u n j u k k a n h a s il y a n g b a i k , s e b a b k a d a r a i r y a n g k u r a n g d a r i 1 0 % m e n a n d a k a n
sa m p e l m am p u te rhin d a r d a ri p e n c em a ra n y a n g dise b a b k a n o le h m ik ro b a d a n
w a k t u s i m p a n s a m p e l a k a n r e l a ti f le b i h la m a s e h i n g g a m e m e n u h i s y a r a t s e b a g a i
b a h a n b a k u h e rb a l.
E k str a k D a u n S ir sa k
S i m p li s i a d a u n s i r s a k d i e k s t r a k s i d e n g a n m e t o d e m a s e r a s i , p r o s e s m a s e r a s i
d i l a k u k a n s e l a m a ti g a k a l i 2 4 j a m p a d a s u h u r u a n g . P e l a r u t y a n g d i g u n a k a n a d a l a h
e ta n o l y a n g dik e ta h ui m am p u m ela rutk a n se n y a w a p o lar d a n n o n p o lar d e n g a n
b a i k ( H a r b o r n e 1 9 8 7 ) . S e l a i n i t u , e t a n o l j u g a b e r s i f a t v o l a ti l d a n t i d a k t o k s i k
s e h i n g g a b a i k d i g u n a k a n s e b a g a i p e l a r u t d a l a m e k s tr a k s i t u m b u h a n h e r b a l . P r o s e s
e k s t r a k s i i n i m e n g h a s il k a n r e n d e m e n e k s tr a k e t a n o l s e b e r a t 2 8 5 .9 1 g a t a u s e b e s a r
1 5 . 7 1 % d a r i b o b o t s i m p l is i a .H a s il i n i l e b i h b a i k d i b a n d i n g k a n p e n e li ti a n M i n a r n i
d a n O k e k e ( 2 0 1 4 ) y a n g h a n y a m e m p e r o l e h r e n d e m e n s e b e s a r 1 1 .4 2 % .
E k s tra k eta n o l tota l k e m u dia n dip isa h k a n d ari klo rofil d a n ta n in y a n g
d i k a n d u n g n y a . D a r i t o t a l 2 5 0 .0 8 g e k s tr a k e t a n o l d i p e r o l e h e n d a p a n y a n g
m e r u p a k a n k l o r o f i l b e r w a r n a h ij a u p e k a t s e b e r a t 1 2 4 .4 g a t a u s e b e s a r 4 9 .7 4 4 %
d a r i e k st r a k e t a n o l t o t a l y a n g d i p i s a h k a n . P e r o l e h a n k l o r o fi l y a n g c u k u p b e sa r i n i
d i k a r e n a k a n s a m p e l y a n g d i g u n a k a n m e r u p a k a n b a g i a n d a u n d a ri
t u m b u h a n . S e la i n e n d a p a n y a n g m e r u p a k a n k l o r o f i l , d i p e r o l e h j u g a f i lt r a t
b e r w a r n a c o k la t t u a s e j u m l a h 9 6 0 m l . F i lt r a t y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p a r t i s i
( c a i r - c a ir ) m e n g g u n a k a n E t O A c s e h i n g g a d i p e r o l e h d u a f a s a , y a it u f a s a a ir y a n g
m e n g a n d u n g t a n i n d a n f a s a o r g a n i k . K e d u a f a s a te r s e b u t l a l u d i p e k a t k a n s e h i n g g a
d i p e r o l e h t a n i n b e r w a r n a c o k l a t t u a s e b e r a t 9 5 .5 g d a n f r a k s i E t O A C y a n g t e l a h
t e r b e b a s d a r i k l o r o f i l d a n t a n i n s e b e r a t 2 7 .5 4 g .
E k s t r a k e t a n o l t o t a l , E t O A c , t a n i n d a n k l o r o fi l k e m u d i a n d i a n a l i si s
m e n g g u n a k a n K r o m a t o g r a fi L a p i s T i p i s ( K L T ) d e n g a n e l u e n n - h e k s a n a : E t O A c
( 7 : 3 ) s e p e r ti y a n g d it u n j u k k a n p a d a G a m b a r 1 .
8
1
2
3
4
1
(a)
G am bar 1
2
3
4
(b )
P ro fil K L T d e n g a n e lu e n n - h e k s a n a : E t O A c (7 :3 ) d a ri (1 ) e k s tra k e ta n o l,
(2 ) e k s tra k E tO A c , (3 ) ta n in d a n (4 ) k lo ro fil d a u n s irs a k d i b a w a h
p e n y in a ra n U V (λ 254nm ) (a ) d a n d i b a w a h p e n y in a r a n U V (λ 366nm ) (b )
P a d a G a m b a r 1 t e rl i h a t b a h w a e k st r a k E t O A c s u d a h t i d a k t e r d a p a t t a n i n
y a n g m e m b e r i k a n n o d a b e r p e n d a
S I R S A K ( A n n o n a m u r ic a ta L ) D A N A K T I V I T A S
S I T O T O K S I K N Y A P A D A S E L M U R I N L E U K E M I A P -3 8 8
S Y A M S U L H ID A Y A T
SEK O LA H PA SC A SA R JAN A
IN S T IT U T P E R T A N IA N B O G O R
BOGOR
2016
P E R N Y A T A A N M E N G E N A I T E S IS D A N
S U M B E R IN F O R M A S I S E R T A P E L IM P A H A N H A K C IP T A
D e n g a n i n i s a y a m e n y a t a k a n b a h w a t e s i s b e r j u d u l K a r a k t e r is a s i S e n y a w a
A k t i f E k s t r a k D a u n S i r s a k ( A n n o n a m u r ic a t a L ) d a n A k t i v i t a s S it o t o k s i k n y a p a d a
S e l M u r i n L e u k e m ia P - 3 8 8 a d a la h b e n a r k a r y a s a y a d e n g a n a r a h a n d a r i k o m i s i
p e m b i m b i n g d a n b e l u m d ia j u k a n d a l a m b e n t u k a p a p u n k e p a d a p e r g u r u a n t i n g g i
m a n a p u n . S u m b e r i n f o r m a s i y a n g b e r a s a l a ta u d i k u ti p d a r i k a r y a y a n g d i t e r b it k a n
m a u p u n ti d a k d i t e r b it k a n d a r i p e n u li s l a i n t e l a h d i s e b u t k a n d a la m t e k s d a n
d i c a n t u m k a n d a l a m D a f t a r P u s ta k a d i b a g i a n a k h ir t e s i s i n i .
D e n g a n i n i s a y a m e l im p a h k a n h a k c i p t a d a r i k a r y a t u li s s a y a k e p a d a I n s t it u t
P e rta n ian B o g o r.
B o g o r, A g u stu s2 0 1 6
S y a m su l H id a y a t
N IM G 4 5 1 1 3 0 2 3 1
R IN G K A S A N
S Y A M S U L H I D A Y A T . K a r a k t e r i s a s i S e n y a w a A k ti f E k s t r a k D a u n S i r s a k
( A n n o n a m u r i c a t a L ) d a n A k t i v i t a s S it o t o k s i k n y a p a d a S e l M u r i n L e u k e m i a P 3 8 8 . D i b i m b i n g o le h P U R W A N T I N I N G S I H S U G I T A d a n I R M A H E R A W A T I
SUPAR TO.
K a n k e r h i n g g a s a a t i n i m a s i h m e r u p a k a n p e n y a k it p a l i n g m e m a t i k a n d i
d u n i a .B e r b a g a i ri s e t u n t u k m e n g u r a n g i r e s i k o t e r h a d a p k a n k e r t e r u s g e n c a r
d i l a k u k a n .P e n c e g a h a n t e r h a d a p k a n k e r b i s a d i l a k u k a n d e n g a n m e n g g u n a k a n
s e n y a w a b a h a n a l a m y a n g m e m i li k i a k ti v it a s a n t i k a n k e r . S a l a h s a t u t u m b u h a n
y a n g d i j u l u k i s e b a g a i t h e c a n c e r k il l e r a d a l a h A n n o n a m u r i c a t a L . B e r b a g a i
b a g i a n d a r i t u m b u h a n i n i t e l a h b a n y a k d il a p o r k a n m e m il i k i a k ti v i ta s
p e n g h a m b a t a n t e r h a d a p s e l k a n k e r . N a m u n b e l u m a d a l a p o r a n t e n t a n g a k ti v i ta s
p e n g h a m b a t a n n y a t e r h a d a p s e l k a n k e r m u r i n le u k e m i a P - 3 8 8 . P a d a h a l k e m a m p u a n
s u a t u b a h a n a k ti f s e b a g a i a n t i k a n k e r s e h a r u s n y a t e l a h t e r u ji p a d a b e r b a g a i j e n i s
s e l k a n k e r , t e r m a s u k s e l j e n is s u s p e n s i s e p e r t i m u r i n P - 3 8 8 . O l e h k a r e n a it u
p e n e l it i a n i n i b e r t u j u a n u n t u k m e n g e t a h u i p o t e n s i p e n g h a m b a t a n s e l m u r i n
l e u k e m i a P - 3 8 8 o le h f r a k s i a k t i f e k s tr a k d a u n A . m u r i c a t a L .
