Karakterisasi Simplisia dan Skrining Fitokimia Serta Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Ketepeng (Senna alata (L.) Roxb.) Dengan Metode DPPH
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
54
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Tumbuhan dan daun ketepeng (Senna alata (L.) Roxb.)
Tumbuhan ketepeng
Daun ketepeng
55
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun ketepeng (Senna alata
(L.) Roxb.)
Simplisia daun ketepeng
Serbuk simplisia daun ketepeng
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Daun ketepeng
Dicuci di air mengalir
Ditiriskan
Ditimbang berat basahnya
Dikeringkan
Ditimbang berat keringnya
Simplisia
Dihaluskan dengan blender
Disimpan
Serbuk simplisia
Karakterisasi
• Makroskopik
• Mikroskopik
• Penetapan kadar air
• Penetapan kadar sari
yang larut air
• Penetapan kadar sari
yang larut etanol
• Penetapan kadar abu
total
• Penetapan kadar abu
yang tidak larut
asam
Skrining fitokimia
Pembuatan ekstrak
Dimase
rasidengan
etanol 80%
•
•
•
•
•
Alkaloid
Glikosida
Antrakinon
Flavonoid
Triterpenoid/
Steroid
• Saponin
• Tanin
Ekstrak
Difraksinasi
Fraksi
n-heksana
Fraksi
etilasetat
Uji aktivitas
antioksidan
57
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun ketepeng
500 g serbuk simplisia
Dimasukkan ke dalam bejana
Dimasukkan
etanol
80%
sampai
simplisia terendam sempurna
Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya, sambil sesekali diaduk
Disaring
Ampas
Maserat
Dimaserasi kembali
dengan etanol 80%
Dienap tuang
Maserat
Ampas
Diuapkan dengan penguap rotary evaporator
Ekstrak kental
(72,5 g)
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Bagan pembuatan fraksi n-heksana dan fraksi etilasetat daun
ketepeng
Ekstrak etanol daun ketepeng (30 g)
Ditambahkan etanol dan akuades
Dihomogenkan
Dimasukkan dalam corong pisah
Diekstraksi dengan n-heksana
sampai tidak memberikan hasil
positif dengan pereaksi LiebermannBurchard
Dikocok dan didiamkan sampai
terbentuk dua lapisan dan
dipisahkan
Fraksi air
Fraksi n-heksana
Diekstraksi dengan etilasetat
Dikumpulkan
Dipekatkan dengan
rotary evaporator
Dikocok dan didiamkan
sampai terbentuk dua
lapisan dan dipisahkan
Fraksi air
Fraksi n-heksana
pekat (3,51 g)
Fraksi etilasetat
Dikumpulkan
Dikumpulkan
Dipekatkan dengan
waterbath
Dipekatkan dengan
rotary evaporator
Fraksi air
pekat (23,3 g)
Fraksi etilasetat
pekat (2,41 g)
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Perhitungan karakterisasi simplisia daun ketepeng
1. Penetapan kadar air
=
Kadar air
a.
volume II-volume I
berat sampel
Berat sampel
= 5,046 g
Volume I
= 3,5 ml
Volume II
= 3,8 ml
3,8-3,5
x 100 % = 5,9453%
Kadar air
=
b. Berat sampel
= 5,064 g
5,046
Volume I
= 3,8 ml
Volume II
= 4,2 ml
4,2-3,8
Kadar air
=
c.
Berat sampel
= 5,045 g
Volume I
= 0,7 ml
Volume II
= 1,0 ml
Kadar air
=
Kadar air rata-rata =
5,064
1,0-0,7
5,045
x 100%
x 100% = 7,9776%
x 100% = 5,9464%
(5,9453+7,9776+5,9464)%
3
= 6,6231%
2. Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Kadar sari=
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel
20
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
a. Berat sampel = 5,0336 g
Berat sari
= 0,1565 g
Kadar sari
=
0,1565
5,0336
x
100
20
x 100% = 15,0536%
b. Berat sampel = 5,0021 g
Berat sari
= 0,1506 g
Kadar sari
=
0,1506
5,0021
x
100
20
x 100% = 15,0536%
c. Berat sampel = 5,0617 g
Berat sari
= 0,1582 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,1582
5,0617
x
100
20
x 100% = 15,6271%
15,0536+15,0536+15,6271%
3
= 15,4087%
3. Penetapan kadar sari larut dalam air
Kadar sari=
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel
20
a. Berat sampel = 5,0026 g
Berat sari
= 0,2011 g
Kadar sari
=
0,2011
5,0026
x
100
20
x 100% = 20,0995%
b. Berat sampel = 5,0320 g
Berat sari
= 0,2156 g
Kadar sari
=
0,2156
5,0320
x
100
20
x 100% = 21,4228%
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
c. Berat sampel = 5,0013 g
Berat sari
= 0,1988 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,1988
5,0013
x
100
20
x 100% = 19,8748%
(20,0995+21,4228+19,8748)%
3
= 20,4657%
4. Penetapan kadar abu total
Kadar abu total =
Berat abu
×100%
Berat sampel
a. Berat sampel = 2,0160 g
Berat abu
= 0,0898 g
Kadar abu
=
0,0898
x 100 % = 4,4543 %
2,0160
b. Berat sampel = 2,0850 g
Berat abu
= 0,0786 g
Kadar abu
=
0,0786
2,0850
x 100% = 3,7697%
c. Berat sampel = 2,0900 g
Berat abu
= 0,0880 g
Kadar abu
=
0,0880
2,0900
Kadar abu total rata-rata =
x 100% = 4,2105%
(4,4543+3,7697+4,2105)%
3
= 4,1448%
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
5. Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Kadar abu yang tidak larut dalam asam
a.
b.
c.
