Isolasi, pengelompokkan warna dan optimasi media pertumbuhan aktonomiset selulolitik asal hutan Sulawesi Tengah

ISOLASI, PENGELOMPOKKAN WARNA DAN OPTIMASI
MEDIA PERTUMBUHAN AKTINOMISET SELULOLITIK
ASAL HUTAN SULAWESI TENGAH

Oleh:
ASIH WIDAYANI
G 34102076

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2006

ABSTRAK
ASIH WIDAYANI. Isolasi, Pengelompokkan Warna dan Optimasi Media Pertumbuhan
Aktinomiset Selulolitik Asal Hutan Sulawesi Tengah. Dibimbing oleh ANJA MERYANDINI dan
YULIN LESTARI.
Sebanyak 63 isolat Aktinomiset diisolasi dari contoh tanah hutan Taman Nasional Lore
Lindu, Sulawesi tengah. Isolat Aktinomiset dikelompokkan berdasarkan warna koloninya menjadi
enam kelompok warna. Beberapa isolat menghasilkan pigmen terdifusi yang berbeda. Delapan
isolat Aktinomiset diantaranya menghasilkan zona bening. Tiga isolat Aktinomiset terpilih

berdasarkan indeks selulolitiknya, yaitu A5D4-3, D2D2-2, dan E2D1-2, diukur biomassanya dan
diuji aktivitas selulasenya. Isolat A5D4-3 dan E2D1-2 memiliki biomassa terbesar ketika pepton
ditambahkan pada media pertumbuhan CMC, sedangkan isolat D2D2-2 memiliki biomassa
terbesar ketika ekstrak khamir ditambahkan pada media pertumbuhan CMC. Isolat A5D4-3
memiliki aktivitas FPase lebih besar (0.022 nkat/ml), dibanding CMCase dan aviselase ketika
menggunakan media pertumbuhan CMC dengan penambahan pepton. Isolat D2D2-2 memiliki
aktivitas CMCase lebih besar (0,373 nkat/ml), dibanding CMCase dan FPase ketika menggunakan
media pertumbuhan CMC dengan penambahan ekstrak khamir. Isolat E2D1-2 memiliki aktivitas
aviselase lebih besar (0,012 nkat/ml), dibandingkan CMCase dan FPase ketika menggunakan
media pertumbuhan CMC dengan penambahan pepton.

ABSTRACT
ASIH WIDAYANI. Isolation, Colour Grouping and Growth Media Optimation of Cellulolytic
Actinomycetes from Central Sulawesi Forest. Supervised by ANJA MERYANDINI dan YULIN
LESTARI.
Sixty three isolates of Actinomycetes were isolated from soil sample of Lore Lindu
National Park forest, Central Sulawesi. Those isolates were grouped into six colour groups based
on the color of their colony. Some isolates produced different diffusible pigment. Eight isolates of
Actinomycetes produced clearing zone. Biomass and cellulase activity of three isolates, A5D4-3,
D2D2-2, and E2D1-2 were measured based on their cellulolytic index. A5D4-3 and E2D1-2 had

the highest biomass when peptone was added into CMC growth media, meanwhile D2D2-2 had
the highest biomass when yeast extract was added into CMC growth media. A5D4-3 had higher
FPase activity (0.022 nkat/ml) than CMCase and avicelase when CMC growth media was added
with peptone. D2D2-2 had higher CMCase activity (0.373 nkat/ml) than avicelase and FPase when
CMC growth media was added with yeast extract. E2D1-2 had higher avicelase activity (0.012
nkat/ml) than CMCase and FPase when CMC growth media was added with peptone.

ISOLASI, PENGELOMPOKKAN WARNA DAN OPTIMASI
MEDIA PERTUMBUHAN AKTINOMISET SELULOLITIK
ASAL HUTAN SULAWESI TENGAH

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperolah gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Biologi

Oleh:
ASIH WIDAYANI
G 34102076

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2006

Judul Skripsi : Isolasi, Pengelompokkan Warna dan Optimasi Media Pertumbuhan Aktinomiset
Selulolitik Asal Hutan Sulawesi Tengah
Nama
: Asih Widayani
NIM
: G34102076

Menyetujui

Pembimbing I

Pembimbing II

Dr. Anja Meryandini, MS
NIP. 131663016

Dr. Ir. Yulin Lestari
NIP. 131779515

Mengetahui
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Pertanian Bogor

Prof. Dr. Ir. Yonny Koesmaryono, MS
NIP. 131473999

Tanggal Lulus :

PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat-Nya sehingga penulis
berhasil menyelesaikan laporan skripsi ini. Penelitian ini berjudul Isolasi, Pengelompokkan Warna
dan Optimasi Media Pertumbuhan Aktinomiset Selulolitik Asal Hutan Sulawesi Tengah, yang
dilaksanakan dari bulan Februari hingga Agustus 2006 di Laboratorium Mikrobiologi Departemen
Biologi FMIPA IPB.
Terima kasih penulis ucapkan kepada Dr. Anja Meryandini, MS. dan Dr. Ir. Yulin Lestari yang

telah memberikan dana, ilmu, saran dan solusi selama penelitian. Penulis juga mengucapkan
terima kasih kepada Dra. Triadiati, M.Si. yang telah memberikan contoh tanah dan Dr. Nisa
Rachmania Mubarik, M.Si. sebagai Kepala Bagian Mikrobiologi Departemen Biologi FMIPA IPB.
Mba Heni, ibu Kokoy, Bapak Endang, Bapak Jaka, dan Bapak Husen sebagai laboran di
Laboratorium Mikrobiologi. Kepada teman-teman di Laboratorium Mikrobiologi Dewi, Nirli,
Vitria, Mia, Dhilah, Mba elsie, Tika, Ari, Tika T, Desi, ibu It. Kepada teman baikku Awi, Neenda,
Juve, Popi, Adisti, Ajeng dan teman-teman Biologi angkatan 39 yang tidak dapat disebutkan satu
persatu atas segala dukungan dan doanya.
Tak lupa terima kasih kepada orang tuaku, seluruh keluarga, dan Mas Anto untuk doa, kasih
sayang, dan dorongan semangatnya selama ini.
Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat.

Bogor, September 2006

Asih Widayani

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jakarta pada tanggal 13 Agustus 1984. Penulis merupakan anak kedua
dari lima bersaudara dari Ayah Djuhanda dan Ibu Wiwi Suswiti.
Tahun 2002 penulis lulus dari SMUN 48 Jakarta Timur, dan berhasil masuk Jurusan Biologi,

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor pada tahun 2002
melalui jalur SPMB. Selama perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten praktikum mata kuliah
Botani Umum pada tahun akademik 2004/2005 dan 2005/2006, mata kuliah Biologi pada tahun
akademik 2005/2006, mata kuliah Taksonomi Tumbuhan Berpembuluh pada tahun akademik
2005/2006 dan mata kuliah Fisiologi Mikroba pada tahun akademik 2005/2006. Penulis pernah
melaksanakan praktik lapang di PDAM Tirta Pakuan Bogor dengan judul Analisa Penurunan
Kandungan Bakteriologis Pada Setiap Proses Pengolahan Air Cipaku PDAM Tirta Pakuan. Tahun
2005 penulis memenangkan Lomba Karya Tulis Ilmiah tingkat IPB dan tahun 2006 sebagai juara
I pada Lomba Pekan Ilmiah Nasional.

