Terminasi Hewan Coba Prosedur Penelitian 1. Ethical Clearance

42 8 Meletakkan pada balok kayu, meratakan pinggirnya, dan membuat ujungnya sedikit meruncing. 9 Memblok parafin, siap dipotong dengan mikrotom. g. Cutting 1 Melakukan pemotongan di ruangan dingin 2 Sebelum memotong, blok didinginkan dahulu di lemari es. 3 Melakukan pemotongan kasar, lalu dilanjutkan dengan pemotongan halus dengan ketebalan 4 5 mikron. Pemotongan dilakukan dengan menggunakan rotary microtome dengan disposable knife. 4 Memilih lembaran potongan yang paling baik, mengapungkan pada air, dan dihilangkan kerutannya dengan cara menekan salah satu sisi lembaran jaringan tersebut dengan ujung jarum dan sisi yan lain ditarik menggunakan kuas runcing. 5 Memindahkan lembaran jaringan ke dalam water bath dengan suhu 60 C selama beberapa detik sampai mengembang sempurna. 6 Dengan gerakan menyendok, mengambil lembaran jaringan tersebut dengan slide bersih dan menempatkan di tengah atau pada sepertiga bawah atau atas, jangan sampai ada gelembung udara di bawah jaringan. 7 Menempatkan slide yang berisi jaringan pada inkubator suhu 37 C selama 24 jam sampai jaringan melekat sempurna. Wibhisono et al., 2014 43 h. Staining atau pewarnaan dengan Harris Hematoksilin Eosin Setelah jaringan melekat sempurna pada slide, memiih slide yang terbaik, selanjutnya secara berurutan memasukkan slide ke dalam zat kimia dibawah ini dengan waktu sebagai berikut: 1 Melakukan deparafinisasi dalam: i. Larutan xylol I selama 5 menit ii. Larutan xylol II selama 5 menit iii. Ethanol absolut selama 1 jam 2 Melakukan hidrasi dalam: i. Alkohol 96 selama 2 menit ii. Alkohol 70 selama 2 menit iii. Air selama 10 menit. 3 Membuat pulasan dengan menggunakan: i. Harris Hematoksilin selama 15 menit ii. Membilas dengan air mengalir iii. Mewarnai dengan eosin selama maksimal 1 menit 4 Selanjutnya, didehidrasi menggunakan: i. Alkohol 70 selama 2 menit ii. Alkohol 96 selama 2 menit iii. Alkohol absolut selama 2 menit 5 Melakukan penjernihan dengan: i. Xylol I selama 2 menit ii. Xylol II selama 2 menit.