=
Berat abu
Berat sampel
x 100%
Berat sampel = 2,0160 g
Berat abu
= 0,0060 g
Kadar abu
=
0,0060
2,0160
x 100% = 0,2976 %
Berat sampel = 2,0850 g
Berat abu
= 0,0080 g
Kadar abu
=
0,0080
2,0850
x 100% = 0,3836%
Berat sampel = 2,0900 g
Berat abu
= 0,0090 g
Kadar abu
=
0,0090
2,0900
x 100% = 0,4306 %
Kadar abu yang tidak larut asam rata-rata =
0,2976%+0,3836%+0,4306%
3
= 0,3706%
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Kromatogram dan data Rf hasil KLT ekstrak etanol daun ketepeng
(EEDK)
Fase gerak n-heksana:etilasetat
(50:50)
(60:40)
(70:30)
u
k
u.m
h
u
(80:20)
(90:10)
u
k
m.m
u
m.m
k
u
h
h.m
h
k
j
u
j
h
u.m
k
k
h
h
j
h
k
j
k
h.m
j
BP
j
u
m.m
u
u.m
k
h
TP
Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak n-heksana:etilasetat
Keterangan:
Fase diam = plat silika gel 60 F254, fase gerak = n-heksana : etilasetat, penampak
bercak = Liebermann-Burchard, h=hijau, h.m=hijau muda, j=jingga, k=kuning,
m.m=merah muda, u=ungu, u.m=ungu muda, BP=batas pengembang, TP= titik
penotolan.
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. (lanjutan)
1.
Fase gerak
(n-heksana:etilasetat)
50:50
2.
60:40
3.
70:30
4.
80:20
5.
90:10
No.
Harga Rf
0,10
0,25
0,31
0,41
0,46
0,12
0,31
0,35
0,87
0,91
0,11
0,27
0,50
0,54
0,56
0,81
0,85
0,91
0,11
0,15
0,30
0,34
0,54
0,58
0,75
0,81
0,91
0,94
0,10
0,30
0,31
0,50
0,54
0,57
0,66
0,76
0,80
0,84
0,89
Penampak bercak
Liebermann-Burchard
jingga
hijau
kuning
ungu
merah muda
ungu muda
ungu
jingga
kuning
ungu
kuning
jingga
hijau muda
hijau
kuning
ungu
hijau
ungu muda
hijau
kuning
hijau
jingga
hijau
hijau muda
ungu
merah muda
kuning
ungu
hijau
kuning
ungu muda
kuning
jingga
kuning
hijau
ungu
merah muda
ungu
jingga
Data Rf hasil KLT EEDK dengan fase gerak n-heksana:etilasetat
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Kromatogram hasil KKt ekstrak etanol daun ketepeng dengan
berbagai fase gerak
Fase gerak
Asam asetat 5%
HCl 1%
BAW (4:1:5)
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, A = asam asetat 5%, B = HCl 1%, C =
BAW (4:1:5) dilihat di bawah sinar UV 366 nm
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
AlCl3
NH3
FeCl3
b.k
k
k.m
b.k
k
k.m
k
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = asam asetat 5%, A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning, k.m= kuning muda
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
AlCl3
NH3
b.k
k
k
A
FeCl3
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = HCl 1%, A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
NH3
AlCl3
k
FeCl3
k
b.k
b.k
k
k
b.k
k
b.k
k
b.k
b.k
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = BAW (4:1:5), A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Penentuan waktu kerja
1. Hasil penentuan waktu kerja ekstrak etanol daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.7001
0.6941
0.6901
0.6898
0.6875
0.6754
0.6690
0.6670
0.6588
0.6523
0.6487
0.6455
0.6398
0.6379
0.6356
0.6322
0.6289
0.6260
0.6240
0.6198
0.6180
0.6158
0.6155
0.6150
0.6141
0.6111
0.6019
0.6015
0.6012
0.6009
0.6008
0.5991
0.5990
0.5983
0.5946
0.5945
0.5935
0.5933
0.5931
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.5931
0.5929
0.5928
0.5917
0.5917
0.5914
0.5913
0.5909
0.5909
0.5905
0.5903
0.5894
0.5894
0.5894
0.5891
0.5890
0.5890
0.5892
0.5895
0.5895
0.5898
0.5881
0.5882
0.5882
0.5880
0.5879
0.5875
0.5874
0.5873
0.5872
0.5872
0.5870
0.5868
0.5869
0.5861
0.5861
0.5853
0.5833
0.5825
Menit ke79
80
Absorbansi
0.5823
0.5811
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
2. Hasil penentuan waktu kerja fraksi n-heksana daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.8930
0.8931
0.8951
0.8951
0.8948
0.8951
0.8949
0.8950
0.8950
0.8954
0.8961
0.8967
0.8973
0.8985
0.8995
0.8991
0.8997
0.8997
0.8800
0.8801
0.8800
0.8802
0.8803
0.8804
0.8813
0.8825
0.8836
0.8842
0.8846
0.8853
0.8859
0.8862
0.8865
0.8867
0.8870
0.8873
0.8876
0.8881
0.8880
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.8880
0.8880
0.8883
0.8887
0.8889
0.8891
0.8892
0.8897
0.8898
0.8700
0.8705
0.8707
0.8709
0.8711
0.8714
0.8736
0.8738
0.8738
0.8732
0.8732
0.8735
0.8737
0.8738
0.8730
0.8732
0.8735
0.8736
0.8739
0.8739
0.8732
0.8734
0.8739
0.8738
0.8730
0.8731
0.8734
0.8734
0.8734
0.8738
Menit ke79
80
Absorbansi
0.8737
0.8737
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
3. Hasil penentuan waktu kerja fraksi etilasetat daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
Absorbansi
0.4812
0.4538
0.4339
0.4188
0.4061
0.3950
0.3854
0.3767
0.3685
0.3614
0.3545
0.3481
0.3420
0.3363
0.3310
0.3259
0.3209
0.3165
0.3118
0.3075
0.3034
0.2993
0.2956
0.2919
0.2883
0.2849
0.2817
0.2784
0.2754
0.2723
0.2695
0.2665
0.2638
0.2611
0.2586
0.2559
0.2534
Menit ke38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
Absorbansi
0.2509
0.2486
0.2462
0.2440
0.2418
0.2400
0.2382
0.2363
0.2344
0.2326
0.2306
0.2288
0.2269
0.2252
0.2233
0.2215
0.2199
0.2184
0.2116
0.2119
0.2114
0.2116
0.2110
0.2115
0.2110
0.2116
0.2113
0.2127
0.2112
0.2111
0.2105
0.2113
0.2127
0.2114
0.2122
0.2119
0.2128
Menit ke75
76
77
78
79
80
Absorbansi
0.2133
0.2141
0.2129
0.2129
0.2124
0.2124
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