DAFTAR ISI
DAFTAR TABEL .........................................................................................................

vii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................................

vii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................

viii

PENDAHULUAN.........................................................................................................
Latar Belakang .............................................................................................
Tujuan ..........................................................................................................

1
1
2

WAKTU DAN TEMPAT .............................................................................................

2

BAHAN DAN METODE .............................................................................................
Bahan ...........................................................................................................
Metode .........................................................................................................
Isolasi Aktinomiset .................................................................................
Colour grouping .....................................................................................

Pengukuran indeks selulolitik.................................................................
Optimasi pertumbuhan isolat selulolitik terpilih pada media
pertumbuhan yang berbeda.....................................................................
Pengukuran biomassa .............................................................................
Pengukuran aktivitas selulase.................................................................

2
2
2
2
2
2

HASIL...........................................................................................................................
Isolasi Aktinomiset.......................................................................................
Colour Grouping..........................................................................................
Pengukuran Indeks Selulolitik......................................................................
Optimasi Pertumbuhan Isolat Selulolitik Terpilih pada Media
Pertumbuhan yang Berbeda..........................................................................
Pengukuran Aktivitas Selulase.....................................................................

3
3
3
3

2
2
2

4
4

PEMBAHASAN ...........................................................................................................
Isolasi Aktinomiset........................................................................................
Colour Grouping ...........................................................................................
Pengukuran Indeks Selulolitik.......................................................................
Optimasi Pertumbuhan Isolat Selulolitik Terpilih pada Media
Pertumbuhan yang Berbeda...........................................................................
Pengukuran Aktivitas Selulase......................................................................

5
5
5
5

SIMPULAN ..................................................................................................................

7

SARAN .........................................................................................................................

7

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................

8

6
6

DAFTAR TABEL
1 Indeks selulolitik isolat terpilih ..................................................................................
2 Biomassa tiga isolat selulolitik pada sumber karbon dan sumber nitrogen yang
berbeda setelah 10 hari pertumbuhan pada suhu ruang ..............................................

3
4

DAFTAR GAMBAR
1 Persentase jumlah isolat Aktinomiset pada contoh tanah A, D, dan E.......................
2 Contoh masing-masing warna koloni isolat yang berbeda-beda ................................
3 Aktivitas selulase isolat A5D4-3 pada media pertumbuhan CMC dengan penambahan
pepton dan media pertumbuhan avisel dengan penambahan pepton yang diuji pada
suhu 40 ºC dan pH 6.5................................................................................................
4 Aktivitas selulase isolat D2D2-2 pada media pertumbuhan CMC dengan penambahan
ekstrak khamir dan media pertumbuhan avisel dengan penambahan ekstrak khamir
yang diuji pada suhu 40 ºC dan pH 6.5 ......................................................................
5 Aktivitas selulase isolat E2D1-2 pada media pertumbuhan CMC dengan penambahan
pepton dan media pertumbuhan avisel dengan penambahan pepton yang diuji pada
suhu 40 ºC dan pH 6.5................................................................................................

3
3

4

4

4

DAFTAR LAMPIRAN
1
2
3
4
5
6
7

Komposisi media agar-agar......................................................................................
Komposisi media pertumbuhan................................................................................
Metode pengujian aktivitas CMCase (Miller 1959) .................................................
Metode pengujian aktivitas aviselase (Okada 1999) ................................................
Metode pengujian aktivitas FPase (Alam et al. 2004)..............................................
Kurva standar glukosa..............................................................................................
Isolat Aktinomiset yang diisolasi dari contoh tanah dengan menggunakan media agaragar CMC.................................................................................................................
8 Pengelompokkan warna miselia Aktinomiset yang ditumbuhkan pada media YMA
selama 14 hari pada suhu ruang ...............................................................................
9 Zona bening yang terbentuk di sekitar koloni ..........................................................
10 Aktivitas selulase isolat A5D4-3 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan pepton .................................................................................................
11 Aktivitas selulase isolat D2D2-2 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan ekstrak khamir....................................................................................
12 Aktivitas selulase isolat E2D1-2 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan pepton .................................................................................................

10
11
13
13
13
13
14
16
17
18
18
18

1

PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme membutuhkan nutrisi
untuk mendukung pertumbuhan selnya.
Nutrisi yang dibutuhkan terdiri atas
makronutrien dan mikronutrien. Makronutrien
yang dibutuhkan yaitu karbon (C), nitrogen
(N), fosfor (P), sulfur (S), kalium (K),
magnesium (Mg), kalsium (Ca), natrium (Na)
dan besi (Fe). Mikronutrien yang dibutuhkan
yaitu tembaga (Cu), mangan (Mn), seng (Zn),
nikel (Ni), molibdenum (Mo), kobalt (Co)
(Prescott et al. 1999). Hampir 50% berat
kering sel terdiri atas karbon, oleh karena itu
karbon (C) merupakan makronutrien yang
paling utama dibutuhkan. Prokariot autotrof
menggunakan CO2 sebagai satu-satunya
sumber karbon, sedangkan yang bersifat
heterotrof menggunakan molekul organik
sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan
(Madigan et al. 2000).
Selulosa, komponen terbesar tumbuhan,
sebagai salah satu sumber karbon merupakan
polimer linier anhidroglukosa dengan ikatan
β-1,4-glikosida (Li & Gao 1997). Di dalam
tumbuhan, selulosa tersusun dalam bentuk
fibril yang terdiri atas beberapa molekul
selulosa yang diikat oleh ikatan hidrogen.
Fibril-fibril tersebut membentuk kristal parsial
yang merupakan ciri pembeda dari pati.
Hidrolisis selulosa dapat dilakukan secara
kimiawi
maupun
secara
enzimatik
menggunakan selulase(Haki & Rakshit 2003).
Selulase, enzim penghidrolisis selulosa,
merupakan enzim kompleks yang terdiri atas:
(1) kompleks endo-β-1,4glukanase:
endoselulase,
Carboxymethyl
cellulase
(CMCase ), atau Cx selulase; (2) kompleks
eksoβ-1,4-glukanase:
selobiohidrolase,
aviselase, atau C1 selulase; (3) β-1,4glukosidase atau selobiase (Crueger &
Creuger 1984). Banyak bakteri dapat tumbuh
dengan selulosa sebagai sumber karbon,
namun hanya beberapa kelompok bakteri
yang mampu mendegrasi komponen selulosa
secara keseluruhan. Bakteri yang mampu
menghasilkan sistem selulase yang lengkap
disebut dengan true cellulolytic bacteria,
sedangkan yang hanya mampu menghasilkan
endoglukanase dan β-glukosidase disebut
pseudocellulolytic bacteria (Coughlan &
Mayer 1991). Sintesis selulase dapat diinduksi
dengan keberadaan selulosa kristal atau avisel
sebagai sumber karbon. Sebaliknya sumber
karbon lain dapat menghambat sintesis
selulase. Penambahan ekstrak khamir tidak
berpengaruh secara langsung terhadap sintesis

