Pengembangan Metode Standardisasi Tablet Ekstrak Kurkumin dengan Metode Fingerprint KLT-Spektrofotodensitometri.
PENGEMBANGAN METODE STANDARDISASI
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT KLTSPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
PENGEMBANGAN METODE STANDARDISASI
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT KLTSPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana
Oleh
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
Menyetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
(L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt.)
(Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt.)
NIP. 197809012008122001
NIP. 198302132006042002
Mengesahkan:
Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
(Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.)
NIP. 196804201994021001
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas
berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Pengembangan Metode Standardisasi Tablet Ekstrak Kurkumin Dengan
Metode Fingerprint KLT-Spektrofotodensitometri” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt. selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan
di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
2.
Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
3.
Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4.
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
iii
5.
Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi.
6.
Drs. I Gusti Ngurah Anom dan I Gusti Ayu Ngurah Ratnawati, selaku
ayah dan ibu tercinta yang telah mengasuh dan membesarkan penulis,
membimbing, memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada penulis, adik
kandung penulis yaitu I Gusti Ngurah Bagus Citapranata yang selalu
memberikan motivasi dan dukungan dalam penyusunan skripsi.
7.
Teman-teman analisis, Analisis 2012 (Vanadium Spectra), Ibu Nova, dan
Ibu Dwi selaku staf Laboratorium Forensik Lembaga Sains dan
Kriminologi Universitas Udayana yang memberikan bantuan, semangat
dan doa dalam penyusunan skripsi.
8.
Seluruh anggota tim profiling, Wiwik, Risma, Purnama, Anggi, Nila,
Cokti yang selalu saling mendukung sebagai tim kerja yang solid.
Keluarga besar geng buaya dan glure, serta teman terdekat, khususnya
Shaine, Krisnawan, Yudi, Eka Fitri, Agastya, Sanjaya, Widiangga, Dipa
yang selalu memberikan dukungan, motivasi, doa dan semangat dalam
penyusunan skripsi ini.
9.
Seluruh teman-teman farmasi angkatan 2012 (Dioscuri Hygeia) atas
segala dukungan dan motivasi kepada penulis dalam penyusunan skripsi
ini.
10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam
penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
iv
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih kurang dari
sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak
yang bersifat membangun sehingga di waktu yang akan datang dapat menjadi
lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua
pihak yang memerlukan.
Bukit Jimbaran, Juni 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL................................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ...............................................................................................x
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
DAFTAR ISTILAH ............................................................................................. xiii
ABSTRAK .............................................................................................................xv
ABSTRACT ........................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN .......................................................................................1
1.1. Latar Belakang ...........................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah......................................................................................3
1.3. Tujuan Penelitian .......................................................................................4
1.4. Manfaat Penelitian .....................................................................................4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.............................................................................5
2.1. Marker Kurkuminoid .................................................................................5
2.2. Metode Ekstraksi .......................................................................................7
2.2.1 Metode Ekstraksi dengan Sonikasi ..................................................8
2.2.2 Pelarut Metanol ................................................................................8
2.3. Kromatografi Fingerprint ..........................................................................8
2.3.1 Kromatogram dan Spektrum pada KLT Fingerprint .......................9
vi
2.3.2 Parameter Kromatogram ................................................................10
2.4. Analisis Kurkumin dengan Metode KLT-Spektrofotodensitometri ........12
2.5. Validasi Metode Analisis.........................................................................13
2.6. Analisis Data............................................................................................18
2.6.1 Fungsi Cosinus ...............................................................................18
2.6.2 Cross Corelation Function.............................................................19
2.6.3 Uji Reprodusibilitas Spektrum Kurkumin .....................................20
BAB III. METODE PENELITIAN........................................................................21
3.1. Rancangan Penelitian ..............................................................................21
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ...................................................................21
3.3. Alat dan Bahan ........................................................................................22
3.3.1 Alat Penelitian ................................................................................22
3.3.2 Bahan Penelitian.............................................................................22
3.4. Prosedur Penelitian ..................................................................................22
3.4.1 Preparasi Sampel ............................................................................22
3.4.2 Preparasi Larutan Standar dan Pembuatan Kurva Kalibrasi ..........23
3.4.3 Pemilihan Sistem Kromatografi Lapis Tipis ..................................23