4. Hasil penentuan waktu reaksi fraksi air daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.8111
0.8012
0.7929
0.7864
0.7809
0.7754
0.7710
0.7668
0.7626
0.7592
0.7560
0.7539
0.7548
0.7521
0.7512
0.7504
0.7494
0.7492
0.7481
0.7478
0.7466
0.7460
0.7455
0.7460
0.7460
0.7457
0.7451
0.7452
0.7450
0.7452
0.7449
0.7451
0.7451
0.7250
0.7253
0.7246
0.7155
0.7151
0.7063
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.7057
0.6961
0.6965
0.6969
0.6877
0.6870
0.6841
0.6888
0.6788
0.6798
0.6700
0.6506
0.6518
0.6524
0.6529
0.6532
0.6536
0.6538
0.6536
0.6537
0.6531
0.6533
0.6532
0.6538
0.6556
0.6546
0.6535
0.6526
0.6514
0.6505
0.6514
0.6515
0.6523
0.6528
0.6467
0.6466
0.6473
0.6471
0.6465
Menit ke79
80
Absorbansi
0.6456
0.6445
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Hasil uji antioksidan
1. Ekstrak etanol daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12995
0,64645
0,51094
0,41066
0,29915
42,79
54,78
63,65
73,52
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,64645
1,12995
× 100% = 42,79%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,51094
1,12995
× 100% = 54,78%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,41066
1,12995
× 100% = 63,65%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,29915
1,12995
× 100% = 73,52%
74
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12887
0,64674
0,51088
0,41064
0,29639
42,71
54,74
63,64
73,74
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,64674
1,12887
× 100% = 42,71%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,51088
1,12887
× 100% = 54,74%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,41064
1,12887
× 100% = 63,64%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,29639
1,12887
× 100% = 73,74%
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12907
0,63835
0,51337
0,40311
0,29706
43,46
54,53
64,29
73,69
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,63835
1,12907
× 100% = 42,98%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,51337
1,12907
× 100% = 54,68%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,40311
1,12907
× 100% = 64,29%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,29706
1,12907
× 100% = 73,65%
76
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data nilai rata-rata % peredaman ekstrak etanol
Konsentrasi
larutan uji (µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
II
III
42,71
43,46
54,74
54,53
63,64
64,29
73,74
73,69
I
42,79
54,78
63,65
73,52
Rata-rata
42,98
54,68
63,86
73,65
2. Fraksi n-heksana daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13287
0,92514
0,86003
0,79924
0,67717
18,33
24,08
29,45
40,22
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,92514
1,13287
× 100% = 18,33%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman =
1,13287-0,86003
1,13287
× 100% = 24,08%
77
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,79924
1,13287
× 100% = 29,45%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,67717
1,13287
× 100% = 40,22%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13487
0,92406
0,86166
0,79854
0,67680
18,57
24,07
29,63
40,36
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,92406
1,13487
× 100% = 18,57%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,86166
1,13487
× 100% = 24,07%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,79854
1,13487
× 100% = 29,63%
78
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,67680
1,13487
× 100% = 40,36%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13669
0,92526
0,86562
0,79521
0,67790
18,6
23,84
30,04
40,36
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,92526
1,13669
× 100% = 18,60%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,86562
1,13669
× 100% = 23,84%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,79521
1,13669
× 100% = 30,04%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,67790
1,13669
× 100% = 40,36%
79
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi n-heksana
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
18,33
24,08
29,45
40,22
18,57
24,07
29,63
40,36
18,6
23,84
30,04
40,36
18,5
24
29,7
40,31
3. Fraksi etilasetat daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
Absorbansi
1,13545
0,25447
0,10541
0,09438
0,07930
% peredaman
77,59
90,99
91,68
93,01
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,25447
1,13545
× 100% = 77,59%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,10541
1,13545
× 100% = 90,99%
80
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,09438
1,13545
× 100% = 91,68%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,07930
1,13545
× 100% = 93,01%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13203
0,25627
0,10551
0,09514
0,07974
77,36
90,68
91,59
92,95
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,25627
1,13203
× 100% = 77,36%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,10551
1,13203
× 100% = 90,68%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,09514
1,13203
× 100% = 91,59%
81
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,07974
1,13487
× 100% = 92,95%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
1,13792
0,25432