selulase, tapi dapat menunjang pertumbuhan
bakteri (Wartel & Schrempf 1996).
Bakteri selulolitik dapat bersifat aerob
maupun anaerob. Dalam kondisi aerobik
degradasi selulosa akan menghasilkan CO2
dan air, sedangkan dalam kondisi anaerobik
akan menghasilkan metan selain CO2 dan air
(Perez et al. 2002). Bakteri selulolitik yang
bersifat aerob antara lain berasal dari genus
Cellulomonas, Cellovibrio, Pseudomonas,
Serratia, Streptomyces. Bakteri selulolitik
yang bersifat anaerob antara lain berasal dari
genus
Bacteroides,
Clostridium,
Ruminococcus (Coughlan & Mayer 1991).
Aktinomiset merupakan salah satu kelas
dari filum Bacteria, ordo Actinomycetales.
Berdasarkan ciri morfologi dan kandungan
dinding selnya, genus Aktinomiset terbagi
dalam
dua
kelompok,
yaitu
genus
Streptomyces dan genus non Streptomyces.
Genus Streptomyces merupakan genus
terbesar Aktinomiset. Streptomyces memiliki
kemampuan untuk mendegradasi selulosa,
hemiselulosa, dan lignin, yang banyak
terdapat dalam tanaman (Holt et al. 1994;
Madigan et al. 2000).
Aktinomiset masuk dalam kelompok
bakteri berfilamen, Gram positif dengan %
GC tertinggi diantara bakteri lainnya, yaitu
sebesar 63-78% (Madigan et al. 2000).
Aktinomiset bereproduksi dengan spora aerial
(konidia) atau melalui fragmentasi miselia.
Aktinomiset memiliki dua macam miselia,
yaitu miselia aerial dan miselia substrat.
Kedua miselia ini mampu menghasilkan
pigmen yang menyebabkan perbedaan warna
pada masing-masing koloni. Perbedaan warna
masing-masing koloni dapat dijadikan tahap
awal identifikasi genus dan spesies pada
aktinomiset. Tahap identifikasi selanjutnya
adalah uji produktivitas melanin, karena
kelompok warna spora yang sama dapat
dimiliki anggota yang berasal dari genus
maupun spesies yang berbeda (Holt et al.
1994).
Dalam dunia industri, enzim selulolitik
termofil dapat diaplikasikan pada industri
makanan dan pemanis yang membutuhkan
proses
bertemperatur
tinggi,
seperti
pasteurisasi (Jang & Chang 2005). Selain itu
enzim selulolitik dapat dimanfaatkan untuk
menjernihkan dan mengekstrak jus buah,
digunakan untuk biostoning bahan jeans,
digunakan untuk memperbaiki kualitas nutrisi
pakan kuda atau sapi, serta digunakan dalam
pengolahan limbah industri (Haki & Rakshit
2003).

2

Taman Nasional Lore Lindu yang beriklim
tropis dan terdiri atas hutan hujan tropis dan
hutan perkebunan, terletak di desa Toro,
Kabupaten Donggala, Sulawesi Tengah.
Taman Nasional Lore Lindu memiliki keragaman flora yang tinggi, lebih dari 100
spesies tumbuhan dapat ditemukan di Taman
Nasional ini. Kondisi hutan yang berserasah
memungkinkan diisolasinya Aktinomiset
selulolitik (Holt et al. 1994; Madigan et al.
2000).
Tujuan
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengisolasi Aktinomiset selulolitik, mengelompokkan koloni Aktinomiset berdasarkan
warna, dan mengetahui media yang optimal
untuk pertumbuhan dan aktivitas selulase
Aktinomiset selulolitik.

WAKTU DAN TEMPAT
Penelitian dilaksanakan mulai bulan
Februari
sampai
Agustus
2006
di
Laboratorium
Mikrobiologi
Departemen
Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.

BAHAN DAN METODE
Bahan
Bahan yang digunakan yaitu contoh tanah
hutan konservasi Taman Nasional Lore Lindu
Sulawesi Tengah, yang terdiri atas (1) tanah
hutan primer dengan vegetasi dominan
tumbuhan hutan (A); (2) tanah hutan kakao
namun masih banyak terdapat tumbuhan
hutan, memiliki nama daerah pahawa pongko
1 (D); (3) tanah hutan dengan vegetasi
dominan berupa tanaman kakao dan sedikit
tumbuhan hutan, memiliki nama daerah
pahawa pongko 2 (E).
Metode
Isolasi Aktinomiset. Isolasi Aktinomiset
dari contoh
tanah dilakukan dengan
mengencerkan contoh tanah hingga 10 -5 dan
disebar pada media agar-agar Carboxy Methyl
Cellulose (CMC) pH 7 (lampiran 1),
diinkubasi selama 7 hari pada suhu ruang.
Kemudian isolat yang diperoleh dimurnikan
kembali pada media agar-agar CMC.
Colour grouping. Isolat Aktinomiset yang
telah murni ditumbuhkan pada media Yeast
Malt Agar (YMA) (lampiran 1) selama 14 hari

pada suhu ruang. Selanjutnya dilakukan
pengelompokan isolat aktinomiset berdasarkan warna koloninya.
Pengukuran indeks selulolitik. Isolat
Aktinomiset yang telah murni ditumbuhkan
pada media agar-agar CMC pH 7 dan
diinkubasi selama 6 hari pada suhu ruang.
Untuk mengetahui indeks selulolitik dilakukan pewarnaan dengan congored 0.1 %
sehingga zona bening yang terbentuk disekitar
koloni terlihat jelas. Indeks selulolitik
didapatkan melalui pengukuran zona bening
yang terbentuk di sekitar koloni dikurangi
diameter koloni dibagi diameter koloni.
Optimasi pertumbuhan isolat selulolitik
terpilih pada media pertumbuhan yang
berbeda. Optimasi pertumbuhan dilakukan
dengan menumbuhkan tiga isolat selulolitik
terpilih berdasarkan indeks selulolitik yang
terbesar (isolat E2D1-2), sedang (isolat
A5D4-3), dan terkecil (D2D2-2) pada enam
media pertumbuhan yang berbeda. Media
pertumbuhan yang digunakan yaitu CMC
dengan penambahan (NH4) 2SO4 (M1), CMC
dengan penambahan pepton (M2), CMC
dengan penambahan ekstrak khamir (M3),
avisel dengan penambahan (NH4 )2SO4 (M4),
avisel dengan penambahan pepton (M5) dan
avisel dengan penambahan ekstrak khamir
(M6) (Lampiran 2). Sebanyak dua koloni
isolat berdiameter 0.5 cm yang tumbuh pada
media agar-agar CMC diinokulasikan ke
dalam 50 ml media pertumbuhan dalam 250
ml erlenmeyer, diinkubasi dengan agitasi 140
rpm selama 10 hari pada suhu ruang dan
diukur aktivitas selulasenya.
Pengukuran
biomassa.
Pengukuran
biomassa dilakukan berdasarkan berat kering
koloni isolat yang telah ditumbuhkan pada
media pertumbuhan selama 10 hari. Endapan
hasil sentrifugasi (4000 xg, 30 menit)
dikeringkan pada suhu 80 ºC selama 24 jam
dan dilakukan sebanyak dua kali ulangan,
supernatan yang merupakan ekstrak kasar
enzim selulase diuji aktivitasnya.
Pengukuran aktivitas selulase. Aktivitas
Carboxy Methyl Cellulase (CMCase),
aviselase, dan Filter Paperase (FPase) diukur
dengan metode DNS (Miller 1959) dengan
glukosa sebagai standar dan dilakukan
sebanyak dua kali ulangan (Lampiran 3, 4, 5
& 6). Gula pereduksi yang dihasilkan diukur
dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 540 nm. Satu unit aktivitas
selulase didefinisikan sebagai jumlah enzim
yang menghasilkan 1 µmol glukosa dalam
satu menit, setara dengan 16.67 nkat/ml
(Dybkaer 2001).