3.4.4 Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel ................................24
3.4.5 Validasi Metode KLT-Spektrofotodensitometri ............................24
3.4.6 Analisis kualitatif dan Kuantitatif Kurkumin pada Tablet dengan
Metode KLT-Spektrofotodensitometri...........................................27
3.4.7 Analisis Data ..................................................................................27
3.5. Skema Umum Penelitian .........................................................................30
vii
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..............................................................31
4.1. Deskripsi Sampel .....................................................................................31
4.1.1. Tempat Pengambilan Sampel ........................................................31
4.2. Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel .........................................31
4.3. Validasi Metode Analisis.........................................................................34
4.3.1. Kekhasan (Spesifisitas) ..................................................................35
4.3.2. Akurasi ...........................................................................................36
4.3.3. Linieritas ........................................................................................37
4.3.4. Presisi .............................................................................................38
4.3.5. LOD dan LOQ ...............................................................................39
4.4. Analisis Kromatografi Fingerprint Tablet Kurkumin ............................ 40
4.4.1. Tampilan Visual Plat......................................................................40
4.4.2. Data Kromatogram dan Spektrum UV-Vis....................................42
4.5. Variasi Fingerprint ................................................................................. 44
4.5.1. Variasi Fingerprint akibat Perbedaan Batch..................................44
4.5.2. Variasi Spektrum Insitu akibat Variasi Batch Sampel Tablet .......45
4.6. Penetapan Kadar Kurkumin dalam Sampel Tablet ..................................46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................21
5.1. Kesimpulan ..............................................................................................49
5.2. Saran ........................................................................................................49
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................50
LAMPIRAN ...........................................................................................................54
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 3.1 Pengelompokan AUC Puncak Berdasarkan Nilai Rf ............................ 28
Tabel 4.1 Hasil Uji Optimasi Volume Penotolan.................................................. 31
Tabel 4.2 Pengelompokan Nilai Rf dan AUC ....................................................... 33
Tabel 4.3 Hasil Uji Kemurnian Spektrum Kurkumin ........................................... 35
Tabel 4.4 Hasil Uji Perolehan Kembali Analit ..................................................... 36
Tabel 4.5 Hasil Uji Presisi Intraday dan Interday ................................................. 39
Tabel 4.6 Pengamatan Warna Tampilan Visual Plat ............................................ 41
Tabel 4.7 Kadar Kurkumin pada Sampel Tablet ................................................... 46
ix
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Struktur kimia kurkumin....................................................................... 6
Gambar 2.2. KLT fingerprint kurkumin ekstrak Curcuma longa L dengan fase
diam Si-60GF254 dan fase gerak CHCl3:C6H6:MeOH (80:15:5),
dideteksi dengan UV366 nm................................................................ 6
Gambar 2.3. Spektra standar kurkumin dengan sampel kurkumin pada
pemisahan menggunakan KLT dengan fase diam berupa plat
silika gel aluminium 60 F254 dan fase gerak toluen : kloroform :
metanol (5:4:1), dideteksi pada panjang gelombang 430 nm ............ 6
Gambar 2.4. Kromatogram kurkumin dalam ekstrak metanol ................................ 7
Gambar 2.5. Perhitungan Tailling Factor (Tf) ...................................................... 11
Gambar 3.1. Skema umum penelitian ................................................................... 30
Gambar 4.1. Kromatrogram ekstrak metanol tablet kurkumin dengan volume
penotolan 5 µL (A), 10 µL (B), 15 µL (C) dan standar (D) ............ 32
Gambar 4.2. Kurva linieritas kurkumin ................................................................ 38
Gambar 4.3. Tampilan visual plat (1 : standar, 2 : sampel, A : pengamatan
dibawah sinar matahari, B : pengamatan UV254, C : pengamatan
UV366) ............................................................................................ 40
Gambar 4.4. Kromatogram ekstrak metanol tablet kurkumin pada pemindaian
di bawah sinar UV 210 nm.(ABC : variasi batch sampel, 123 :
pengulangan penotolan) ................................................................... 42
x
Gambar 4.5. Spektrum tiap puncak pada kromatogram ekstrak metanol tablet
kurkumin .......................................................................................... 43
Gambar 4.6. Spektrum senyawa standar kurkumin (A), dan spektrum sampel
tablet kurkumin (B) .......................................................................... 43
Gambar 4.7. Korelasi spektrum sampel tablet kurkumin pada 3 batch yang
berbeda dengan 3 kali pengulangan ................................................. 46
xi
DAFTAR SINGKATAN
AUC
: Area Under Curve
C
: Cosinus
HPLC
: High Performance Liquid Chromatography
ICH
: International Conference on Harmonisation
IR
: Infrared
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
KV
: Koefisien Variasi
LOD
: Limit of Detection
LOQ
: Limit of Quantification
Rf
: Redentation of Factor
Rs
: Resolusi
RSD
: Relatif Standar Deviasi
SD
: Standar Deviasi
Tf
: Tailling Factor
TLC
: Thin Layer Chromatography
UNODC
: United Nation Ofice on Drug and Crime
UV
: Ultraviolet
WHO
:World Health Organization
xii
DAFTAR ISTILAH
Adsorpsi
: Suatu proses yang terjadi ketika suatu fluida, cairan
maupun gas, terikat kepada suatu padatan atau cairan
dan akhirnya membentuk suatu lapisan tipis atau film
pada permukaannya.