S e r b u k d a u n s ir s a k y a n g d i p e r o l e h d a r i k e b u n P u s a t S t u d i B i o f a r m a k a
I n s t it u t P e r t a n i a n B o g o r m e m i li k i k a d a r a i r s e b e s a r 7 .3 0 % . S e r b u k te r s e b u t
d i e k s tr a k s i m e n g g u n a k a n p e l a r u t e t a n o l s e b a n y a k ti g a k a l i 2 4 j a m d i d a la m s u h u
r u a n g . D a r i p r o s e s i n i d i p e r o l e h e k s t r a k k a s a r s e b e r a t 2 8 5 .9 1 g . K a n d u n g a n
k l o r o f i l d a n ta n i n l a l u d i p i s a h k a n d a r i e k s t r a k k a s a r e t a n o l , h i n g g a m e n y i s a k a n
e k s t r a k E t O A c y a n g t e r b e b a s d a r i t a n i n d a n k l o r o f il s e b e r a t 2 7 .5 4 g . S e l a n j u t n y a
e k s t r a k E t O A c d i f r a k s i n a s i m e n g g u n a k a n K r o m a t o g r a f i C a ir V a k u m ( K C V ) a g a r
d ip e ro leh fra k si y a n g le b ih se d e rh a n a . P a d a p ros e s ini d ip e role h s e m bilan fra k si
( A - I ) d a n s e b a g a i p e n a p i s a n t o k s i s i t a s n y a d il a k u k a n d e n g a n m e t o d e B r i n e S h r i m p
L e t h a l it y T e s t ( B S L T ) . H a s il B S L T m e n u n j u k k a n b a h w a f r a k s i A , C d a n F
m a s i n g - m a s i n g m e m i li k i n i la i L C 5 0 s e b e s a r 2 7 5 .5 3 , 3 2 0 .3 5 , d a n 9 4 .5 1 µ g .m l 1
. K e t i g a f r a k s i i n i k e m u d i a n d il a n j u t k a n k e ta h a p p e m u r n ia n m e n g g u n a k a n
K L T P . H a s i l K L T P k e m b a l i d i u ji t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T . B e r d a s a r k a n
n i l a i L C 5 0 d a n k e t e r s e d ia a n r e n d e m e n n y a f r a k s i F 3 d i p il i h u n t u k d il a n j u t k a n k e u ji
a k t i v it a s p e n g h a m b a t a n s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
S e l a i n f r a k s i F 3 , u ji a k ti v it a s p e n g h a m b a t a n s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P 3 8 8 j u g a d i l a k u k a n t e r h a d a p f r a k s i F d a n e k st r a k E t O A c .N i l a i I C 5 0 y a n g d i p e r o l e h
u n t u k e k s t r a k E t O A c , f r a k s i F , d a n f r a k s i F 3 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t a d a l a h s e b e s a r
0 . 1 6 , < 0 . 1 , d a n > 1 0 0 µ g .m l - 1 . I n i m e n u n j u k k a n b a h w a k e m a m p u a n e k s tr a k
E t O A c d a n f r a k s i F d a l a m m e n g h a m b a t p e r t u m b u h a n s e l k a n k e r m u r i n le u k e m i a
P - 3 8 8 l e b i h b a i k d i b a n d i n g k a n d e n g a n k o n t r o l p o s i ti f A r t o n i n E y a n g d i g u n a k a n ,
d e n g a n n i l a i I C 5 0 h a n y a s e b e s a r 0 .7 6 µ g .m l - 1 .
K a t a k u n c i : A n n o n a m u r i c a t a L ,a n ti k a n k e r ,l e u k e m i a , m u r i n P - 3 8 8
SU M M A R Y
S Y A M S U L H I D A Y A T . C h a r a c t e r i z a t i o n o f A c ti v e C o m p o u n d s o n E x t r a c t e d
L e a v e s o f S o u r s o p ( A n n o n a m u r i c a t a L ) a n d C y t o t o x i c it y A s s e s s m e n t o n M u r i n
C e ll L e u k em ia P -3 8 8 . S u p erv ise d b y P U R W A N T IN IN G S IH S U G IT A a n d IR M A
HERAW ATI SUPART O.
C a n c e r i s t h e m o s t d e a d l y d i s e a s e s i n t h e w o r l d . V a r i o u sr e s e a rc h t o r e d u c e t h e
r i s k o f c a n c e r i n t e n s i v e l y c o n d u c te d . P r e v e n t i o n o f c a n c e r c a n b e d o n e b y u s i n g
n a t u r a l c o m p o u n d s t h a t h a v e a n ti c a n c e r a c t i v i t y . T h e p l a n t w a s d i s c r i b e d a s t h e
c a n c e r k il l e r i s A n n o n a m u r i c a t a L , d u e t o it ’ s r e m a r k a b l e c y t o t o x i c it y a g a i n s t
s e v e r a l c a n c e r c e ll l i n e s . S o m e p a r t s o f t h i s p l a n t h a v e b e e n r e p o r t e d h a v i n g a n
i n h i b it o r y a c ti v it y a g a i n s t c a n c e r c e l ls . B u t t h e r e h a s b e e n n o r e p o r t o n t h e
i n h i b it o r y a c ti v it y a g a i n s t c a n c e r c e ll s m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 . Y e t t h e a b i li t y o f
a n a c t i v e c o m p o u n d a s a n ti c a n c e r s h o u l d h a v e b e e n t e s t e d o n v a r i o u s t y p e s o f
c a n c e r c e l l s , i n c l u d i n g c e l l t y p e s u s p e n s i o n a s m u r i n e P - 3 8 8 .T h e r e f o r e , t h i s st u d y
a i m s t o d e t e r m i n e t h e p o t e n t ia l i n h ib i ti o n o f c e ll m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 b y t h e
a c tiv e fra ctio n e xtra ct o f le a v e s o f A . m u ric a ta L .
A . m u ric a ta L lea f p o w d e r is o bta in e d from T h e G a rd e n C e nte r
o f B i o f a r m a k a B o g o r A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y h a s a w a t e r c o n t e n t o f 7 .3 0 % . T h e
p o w d e r w e re m a c e rate in 9 6% e th a n ol fo r th re e tim e s 2 4 h o u rs at ro o m te m p era ture .
F r o m t h i s p r o c e s s , t h e c r u d e e x t r a c t o b t a i n e d w e i g h i n g 2 8 5 .9 1 g . T h e c o n t e n t o f
c h l o r o p h y ll a n d t a n n i n s w e r e s e p a r a t e d f r o m t h e c r u d e e x tr a c t e t h a n o l u n t il
l e a v i n g E t O A c e x t r a c ts a r e f r e e f r o m t a n n i n a n d c h l o r o p h y l l . T h i s p r o c e s s y i e l d e d
2 7 . 5 4 g o f E t O A c e x t r a c t s . F u r t h e r m o r e E t O A c e x t r a c t s w e r e f r a c ti o n a t e d u s i n g
th e K C V in o rd e r to o b ta in a m o re sim ple frac tio ns . In this p ro c es s g a in e d nin e
f r a c ti o n s ( A - I ) a n d a s c r e e n i n g t o x i c it y te s t w a s c o n d u c t e d u s i n g B r i n e S h r im p
L e t h a l it y T e s t ( B S L T ) . B S L T r e s u lt s s h o w e d t h a t t h e f r a c t i o n A , C a n d F h a v e
L C 5 0 v a l u e s o f 2 7 5 .5 3 , 3 2 0 .3 5 a n d 9 4 .5 1 μ g .m l - 1 , r e s p e c t i v e l y . A ll o f t h r e e
f r a c ti o n s t h e n p r o c e e d e d t o n e x t s t e p p u r i f i c a ti o n u s i n g K L T P a n d K L T P
r e s u lt s w e r e t e s t e d f o r t o x i c it y u s i n g B S L T . B a s e d o n t h e L C 5 0 v a l u e a n d q u a n t i t y ,
F 3 f r a c t i o n h a v e t o c o n ti n u e t o t e s t t h e i n h i b i t o r y a c t i v i t y o f c a n c e r c e ll s m u r i n e
le u k e m ia P -3 8 8 .