3

Pengukuran aktivitas CMCase dilakukan
dengan menambahkan sebanyak 1 ml filtrat
ekstrak kasar enzim dengan 1ml CMC 1 %
dalam bufer fosfat 0.2 M pH 6.5, diinkubasi
selama 2 jam pada suhu 40 ºC. Pengukuran
aviselase dilakukan dengan menambahkan
sebanyak 2 ml filtrat ekstrak kasar enzim
dengan 2 ml avisel 2 % dalam bufer fosfat 0.2
M pH 6.5, diinkubasi selama 2 jam pada suhu
40 ºC. Reaksi dihentikan dengan penambahan
20 µl NaOH 2 M, kemudian disentrifugasi
pada kecepatan 1500 xg selama 15 menit
(Okada 1999). Pengukuran FPase dilakukan
dengan menambahkan sebanyak 1 ml filtrat
ekstrak kasar enzim dengan 0.5 g kertas saring
Whatmann no. 1 (1 x 6 cm), diinkubasi
selama dua jam pada suhu 40 ºC (Alam et al.
2004).

HASIL
Isolasi Aktinomiset
Dari 50 contoh tanah didapatkan 63 isolat
Aktinomiset (Lampiran 7). Dari gambar 1
terlihat isolat Aktinomiset banyak dijumpai
pada contoh tanah A dengan persentasi
sebesar 66.67 %, sedangkan pada contoh
tanah D sebesar 26.97 %, dan pada contoh
tanah E sebesar 6.35 %.
Tanah E
6%

Tanah D
27%

Tanah A
67%

jumlah
isolat
Gambar 1 Persentase
Aktinomiset pada contoh tanah A,
D, dan E.
Colour Grouping
Dari hasil pengamatan didapatkan 6
kelompok warna koloni yang berbeda serta 3
warna pigmen terdifusi (Gambar 3 dan
Lampiran 8). Isolat A2D5-3 dan isolat A3D11 menghasilkan pigmen terdifusi berwarna
coklat tua, isolat A2D4-1 menghasilkan
pigmen terdifusi berwarna kuning, dan isolat
D4D2-4 menghasilkan pigmen terdifusi
berwana coklat. Beberapa isolat juga
menghasilkan eksudat berupa cairan yaitu
isolat A1D1-2, A1D3-1, A4D1-3, A4D1-4,
dan D2D2-2.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

Gambar 2 Contoh masing-masing warna
koloni isolat yang berbedabeda. (a) Isolat A4D4-2 dengan
warna koloni abu-abu; (b) Isolat
A4D-1 dengan warna koloni
abu-abu tua; (c) Isolat D1D2-2
dengan warna koloni coklat; (d)
Isolat A4D3-3 dengan warna
koloni hitam; (e) Isolat A4D3-5
dengan warna koloni merah
muda; (f) Isolat D4D2-4 dengan
warna koloni putih.

Pengukuran indeks selulolitik
Dari 63 koloni isolat yang didapatkan
delapan
diantaranya
memiliki
indeks
selulolitik yang besar (Tabel 1 dan Lampiran
9). Indeks selulolitik terbesar dimiliki oleh
isolat E2D1-2 yaitu sebesar 3.8, sedangkan
indeks selulolitik terkecil dimiliki oleh isolat
D2D2-2 yaitu sebesar 1.8.
Tabel 1 Indeks selulolitik isolat terpilih
No.

Nama

Indeks
Selulolitik

1.

A2D5-2

2.8

2.

A5D2-2

2.3

3.

A5D4-3

2.125

4.

D1D4-3

2.143

5.

D2D2-2

1.8

6.

D3D3-1

3

7.

D4D2-4

2.75

8.

E2D1-2

3.8

4

Media
Pertumbuhan
M1
M2
M3
M4
M5
M6

Isolat
A5D4-3
10
30
20
2
22
12

Akt ivit as Selulase
(n kat /ml)

Pengukuran Aktivitas Selulase
Pengukuran aktivitas selulase dilakukan
sebanyak dua kali ulangan terhadap aktivitas
CMCase, aviselase, dan FPase (Lampiran 10,
11, dan 12). Gambar 3 memperlihatkan
aktivitas selulase isolat A5D4-3 pada media
pertumbuhan CMC dengan penambahan
pepton (M2) dan media pertumbuhan avisel
dengan penambahan pepton (M5). Pada media
pertumbuhan M2 aktivitas CMCase, aviselase,
dan FPase memiliki aktivitas masing-masing
sebesar 0.011, 0.015 dan 0.022 nkat/ml. Pada
media pertumbuhan M5 aktivitas CMCase,
aviselase, FPase memiliki aktivitas masingmasing sebesar 0.006, 0.004 dan 0.01 nkat/ml.
0.025
0.02
0.015
0.01
0.005
0
CMCase

Aviselase

0.4
(nkat/ml)

Aktivitas selulase

Biomassa (mg)
Isolat
Isolat
D2D2-2
E2D1-2
40
50
70
80
70
60
12
52
32
62
52
42

Aktivitas selulsase isolat D2D2-2 pada
media pertumbuhan CMC dengan penambahan ekstrak khamir (M3) dan media
pertumbuhan avisel dengan penambahan
ekstrak khamir (M6) terlihat pada gambar 4.
Pada media pertumbuhan M3 aktivitas CMC ase, aviselase, dan FPase memiliki aktivitas
masing-masing sebesar 0.373, 0.069 dan
0.219 nkat/ml. Pada media pertumbuhan M6
aktivitas CMCase, aviselase, dan FPase
memiliki aktivitas masing-masing sebesar
0.126, 0.11 dan 0.044 nkat/ml.
0.3
0.2
0.1
0
CMCase

CMC

Gambar 3

Avisel

0.015
0.01
0.005

FPase

0
CMCase

Aviselase

FPase

Enzim Selulase
CMC

Avisel

Aktivitas selulase isolat A5D4-3
pada media pertumbuhan CMC
dengan penambahan pepton dan
media
pertumbuhan
avisel
dengan
penambahan pepton
yang diuji pada suhu 40 ºC dan
pH 6.5.