Kemometrik
: Disiplin ilmu kimia yang menggunakan matematika
dan metode statistic untuk memberikan informasi
kimia melalui analisis data kimia.
Kontrol kualitas
: Suatu kegiatan untuk memelihara dan meningkatkan
suatu produk salah satunya aspek keselamatan
melalui proses penelitian.
Kromatografi Fingerprint : Prosedur untuk menunjukkan informasi kimia berupa
kromatogram yang digunakan untuk evaluasi dan
kontrol
kualitas
sampel
dengan
kandungan
multikomponen
Kromatografi
: Suatu metode pemisahan senyawa-senyawa terlarut
oleh proses migrasi pada dua fase yang berbeda,
perbedaan mobilitas senyawa disebabkan oleh
adanya perbedaan afinitas pada dua fase.
Radiasi Elektromagnetik : Kombinasi medan magnet dan medan listrik yang
berosilasi dan merambat lewat ruang dan membawa
energi dari satu tempat ke tempat yang lain.
xiii
Simplisia
: Bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga
dan
kecuali dinyatakan lain simplisia merupakan bahan
yang dikeringkan.
Spektrum
: Perbandingan massa per muatan (m/z) terhadap
kelimpahan dari suatu senyawa.
Standardisasi
: Rangkaian proses yang melibatkan berbagai metode
analisis kimiawi berdasarkan data farmakologis,
melibatkan analisis fisik dan mikrobiologi untuk
menilai keamanan bahan atau produk obat dari alam.
xiv
ABSTRAK
Kurkumin merupakan salah satu komponen bioaktif utama pada spesies
curcuma termasuk kunyit (Curcuma longa L) yang telah dimanfaatkan sebagai
obat herbal. Tablet ekstrak kurkumin sebagai obat herbal memerlukan
standardisasi untuk menjamin identitas komponen kimianya. Penelitian ini
bertujuan untuk mendapatkan metode yang sensitif, cepat dan akurat yang dapat
digunakan untuk standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat
herbal.
Ekstraksi dilakukan dengan sonikasi menggunakan pelarut metanol.
Pemisahan menggunakan sistem KLT-Spektrofotodensitometri tervalidasi.
Sampel hasil ekstraksi ditotolkan pada plat silika gel 60 GF254, dielusi dengan
kloroform P dan metanol P (95:5) v/v. Plat diamati dengan sinar matahari, UV254
nm, UV366 nm dan dipindai dengan TLC Scanner 3 (CAMAG) pada panjang
gelombang 210 nm. Tiap bercak dibuat spektrumnya pada panjang gelombang
200-700 nm dan dilakukan penetapan kadar kurkumin menggunakan persamaan
regresi linier yang diperoleh dari larutan seri. Analisis data dilakukan dengan
menggunakan fungsi kosinus dan cross correlation function.