0,10072
77,65
91,15
80
100
0,09047
0,0807
92,05
92,91
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,25432
1,13792
× 100% = 77,65%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,10072
1,13792
× 100% = 91,15%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,09047
1,13792
× 100% = 92,05%
82
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman =
1,13792-0,08070
1,13792
× 100% = 92,91%
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi etilasetat
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
77,59
90,99
91,68
93,01
77,36
90,68
91,59
92,95
77,65
91,15
92,05
92,91
77,53
90,94
91,77
92,96
4. Fraksi air daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13939
0,73331
0,58847
0,44942
0,35907
35,64
48,35
60,55
68,48
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,73331
1,13939
× 100% = 35,64%
83
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,58847
1,13939
× 100% = 48,35%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,44942
1,13939
× 100% = 60,55%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,35907
1,13939
× 100% = 68,48%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13618
0,73335
0,58855
0,44981
0,35658
35,44
48,20
60,41
68,61
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,73335
1,13618
× 100% = 35,44%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,58855
1,13618
× 100% = 48,20%
84
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,44981
1,13618
× 100% = 60,41%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,35658
1,13487
× 100% = 68,61%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
1,13725
-
40
0,73325
35,52
60
0,58887
48,22
80
0,44276
61,06
100
0,35922
68,41
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,73325
1,13725
× 100% = 35,52%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,58887
1,13725
× 100% = 48,22%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,44276
1,13725
× 100% = 61,06%
85
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,35922
1,13725
× 100% = 68,41%
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi air
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
35,64
48,35
60,55
68,48
35,44
48,20
60,41
68,61
35,52
48,22
61,06
68,41
35,53
48,25
60,67
68,50
86
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan nilai IC50
1. Ekstrak etanol daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
42,98
1719,2
1600
60
54,68
3280,8
3600
80
63,86
5108,8
6400
100
73,65
7365
10000
∑ x=280
∑ y= 235,17
∑ xy=17473,8
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=47,034
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(17473,8)-(280)(73,65)/5
(21600)-(280)2 /5
4304,28
5920
a= 0,727
b= y� - ax�
b= 47,034 – (0,727)(56)
b= 6,32
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,727X + 6,32
Nilai IC50 :
Y = 0,727X + 6,32
50 = 0,727X + 6,32
X = 43,67 µg/ml
IC50 ekstrak etanol = 43,67 µg/ml
87
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
2. Fraksi n-heksana daun ketepeng
X
Y
XY
0
40
60
0
18,50
24,00
0
740
1440
X2
0
1600
3600
80
100
29,70
40,31
2376
4031
6400
10000
∑ x=280
∑ y=112,51
∑ xy=8587
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=22,502
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(8587)-(280)(112,51)/5
(21600)-(280)2 /5
2286,44
5920
a= 0,386
b= y� - ax�
b= 22,502 – (0,386)(56)
b= 0,87
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,386X + 0,87
Nilai IC50 :
Y = 0,386X + 0,87
50 = 0,386X + 0,87
X = 127,27 µg/ml
IC50 fraksi n-heksana = 127,27 µg/ml
88
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
3. Fraksi etilasetat daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
77,53
3101,2
1600
60
90,94
5456,4
3600
80
91,77
7341,6
6400
100
92,96
9296
10000
∑ x=280
∑ y=353,2
∑ xy=25195,2
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=70,64
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(25195,2)-(280)(353,2)/5
(21600)-(280)2 /5
5416
5920
a= 0,915
b= y� - ax�
b= 70,64 – (0,915)(56)
b= 19,407
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,915X + 19,407
Nilai IC50 :
Y = 0,915X + 19,407
50 = 0,915X + 19,407
X = 33,43µg/ml
IC50 fraksi etilasetat = 33,43 µg/ml
89
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
4. Fraksi air daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
35,53
1421,2
1600
60
48,25
2895
3600
80
60,67
4853,6
6400
100
68,50
6850
10000
∑ x=280
∑ y=212,95
∑ xy=16019,8
∑ x ==21600
x�=56
y� =42,59
2
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
(∑ �� )−(∑ �)(∑ �)/�
(∑ � 2 )−(∑ �)2 /�
(16019,8)-(280)(212,95)/5
(21600)-(280)2 /5
4094,6
5920
a= 0,69
b= y� - ax�
b= 42,59 – (0,69)(56)
b= 3,85
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,69X + 3,85
Nilai IC50 :
Y = 0,69X + 3,85
50 = 0,69X + 3,85
X = 66,78 µg/ml
IC50 fraksi air = 66,78 µg/ml
90
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Gambar spektrofotometer UV-Visibel
91
Universitas Sumatera Utara
54
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Tumbuhan dan daun ketepeng (Senna alata (L.) Roxb.)
Tumbuhan ketepeng
Daun ketepeng
55
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun ketepeng (Senna alata
(L.) Roxb.)