FPase

Gambar 4 Aktivitas selulase isolat D2D2-2
pada media pertumbuhan CMC
dengan penambahan ekstrak khamir
dan media pertumbuhan avisel
dengan penambahan ekstrak khamir
yang diuji pada suhu 40 ºC dan pH
6.5.
.
Gambar 5 memperlihatkan aktivitas selulase
isolat E2D1-2 pada media pertumbuhan CMC
dengan penambahan pepton (M2) dan media
pertumbuhan avisel dengan penambahan
pepton (M5). Pada media pertumbuhan M2
aktivitas aviselase sebesar 0.012 nkat/ml,
sedangkan CMCase dan FPase tidak memiliki
aktivitas. Pada media pertumbuhan M5
aktivitas aviselase dan FPase masing-masing
sebesar 0.005 dan 0.003 nkat/ml, sedangkan
CMCase tidak memiliki aktivitas.

Enzim Selulase
CMC

Av iselase
Enzim Selulase

Aktivitas Selulase
(nkat/m l)

Optimasi Pertumbuhan Isolat Selulolitik
Terpilih pada Media Pertumbuhan yang
Berbeda
Data pada tabel 2 menunjukkan isolat
A5D4-3 dan E2D1-2 memiliki pertumbuhan
lebih baik pada media pertumbuhan M2
dengan biomassa masing-masing sebesar 30
mg dan 80 mg dibanding media pertumbuhan
lainnya. Isolat D2D2-2 memiliki pertumbuhan
lebih baik pada media pertumbuhan M2 dan
M3 yaitu dengan biomassa masing-masing
sebesar 70 mg.
Tabel 2 Biomassa tiga isolat selulolitik pada
sumber karbon dan sumber nitrogen
yang berbeda
setelah 10 hari
pertumbuhan pada suhu ruang

Gambar 5

Avisel

Aktivitas selulase isolat E2D1-2
pada media pertumbuhan CMC
dengan penambahan pepton dan
media pertumbuhan avisel dengan penambahan pepton yang
diuji pada suhu 40 ºC dan pH 6.5.
.

5

PEMBAHASAN
Isolasi Aktinomiset
Tanah memiliki komposisi mikroorganisme yang sangat beragam, 10-33 % diantaranya merupakan Aktinomiset dan genus
Streptomyces merupakan genus yang sangat
melimpah. Kondisi tanah yang disukai
Aktinomiset yaitu pada pH basa atau netral
dan sangat sensitif pada kondisi tanah yang
bersifat asam (Atlas & Bartha 1998). Habitat
alami Aktinomiset yang meliputi tanah dan
kompos menyebabkan genus ini memiliki
kemampuan untuk mendegradasi selulosa (Mc
Carthy 1987 diacu dalam Coughlan & Mayer
1991 ).
Isolasi Aktinomiset dilakukan dengan
menggunakan media agar-agar selektif CMC
pH 7 untuk mendapatkan isolat Aktinomiset
selulolitik. Isolat Aktinomiset paling banyak
ditemukan pada contoh tanah hutan primer
(A) yaitu dengan persentase sebesar 66.67 %.
Kondisi tanah yang berserasah memungkinkan didapatkannya isolat Aktinomiset
selulolitik.
Colour Grouping
Berdasarkan hasil pengamatan terhadap 63
isolat Aktinomiset yang diremajakan pada
media YMA, hanya 46 isolat yang berhasil
ditumbuhkan. Hal ini mungkin dikarenakan
isolat Aktinomiset sebelumnya ditumbuhkan
pada media agar-agar CMC dengan sumber
karbon yang minimal, sehingga isolat
Aktinomiset tidak mampu untuk tumbuh.
Untuk sporulasi Streptomyces membutuhkan media dengan rasio C:N yang tinggi
(Wendisch & Kutzner 1991). Beberapa media
yang biasa digunakan yaitu: (1) media YMA;
(2) media agar-agar oatmeal; (3) media agaragar pati mineral inorganik; (4) media agaragar gliserol-asparagin; (5) media trace salt
solution; (6) media trace elements solution
SPV-4 (Shirling & Gottlieb 1966 diacu dalam
Wendisch & Kutzner 1991 ; Voelskow 1988
diacu dalam Wendisch & Kutzner 1991).
Dalam penelitian ini digunakan media
YMA untuk mengelompokan warna koloni
Aktinomiset. Aktinomiset dapat menghasilkan
pigmen yang beragam yang mewarnai struktur
vegetatif dan miselia aerialnya. Selain itu juga
Aktinomiset menghasilkan warna pigmen
yang berdifusi. Beberapa warna pigmen yang
telah dilaporkan yaitu: (1) oranye-merah tua
atau violet; (2) merah violet-biru; (3) kuningoranye; (4) hijau-keabu-abuan; (5) hijau; (6)
merah kecoklatan-merah tua; (7) abu-abuhitam (Wendisch & Kutzner 1991).

Berdasarkan letaknya, pigmen dibedakan atas:
(1) endopigmen, yang hanya mewarnai koloni
saja; (2) eksopigmen, yang dikeluarkan ke
media. Eksopigmen bersifat larut dalam air
dan berdifusi ke media.
International Streptomyces Project (ISP)
melaporkan beberapa tipe warna miselia aerial
pada Streptomyces, yaitu kuning, violet,
merah, biru, hijau, abu-abu, dan putih
(Wendisch & Kutzner 1991). Meskipun telah
dilaporkan tipe warna miselia aerial pada
Streptomyces, namun ada beberapa warna
miselia aerial yang tidak dapat didefinisikan.
Ersya (2004) mengelompokkan warna spora
Aktinomiset yang berasal dari Sumatra, Jawa,
Kalimantan Timur, dan Tembagapura Irian
Jaya menjadi 7 kelompok warna yaitu abuabu, putih, hitam krem, coklat, merah muda,
dan merah. Isolat Aktinomiset tersebut juga
menghasilkan pigmen terdifusi yaitu kuning,
coklat hitam, coklat, coklat muda, hijau tua,
hijau dan krem. Dari 46 isolat yang
ditumbuhkan pada media YMA didapat 6
kelompok koloni, yaitu merah muda, abu-abu,
abu-abu tua, putih, coklat, dan hitam. Selain
itu juga didapatkan tiga pigmen terdifusi,
yaitu coklat tua, coklat, dan kuning.
Pengukuran indeks selulolitik
Pembentukan zona bening menunjukkan
bahwa selulosa yang terdapat di dalam media
dihidrolisis oleh enzim selulase menjadi
senyawa yang sederhana yaitu selobiosa yang
kemudian disederhanakan menjadi dua
molekul glukosa (Perez et al. 2002).
Pengukuran zona bening yang terbentuk
disekitar koloni merupakan analisis semi
kuantitatif aktivitas bakteri selulolitik
(Coughlan & Mayer 1991). Koloni isolat yang
ditumbuhkan pada media agar-agar CMC
berumur 6 hari disiram dengan larutan congo
red 0.1 %, untuk memperjelas terbentuknya
zona bening. Congo red memiliki interaksi
yang kuat dengan polisakarida yang
mengandung rantai ikatan
β-(1
4) Dglukopiranosil (Teather & Wood 1982).
Untuk memperjelas visualisasi zona
bening yang terbentuk, media agar-agar
disiram dengan larutan HCl 1M yang akan
merubah
warna
menjadi
biru
serta
menghentikan aktivitas enzim (Teather &
Wood 1982). Zona bening yang tidak ikut
terwarnai menandakan bahwa selulosa telah
terhidrolisis menjadi senyawa yang lebih
sederhana oleh enzim selulase. Enzim selulase
merupakan enzim ekstraseluler, yaitu enzim
yang dihasilkan di dalam sel dan dilepaskan
ke
dalam
media
sehingga
dapat

