Uji Dugaan Uji Penegasan Uji Mikroskopik

3.7 Pemeriksaan Bakteri Escherichia coli

Pemeriksaan Bakteri Esherichia coli meliputi: uji dugaan, uji penegasan, isolasi, uji mikroskopik, identifikasi dan konfirmasi.

3.7.1 Uji Dugaan

Disiapkan lima buah tabung reaksi steril untuk tiap-tiap sampel, masukkan tabung durham secara terbalik ke dalam masing-masing tabung tersebut. Kemudian isi seluruhnya dengan 10 ml media Lactosa Broth. Dengan cara aseptik dipipet 10 ml suspensi hasil homogenisasi setiap sampel, dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi media Lactosa Broth. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 24 jam. Setelah 24 jam, diamati biakan yang mengandung gas.

3.7.2 Uji Penegasan

Disediakan tabung reaksi steril sejumlah biakan yang mengandung gas pada uji dugaan, masukkan tabung durham secara terbalik ke dalam masing-masing tabung tersebut. Kemudian isi tabung reaksi dengan 10 ml media Brilliant Green Lactosa Bile 2. Dengan cara aseptik pipet 10 ml biakan yang mengandung gas pada uji dugaan, masukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi media Brilliant Green Lactosa Bile 2. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 24 jam. Setelah 24 jam, diamati biakan yang mengandung gas. 3.7.3 Isolasi Biakan yang mengandung gas pada uji penegasan, diinokulasikan satu sengkelit pada permukaan media Mac Conkey Agar. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 24 jam dengan posisi lempeng dibalik. Diamati koloni spesifik yang terbentuk. Koloni berbentuk bulat dan berwarna merah bata diduga tercemar oleh bakteri Escherichia coli. Universitas Sumatera Utara

3.7.4 Uji Mikroskopik

Dilakukan pengecatan Gram terhadap sampel yang membentuk koloni bulat dan berwarna merah bata pada permukaan media Mac Conkey Agar. Dengan menggunakan ose diambil satu sengkelit koloni tersebut, dibuat lapisan tipis pada permukaan kaca objek yang bersih. Setelah kering, fiksasi dengan cara menyentuhkan permukaan sebelah bawah kaca objek tiga kali berturut-turut pada permukaan api bunsen. Diberi larutan warna gentian violet, diamkan 3-5 menit lalu dicuci dengan air. Kemudian diberi larutan lugol dan dibiarkan selama 3-5 menit lalu dicuci dengan air. Preparat didekolorisasi dengan alkohol 96 sampai semua zat warna tampak luntur lalu cuci dengan air. Diberi warna kontras safrani lalu dicuci dengan air. Preparat akan berwarna merah seperti warna safranin bakteri Gram negatif. Amati di bawah mikroskop. Bakteri Escherichia coli akan terlihat berbentuk batang.

3.7.5 Identifikasi dan Konfirmasi