Simplisia daun ketepeng
Serbuk simplisia daun ketepeng
56
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Daun ketepeng
Dicuci di air mengalir
Ditiriskan
Ditimbang berat basahnya
Dikeringkan
Ditimbang berat keringnya
Simplisia
Dihaluskan dengan blender
Disimpan
Serbuk simplisia
Karakterisasi
• Makroskopik
• Mikroskopik
• Penetapan kadar air
• Penetapan kadar sari
yang larut air
• Penetapan kadar sari
yang larut etanol
• Penetapan kadar abu
total
• Penetapan kadar abu
yang tidak larut
asam
Skrining fitokimia
Pembuatan ekstrak
Dimase
rasidengan
etanol 80%
•
•
•
•
•
Alkaloid
Glikosida
Antrakinon
Flavonoid
Triterpenoid/
Steroid
• Saponin
• Tanin
Ekstrak
Difraksinasi
Fraksi
n-heksana
Fraksi
etilasetat
Uji aktivitas
antioksidan
57
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun ketepeng
500 g serbuk simplisia
Dimasukkan ke dalam bejana
Dimasukkan
etanol
80%
sampai
simplisia terendam sempurna
Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya, sambil sesekali diaduk
Disaring
Ampas
Maserat
Dimaserasi kembali
dengan etanol 80%
Dienap tuang
Maserat
Ampas
Diuapkan dengan penguap rotary evaporator
Ekstrak kental
(72,5 g)
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Bagan pembuatan fraksi n-heksana dan fraksi etilasetat daun
ketepeng
Ekstrak etanol daun ketepeng (30 g)
Ditambahkan etanol dan akuades
Dihomogenkan
Dimasukkan dalam corong pisah
Diekstraksi dengan n-heksana
sampai tidak memberikan hasil
positif dengan pereaksi LiebermannBurchard
Dikocok dan didiamkan sampai
terbentuk dua lapisan dan
dipisahkan
Fraksi air
Fraksi n-heksana
Diekstraksi dengan etilasetat
Dikumpulkan
Dipekatkan dengan
rotary evaporator
Dikocok dan didiamkan
sampai terbentuk dua
lapisan dan dipisahkan
Fraksi air
Fraksi n-heksana
pekat (3,51 g)
Fraksi etilasetat
Dikumpulkan
Dikumpulkan
Dipekatkan dengan
waterbath
Dipekatkan dengan
rotary evaporator
Fraksi air
pekat (23,3 g)
Fraksi etilasetat
pekat (2,41 g)
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Perhitungan karakterisasi simplisia daun ketepeng
1. Penetapan kadar air
=
Kadar air
a.
volume II-volume I
berat sampel
Berat sampel
= 5,046 g
Volume I
= 3,5 ml
Volume II
= 3,8 ml
3,8-3,5
x 100 % = 5,9453%
Kadar air
=
b. Berat sampel
= 5,064 g
5,046
Volume I
= 3,8 ml
Volume II
= 4,2 ml
4,2-3,8
Kadar air
=
c.
Berat sampel
= 5,045 g
Volume I
= 0,7 ml
Volume II
= 1,0 ml
Kadar air
=
Kadar air rata-rata =
5,064
1,0-0,7
5,045
x 100%
x 100% = 7,9776%
x 100% = 5,9464%
(5,9453+7,9776+5,9464)%
3
= 6,6231%
2. Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Kadar sari=
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel
20
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
a. Berat sampel = 5,0336 g
Berat sari
= 0,1565 g
Kadar sari
=
0,1565
5,0336
x
100
20
x 100% = 15,0536%
b. Berat sampel = 5,0021 g
Berat sari
= 0,1506 g
Kadar sari
=
0,1506
5,0021
x
100
20
x 100% = 15,0536%
c. Berat sampel = 5,0617 g
Berat sari
= 0,1582 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,1582
5,0617
x
100
20
x 100% = 15,6271%
15,0536+15,0536+15,6271%
3
= 15,4087%
3. Penetapan kadar sari larut dalam air
Kadar sari=
Berat sari
100
x
×100%
Berat sampel
20
a. Berat sampel = 5,0026 g
Berat sari
= 0,2011 g
Kadar sari
=
0,2011
5,0026
x
100
20
x 100% = 20,0995%
b. Berat sampel = 5,0320 g
Berat sari
= 0,2156 g
Kadar sari
=
0,2156
5,0320
x
100
20
x 100% = 21,4228%
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
c. Berat sampel = 5,0013 g
Berat sari
= 0,1988 g
Kadar sari
=
Kadar sari rata-rata
=
0,1988
5,0013
x
100
20
x 100% = 19,8748%
(20,0995+21,4228+19,8748)%
3
= 20,4657%
4. Penetapan kadar abu total
Kadar abu total =
Berat abu
×100%
Berat sampel
a. Berat sampel = 2,0160 g
Berat abu
= 0,0898 g
Kadar abu
=
0,0898
x 100 % = 4,4543 %
2,0160
b. Berat sampel = 2,0850 g
Berat abu
= 0,0786 g
Kadar abu
=
0,0786
2,0850
x 100% = 3,7697%
c. Berat sampel = 2,0900 g
Berat abu
= 0,0880 g
Kadar abu
=
0,0880
2,0900
Kadar abu total rata-rata =
x 100% = 4,2105%
(4,4543+3,7697+4,2105)%
3
= 4,1448%
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (lanjutan)
5. Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Kadar abu yang tidak larut dalam asam
a.
b.
c.