6

menghidrolisis makromolekul seperti selulosa,
kemudian hasil hidrolisis diserap sel (Crueger
& Crueger 1984).
Optimasi Pertumbuhan Isolat Selulolitik
Terpilih pada Media Pertumbuhan yang
Berbeda
Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan
mikrob yaitu media pertumbuhan yang
digunakan, suhu, pH, dan aerasi. Media
tumbuh yang biasa digunakan terdiri atas: (1)
media sintetik; dan (2) media kompleks.
Media sintetik merupakan media sederhana
yang seluruh komponennya telah diketahui
(Prescott et al. 1999; Madigan et al. 2000).
Aktinomiset,
khususnya
Streptomyces,
merupakan bakteri kemoorganotropik yang
dapat tumbuh pada media sintetik yang hanya
mengandung sumber karbon organik (misal
+
selulosa), sumber nitrogen inorganik (NH4
atau NO3 ), dan beberapa garam mineral
lainnya (Wendisch & Kutzner 1991).
Media kompleks mengandung komponen
nutrisi yang lengkap seperti pepton, ekstrak
daging, dan ekstrak khamir. Pepton
merupakan protein hidrolisat yang berfungsi
sebagai sumber karbon, sumber energi, dan
sumber nitrogen (Prescott et al. 1999).
Ekstrak khamir merupakan substrat terbaik
pada sebagian mikroorganisme yang mengandung vitamin B dan dapat berfungsi
sebagai sumber nitrogen dan sumber karbon.
Hasil pengukuran biomassa (Tabel 2),
menunjukkan bahwa ketiga isolat memiliki
pertumbuhan lebih baik ketika ditumbuhkan
pada media pertumbuhan CMC dibandingkan
media pertumbuhan avisel. Hal ini dikarenakan CMC, selulosa yang mudah larut,
lebih mudah dihidrolisis dibanding avisel
yang memiliki struktur kristalin. Isolat A5D43 dan isolat E2D1-2 tumbuh baik pada media
pertumbuhan CMC dengan penambahan
pepton, isolat D2D2-2 tumbuh baik pada
media
pertumbuhan
CMC
dengan
penambahan ekstrak khamir dibandingkan
media pertumbuhan lainnya. Hal ini menunjukkan meskipun Aktinomiset mampu
tumbuh pada media yang sederhana, namun
pertumbuhannya akan lebih baik jika
menggunakan media kompleks.
Pengukuran Aktivitas Selulase
Hasil pengukuran aktivitas selulase ketiga
isolat selulolitik terpilih, menunjukkan media
pertumbuhan dapat menginduksi aktivitas
selulase yang berbeda pada ketiga isolat
Aktinomiset. Adhi et al. (1989) melaporkan
Streptomyces viridosporus T7A dan S. badius

menghasilkan
endoglukanase
(CMCase)
ketika ditumbuhkan pada media yang
menggunakan ekstrak khamir. Selain itu pula,
sumber karbon yang berbeda dapat
mempengaruhi aktivitas selulase yang berbeda
pula (Coughlan & Mayer 1991). MacKenzie
et al. (1987) melaporkan S. flavogriseus dan
S. olivochromogenes menghasilkan selulase
yang lebih tinggi ketika ditumbuhkan pada
media xilan dibanding selulosa sebagai
sumber karbon.
Hasil pengukuran aktivitas selulolitik
(gambar 3, 4 dan 5) menunjukkan, aktivitas
CMCase, aviselase, dan FPase lebih besar
ketika ditumbuhkan pada media CMC sebagai
sumber karbon dibandingkan avicel. Isolat
A5D4-3 memiliki aktivitas FPase lebih baik
dibanding CMCase dan aviselase ketika
menggunakan media pertumbuhan CMC
dengan penambahan pepton. Isolat D2D2-2
memiliki aktivitas CMCase lebih baik
dibanding aktivitas aviselase dan FPase ketika
menggunakan media pertumbuhan CMC
dengan penambahan ekstrak khamir. Isolat
ED212 memiliki aktivitas aviselase lebih baik
dibanding aktivitas CMCase dan FPase ketika
menggunakan media pertumbuhan CMC
dengan penambahan pepton.
Berbagai kondisi dapat menginduksi kerja
enzim. Kondisi substrat yang minimum
mengakibatkan kerja enzim memecah substrat
menjadi lambat, sedangkan pada substrat yang
melimpah memungkinkan
kontak antara
enzim dengan substrat lebih besar, sehingga
akan menghasilkan produk yang lebih banyak
(Prescott et al. 1999). Hal ini terjadi pada
aktivitas selulolitik yang tinggi ketika
Aktinomiset ditumbuhkan pada media
pertumbuhan dengan penambahan pepton atau
ekstrak khamir. Keberadaan pepton atau
ekstrak khamir menunjang pertumbuhan
bakteri sehingga enzim yang dihasilkan lebih
banyak.
Hidrolisis selulase seutuhnya membutuhkan interaksi yang sinergis antara aktivitas
endoglukanase dan eksoglukanase. Endoglukanase aktif menghidrolisis selulosa amorf
dan selulosa terlarut (CMC), sedangkan
eksoglukanase aktif menghidrolisis selulosa
kristalin (Coughlan & Mayer 1991).
Endoglukanase dan eksoglukanase akan
menghidrolisis selulosa menjadi selobiosa,
kemudian β-glukosidase akan memecah
selobiosa menjadi dua molekul glukosa (Perez
et al. 2002). Untuk mengetahui interaksi yang
sinergis antara aktivitas endoglukanase dan
eksoglukanase perlu dilakukan pengukuran
aktivitas FPase, dengan menggunakan kertas

7

saring Whatmann no. 1 sebagai substrat.
Kertas saring merupakan substrat yang
majemuk karena memiliki ujung-ujung bebas
dan amorf sampai serat-serat kristalin.
Berdasarkan gambar 3, 4, dan 5, dapat
terlihat bahwa hanya isolat A5D4-3 yang
memiliki enzim endoglukanase (CMCase) dan
eksoglukanase (aviselase) yang bekerja secara
sinergis. Isolat D2D2-2 memiliki aktivitas
CMCase yang tinggi namun aktivitas
aviselase yang rendah sehingga memiliki
aktivitas FPase yang tidak tinggi. Hal yang
sama dimiliki oleh isolat E2D1-2 yang hanya
memiliki aktivitas aviselase.