Seluruh parameter validasi telah memenuhi persyaratan validasi, yaitu nilai
spesifisitas > 0,95; presisi dengan nilai KV < 2%; linieritas dengan nilai r 0,9991;
LOD dan LOQ masing-masing 11,67 ng dan 30,19 ng; rata-rata persen perolehan
kembali dengan rentang 101,04-103,04%. Analisis fungsi kosinus menghasilkan
nilai kosinus dengan rentang 96,38-99,95 dan analisis cross correlation function
menghasilkan nilai dengan rentang 0,9963-1. Kadar kurkumin yang diperoleh
berada pada rentang 1,331-1,342 mg dengan kadar rata-rata sebesar 1,334 mg dan
nilai KV 0,385%. Metode KLT-Spektrofotodensitometri dapat digunakan untuk
standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat herbal.
Kata kunci : Kurkumin, KLT-Spektrofotodensitometri, fungsi kosinus, cross
correlation function
xv
ABSTRACT
Curcumin is one of the main bioactive component of the curcuma species
including turmeric (Curcuma longa L) which has been used as an herbal
medicine. Curcumin extract tablet as an herbal medicine requires standardization
to guarantee the identity of its chemical components. This study aims to find a
method that is sensitive, rapid and accurate which can be used to curcumin extract
tablet standardization in the quality assessment of herbal medicine.
Extraction was done by sonication using methanol. Separation was used TLCSpectrophotodensitometry. Sample was spotted on silica gel 60 GF254 plate,
eluted with chloroform P: methanol P (95: 5) v/v. Plate was observed with
sunlight, UV254nm and UV366nm then scanned with TLC scanner 3 (CAMAG) at
wavelength of 210 nm. Spectrums were made for every spots at wavelength from
200 to 700 nm and the assay curcumin using the linear regression equation
derived from the series solution. Data analysis was performed use the cosine
function and cross-correlation function.
All parameter validation had appropriate the requirements of the validity
which is a specificity > 0,95; precision with KV value < 2%; linearity with r value
= 0,9991; LOD and LOQ respectively 11,67 ng and 30,19 ng; average recovery in
the range of 101,04 to 103,04%. The cosine function value with a range from
96,38 to 99,95 and the cross-correlation function value with a range from 0,9963
to 1. Curcumin were obtained in the range from 1,331 to 1,342 mg with an
average of 1,334 mg and value of KV 0,385%. TLC-Spectrophotodensitometry
method can be used to standardization of curcumin extract tablets in the quality
assessment of herbal medicine.
Key word :
Curcumin, TLC-Spectrophotodensitometry, cosine function, cross
correlation function
xvi
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT KLTSPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
PENGEMBANGAN METODE STANDARDISASI
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT KLTSPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana
Oleh
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
Menyetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
(L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt.)
(Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt.)
NIP. 197809012008122001
NIP. 198302132006042002
Mengesahkan:
Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
(Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.)
NIP. 196804201994021001
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas
berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Pengembangan Metode Standardisasi Tablet Ekstrak Kurkumin Dengan
Metode Fingerprint KLT-Spektrofotodensitometri” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan
dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt. selaku dosen pembimbing I
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan
di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
2.
Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
3.
Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4.
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
iii
5.
Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skripsi.
6.
Drs. I Gusti Ngurah Anom dan I Gusti Ayu Ngurah Ratnawati, selaku
ayah dan ibu tercinta yang telah mengasuh dan membesarkan penulis,
membimbing, memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada penulis, adik
kandung penulis yaitu I Gusti Ngurah Bagus Citapranata yang selalu
memberikan motivasi dan dukungan dalam penyusunan skripsi.
7.
Teman-teman analisis, Analisis 2012 (Vanadium Spectra), Ibu Nova, dan
Ibu Dwi selaku staf Laboratorium Forensik Lembaga Sains dan
Kriminologi Universitas Udayana yang memberikan bantuan, semangat
dan doa dalam penyusunan skripsi.
8.
Seluruh anggota tim profiling, Wiwik, Risma, Purnama, Anggi, Nila,
Cokti yang selalu saling mendukung sebagai tim kerja yang solid.
Keluarga besar geng buaya dan glure, serta teman terdekat, khususnya
Shaine, Krisnawan, Yudi, Eka Fitri, Agastya, Sanjaya, Widiangga, Dipa
yang selalu memberikan dukungan, motivasi, doa dan semangat dalam
penyusunan skripsi ini.
9.
Seluruh teman-teman farmasi angkatan 2012 (Dioscuri Hygeia) atas
segala dukungan dan motivasi kepada penulis dalam penyusunan skripsi
ini.