I n a d d i t i o n t o F 3 f r a c ti o n , t h e i n h i b it o r y a c ti v it y t e s t o f c a n c e r c e ll s m u r i n e
l e u k e m i a P - 3 8 8 i s a ls o m a d e t o t h e F f r a c t i o n a n d E t O A c e x tr a c t . I C 5 0 v a l u e f o r
t h e E t O A c e x t r a c t , F f r a c ti o n , a n d F 3 f r a c t i o n f r o m t h e t e s t a r e 0 .1 6 , < 0 . 1 , a n d >
1 0 0 μ g . m l – 1 , r e s p e c ti v e l y . T h e s e s h o w t h a t t h e a b il i t y E t O A c e x tr a c t s a n d F
f r a c ti o n s i n i n h i b i ti n g t h e g r o w t h o f c a n c e r c e ll s m u r i n e l e u k e m i a P - 3 8 8 i s f i v e
t i m e s b e tt e r t h a n t h e p o s it i v e c o n t r o l A r t o n i n E u s e d , w it h I C 5 0 v a l u e s o f A r t o n i n
E o n l y 0 .7 6 μ g . m l – 1 .
K e y w o r d s : A n n o n a m u r i c a t a L , a n ti c a n c e r , l e u k e m i a , m u r i n P - 3 8 8
© H a k C ip ta M ili k I P B , T a h u n 2 0 1 6
H a k C ip ta D i lin d u n g i U n d a n g - U n d a n g
D i l a r a n g m e n g u ti p s e b a g i a n a t a u s e l u r u h k a r y a t u l i s i n i t a n p a m e n c a n t u m k a n
a t a u m e n y e b u t k a n s u m b e r n y a . P e n g u t i p a n h a n y a u n t u k k e p e n ti n g a n p e n d i d i k a n ,
p e n e l it i a n , p e n u l i s a n k a r y a i l m i a h , p e n y u s u n a n l a p o r a n , p e n u l is a n k r it i k , a t a u
t i n j a u a n s u a t u m a s a l a h ; d a n p e n g u t i p a n t e r s e b u t t i d a k m e r u g i k a n k e p e n ti n g a n
IP B
D i l a r a n g m e n g u m u m k a n d a n m e m p e r b a n y a k s e b a g i a n a t a u s e l u r u h k a r y a t u li s i n i
d a la m b e n tu k a p a p u n ta n p a izin IP B
K A R A K T E R IS A S I SE N Y A W A A K T IF E K S T R A K D A U N
S I R S A K ( A n n o n a m u r ic a ta L ) D A N A K T I V I T A S
S I T O T O K S I K N Y A P A D A S E L M U R I N L E U K E M I A P -3 8 8
S Y A M S U L H ID A Y A T
T e sis
s e b a g a i s a l a h s a t u s y a r a t u n tu k m e m p e r o le h g e l a r
M a g i s te r S a i n s
pada
P ro g ra m S tu di K im ia
SEK O LA H PA SC A SA R JAN A
IN S T IT U T P E R T A N IA N B O G O R
BOGOR
2016
P e n g u j i L u a r K o m i s i p a d a U j i a n T e s i s : D r Z a e n a l A l im M a s ’ u d D E A
PRAK ATA
P u j i d a n s y u k u r p e n u li s p a n j a t k a n k e p a d a A l la h s u b h a n a h u w a t a ’ a l a a t a s
s e g a l a k a r u n ia - N y a s e h i n g g a p e n u li s d a p a t m e n y e l e s a i k a n t e s is i n i . J u d u l y a n g
d i p i li h d a l a m p e n e li t ia n i n i i a l a h K a r a k t e r i s a s i S e n y a w a A k t if E k s tr a k D a u n
S i r s a k ( A n n o n a m u r ic a t a L ) d a n A k ti v it a s S it o t o k s i k n y a p a d a S e l M u r i n
L e u k e m i a P - 3 8 8 .P e n e l it i a n i n i m e r u p a k a n s a l a h s a t u p e r s y a r a ta n u n t u k
m e m p e r o l e h g e la r M a g is t e r S a i n s p a d a P r o g r a m S t u d i K im i a d i S e k o l a h
P a s c a s a r j a n a I n s t it u t P e r t a n i a n B o g o r .
T e r i m a k a s i h p e n u l is u c a p k a n k e p a d a P r o f D r P u r w a n ti n i n g s i h S u g it a , M S
d a n D r d r I r m a H e r a w a t i S u p a r t o , M S s e l a k u k o m i s i p e m b im b i n g y a n g t e l a h
b a n y a k m e m b e r i m a s u k a n d a n a r a h a n d a l a m m e n y e l e s a i k a n p e n e l it i a n d a n t e s i s
i n i . T e r i m a k a s i h j u g a k e p a d a P r o f D r D y a h I s w a n t in i M S c A g r s e l a k u K e t u a
P r o g r a m S t u d i M a g is t e r K im ia , ja ja r a n s ta f l a b o r a t o r i u m k im i a o r g a n i k , r e k a n - r e k a n
k e l a s p r o g r a m s t u d i m a g is t e r k im ia , d a n s e l u r u h p ih a k y a n g t e l a h m e m b a n t u h i n g g a
p e n e l it i a n i n i t e r s e l e s a i k a n .U n g k a p a n te r im a k a s i h d a n r a s a h o r m a t s e t i n g g it i n g g i n y a j u g a p e n u li s s a m p a i k a n k e p a d a a y a h , i b u , s e r t a s e l u r u h k e l u a r g a a ta s
s e g a l a d o a d a n k a s i h s a y a n g n y a . T e n t u n y a k e p a d a i s tr i t e r c i n ta y a n g s e l a l u
m e m b e r i k a n d u k u n g a n u n t u k m e n y e l e s a i k a n k a r y a i lm i a h i n i .
A k h i r n y a s e m o g a k a r y a il m i a h i n i d a p a t b e r m a n f a a t b a g i p e n u li s , c i v it a s
a k a d e m i k a d a n p a r a p e m b a c a .S e h i n g g a m a m p u m e m b e r i k a n i n f o rm a si u n t u k
m e m p e r l u a s k h a s a n a h k e il m u a n d i m a s a m e n d a t a n g .
B o g o r, A g u stu s 2 0 1 6
S y a m su l H id a y a t
D A F T A R IS I
DAFT AR T ABEL
vi
DAFT AR G AM BA R
vi
D A F T A R L A M P IR A N
vi
1 PEND AH ULU AN
L a ta r B e la k a n g
P e ru m u sa n M a sa la h
T u j u a n P e n e l it i a n
M a n f a a t P e n e l it i a n
1
1
2
2
3
2 M ETODE
W a k t u d a n T e m p a t P e n e li ti a n
B ahan
A la t
P r o s e d u r P e n e l i ti a n
3
3
3
3
3
3 H A S IL D A N P E M B A H A S A N
K a d a r A ir
E k s t r a k D a u n S i rs a k
K a n d u n g a n M e t a b o li t S e k u n d e r
F r a k s i o n a s i E k s tr a k E t O A c
N i l a i T o k s is it a s p a d a U ji B r i n e S h r i m p L e t h a li t y T e s t
K a r a k t e ri s a si S e n y a w a
A k tiv itas A n tik a n k er terh a d a p S e l M u rin L e u k em ia P-3 8 8
7
7
7
8
9
13
14
18
4 S IM P U L A N D A N S A R A N
S im p u la n
S aran
19
19
19
DAFT AR PUSTA KA
20
L A M P IR A N
23
R IW A Y A T H ID U P
30
DAFTAR TABEL
1 H a s i l u ji f it o k im i a p a d a e k s tr a k e t a n o l , E t O A c , t a n i n d a n
k l o r o fi l
2 N i l a i r e n d e m e n d a n t o k si si t a s fr a k s i h a si l K C V d a r i e k s t ra k E t O A c
d a u n sirsa k
3 N i l a i r e n d e m e n d a n t o k s is it a s f r a k s i h a s il K L T P
4 N i l a i I C 5 0 s a m p e l t e r h a d a p p e r t u m b u h a n s e l m u r i n l e u k e m ia P - 3 8 8
8
10
12
18
DAFTAR G AM BAR
1 P r o f i l K L T d e n g a n e l u e n n - h e k s a n a : E t O A c ( 7 : 3 ) d a ri ( 1 ) e k s t ra k
e t a n o l , ( 2 ) e k s tr a k E t O A c , ( 3 ) ta n i n d a n ( 4 ) k l o r o f il d a u n A n n o n a
m u r i c a t a L d i b a w a h p e n y i n a r a n U V ( λ 25 4 n m ) ( a ) d a n U V ( λ 36 6 n m ) ( b )
2 P r o f i l K L T e k s t r a k E t O A c d a u n s i r s a k d e n g a n g r a d a s i k e p o la r a n e l u e n