=
Berat abu
Berat sampel
x 100%
Berat sampel = 2,0160 g
Berat abu
= 0,0060 g
Kadar abu
=
0,0060
2,0160
x 100% = 0,2976 %
Berat sampel = 2,0850 g
Berat abu
= 0,0080 g
Kadar abu
=
0,0080
2,0850
x 100% = 0,3836%
Berat sampel = 2,0900 g
Berat abu
= 0,0090 g
Kadar abu
=
0,0090
2,0900
x 100% = 0,4306 %
Kadar abu yang tidak larut asam rata-rata =
0,2976%+0,3836%+0,4306%
3
= 0,3706%
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Kromatogram dan data Rf hasil KLT ekstrak etanol daun ketepeng
(EEDK)
Fase gerak n-heksana:etilasetat
(50:50)
(60:40)
(70:30)
u
k
u.m
h
u
(80:20)
(90:10)
u
k
m.m
u
m.m
k
u
h
h.m
h
k
j
u
j
h
u.m
k
k
h
h
j
h
k
j
k
h.m
j
BP
j
u
m.m
u
u.m
k
h
TP
Gambar hasil kromatogram dengan fase gerak n-heksana:etilasetat
Keterangan:
Fase diam = plat silika gel 60 F254, fase gerak = n-heksana : etilasetat, penampak
bercak = Liebermann-Burchard, h=hijau, h.m=hijau muda, j=jingga, k=kuning,
m.m=merah muda, u=ungu, u.m=ungu muda, BP=batas pengembang, TP= titik
penotolan.
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. (lanjutan)
1.
Fase gerak
(n-heksana:etilasetat)
50:50
2.
60:40
3.
70:30
4.
80:20
5.
90:10
No.
Harga Rf
0,10
0,25
0,31
0,41
0,46
0,12
0,31
0,35
0,87
0,91
0,11
0,27
0,50
0,54
0,56
0,81
0,85
0,91
0,11
0,15
0,30
0,34
0,54
0,58
0,75
0,81
0,91
0,94
0,10
0,30
0,31
0,50
0,54
0,57
0,66
0,76
0,80
0,84
0,89
Penampak bercak
Liebermann-Burchard
jingga
hijau
kuning
ungu
merah muda
ungu muda
ungu
jingga
kuning
ungu
kuning
jingga
hijau muda
hijau
kuning
ungu
hijau
ungu muda
hijau
kuning
hijau
jingga
hijau
hijau muda
ungu
merah muda
kuning
ungu
hijau
kuning
ungu muda
kuning
jingga
kuning
hijau
ungu
merah muda
ungu
jingga
Data Rf hasil KLT EEDK dengan fase gerak n-heksana:etilasetat
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Kromatogram hasil KKt ekstrak etanol daun ketepeng dengan
berbagai fase gerak
Fase gerak
Asam asetat 5%
HCl 1%
BAW (4:1:5)
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, A = asam asetat 5%, B = HCl 1%, C =
BAW (4:1:5) dilihat di bawah sinar UV 366 nm
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
AlCl3
NH3
FeCl3
b.k
k
k.m
b.k
k
k.m
k
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = asam asetat 5%, A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning, k.m= kuning muda
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
AlCl3
NH3
b.k
k
k
A
FeCl3
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = HCl 1%, A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (lanjutan)
Penampak bercak
NH3
AlCl3
k
FeCl3
k
b.k
b.k
k
k
b.k
k
b.k
k
b.k
b.k
A
B
C
Keterangan:
Fase diam = kertas saring Whatmann, fase gerak = BAW (4:1:5), A = disemprot
dengan AlCl3, B = disemprot dengan NH3, C = disemprot dengan FeCl3, b.k= biru
kehitaman, k= kuning
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Penentuan waktu kerja
1. Hasil penentuan waktu kerja ekstrak etanol daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.7001
0.6941
0.6901
0.6898
0.6875
0.6754
0.6690
0.6670
0.6588
0.6523
0.6487
0.6455
0.6398
0.6379
0.6356
0.6322
0.6289
0.6260
0.6240
0.6198
0.6180
0.6158
0.6155
0.6150
0.6141
0.6111
0.6019
0.6015
0.6012
0.6009
0.6008
0.5991
0.5990
0.5983
0.5946
0.5945
0.5935
0.5933
0.5931
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.5931
0.5929
0.5928
0.5917
0.5917
0.5914
0.5913
0.5909
0.5909
0.5905
0.5903
0.5894
0.5894
0.5894
0.5891
0.5890
0.5890
0.5892
0.5895
0.5895
0.5898
0.5881
0.5882
0.5882
0.5880
0.5879
0.5875
0.5874
0.5873
0.5872
0.5872
0.5870
0.5868
0.5869
0.5861
0.5861
0.5853
0.5833
0.5825
Menit ke79
80
Absorbansi
0.5823
0.5811
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
2. Hasil penentuan waktu kerja fraksi n-heksana daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.8930
0.8931
0.8951
0.8951
0.8948
0.8951
0.8949
0.8950
0.8950
0.8954
0.8961
0.8967
0.8973
0.8985
0.8995
0.8991
0.8997
0.8997
0.8800
0.8801
0.8800
0.8802
0.8803
0.8804
0.8813
0.8825
0.8836
0.8842
0.8846
0.8853
0.8859
0.8862
0.8865
0.8867
0.8870
0.8873
0.8876
0.8881
0.8880
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.8880
0.8880
0.8883
0.8887
0.8889
0.8891
0.8892
0.8897
0.8898
0.8700
0.8705
0.8707
0.8709
0.8711
0.8714
0.8736
0.8738
0.8738
0.8732
0.8732
0.8735
0.8737
0.8738
0.8730
0.8732
0.8735
0.8736
0.8739
0.8739
0.8732
0.8734
0.8739
0.8738
0.8730
0.8731
0.8734
0.8734
0.8734
0.8738
Menit ke79
80
Absorbansi
0.8737
0.8737
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
3. Hasil penentuan waktu kerja fraksi etilasetat daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
Absorbansi
0.4812
0.4538
0.4339
0.4188
0.4061
0.3950
0.3854
0.3767
0.3685
0.3614
0.3545
0.3481
0.3420
0.3363
0.3310
0.3259
0.3209
0.3165
0.3118
0.3075
0.3034
0.2993
0.2956
0.2919
0.2883
0.2849
0.2817
0.2784
0.2754
0.2723
0.2695
0.2665
0.2638
0.2611
0.2586
0.2559
0.2534
Menit ke38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
Absorbansi
0.2509
0.2486
0.2462
0.2440
0.2418
0.2400
0.2382
0.2363
0.2344
0.2326
0.2306
0.2288
0.2269
0.2252
0.2233
0.2215
0.2199
0.2184
0.2116
0.2119
0.2114
0.2116
0.2110
0.2115
0.2110
0.2116
0.2113
0.2127
0.2112
0.2111
0.2105
0.2113
0.2127
0.2114
0.2122
0.2119
0.2128
Menit ke75
76
77
78
79
80
Absorbansi
0.2133
0.2141
0.2129
0.2129
0.2124
0.2124
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. (lanjutan)
4. Hasil penentuan waktu reaksi fraksi air daun ketepeng
Menit ke1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