10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam
penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
iv
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih kurang dari
sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak
yang bersifat membangun sehingga di waktu yang akan datang dapat menjadi
lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua
pihak yang memerlukan.
Bukit Jimbaran, Juni 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL................................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ...............................................................................................x
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
DAFTAR ISTILAH ............................................................................................. xiii
ABSTRAK .............................................................................................................xv
ABSTRACT ........................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN .......................................................................................1
1.1. Latar Belakang ...........................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah......................................................................................3
1.3. Tujuan Penelitian .......................................................................................4
1.4. Manfaat Penelitian .....................................................................................4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.............................................................................5
2.1. Marker Kurkuminoid .................................................................................5
2.2. Metode Ekstraksi .......................................................................................7
2.2.1 Metode Ekstraksi dengan Sonikasi ..................................................8
2.2.2 Pelarut Metanol ................................................................................8
2.3. Kromatografi Fingerprint ..........................................................................8
2.3.1 Kromatogram dan Spektrum pada KLT Fingerprint .......................9
vi
2.3.2 Parameter Kromatogram ................................................................10
2.4. Analisis Kurkumin dengan Metode KLT-Spektrofotodensitometri ........12
2.5. Validasi Metode Analisis.........................................................................13
2.6. Analisis Data............................................................................................18
2.6.1 Fungsi Cosinus ...............................................................................18
2.6.2 Cross Corelation Function.............................................................19
2.6.3 Uji Reprodusibilitas Spektrum Kurkumin .....................................20
BAB III. METODE PENELITIAN........................................................................21
3.1. Rancangan Penelitian ..............................................................................21
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ...................................................................21
3.3. Alat dan Bahan ........................................................................................22
3.3.1 Alat Penelitian ................................................................................22
3.3.2 Bahan Penelitian.............................................................................22
3.4. Prosedur Penelitian ..................................................................................22
3.4.1 Preparasi Sampel ............................................................................22
3.4.2 Preparasi Larutan Standar dan Pembuatan Kurva Kalibrasi ..........23
3.4.3 Pemilihan Sistem Kromatografi Lapis Tipis ..................................23
3.4.4 Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel ................................24
3.4.5 Validasi Metode KLT-Spektrofotodensitometri ............................24
3.4.6 Analisis kualitatif dan Kuantitatif Kurkumin pada Tablet dengan
Metode KLT-Spektrofotodensitometri...........................................27
3.4.7 Analisis Data ..................................................................................27
3.5. Skema Umum Penelitian .........................................................................30
vii
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..............................................................31
4.1. Deskripsi Sampel .....................................................................................31
4.1.1. Tempat Pengambilan Sampel ........................................................31
4.2. Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel .........................................31
4.3. Validasi Metode Analisis.........................................................................34
4.3.1. Kekhasan (Spesifisitas) ..................................................................35
4.3.2. Akurasi ...........................................................................................36
4.3.3. Linieritas ........................................................................................37
4.3.4. Presisi .............................................................................................38
4.3.5. LOD dan LOQ ...............................................................................39
4.4. Analisis Kromatografi Fingerprint Tablet Kurkumin ............................ 40