n - h e k s a n a : E t O A c ( a ) d i b a w a h si n a r U V ( λ 25 4 n m ) d a n ( b ) U V ( λ 36 6 n m )
3 P ro fil K L T e lu at 1 -1 8 h a sil K C V e k s tra k E tO A c d a u n s irs a k d e n g a n
e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) d i b a w a h si n a r U V ( λ 36 6 n m )
4 P r o f i l K L T h a s i l p e m i s a h a n fr a k s i A e k s t ra k E t O A c d a u n s i r s a k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) (a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
5 P ro fil K L T h a sil p e m isa h a n fra ksi C e k stra k E tO A c d a u n sirsa k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n n - h e k sa n a : E t O A c ( 7 : 3 ) (a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
6 P r o f i l K L T h a s i l p e m i s a h a n f r a k s i F e k s tr a k E t O A c d a u n s ir s a k d e n g a n
K L T P m e n g g u n a k a n e l u e n D C M : M e O H ( 1 9 ,5 : 0 ,5 ) ( a ) d i b a w a h s i n a r
U V (λ 254nm ) d an (b ) d i baw ah U V (λ 366nm )
7 G ra fik h a sil uji to ks isitas m e n g g u n a k a n B S L T (a ) fra k si A 2 d a n (b ) F 3
8 K r o m a t o g r a m fr a k s i A 2
9 S p e k t r u m m a ss a fr a k si A 2 d a n u su l a n s e n y a w a n y a b e r d a s a r k a n
p u s t a k a W I L L E Y 0 9 T H , ( a ) u n t u k w a k t u r e t e n s i 1 6 ,6 7 m e n i t d a n ( b )
u n t u k w a k t u r e t e n s i 1 7 ,7 4 m e n it
1 0 K r o m a t o g r a m fr a k s i F
1 1 ( a ) K r o m a t o g r a m f ra k s i F 3 ( b ) s p e k t r u m m a s s a fr a k si F 3 d a n u s u l a n
se n y a w a n y a b e rd asa rk a n p u sta k a W IL L E Y 0 9 T H p a d a w a k tu rete n si
2 8 ,6 7 m e n i t
8
9
10
11
12
12
13
14
15
16
17
D A F T A R L A M P IR A N
1
2
3
4
D i a g r a m a l i r p e n e li t ia n
S a l i n a n h a si l d e t e rm i n a s i t u m b u h a n si r s a k
P e r h i t u n g a n k a d a r a i r s i m p li s i a d a u n s i r s a k
P e rh itu n g a n nilai L C 50 p a d a B S L T
24
25
26
27
1 PENDAH ULUAN
L a ta r B e la k a n g
K a n k e r s a m p a i s a a t i n i m e r u p a k a n s a l a h s a t u p e n y a k it p a li n g m e m a ti k a n d i
d u n i a . M e n u r u t d a ta I n te r n a ti o n a l A g e n c y f o r R e s e a r c h o n C a n c e r - W H O , p a d a
t a h u n 2 0 1 2 t e r d a t a 1 4 .1 j u t a p e n d e r i ta k a n k e r , d a n 8 .2 j u t a k e m a ti a n a k i b a t k a n k e r .
L e b i h d a r i 5 0 % a n g k a t e r s e b u t t e r j a d i d i n e g a r a - n e g a r a t e r ti n g g a l . D i I n d o n e s i a
s e n d i r i k e m a t i a n a k i b a t k a n k e r m e r e n g g u t 1 9 5 3 0 0 ji w a p a d a t a h u n 2 0 1 4 .
U n t u k m e n g u r a n g i r e s i k o t e r h a d a p k a n k e r , p a r a p e n e l it i t e r u s m e l a k u k a n
b e r b a g a i r is e t . P e n c e g a h a n t e r h a d a p k a n k e r b i s a d il a k u k a n d e n g a n m e n g g u n a k a n
s e n y a w a b a h a n a l a m y a n g m e m i li k i a k ti v it a s a n ti k a n k e r . A n n o n a m e r u p a k a n s a l a h
s a t u g e n u s t u m b u h a n y a n g b a n y a k d il a p o r k a n m e m il i k i a k t i v i t a s a n t i k a n k e r .
B e b e r a p a s p e s i e s tu m b u h a n y a n g b e r a s a l d a r i g e n u s t e r s e b u t a d a l a h A n n o n a
s q u a m o s a , A . m o n t a n a , A . d i o i c a d a n A . m u r i c a t a ( C o n s o l a c i o n e t a l . 2 0 1 2 ; T o r re s
e t a l . 2 0 1 2 ; G u e t a l . 1 9 9 6 ; S u n e t a l . 2 0 1 4 ) .H o p p e t a l . ( 1 9 9 7 ) m e l a p o r k a n b a h w a
d a r i k u li t k a y u A . s q u a m o s a b e r h a s i l d i i s o l a s i s e n y a w a g o l o n g a n a s e t o g e n i n
d e n g a n e f e k t i v i t a s p e n g h a m b a ta n t e r h a d a p s e l k a n k e r p a n k r e a s P A C A - 2 d e n g a n
E D 5 0 s e b e s a r 1 , 2 x 1 0 -4 µ g / m L . S e n y a w a g o l o n g a n a s e t o g e n i n d a n a l k a l o i d j u g a
b e r h a s il d ii s o la s i d a r i d a u n A . m o n t a n a d a n m e n u n j u k k a n a k t i v it a s p e n g h a m b a t a n
t e r h a d a p s e l k a n k e r p a r u - p a r u L L C , A - 5 4 9 , u s u s H T - 2 9 , d a n m u ri n P - 3 8 8 d e n g a n
E D 5 0 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t s e b e s a r 0 .0 8 , 4 .4 6 , 2 .5 1 , d a n 3 .3 3 µ g / m L ( W u e t a l .
1 9 9 3 , W a n g e t a l . 2 0 0 2 ) . S e m e n ta r a it u , s e n y a w a k a e m p f e r o l y a n g m e r u p a k a n
g o l o n g a n f la v o n o i d d il a p o r k a n t e l a h d ii s o l a s i d a r i b a g i a n d a u n A . d i o i c a d a n
m a m p u m e n g h a m b a t s e l m u r i n E r l i c h k a r s i n o m a d e n g a n I C 5 0 s e b e s a r 7 .8
m m o l/ m L ( V e g a e t a l . 2 0 0 7 ) .
M e s k i p u n s p e s i e s y a n g s e g e n u s d e n g a n n y a ju g a m e m i li k i a k ti v it a s
a n t i k a n k e r , n a m u n A . m u r ic a t a L l e b i h d i k e n a l s e b a g a i “ T h e c a n c e r k i l le r ” d a n
s e c a r a e m p i r i s t e la h d i g u n a k a n s e b a g a i o b a t t r a d i s i o n a l u n t u k p e r a w a ta n p e n d e r it a
k a n k e r d a n t u m o r ( M o g h a d a m t o u s i e t a l . 2 0 1 4 ) .A . m u r i c a t a L a t a u y a n g p o p u l e r
d e n g a n s e b u t a n s ir s a k d i I n d o n e s i a b a h k a n t i d a k h a n y a m e m i li k i a k t i v i t a s s e b a g a i
a n t i k a n k e r .E k s t ra k k a s a r d a ri t u m b u h a n s i rs a k j u g a t e l a h d i l a p o r k a n b e r k h a s i a t
s e b a g a i a ntidia b e tes (A d e y e m i e t al. 2 0 0 9 ), a ntio k sid a n (F lo re n c e et a l. 2 0 1 4;
O l a k u n l e e t a l . 2 0 1 4 ; C u e v a s e t a l . 2 0 1 4 ) , a n ti i n f l a m a s i ( F o o n g d a n H a m i d 2 0 1 2 ) ,
d a n a n t ib a k t e r i ( V i j a y a m e e n a e t a l . 2 0 1 3 ) . P e n e l i ti a n y a n g t e l a h d i l a p o r k a n
t e r s e b u t m e n g g u n a k a n b e r b a g a i b a g i a n d a r i t u m b u h a n s i r s a k s e p e r ti b a g i a n a k a r ,
k u l i t b a t a n g , b u a h , b i ji d a n d a u n .
P a d a p e n e l i ti a n i n i y a n g a k a n d i g u n a k a n a d a l a h d a u n n y a . B e b e r a p a
p e n e l it i a n a n t i k a n k e r t e r h a d a p d a u n s ir s a k s e n d i r i b a n y a k d i l a p o r k a n d a l a m
b e n t u k e k s t r a k k a s a r n y a . S e p e r t i y a n g t e l a h d is a m p a i k a n o l e h H a m i z a h e t a l .