SIMPULAN
Dari 50 contoh tanah didapatkan 63 isolat
Aktinomiset, delapan diantaranya mampu
menghasilkan zona bening disekitar koloni.
Dari 46 isolat yang mampu tumbuh baik
didapatkan 6 kelompok warna koloni.
Penambahan pepton dan ekstrak khamir pada
media pertumbuhan CMC dapat lebih meningkatkan pertumbuhan
ketiga isolat
Aktinomiset selulolitik terpilih dibandingkan
(NH 4)2 SO4. Aktivitas selulase lebih tinggi
ketika CMC digunakan sebagai sumber
karbon, dibanding dengan ketika avisel
digunakan sebagai sumber karbon. Pada isolat
A5D4-3, pepton menginduksi aktivitas FPase,
pada isolat D2D2-2 ekstrak khamir
menginduksi aktivitas CMCase, sedangkan
pada isolat E2D1-2 pepton menginduksi
aktivitas aviselase.

SARAN
Perlu dilakukan pencirian karakter
morfologi, analisis DAP dan produksi pigmen
melanin untuk identifikasi lebih lanjut isolat
Aktinomiset yang telah didapatkan. Selain itu
juga perlu dilakukan optimasi media
pertumbuhan dengan menggunakan sumber
karbon lain yang dapat menginduksi aktivitas
selulase.

8

DAFTAR PUSTAKA
Adhi TP, Korus RA, Crawford DL. 1989.
Production of mayor ekstrasellular
enzymes
during
lignocellulose
degradation by two Streptomycetes
in agitated submerged cultur.
Appl Environ Microbiol 5: 11651168.
Alam MZ, Manchur MA, Anwar MN. 2004.
Isolation,
purification,
characterization
of
cellulolytic
enzymes produced by Streptomyces
omiyaensis. J Biol Sci 10: 16471653.
Atlas RM, Bartha R. 1998. Microbial
Ecology.
Ed
ke-4.
Benjamin/Cummings Publishing.
Coughland MP, Mayer F. 1991. The cellulose
decomposing bacteria and their
enzyme systems. Di dalam Balows
A, Triper HG, Dworkin M, Harder
W,
Schleifer KH, editor. The
Prokaryotes, A Handbook on Biology
of
Bacteria:
Ecophysiology,
Isolation,
Identification,
Application. Vol I.
New
York:
Springer
Verlag.
Hlm
460-516.
Crueger W, Crueger A. 1984. Biotechnology:
A Textbook of
Industri
Microbiology. Brock TD, editor.
Sunderland:
Minauer
Associates.
Dybkaer R. 2001. Unit ”katal” for catalytic
activity. J Pure Appl Chem 73: 927931.
Ersya DA. 2004. Pencirian Actinomycetes
isolat lokal: colour grouping,
produksi
pigmen melanin,
dan
resistensi
antibiotik
[skripsi].
Bogor:
Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor.
Haki GD, Rakshit SK. 2003. Developments in
industrially important thermostable
enzymes: a review. Bioresource
Technol 89: 17-34.
Holt et al. 1994. Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology. Ed ke-9.
Baltmore: Williams and wilkins.
Jang HD, Chang KS. 2005. Thermostable
cellulase from Streptomyces sp. :
scale
up
production
in
a
fermenter. Biotechnol Letters 27:
239-242.

Li X, Gao P. 1997. CMC-liquefying enzyme a
low
molecular
mass
initial
cellulose decomposing cellulase
responsible for fragmentation from
Streptomyces sp. LX. J Appl
Microbiol 83: 59-66.
Madigan MT, Martinko JM, Parker J. 2000.
Biology of Microorganisms. Ed ke-9.
New Jersey: Prentice Hall.
MacKenzie CR, Bilous D, Schneider H,
Johnson KG. 1987. Induction of
cellulolytic and xylanolytic enzyme
systems in Streptomyces sp. Appl
Environ Microbiol 53: 2835-2839
Miller GL. 1959. Dinitrosalisic assay. Anal
Chem 31: 426-428.
Okada G. 1999. A novel concept for the
enzymatic degradation mechanism of
native cellulose. Di dalam: Ohmiya
et al., editor. Genetics Biochemistry
and
Ecology
of
Cellulose
Degradation Cel. Tokyo: Uni
Publisher. Hlm
76-85.
Perez J, Dorado JM, Rubia T de la, Martinez
J. 2002. Biodegradation and
biochemical treatments of cellulose,
hemicellulose, and lignin: an
overview.
Int
Microbiol
5:
53-63.
Prescott LM, Harley JP, Klein DA. 1999.
Microbiology. New York: Mc Graw
Hill.
Teather RM, Wood PJ. 1982. Use of congo
red polysacharide interactions in
enumeration and characterization of
cellulolytics bacteria from the bovine
rumen. Appl Environ Microbiol 43:
777-780.
Walter S, Schrempf H. 1996. Physiological
studies of cellulase (avicelase)
synthesis in Streptomyces reticuli
[catatan penelitian]. Appl Environ
Microbial 62: 1065-1069.
Wendisch FK, Kutzner HJ. 1991. The family
Streptomycetaceae.
Di
dalam
Balows A, Triper HG, Dworkin M,
Harder W, Schleifer KH, editor. The
Prokaryotes, A Handbook on Biology
of
Bacteria:
Ecophysiology,
Isolation, Identification, Application.
Vol I. New York: Springer Verlag.
Hlm
460-516.

9

LAMPIRAN

10

Lampiran 1 Komposisi media agar-agar
 Media agar-agar CMC (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
CMC
1
MgSO 4. 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
Pepton
0.2
Agar-agar
1.5
 Komposisi media agar-agar YM (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
Ekstrak khamir
0.4
Ekstrak malt
1
Glukosa
0.4
Agar-agar
1.5

11

Lampiran 2 Komposisi media pertumbuhan
 Media pertumbuhan 1 (M1) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
CMC
1
MgSO 4. 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
(NH 4) 2SO4
0.2
 Media pertumbuhan 2 (M2) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
CMC
1
.
MgSO 4 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
Pepton
0.2
 Media pertumbuhan 3 (M3) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
CMC
1
.
MgSO 4 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
CaCl 2. 2H2O
0.004
Ekstrak khamir
0.2
 Media pertumbuhan 4 (M4) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
Avisel
1
.
MgSO 4 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
FeSO 4. 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
(NH 4) 2SO4
0.2
 Media pertumbuhan 5 (M5) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
Avisel
1
MgSO 4. 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
Pepton
0.2

12

 Media pertumbuhan 6 (M6) (100 ml)
Komposisi
Jumlah (gram)
Avisel
1
MgSO 4. 7H2O
0.02
KNO 3
0.075
K 2HPO4
0.05
.
FeSO 4 7H2O
0.002
.
CaCl 2 2H2O
0.004
Ekstrak khamir
0.2