4.4.1. Tampilan Visual Plat......................................................................40
4.4.2. Data Kromatogram dan Spektrum UV-Vis....................................42
4.5. Variasi Fingerprint ................................................................................. 44
4.5.1. Variasi Fingerprint akibat Perbedaan Batch..................................44
4.5.2. Variasi Spektrum Insitu akibat Variasi Batch Sampel Tablet .......45
4.6. Penetapan Kadar Kurkumin dalam Sampel Tablet ..................................46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................21
5.1. Kesimpulan ..............................................................................................49
5.2. Saran ........................................................................................................49
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................50
LAMPIRAN ...........................................................................................................54
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 3.1 Pengelompokan AUC Puncak Berdasarkan Nilai Rf ............................ 28
Tabel 4.1 Hasil Uji Optimasi Volume Penotolan.................................................. 31
Tabel 4.2 Pengelompokan Nilai Rf dan AUC ....................................................... 33
Tabel 4.3 Hasil Uji Kemurnian Spektrum Kurkumin ........................................... 35
Tabel 4.4 Hasil Uji Perolehan Kembali Analit ..................................................... 36
Tabel 4.5 Hasil Uji Presisi Intraday dan Interday ................................................. 39
Tabel 4.6 Pengamatan Warna Tampilan Visual Plat ............................................ 41
Tabel 4.7 Kadar Kurkumin pada Sampel Tablet ................................................... 46
ix
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Struktur kimia kurkumin....................................................................... 6
Gambar 2.2. KLT fingerprint kurkumin ekstrak Curcuma longa L dengan fase
diam Si-60GF254 dan fase gerak CHCl3:C6H6:MeOH (80:15:5),
dideteksi dengan UV366 nm................................................................ 6
Gambar 2.3. Spektra standar kurkumin dengan sampel kurkumin pada
pemisahan menggunakan KLT dengan fase diam berupa plat
silika gel aluminium 60 F254 dan fase gerak toluen : kloroform :
metanol (5:4:1), dideteksi pada panjang gelombang 430 nm ............ 6
Gambar 2.4. Kromatogram kurkumin dalam ekstrak metanol ................................ 7
Gambar 2.5. Perhitungan Tailling Factor (Tf) ...................................................... 11
Gambar 3.1. Skema umum penelitian ................................................................... 30
Gambar 4.1. Kromatrogram ekstrak metanol tablet kurkumin dengan volume
penotolan 5 µL (A), 10 µL (B), 15 µL (C) dan standar (D) ............ 32
Gambar 4.2. Kurva linieritas kurkumin ................................................................ 38
Gambar 4.3. Tampilan visual plat (1 : standar, 2 : sampel, A : pengamatan
dibawah sinar matahari, B : pengamatan UV254, C : pengamatan
UV366) ............................................................................................ 40
Gambar 4.4. Kromatogram ekstrak metanol tablet kurkumin pada pemindaian
di bawah sinar UV 210 nm.(ABC : variasi batch sampel, 123 :
pengulangan penotolan) ................................................................... 42
x
Gambar 4.5. Spektrum tiap puncak pada kromatogram ekstrak metanol tablet
kurkumin .......................................................................................... 43
Gambar 4.6. Spektrum senyawa standar kurkumin (A), dan spektrum sampel
tablet kurkumin (B) .......................................................................... 43
Gambar 4.7. Korelasi spektrum sampel tablet kurkumin pada 3 batch yang
berbeda dengan 3 kali pengulangan ................................................. 46
xi
DAFTAR SINGKATAN
AUC
: Area Under Curve
C
: Cosinus
HPLC
: High Performance Liquid Chromatography
ICH
: International Conference on Harmonisation
IR
: Infrared
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
KV
: Koefisien Variasi
LOD
: Limit of Detection
LOQ
: Limit of Quantification
Rf
: Redentation of Factor
Rs
: Resolusi
RSD
: Relatif Standar Deviasi
SD
: Standar Deviasi
Tf
: Tailling Factor
TLC
: Thin Layer Chromatography
UNODC
: United Nation Ofice on Drug and Crime
UV
: Ultraviolet
WHO
:World Health Organization
xii
DAFTAR ISTILAH
Adsorpsi
: Suatu proses yang terjadi ketika suatu fluida, cairan
maupun gas, terikat kepada suatu padatan atau cairan
dan akhirnya membentuk suatu lapisan tipis atau film
pada permukaannya.
Kemometrik
: Disiplin ilmu kimia yang menggunakan matematika
dan metode statistic untuk memberikan informasi
kimia melalui analisis data kimia.
Kontrol kualitas
: Suatu kegiatan untuk memelihara dan meningkatkan
suatu produk salah satunya aspek keselamatan
melalui proses penelitian.
Kromatografi Fingerprint : Prosedur untuk menunjukkan informasi kimia berupa
kromatogram yang digunakan untuk evaluasi dan
kontrol
kualitas
sampel
dengan
kandungan
multikomponen
Kromatografi
: Suatu metode pemisahan senyawa-senyawa terlarut
oleh proses migrasi pada dua fase yang berbeda,
perbedaan mobilitas senyawa disebabkan oleh
adanya perbedaan afinitas pada dua fase.
Radiasi Elektromagnetik : Kombinasi medan magnet dan medan listrik yang
berosilasi dan merambat lewat ruang dan membawa
energi dari satu tempat ke tempat yang lain.
xiii
Simplisia
: Bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga
dan
kecuali dinyatakan lain simplisia merupakan bahan
yang dikeringkan.