( 2 0 1 2 ) b a h w a e f e k p a p i l o m a g e n e s i s p a d a m e n c i t t e ri n d u k s i 7 ,1 2 d i m e t h y l b e n z ( α ) a n t h r a c e n e s e c a r a t o p i k a l s e la m a s e p u l u h m i n g g u m a m p u d it e k a n
p r o s e s i n i s i a s i t u m o r n y a s e te l a h p e m b e r i a n e k s tr a k e t a n o l d a u n s i r s a k d e n g a n
d o s i s 3 0 , 1 0 0 d a n 3 0 0 m g .k g - 1 b e r a t b a d a n . P a d a p e n e li ti a n l a i n j u g a d i l a p o r k a n
b a h w a e k s t r a k e t a n o l d a u n s ir s a k m a m p u m e n g h a m b a t s e l k a n k e r k a r s i n o m a
2
E r l i c h E A C C , s e l k a n k e r p a y u d a r a M D A d a n S K B R 3 d e n g a n I C 5 0 b e r t u r u t- t u r u t
s e b e s a r 3 3 5 .8 5 , 2 4 8 .7 7 , d a n 2 0 2 .3 3 µ g .m L - 1 ( G a v a m u k u l y a e t a l . 2 0 1 4 ) .
S e d a n g k a n e k s t r a k m e t a n o l d i l a p o r k a n m e m i li k i e f e k s i t o t o k s i k t e r h a d a p s e l
k a n k e r larin g H E p -2 d a n p a ru-p a ru N C I-H 2 9 2 (M elo e t al. 2 0 1 0 ).
S e m e n t a r a i t u , p e n e li t ia n t e r h a d a p a k ti v it a s a n t i k a n k e r y a n g m e n g g u n a k a n
se n y a w a m u rni, b a n y a k b erfo k u s p a da a seto g e n in y a n g m eru p a k a n su atu
p o l i k e ti d a . S e j a u h i n i l e b i h d a r i 4 0 0 je n i s a s e t o g e n i n t e l a h d il a p o r k a n b e r h a s il
d i i s o l a s i ( A m i n i m o g h a d a m f a r o u j e t a l . 2 0 1 1 ) . S e p e r t i y a n g d il a p o r k a n o l e h S u n e t
a l. (2 0 1 4 ), C o n so la c io n e t a l. (2 0 1 2), K im e t al. (1 9 9 8 ), d a n G u e t a l. (1 9 9 6 )
s e n y a w a a s e t o g e n i n d a r i A . m u r i c a t a m e m p u n y a i a k ti v i ta s s it o t o k s i k d a l a m
m e la w a n sel k a n k e r p a n kre a s P A C A -2 , p ro stat P C -3 , p a ru -p aru A -5 4 9 , h e p a tom a
H e p G 2 , p a y u d a ra M C F -7 , g in ja l A -4 9 8 d a n u su s H T -2 9 . S e la in ase to g e nin ,
s e n y a w a g o l o n g a n a l k a l o i d s e p e r t i a n n o n a m i n e d a n a n o n a i n e b e r h a s i l d i is o l a s i
d a r i d a u n s i r s a k d a n m e n u n j u k k a n e f e k s it o t o k s i k t e r h a d a p s e l n e u r o b l a s t o m a S H S Y 5 Y d e n g a n n i l a i I C 5 0 s e c a r a b e r t u r u t- t u r u t s e b e s a r 1 9 5 .8 ± 1 7 d a n 3 4 .6 ± 3 .5
µ M ( M a t s u s h i g e e t a l . 2 0 1 2 ) . E k s tr a k k a e m p f e r o l , s u a t u f l a v o n o i d j u g a d i p e r o l e h
d a r i d a u n s i r s a k d a n m e n u n j u k k a n a k t i v i t a s p e n g h a m b a t a n te r h a d a p s e l R a ji
d e n g a n I C 5 0 s e b e s a r 1 1 0 .8 2 µ g .m L - 1 ( M u s t a r i a n i , 2 0 1 1 ) .M e s k i p u n d e m i k i a n ,
h i n g g a s a a t i n i b e l u m p e r n a h d il a p o r k a n k a ji a n a k t i v it a s a n t i k a n k e r m e t a b o l it
s e k u n d e r d a r i A n n o n a m u r i c a t a t e r h a d a p s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .O l e h k a r e n a
i t u p e n e l it i a n u n t u k m e n c a r i s e n y a w a m e t a b o l it s e k u n d e r d a r i d a u n s i r s a k y a n g
d a p a t b e r p e r a n a k ti f d a l a m m e n g h a m b a t a k t i v i t a s s e l k a n k e r m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8
m e n j a d i p e n ti n g u n t u k d i l a k u k a n .
P e r u m u sa n M a sa la h
T u m b u h a n A . m u r i c a t a L a t a u s i r s a k te l a h d i k e n a l s e b a g a i t u m b u h a n
b e r k h a s i a t o b a t . D i a n t a r a b a n y a k b i o a k t i v it a s y a n g d im il i k i , a n t i k a n k e r
m e r u p a k a n b i o a k t i v i t a s y a n g t e l a h b a n y a k d i l a p o r k a n . P e n e l i ti a n t e r k a it a n t i k a n k e r
d a r i s i r s a k l e b i h s e r i n g d il a p o r k a n m e n g g u n a k a n e k s t r a k k a s a r n y a . S e m e n t a r a it u ,
p e n e l it i a n d e n g a n s e n y a w a m u r n i l e b i h b a n y a k b e r f o k u s p a d a a s e t o g e n i n .D e n g a n
d e m i k ia n , b i o a k ti v it a s s i r s a k s e b a g a i a n t i k a n k e r m e m a n g s e r i n g d ii d e n ti k k a n
d e n g a n a s e t o g e n i n y a n g d i k a n d u n g n y a .M e s k i p u n d e m i k i a n , h i n g g a sa a t i n i b e l u m
p e r n a h d i l a p o r k a n k a j i a n a k ti v it a s a n t i k a n k e r m e ta b o l it s e k u n d e r d a r i A .
m u r i c a t a L t e r h a d a p s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 . O l e h k a r e n a i t u p e r l u d i la k u k a n
p e n c a r i a n s e n y a w a m e t a b o l it s e k u n d e r y a n g b e r p e r a n a k ti f d a l a m m e n g h a m b a t
a k t i v it a s s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
T u ju a n P e n e litia n
P e n e l i ti a n i n i b e r t u j u a n u n t u k m e n g e t a h u i p o t e n s i p e n g h a m b a ta n s e l m u r i n
l e u k e m i a P - 3 8 8 o le h f r a k s i a k t i f e k s tr a k d a u n s ir s a k .
3
M a n f a a t P e n e li t i a n
P e n e l i ti a n i n i d i h a r a p k a n d a p a t m e m b e r i k a n i n f o r m a s i m e n g e n a i p o t e n s i
f r a k s i a k t if e k s t r a k d a u n s i r s a k d a l a m m e n g h a m b a t p e r t u m b u h a n s e l m u r i n
le u k e m ia P -3 8 8 .
2 M ETODE
W a k t u d a n T e m p a t P e n e l i ti a n
P e n e l i ti a n i n i d i l a k u k a n p a d a b u l a n A p r il 2 0 1 5 s a m p a i d e n g a n J a n u a r i
2 0 1 6 d i L a b o r a t o r i u m K im i a O r g a n i k D e p a r t e m e n K im i a I P B , L a b o r a t o r i u m
K im ia O rga n ik B a h a n A la m IT B , d a n P u sa t L a b o rato rium F ore n sik M a rka s B e sar
K e p o lisia n R e p u blik In d o ne sia .
Bahan
B a h a n y a n g d i g u n a k a n d a l a m p e n e l it i a n i n i a d a l a h s e r b u k s i m p l i s i a d a u n
s i r s a k y a n g d i a m b i l d a ri k e b u n U n i t K o n s e r v a s i d a n B u d i d a y a B i o f a rm a k a
( U K B B ) P u s a t S t u d i B i o f a rm a k a I P B b e rl o k a si d i C i k a b a y a n K a b u p a t e n
B o g o r . P e l a r u t y a n g d i g u n a k a n a d a l a h e t a n o l 9 6 % , m e t a n o l , e t il a s e t a t ,
d i k l o r o m e t a n a , a s e t o n , k l o r o f o r m , a s a m s u lf a t , a s a m k l o r i d a , h e k s a n a , a ir l a u t ,
r e a g e n M e y e r , W a g n e r , D r a g e n d o r f , s e r b u k m a g n e s i u m d a n t e l u r A r t e m i a s a li n a .