13

Lampiran 3 Metode pengujian aktivitas CMCase (Miller 1959)
Pereaksi
Blanko (ml)
Kontrol (ml)
Sampel (ml)
Substrat CMC 1 %
1
1
1
Ekstrak kasar enzim
1
Inkubasi pada suhu 40 ºC selama 2 jam
Akuades
1
DNS
2
2
2
Ekstrak kasar enzim
1
Larutan dikocok dan dipanaskan pada suhu 100 ºC selama 15 menit
Larutan didinginkan lalu diukur absorbansi pada panjang gelombang 540 nm
Lampiran 4 Metode pengujian aktivitas aviselase (Okada et al. 1999)
Pereaksi
Blanko (ml)
Kontrol (ml)
Sampel (ml)
Substrat Avisel 2 %
1
1
2
Ekstrak kasar enzim
2
Inkubasi pada suhu 40 ºC selama 2 jam
Reaksi dihentikan dengan penambahan 20 μl NaOH 2M, kemudian disentrifugasi pada
kecepatan 1500 xg selama 15 menit, sebanyak 2 ml larutan ditambahkan DNS
Akuades
1
DNS
2
2
2
Ekstrak kasar enzim
1
Larutan dikocok dan dipanaskan pada suhu 100 ºC selama 15 menit
Larutan didinginkan lalu diukur absorbansi pada panjang gelombang 540 nm
Lampiran 5 Metode pengujian aktivitas FPase (Alam et al. 2004)
Pereaksi
Blanko
Kontrol
Sampel
Substrat kertas saring
1
1
1
Whatmann n0.1 (1x 6
cm)
Ekstrak kasar enzim
1
Inkubasi pada suhu 40 ºC selama 2 jam
Akuades
1 ml
DNS
2 ml
2 ml
2 ml
Ekstrak kasar enzim
1 ml
Larutan dikocok dan dipanaskan pada suhu 100 ºC selama 15 menit
Larutan didinginkan lalu diukur absorbansi pada panjang gelombang 540 nm
Lampiran 6 Kurva standar glukosa
y = 2.1276x - 0.0837
R2 = 0.9987

Ab sorb ansi

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

0.1

0.2

0.3

0.4

Kons entrasi Glukos a (m g/m l)

0.5

14

Lampiran 7 Isolat Aktinomiset yang diisolasi dari contoh tanah dengan menggunakan
media agar-agar CMC
Jumlah
Jumlah
Contoh
Contoh
No
Mikrob
Isolat
No
Mikrob
Isolat
Tanah
Tanah
(105)
(10 5)
1
A1D1
17
A1D1-1
27
D1D3
23
A1D1-2
A1D1-4
2

A1D2

18

-

28

D1D4

22

D1D4-2
D1D4-3

3

A1D3

19

A1D3-1
A1D3-2
A1D3-3

29

D1D5

31

-

4

A1D4

14

-

30

D2D1

12

-

5

A1D5

10

-

31

D2D2

15

D2D2-2

6

A2D1

12

-

32

D2D3

17

-

7

A2D2

15

-

33

D2D4

20

D2D4-2
D2D4-3
D2D4-4

8

A2D3

20

-

34

D3D1

20

D3D1-1

9

A2D4

22

-

35

D3D2

17

D3D2-1
D3D2-3
D3D2-4

10

A2D5

16

A2D5-2
A2D5-3

36

D3D3

17

D3D3-1

11

A3D1

17

A3D1-1

37

D3D4

10

-

12

A3D2

29

A3D2-1

38

D4D1

9

D4D1-2

13

A3D4

10

-

39

D4D2

9

D4D2-1
D4D2-4

14
15

A3D5
A4D1

35
36

A4D1-1
A4D1-2
A4D1-3
A4D1-4
A4D1-5

40
41

D4D5
D5D1

30
25

D5D1-4

16

A4D2

24

A4D2-1

42

D5D2

9

-

17

A4D3

32

A4D3-1
A4D3-2
A4D3-3
A4D3-5
A4D3-6
A4D3-7

43

D5D3

7

-

15

18

A4D4

Jumlah
Mikrob
(105)
29

19

A4D5

13

20

A5D1

5

21

A5D2

5

A5D2-1
A5D2-2

47

E1D4

10

22

A5D3

11

A5D3-1
A5D3-2
A5D3-5

48

E1D5

9

E1D5-2

23

A5D4

17

A5D4-1
A5D4-2
A5D4-3

49

E2D1

7

E2D1-1
E2D1-2

24

A5D5

10

A5D5-1
A5D5-2

50

E2D2

12

25

D1D1

21

-

26

D1D2

7

No

Contoh
Tanah

No

Contoh
Tanah

A4D4-1
A4D4-2
A4D4-3

44

E1D1

Jumlah
Mikrob
(10 5)
10

A4D5-1
A4D5-2
A4D5-3
A4D5-5
A5D1-1
A5D1-2
A5D1-3

45

E1D2

9

-

46

E1D3

15

-

-

Isolat

D1D2-1
D1D2-2

Isolat
E1D1-1

-

16

Lampiran 8 Pengelompokkan warna miselia Aktinomiset yang ditumbuhkan pada media YMA
selama 14 hari pada suhu ruang
No
Warna
Isolat
No
Warna
Isolat
No
Warna
Isolat
1
Merah muda A1D1-1 17
Hitam
A4D3-3 33
D2D4-2
2
A4D1-2 18
Abu-abu
A1D1-2 34
D3D1-1
3
A4D1-3 19
A1D1-4 35
Putih
A5D1-1
4
A4D1-4 20
A1D3-1 36
A5D1-3
5
A4D1-5 21
A2D5-2 37
A5D3-1
6
A4D2-1 22
A2D5-3 38
A5D3-5
7
A4D3-5 23
A3D1-1 39
D1D4-3
8
A4D3-6 24
A4D3-1 40
D2D4-4
9
A4D3-7 25
A4D4-2 41
D3D2-1
10
A5D4-1 26
A4D5-1 42
D3D2-4
11
A5D4-2 27
A4D5-2 43
D4D2-4
12
D1D2-1 28
A5D2-2 44
E2D1-2
13
D2D2-2 29
A5D3-2 45
Abu-abu tua A2D4-1
14
coklat
A4D4-3 30
A5D4-3 46
A4D1-1
15
D1D2-2 31
A5D5-1
16
D3D3-1 32
D1D4-2

17

Lampiran 9 Zona bening yang terbentuk di sekitar koloni

(a)

(b)

(c)

(f)

(g)

(d)

(e)

(h)

Keterangan: (a) Isolat A2D5-2; (b) Isolat A5D2-2; (c) Isolat A5D4-3; (d) Isolat D1D4-3; (e) Isolat
D2D2-2; (f) Isolat D3D3-1; (g) Isolat D4D2-4; (h) Isolat E2D1-2

18

Lampiran 10 Aktivitas selulase isolat A5D4-3 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan pepton
Aktivitas Selulase
Enzim
Sumber Karbon
(nkat/ml)
CMCase
CMC
0.011
Avisel
0.006
Aviselase
CMC
0.015
Avisel
0.004
FPase
CMC
0.022
Avisel
0.01
Lampiran 11 Aktivitas selulase isolat D2D2-2 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan ekstrak khamir
Aktivitas Selulase
Enzim
Sumber Karbon
(nkat/ml)
CMCase
CMC
0.373
Avisel
0.126
Aviselase
CMC
0.069
Avisel
0.011
FPase
CMC
0.219
Avisel
0.044
Lampiran 12 Aktivitas selulase isolat E2D1-2 yang ditumbuhkan pada media pertumbuhan dengan
penambahan pepton
Aktivitas Selulase
Enzim
Sumber Karbon
(nkat/ml)
CMCase
CMC
0
Avisel
0
Avicelase
CMC
0.012
Avisel
0.005
FPase
CMC
0
Avisel
0.0003