Absorbansi
0.8111
0.8012
0.7929
0.7864
0.7809
0.7754
0.7710
0.7668
0.7626
0.7592
0.7560
0.7539
0.7548
0.7521
0.7512
0.7504
0.7494
0.7492
0.7481
0.7478
0.7466
0.7460
0.7455
0.7460
0.7460
0.7457
0.7451
0.7452
0.7450
0.7452
0.7449
0.7451
0.7451
0.7250
0.7253
0.7246
0.7155
0.7151
0.7063
Menit ke40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
Absorbansi
0.7057
0.6961
0.6965
0.6969
0.6877
0.6870
0.6841
0.6888
0.6788
0.6798
0.6700
0.6506
0.6518
0.6524
0.6529
0.6532
0.6536
0.6538
0.6536
0.6537
0.6531
0.6533
0.6532
0.6538
0.6556
0.6546
0.6535
0.6526
0.6514
0.6505
0.6514
0.6515
0.6523
0.6528
0.6467
0.6466
0.6473
0.6471
0.6465
Menit ke79
80
Absorbansi
0.6456
0.6445
73
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Hasil uji antioksidan
1. Ekstrak etanol daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12995
0,64645
0,51094
0,41066
0,29915
42,79
54,78
63,65
73,52
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,64645
1,12995
× 100% = 42,79%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,51094
1,12995
× 100% = 54,78%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,41066
1,12995
× 100% = 63,65%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12995-0,29915
1,12995
× 100% = 73,52%
74
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12887
0,64674
0,51088
0,41064
0,29639
42,71
54,74
63,64
73,74
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,64674
1,12887
× 100% = 42,71%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,51088
1,12887
× 100% = 54,74%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,41064
1,12887
× 100% = 63,64%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12887-0,29639
1,12887
× 100% = 73,74%
75
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,12907
0,63835
0,51337
0,40311
0,29706
43,46
54,53
64,29
73,69
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman ekstrak etanol daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,63835
1,12907
× 100% = 42,98%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,51337
1,12907
× 100% = 54,68%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,40311
1,12907
× 100% = 64,29%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,12907-0,29706
1,12907
× 100% = 73,65%
76
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data nilai rata-rata % peredaman ekstrak etanol
Konsentrasi
larutan uji (µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
II
III
42,71
43,46
54,74
54,53
63,64
64,29
73,74
73,69
I
42,79
54,78
63,65
73,52
Rata-rata
42,98
54,68
63,86
73,65
2. Fraksi n-heksana daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13287
0,92514
0,86003
0,79924
0,67717
18,33
24,08
29,45
40,22
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,92514
1,13287
× 100% = 18,33%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman =
1,13287-0,86003
1,13287
× 100% = 24,08%
77
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,79924
1,13287
× 100% = 29,45%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13287-0,67717
1,13287
× 100% = 40,22%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13487
0,92406
0,86166
0,79854
0,67680
18,57
24,07
29,63
40,36
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,92406
1,13487
× 100% = 18,57%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,86166
1,13487
× 100% = 24,07%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,79854
1,13487
× 100% = 29,63%
78
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,67680
1,13487
× 100% = 40,36%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13669
0,92526
0,86562
0,79521
0,67790
18,6
23,84
30,04
40,36
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi n-heksana daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,92526
1,13669
× 100% = 18,60%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,86562
1,13669
× 100% = 23,84%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,79521
1,13669
× 100% = 30,04%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13669-0,67790
1,13669
× 100% = 40,36%
79
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi n-heksana
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
18,33
24,08
29,45
40,22
18,57
24,07
29,63
40,36
18,6
23,84
30,04
40,36
18,5
24
29,7
40,31
3. Fraksi etilasetat daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
Absorbansi
1,13545
0,25447
0,10541
0,09438
0,07930
% peredaman
77,59
90,99
91,68
93,01
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,25447
1,13545
× 100% = 77,59%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,10541
1,13545
× 100% = 90,99%
80
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,09438
1,13545
× 100% = 91,68%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13545-0,07930
1,13545
× 100% = 93,01%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13203
0,25627
0,10551
0,09514
0,07974
77,36
90,68
91,59
92,95
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,25627
1,13203
× 100% = 77,36%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,10551
1,13203
× 100% = 90,68%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13203-0,09514
1,13203
× 100% = 91,59%
81
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,07974
1,13487
× 100% = 92,95%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
1,13792
0,25432
0,10072
77,65
91,15
80
100
0,09047
0,0807
92,05
92,91
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi etilasetat daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,25432