A d a p u n s i l i k a g e l y a n g d i g u n a k a n a d a l a h s il i k a g e l M e r c k 6 0 G u n t u k
K ro m a to g rafi C a ir V a k u m (K C V ), silik a g e l M erc k 6 0 K ie se l G F 254 u n tu k
K r o m a t o g r a f i L a p is T i p i s P r e p a r a t i f ( K L T P ) , d a n p e l a t s il i k a g e l M e r c k 6 0 F 2 5 4
u k u ra n 2 0 x 2 0 c m u n tu k K ro m a to gra fi L a pis T ip is (K L T ). B a h a n m e d ia k u ltur
s e l , y a it u D u l b e c c o ’ s M o d if i e d E a g l e M e d i u m ( D M E M ) , f e t a l b o v i n e s e r u m ( F B S ) ,
S D S , H C l d a n b u f f e r f o s f a t p H 7 . 4 ,M T T ( 3 - ( 4 , 5 - D i m e t h y l t h i a z o l- 2 - y l ) - 2 , 5 d i p h e n y lt e t r a z o li u m b r o m i d e ) , a r t o n i n E d a n s e l m u r i n l e u k e m i a P - 3 8 8 .
A la t
P e r a l a ta n y a n g d i g u n a k a n p a d a p e n e li ti a n i n i a d a l a h p e r a l a t a n g e l a s y a n g
u m u m d i g u n a k a n d i l a b o r a t o r i u m o r g a n i k , n e r a c a d i g it a l a n a l i ti k G R - 2 0 0 ,
p e n g u a p p u t a r R - 1 1 4 , d e t e k t o r s i n a r t a m p a k H e r a e u s W - G e r m a n y n o m o r s e ri
9 3 1 1 0 1 7 . S e p e r a n g k a t a l a t K r o m a t o g r a f i L a p i s T i p is ( K L T ) , K r o m a t o g r a f i C a ir
V a k u m ( K C V ) , K r o m a t o g r a f i L a p is T i p i s P r e p a r a t if ( K L T P ) . A d a p u n
s p e k t o m e t e r m a s s a y a n g d i g u n a k a n d e n g a n k o l o m k a p il e r m o d e l A g il e n t 1 9 0 9 1 S 436.
P r o s e d u r P e n e l i ti a n
S e c a r a g a r i s b e s a r , p e n e li ti a n i n i d i b a g i d a l a m e m p a t t a h a p a n , y a it u
p e n y i a p a n s a m p e l d a u n s i r s a k , f r a k s i n a s i , u j i s i t o t o k s i s it a s m e n g g u n a k a n l a r v a
4
A r t e m i a s a li n a d a n s e l m u r i n l e u k e m ia P - 3 8 8 , s e r t a k a r a k t e r i s a s i m e n g g u n a k a n
k r o m a t o g r a f i g a s - s p e k t r o m e te r m a s s a ( G C - M S ) .
P e n y i a p a n S a m p e l P e n e li t i a n
S a m p e l d a u n s i r s a k y a n g te l a h te r i d e n t if i k a s i s e b a g a i s p e s i e s A . m u r i c a t a L
o le h H e rb a rium B o g o rie n se , B o g o r d ik u m p ulk a n d a ri k e b u n P u sa t S tu di
B i o f a r m a k a I P B . S a m p e l d a u n y a n g t e r k u m p u l l a l u d i k e r i n g k a n d a n d i g i li n g
m e n j a d i s e r b u k s i m p l i s i a d a u n s ir s a k .S e r b u k y a n g d i p e r o l e h l a l u d i s i m p a n d i
w ad ah y an g k ed ap u d ara.
P e n g u k u r a n K a d a r A ir
C a w a n p o r s e l e n t e rl e b i h d a h u l u d i k e r i n g k a n d a l a m o v e n p a d a s u h u 1 0 0 o C
s e l a m a 3 0 m e n i t , k e m u d i a n d i d i n g i n k a n d a la m d e s i k a t o r d a n d i ti m b a n g . S e b a n y a k
2 g s i m p l is i a d a u n s ir s a k d il e t a k k a n d a l a m c a w a n t e r s e b u t , k e m u d i a n d i p a n a s k a n
d a l a m o v e n p a d a s u h u 1 0 0 ± 1 o C s e l a m a 5 j a m .S e l a n j u t n y a c a w a n b e r i si
s i m p l i s i a d i d i n g i n k a n d a l a m d e s i k a t o r k e m u d i a n d it im b a n g . P e n g e r i n g a n d a n
p e n i m b a n g a n d i u la n g i s e t ia p 1 j a m h i n g g a d i d a p a t k a n b o b o t k o n s t a n ( A O A C
2 0 0 5 ) . P r e s e n t a s i k a d a r a ir d i h i t u n g d e n g a n m e n g g u n a k a n p e r s a m a a n b e r i k u t :
D e n g a n a d a la h b o b o t s am p e l se b e lum d ik erin g k a n d a n
s e t e l a h d i k e ri n g k a n .
a d a la h b o b o t sa m p el
E k stra k si S a m p el
S a m p e l b e r u p a s i m p li s i a d a u n s i r s a k d i s i a p k a n s e b a n y a k 2 k g u n t u k
d i e k s tr a k s i d e n g a n c a r a m a s e r a s i m e n g g u n a k a n p e l a r u t e t a n o l s e l a m a 2 4 j a m p a d a
s u h u r u a n g d e n g a n ti g a k a li u l a n g a n . H a s i l m a s e r a s i k e m u d i a n d i s a r i n g , s e h i n g g a
d i p e r o l e h f il tr a t d a n r e s i d u . S e m u a f il tr a t y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p e k a t k a n
m e n g g u n a k a n p e n g u a p p u t a r u n t u k m e m p e r o l e h e k s t ra k k a s a r e t a n o l d a n
d i t e n t u k a n j u m l a h r e n d e m e n n y a . E k s t r a k e t a n o l k e m u d ia n d i p is a h k a n d a r i k l o r o f il
d a n t a n i n . U n t u k m e n g h il a n g k a n k l o r o f i l , e k s t r a k e t a n o l t o t a l d it a m b a h k a n p e l a r u t
M e O H : H 2 O ( 1 : 1 ) s e l a m a 7 2 j a m d a n k e m u d ia n d is a r i n g , s e h i n g g a d i p e r o l e h
e n d a p a n d a n f il tr a t . E n d a p a n y a n g d i p e r o l e h m e r u p a k a n k l o r o f il , s e d a n g k a n f i lt r a t
k e m u d i a n d i p a r t is i c a ir - c a i r m e n g g u n a k a n E t O A c u n t u k m e m p e r o l e h t a n i n d a n
e k s t r a k E t O A c .K e d u a f a s a y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p e k a t k a n d a n d i t e n t u k a n
re n d e m e n n y a (m o difik asi M in a rni d a n O k e k e 2 0 1 4 ).
U j i F i t o k im i a
U j i F l a v o n o i d d a n S e n y a w a F e n o l i k . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g m a s i n g s a m p e l d it a m b a h k a n a i r k e m u d i a n d i d i d i h k a n s e la m a 2 m e n it d a n d i s a r i n g .
U n t u k p e n g u j i a n f la v o n o i d , 5 m L f il tr a t n y a d it a m b a h H 2 S O 4 a t a u s e t e l a h
d i p a n a s k a n 5 m l f i lt r a t d it a m b a h k a n 0 .2 5 g s e r b u k M g d a n d i t a m b a h k a n 1 m l H C l
p e k a t d a n 1 m l a m il a l k o h o l . T e r b e n t u k n y a w a r n a m e r a h a k i b a t p e n a m b a h a n
5
H 2 S O 4 m e n u n ju k k a n a d a n y a se n y a w a a n fla v o n oid d a n terb e n tu k n y a w a rn a m e ra h,
k u n i n g , a t a u ji n g g a p a d a l a p is a n a m i l a l k o h o l m e n u n j u k k a n a d a n y a
f l a v o n o i d . P e n g u j i a n s e n y a w a f e n o l i k s e b a n y a k 5 m L f i lt r a t d i t a m b a h k a n F e C l 3
1 % (b /v ) terb e n tu k n ya w a rn a h ija u a ta u biru m e n u nju k k a n a d a n y a se n y a w a
fe n o lik .
U j i T e r p e n o i d d a n S t e r o i d . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g
s a m p e l d it a m b a h 5 m l e t a n o l l a l u d i p a n a s k a n p a d a 5 0 ° C d a n d is a r i n g . F i lt r a t n y a
d i u a p k a n h i n g g a k e r i n g k e m u d i a n d i l a r u t k a n d e n g a n e t e r . L a p i s a n e t e r d it a m b a h 3
t e t e s a s e t a t a n h i d r i d a d a n 1 t e t e s H 2 S O 4 p e k a t .W a r n a m e r a h a t a u u n g u
m e n u n ju k k a n a d a n ya te rpe n o id d a n w a rn a hija u m e n u n ju k ka n a d a n y a ste roid .