Spektrum
: Perbandingan massa per muatan (m/z) terhadap
kelimpahan dari suatu senyawa.
Standardisasi
: Rangkaian proses yang melibatkan berbagai metode
analisis kimiawi berdasarkan data farmakologis,
melibatkan analisis fisik dan mikrobiologi untuk
menilai keamanan bahan atau produk obat dari alam.
xiv
ABSTRAK
Kurkumin merupakan salah satu komponen bioaktif utama pada spesies
curcuma termasuk kunyit (Curcuma longa L) yang telah dimanfaatkan sebagai
obat herbal. Tablet ekstrak kurkumin sebagai obat herbal memerlukan
standardisasi untuk menjamin identitas komponen kimianya. Penelitian ini
bertujuan untuk mendapatkan metode yang sensitif, cepat dan akurat yang dapat
digunakan untuk standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat
herbal.
Ekstraksi dilakukan dengan sonikasi menggunakan pelarut metanol.
Pemisahan menggunakan sistem KLT-Spektrofotodensitometri tervalidasi.
Sampel hasil ekstraksi ditotolkan pada plat silika gel 60 GF254, dielusi dengan
kloroform P dan metanol P (95:5) v/v. Plat diamati dengan sinar matahari, UV254
nm, UV366 nm dan dipindai dengan TLC Scanner 3 (CAMAG) pada panjang
gelombang 210 nm. Tiap bercak dibuat spektrumnya pada panjang gelombang
200-700 nm dan dilakukan penetapan kadar kurkumin menggunakan persamaan
regresi linier yang diperoleh dari larutan seri. Analisis data dilakukan dengan
menggunakan fungsi kosinus dan cross correlation function.
Seluruh parameter validasi telah memenuhi persyaratan validasi, yaitu nilai
spesifisitas > 0,95; presisi dengan nilai KV < 2%; linieritas dengan nilai r 0,9991;
LOD dan LOQ masing-masing 11,67 ng dan 30,19 ng; rata-rata persen perolehan
kembali dengan rentang 101,04-103,04%. Analisis fungsi kosinus menghasilkan
nilai kosinus dengan rentang 96,38-99,95 dan analisis cross correlation function
menghasilkan nilai dengan rentang 0,9963-1. Kadar kurkumin yang diperoleh
berada pada rentang 1,331-1,342 mg dengan kadar rata-rata sebesar 1,334 mg dan
nilai KV 0,385%. Metode KLT-Spektrofotodensitometri dapat digunakan untuk
standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat herbal.
Kata kunci : Kurkumin, KLT-Spektrofotodensitometri, fungsi kosinus, cross
correlation function
xv
ABSTRACT
Curcumin is one of the main bioactive component of the curcuma species
including turmeric (Curcuma longa L) which has been used as an herbal
medicine. Curcumin extract tablet as an herbal medicine requires standardization
to guarantee the identity of its chemical components. This study aims to find a
method that is sensitive, rapid and accurate which can be used to curcumin extract
tablet standardization in the quality assessment of herbal medicine.
Extraction was done by sonication using methanol. Separation was used TLCSpectrophotodensitometry. Sample was spotted on silica gel 60 GF254 plate,
eluted with chloroform P: methanol P (95: 5) v/v. Plate was observed with
sunlight, UV254nm and UV366nm then scanned with TLC scanner 3 (CAMAG) at
wavelength of 210 nm. Spectrums were made for every spots at wavelength from
200 to 700 nm and the assay curcumin using the linear regression equation
derived from the series solution. Data analysis was performed use the cosine
function and cross-correlation function.
All parameter validation had appropriate the requirements of the validity
which is a specificity > 0,95; precision with KV value < 2%; linearity with r value
= 0,9991; LOD and LOQ respectively 11,67 ng and 30,19 ng; average recovery in
the range of 101,04 to 103,04%. The cosine function value with a range from
96,38 to 99,95 and the cross-correlation function value with a range from 0,9963
to 1. Curcumin were obtained in the range from 1,331 to 1,342 mg with an
average of 1,334 mg and value of KV 0,385%. TLC-Spectrophotodensitometry
method can be used to standardization of curcumin extract tablets in the quality
assessment of herbal medicine.
Key word :
Curcumin, TLC-Spectrophotodensitometry, cosine function, cross
correlation function
xvi