1,13792
× 100% = 77,65%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,10072
1,13792
× 100% = 91,15%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13792-0,09047
1,13792
× 100% = 92,05%
82
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman =
1,13792-0,08070
1,13792
× 100% = 92,91%
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi etilasetat
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
77,59
90,99
91,68
93,01
77,36
90,68
91,59
92,95
77,65
91,15
92,05
92,91
77,53
90,94
91,77
92,96
4. Fraksi air daun ketepeng
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran pertama
Konsentrasi larutan uji
(µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13939
0,73331
0,58847
0,44942
0,35907
35,64
48,35
60,55
68,48
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,73331
1,13939
× 100% = 35,64%
83
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,58847
1,13939
× 100% = 48,35%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,44942
1,13939
× 100% = 60,55%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13939-0,35907
1,13939
× 100% = 68,48%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran kedua
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
40
60
80
100
1,13618
0,73335
0,58855
0,44981
0,35658
35,44
48,20
60,41
68,61
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,73335
1,13618
× 100% = 35,44%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,58855
1,13618
× 100% = 48,20%
84
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13618-0,44981
1,13618
× 100% = 60,41%
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13487-0,35658
1,13487
× 100% = 68,61%
Data absorbansi menit ke-60 pengukuran ketiga
Konsentrasi larutan uji (µg/ml)
Absorbansi
% peredaman
0
1,13725
-
40
0,73325
35,52
60
0,58887
48,22
80
0,44276
61,06
100
0,35922
68,41
% peredaman =
Akontrol -Asampel
Akontrol
× 100%
Keterangan:
Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
Perhitungan % peredaman fraksi air daun ketepeng
- Konsentrasi 40 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,73325
1,13725
× 100% = 35,52%
- Konsentrasi 60 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,58887
1,13725
× 100% = 48,22%
- Konsentrasi 80 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,44276
1,13725
× 100% = 61,06%
85
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. (lanjutan)
- Konsentrasi 100 µg/ml
% peredaman
=
1,13725-0,35922
1,13725
× 100% = 68,41%
Data nilai rata-rata % peredaman fraksi air
Konsentrasi
larutan uji
(µg/ml)
0
40
60
80
100
% peredaman
I
II
III
Rata-rata
35,64
48,35
60,55
68,48
35,44
48,20
60,41
68,61
35,52
48,22
61,06
68,41
35,53
48,25
60,67
68,50
86
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Perhitungan nilai IC50
1. Ekstrak etanol daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
42,98
1719,2
1600
60
54,68
3280,8
3600
80
63,86
5108,8
6400
100
73,65
7365
10000
∑ x=280
∑ y= 235,17
∑ xy=17473,8
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=47,034
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(17473,8)-(280)(73,65)/5
(21600)-(280)2 /5
4304,28
5920
a= 0,727
b= y� - ax�
b= 47,034 – (0,727)(56)
b= 6,32
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,727X + 6,32
Nilai IC50 :
Y = 0,727X + 6,32
50 = 0,727X + 6,32
X = 43,67 µg/ml
IC50 ekstrak etanol = 43,67 µg/ml
87
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
2. Fraksi n-heksana daun ketepeng
X
Y
XY
0
40
60
0
18,50
24,00
0
740
1440
X2
0
1600
3600
80
100
29,70
40,31
2376
4031
6400
10000
∑ x=280
∑ y=112,51
∑ xy=8587
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=22,502
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(8587)-(280)(112,51)/5
(21600)-(280)2 /5
2286,44
5920
a= 0,386
b= y� - ax�
b= 22,502 – (0,386)(56)
b= 0,87
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,386X + 0,87
Nilai IC50 :
Y = 0,386X + 0,87
50 = 0,386X + 0,87
X = 127,27 µg/ml
IC50 fraksi n-heksana = 127,27 µg/ml
88
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
3. Fraksi etilasetat daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
77,53
3101,2
1600
60
90,94
5456,4
3600
80
91,77
7341,6
6400
100
92,96
9296
10000
∑ x=280
∑ y=353,2
∑ xy=25195,2
∑ x 2 ==21600
x�=56
y�=70,64
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
( ∑ xy)-( ∑ x)( ∑ y)/n
(∑ x2 )-( ∑ x)2 /n
(25195,2)-(280)(353,2)/5
(21600)-(280)2 /5
5416
5920
a= 0,915
b= y� - ax�
b= 70,64 – (0,915)(56)
b= 19,407
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,915X + 19,407
Nilai IC50 :
Y = 0,915X + 19,407
50 = 0,915X + 19,407
X = 33,43µg/ml
IC50 fraksi etilasetat = 33,43 µg/ml
89
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. (lanjutan)
4. Fraksi air daun ketepeng
X
Y
XY
X2
0
0
0
0
40
35,53
1421,2
1600
60
48,25
2895
3600
80
60,67
4853,6
6400
100
68,50
6850
10000
∑ x=280
∑ y=212,95
∑ xy=16019,8
∑ x ==21600
x�=56
y� =42,59
2
X = Konsentrasi (µg/ml)
Y = % Peredaman
a=
a=
a=
(∑ �� )−(∑ �)(∑ �)/�
(∑ � 2 )−(∑ �)2 /�
(16019,8)-(280)(212,95)/5
(21600)-(280)2 /5
4094,6
5920
a= 0,69
b= y� - ax�
b= 42,59 – (0,69)(56)
b= 3,85
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,69X + 3,85
Nilai IC50 :
Y = 0,69X + 3,85
50 = 0,69X + 3,85
X = 66,78 µg/ml
IC50 fraksi air = 66,78 µg/ml
90
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Gambar spektrofotometer UV-Visibel
91
Universitas Sumatera Utara