U j i A l k a l o i d . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s tr a k d a r i m a s i n g - m a s i n g s a m p e l
d i t a m b a h k a n 2 .5 m L k l o r o f o r m d a n b e b e r a p a te t e s a m o n i a k . K e m u d i a n c a m p u r a n
d i a s a m k a n d e n g a n 5 t e t e s H 2 S O 4 2 M .F r a k s i a s a m d i b a g i m e n j a d i t i g a t a b u n g
k e m u d i a n m a s i n g - m a s i n g d it a m b a h k a n p e r e a k s i M e y e r , W a g n e r , d a n
D r a g e n d r o f . A d a n y a a l k a l o i d d i ta n d a i d e n g a n t e r b e n t u k n y a e n d a p a n p u ti h p a d a
p e re a k si M e y er, e n d a p a n c o k e lat p a d a p e re a ksi W a g n e r, d a n terb e n tu k w a rn a
m e r a h ji n g g a p a d a p e r e a k s i D r a g e n d r o f .
U j i S a p o n i n . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g s a m p e l d it a m b a h
a i r s e c u k u p n y a d a n d i p a n a s k a n s e l a m a l im a m e n i t . L a r u t a n t e r s e b u t d i d i n g i n k a n
k e m u d i a n d i k o c o k . T i m b u l n y a b u s a s e l a m a s e k it a r 1 0 m e n i t m e n u n j u k k a n a d a n y a
sa p o n in .
U j i T a n i n . S e b a n y a k 0 .2 5 g e k s t r a k d a r i m a s i n g - m a s i n g b a g i a n d i ta m b a h k a n
a i r k e m u d i a n d i d i d i h k a n s e l a m a 2 m e n i t l a l u d is a r i n g . S e b a n y a k 5 m l f i lt r a t
d i t a m b a h k a n l a r u t a n F e C l 3 1 % ( b / v ) . U j i p o s i ti f d i ta n d a i d e n g a n m u n c u l n y a w a r n a
b iru tu a a ta u hija u k e hitam a n (H a rb orn e 1 9 8 7 ).
F r a k s i o n a s i E k s t r a k E tO A c
F r a k s i o n a s i te r h a d a p e k s t r a k E t O A c d i a w a li d e n g a n p e n c a r i a n e l u e n t e r b a i k
m e n g g u n a k a n b e b e r a p a e l u e n t u n g g a l y a i t u n - h e k s a n a , e t il a s e t a t , d i k l o r o m e t a n ,
k l o r o f o rm , e t a n o l d a n m e t a n o l .E l u e n t e rs e b u t k e m u d i a n d i k o m b i n a si k a n u n t u k
m e m p e r o l e h e l u e n c a m p u r a n t e r b a i k y a n g m e n g h a s il k a n n o d a t e r b a n y a k d e n g a n
p o l a p e m i s a h a n y a n g t e r b a i k . S e t e l a h i t u e k s tr a k t e r s e b u t d ii m p r e g n a s i d e n g a n
s i li k a g e l K C V 6 0 G ( n i s b a h 1 : 2 ) d a n d i f r a k s i n a s i d e n g a n K C V . E l u a t K C V
s e la n jutn y a d ia n alisis p o la p em is a h a n n ya m e n g g u n a k a n K L T , e lu a t d e n g a n p o la
p e m i s a h a n y a n g s a m a a k a n d i g a b u n g k a n k e d a l a m s a t u f r a k s i k e m u d i a n d il i h a t
k e m b a li p o l a p e m is a h a n n y a d e n g a n K L T . S e t e l a h it u d i p e k a t k a n d e n g a n p e n g u a p
p u t a r d a n d i u ji t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T . F r a k s i d e n g a n p r o f i l K L T d a n
h a s i l u ji t o k s i s it a s y a n g b a i k d i l a n j u t k a n k e t a h a p a n p e m is a h a n l e b i h l a n j u t
m e n g g u n a k a n K L T P . H a s i l K L T P k e m b a l i d i l i h a t p o l a p e m i s a h a n n y a , u n t u k p r o f il
n o d a y a n g t u n g g a l d i u j i k e m b a li t o k s i s it a s n y a m e n g g u n a k a n B S L T d a n
d i k a r a k te r is a s i m e n g g u n a k a n G C - M S ( m o d if i k a s i M o g h a d a m t o u s i e t a l . 2 0 1 4 ) .
U j i T o k s i s it a s M e n g g u n a k a n M e t o d e B r i n e S h r i m p L e t h a l it y T e s t ( B S L T )
S e b a n y a k 2 0 m g t e l u r A . s a li n a d im a s u k k a n d a l a m w a d a h b e r i s i a i r l a u t,
k e m u d i a n d i si n a ri l a m p u d a n d i a e r a si s e c a ra k o n s t a n s e l a m a 4 8 j a m .S e t e l a h t e l u r
m e n e t a s , l a r v a A . s a l i n a s i a p d i g u n a k a n u n t u k u j i t o k s i s it a s . L a r u t a n i n d u k f r a k s i
y a n g d i u j i d i b u a t d e n g a n k o n s e n t r a s i 1 0 0 0 p p m , k e m u d ia n d i e n c e r k a n m e n j a d i
6
b e b e r a p a v a r i a s i k o n s e n tr a s i y a i t u 0 , 3 1 .2 5 , 6 2 .5 , 1 2 5 , 2 5 0 , d a n 5 0 0 p p m y a n g
d i m a s u k k a n k e d a l a m s u m u r b e r i s i 1 0 l a r v a d a l a m a i r l a u t . P e r l a k u a n d i la k u k a n
s e b a n y a k t i g a k a li d a n d i d ia m k a n s e la m a 2 4 ja m d a n t e t a p d i s i n a r i l a m p u . S e t e l a h
i t u j u m l a h l a r v a y a n g m a ti d i h it u n g d a n d it e n t u k a n p e r s e n k e m a t ia n n y a
b e r d a s a r k a n p e r s a m a a n b e r i k u t:
N i l a i L C 5 0 k e m u d i a n d i p e r o le h d a r i p e r s a m a a n r e g r e s i p a d a g r a f i k h u b u n g a n
a n t a r a l o g a r it m a k o n s e n tr a s i s a m p e l u j i t e r h a d a p a n g k a p r o b it . A n g k a p r o b it
d i p e r o l e h s e b a g a i h a s il k o n v e r s i d a r i p e r s e n k e m a t i a n y a n g d i p e r o l e h ( M e y e r , e t
a l .1 9 8 2 ) .
K a r a k te risa si S e n y a w a M e n g g u n a k a n G C -M S
F r a k s i a k ti f d ii n j e k s i k a n k e d a l a m G C - M S S h i m a d z u Q P - 5 0 5 0 A d e n g a n
k o l o m k a p il e r m o d e l a g i l e n t 1 9 0 9 1 S - 4 3 6 H P - 5 M S b e r u k u r a n 0 . 2 5 m m x 6 0 m x
0 . 2 5 µ m d a n g a s p e m b a w a h e l i u m d e n g a n l a j u a li r 1 . 0 m L / m e n i t . S u h u
m a k s im u m k o l o m s e b e s a r 3 5 0 o C , s u h u o v e n 7 0 o C d e n g a n s u h u m a k s i m u m
3 2 5 o C d a n w a k t u p r o s e s s e l a m a 5 9 . 6 7 m e n it d e n g a n p e n u n d a a n s e l a m a 5 m e n it
a w a l . S u h u i n j e k t o r 2 9 0 o C d e n g a n te k a n a n 1 8 . 1 2 p s i . S p e k tr o m e t e r m a s s a
m e n g g u n a k a n e n e r g i i o n i s a s i 6 9 .9 2 e V d e n g a n a r e a d e t e k s i p a d a r e n t a n g 4 0 – 8 0 0
m / z . I d e n t if i k a s i t e r h a d a p p u n c a k y a n g m u n c u l d a l a m k r o m a t o g r a m d i o l a h
m e n g g u n a k a n p e r a n g k a t l u n a k M S D C h e m S t a t i o n E .0 2 .0 2 .1 4 3 1 l a l u
d i b a n d i n g k a n k e m ir i p a n n y a t e r h a d a p p u s t a k a W I L L E Y 0 9 T H .
U ji b io a k tiv ita s a n tik a n k er seca ra in vitro ter h a d a p sel m u rin
leu k em ia P - 3 8 8
S u s p e n s i s e l d i b u a t s e k i ta r 3 x 1 0 3 s e l / m L d a la m m e d i a R P M I 1 6 4 0 . S e l
d i i n o k u l a s i k a n d a l a m p e l a t m i k r o 9 6 b e r l u b a n g d a s a r r a t a d a n d i k u lt i v a s i d a l a m
in k u b a to r C O 2 sela m a 2 4 ja m u n tu k m e n u m b u h k a n sel.
H a r i k e d u a d i l a k u k a n p e n a m b a h a n s a m p e l y a n g d il a r u t k a n d a l a m p e l a r u t
D M S O . S a m p e l d ie n c erk a n d e n g a n m e n a m b a h ka n laru ta n b uffe r fo sfat (P B S ) p H
7 , 3 0 – 7 , 6 5 . S a m p e l d e n g a n k o n s e n t r a s i b e r a g a m ( 0 , 0 .1 , 0 . 3 , 1 , 3 , 1 0 , 3 0 , d a n 1 0 0
µ g . m L -1 ) d i t a m b a h k a n k e d a l a m p l a t m i k r o l a l u d i k o c o k d e n g a n p e n g a d u k p l a t
m i k r o d a n d i s im p a n k e m b a l i d a l a m i n k u b a t o r C O 2 . S e b a g a i k o n t r o l n e g a t if
d i g u n a k a n D M S O d a n k o n t r o l p o s i ti f d i g u n a k a n s e n y a w a s t a n d a r a r t o n i n E . S e l
d i i n k u b a s i s e l a m a 4 8 j a m , k e m u d ia n d it a m b a h k a n r e a g e n M T T [ 3 - ( 4 , 5 - d i m e t il
t i a z o l - 2 - i l) - 2 , 5 - d i f e n i l t e t r a z o l i u m b r o m i d a ] d a n d i k o c o k d e n g a n p e n g a d u k p l a t
m i k r o . I n k u b a s i d i la n j u t k a n s e la m a 4 j a m , k e m u d i a n d i t a m b a h k a n l a r u t a n
p e n g h e n ti (S D S -H C l) d a n d ik o c o k d e n g a n b a ik ta n pa m e n in g g alk a n b u sa y a n g
d a p a t m e n g g a n g g u p e n g a m a ta n , s e t e l a h it u p l a t m i k r o k e m b a li d ii n k u b a s i s e l a m a
2 4 ja m .
P e n g u k u r a n r a p a ta n o p t i s ( O D ) d i l a k u k a n d e n g a n p e m b a c a p l a t m i k r o p a d a
p a n j a n g g e l o m b a n g 5 4 0 n m , s e te l a h 2 4 j a m p e n a m b a h a n l a r u t a n p e n g h e n t i ( A ll e y
e t a l . 1 9 8 8 ) .D a t a O D k e m u d i a n d i m a s u k k a n d a l a m p r o g r a m o r i g i n 8 u n t u k
m e n g h i t u n g n i la i I C 5 0 .
7
3 H A S IL D A N P E M B A H A S A N
K a d a r A ir
S a m p e l d a u n s ir s a k y a n g d i p e r o l e h d a r i k e b u n U n i t K o n s e r v a s i d a n
B u d i d a y a B i o f a r m a k a ( U K B B ) P u s a t S t u d i B i o f a r m a k a I P B t e l a h t e r i d e n t if i k a s i
s p e s i e s n y a s e b a g a i A n n o n a m u r i c a t a L d i H e r b a r i u m B o g o r ie n s e , B o g o r
( L a m p i r a n 2 ) .S a m p e l d a u n s i r s a k d i k e r i n g k a n l a l u d i g il i n g h i n g g a b e r b e n t u k
s e r b u k s i m p l i s i a . P e n g g il i n g a n d im a k s u d k a n u n t u k m e m p e r k e c il u k u r a n p a r t i k e l
s i m p l i s i a s e h i n g g a p e r m u k a a n k o n ta k d e n g a n p e la r u t s a a t e k s tr a k s i m e n j a d i l u a s
d a n s i m p l i s i a d a p a t t e r e k s tr a k d e n g a n b a i k .
S e b e l u m k e t a h a p e k s t r a k s i , k a d a r a i r d a r i s i m p l i s i a d it e n t u k a n te r le b i h
d a h u l u . K a d a r a i r d i p e r o l e h s e b e s a r 7 .3 0 % ( L a m p ir a n 3 ) , n il a i i n i a k a n m e n j a d i
f a k t o r k o r e k s i d a la m m e n e n t u k a n j u m l a h r e n d e m e n e k s t r a k . P e r s e n t a s e k a d a r a ir
m e n u n j u k k a n h a s il y a n g b a i k , s e b a b k a d a r a i r y a n g k u r a n g d a r i 1 0 % m e n a n d a k a n
sa m p e l m am p u te rhin d a r d a ri p e n c em a ra n y a n g dise b a b k a n o le h m ik ro b a d a n
w a k t u s i m p a n s a m p e l a k a n r e l a ti f le b i h la m a s e h i n g g a m e m e n u h i s y a r a t s e b a g a i
b a h a n b a k u h e rb a l.
E k str a k D a u n S ir sa k
S i m p li s i a d a u n s i r s a k d i e k s t r a k s i d e n g a n m e t o d e m a s e r a s i , p r o s e s m a s e r a s i
d i l a k u k a n s e l a m a ti g a k a l i 2 4 j a m p a d a s u h u r u a n g . P e l a r u t y a n g d i g u n a k a n a d a l a h
e ta n o l y a n g dik e ta h ui m am p u m ela rutk a n se n y a w a p o lar d a n n o n p o lar d e n g a n
b a i k ( H a r b o r n e 1 9 8 7 ) . S e l a i n i t u , e t a n o l j u g a b e r s i f a t v o l a ti l d a n t i d a k t o k s i k
s e h i n g g a b a i k d i g u n a k a n s e b a g a i p e l a r u t d a l a m e k s tr a k s i t u m b u h a n h e r b a l . P r o s e s
e k s t r a k s i i n i m e n g h a s il k a n r e n d e m e n e k s tr a k e t a n o l s e b e r a t 2 8 5 .9 1 g a t a u s e b e s a r
1 5 . 7 1 % d a r i b o b o t s i m p l is i a .H a s il i n i l e b i h b a i k d i b a n d i n g k a n p e n e li ti a n M i n a r n i
d a n O k e k e ( 2 0 1 4 ) y a n g h a n y a m e m p e r o l e h r e n d e m e n s e b e s a r 1 1 .4 2 % .
E k s tra k eta n o l tota l k e m u dia n dip isa h k a n d ari klo rofil d a n ta n in y a n g
d i k a n d u n g n y a . D a r i t o t a l 2 5 0 .0 8 g e k s tr a k e t a n o l d i p e r o l e h e n d a p a n y a n g
m e r u p a k a n k l o r o f i l b e r w a r n a h ij a u p e k a t s e b e r a t 1 2 4 .4 g a t a u s e b e s a r 4 9 .7 4 4 %
d a r i e k st r a k e t a n o l t o t a l y a n g d i p i s a h k a n . P e r o l e h a n k l o r o fi l y a n g c u k u p b e sa r i n i
d i k a r e n a k a n s a m p e l y a n g d i g u n a k a n m e r u p a k a n b a g i a n d a u n d a ri
t u m b u h a n . S e la i n e n d a p a n y a n g m e r u p a k a n k l o r o f i l , d i p e r o l e h j u g a f i lt r a t
b e r w a r n a c o k la t t u a s e j u m l a h 9 6 0 m l . F i lt r a t y a n g d i p e r o l e h k e m u d i a n d i p a r t i s i
( c a i r - c a ir ) m e n g g u n a k a n E t O A c s e h i n g g a d i p e r o l e h d u a f a s a , y a it u f a s a a ir y a n g
m e n g a n d u n g t a n i n d a n f a s a o r g a n i k . K e d u a f a s a te r s e b u t l a l u d i p e k a t k a n s e h i n g g a
d i p e r o l e h t a n i n b e r w a r n a c o k l a t t u a s e b e r a t 9 5 .5 g d a n f r a k s i E t O A C y a n g t e l a h
t e r b e b a s d a r i k l o r o f i l d a n t a n i n s e b e r a t 2 7 .5 4 g .
E k s t r a k e t a n o l t o t a l , E t O A c , t a n i n d a n k l o r o fi l k e m u d i a n d i a n a l i si s
m e n g g u n a k a n K r o m a t o g r a fi L a p i s T i p i s ( K L T ) d e n g a n e l u e n n - h e k s a n a : E t O A c
( 7 : 3 ) s e p e r ti y a n g d it u n j u k k a n p a d a G a m b a r 1 .
8
1
2
3
4
1
(a)
G am bar 1
2
3
4
(b )
P ro fil K L T d e n g a n e lu e n n - h e k s a n a : E t O A c (7 :3 ) d a ri (1 ) e k s tra k e ta n o l,
(2 ) e k s tra k E tO A c , (3 ) ta n in d a n (4 ) k lo ro fil d a u n s irs a k d i b a w a h
p e n y in a ra n U V (λ 254nm ) (a ) d a n d i b a w a h p e n y in a r a n U V (λ 366nm ) (b )
P a d a G a m b a r 1 t e rl i h a t b a h w a e k st r a k E t O A c s u d a h t i d a k t e r d a p a t t a n i n
y a n g m e m b e r i k a n n o d a b e r p e n d a