Uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform, dan etanol kulit buah manggis (garcinia mangostana l.) terhadap staphylococcus aureus resisten amoksisilin - USD Repository

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

UJI AKTIVITAS AN ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSANA, K , KLOROFORM,

DAN ETANOL K L KULIT BUAH MANGGIS (Garcinia mangost angostana L.)

TERHADAP S P Staphylococcus aureus RESISTEN AMOK KSISILIN

SKRIPSI

  Disusun untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Di Me Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Agnes Astri Sukmaratri NIM : 108114072

  

FAKULTAS FARMASI

U UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

UJI AKTIVITAS AN ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSANA, K , KLOROFORM,

DAN ETANOL K L KULIT BUAH MANGGIS (Garcinia mangost angostana L.)

TERHADAP S P Staphylococcus aureus RESISTEN AMOK KSISILIN

SKRIPSI

  Disusun untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Di Me Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Agnes Astri Sukmaratri NIM : 108114072

  

FAKULTAS FARMASI

U UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  HALAMAN PERSEMBAHAN “Saya belajar untuk hidup dan bukan hidup untuk belajar”

“TERJADILAH PADAKU SETURUT

KEHENDAK-MU”

  Kupersembahkan untuk keluargaku tercinta, Bapak Ignasius Sukoco,

  Ibu Maria Goretti Gayatri, Simbah Sardi dan Simbah Romelah,

  Adik Cicilia Dias Sukmaningtyas, Serta Almamater tercinta tempat bernaung.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

PRAKATA

  Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat dan berkat, kasih dan sayang, serta pimpinan dan tuntunan sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas

  

Antibakteri Fraksi N-Heksana, Kloroform dan Etanol Kulit Buah Manggis

(Garcinia mangostana L.) terhadap Staphylococcus aureus Resisten

Amoksisilin” dengan baik.

  Penulis menyadari bahwa selama penyusunan skripsi ini penulis tidak lepas dari bantuan, doa, arahan, dukungan, kritik dan saran yang sangat membangun. Pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih sebesar-besarnya kepada:

  1. Bapak Ipang Djunarko, M. Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. dan Ibu Agustina Setiawati, M. Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang selalu memberikan arahan, evaluasi serta kritik dan saran mulai dari pembuatan proposal penelitian hingga penulisan skripsi ini selesai.

  3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si. dan Ibu Damiana Sapta Candrasari, M. Sc. selaku Dosen Penguji.

  4. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S. Si., atas masukan dan arahan dalam bidang

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  5. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Bapak Heru, Bapak Kayat dan Bapak Parlan serta semua laboran yang telah membantu selama proses penelitian di laboratorium.

  6. Christiana Destia Anggraeni atas bantuannya selama penelitian di laboratorium, baik tenaga maupun ide-ide cemerlangnya, serta motivasi.

  7. Teman-teman Farmasi Sains dan Teknologi 2010 atas doa dan dukungan.

  8. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu atas semua bantuan, dukungan dan doa selama penelitian dan penyusunan skripsi.

  Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam naskah skripsi ini dengan segala keterbatasan yang ada. Oleh karena itu, penulis membuka diri terhadap segala kritik dan saran yang membangun untuk kemajuan diri dan ilmu pengetahuan.

  Penulis

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

DAFTAR ISI

  Halaman HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................ ii HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI .............................................. iv HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ v PRAKATA ......................................................................................................... vi PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ viii DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiii DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv

  INTISARI ........................................................................................................... xvi

  

ABSTRACT .......................................................................................................... xvii

BAB I. PENGANTAR .......................................................................................

  1 A. Latar Belakang ........................................................................................

  1 1. Rumusan masalah ..............................................................................

  3 2. Keaslian penelitian .............................................................................

  4 3. Manfaat penelitian ..............................................................................

  4 B. Tujuan Penelitian......................................................................................

  5 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................

  6

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  A. Staphylococcus aureus ............................................................................

  6 B. Amoksisilin dan Resistensinya ................................................................

  7 C. Buah Manggis (Garcinia mangostana L.) ..............................................

  9 D. Ekstraksi .................................................................................................. 10

  E. Uji Aktivitas Antibakteri ......................................................................... 11

  F. Landasan Teori ........................................................................................ 12

  G. Hipotesis .................................................................................................. 13

  BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ......................................................... 14 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 14 B. Variabel dan Definisi Operasional .......................................................... 14

  1. Variabel penelitian ............................................................................. 14

  2. Definisi operasional ........................................................................... 15

  C. Bahan Penelitian ...................................................................................... 16

  D. Alat Penelitian ......................................................................................... 16

  E. Tata Cara Penelitian ................................................................................ 16

  1. Pengumpulan bahan kulit manggis .................................................... 16

  2. Pembuatan serbuk simplisia kulit buah manggis ............................... 17

  3. Pembuatan fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis .............................................................................................. 17

  4. Penentuan nilai kadar hambat minimum (KHM) Staphylococcus

  aureus sebelum dan sesudah perlakuan resistensi dengan metode

  dilusi padat.......................................................................................... 19

  6. Pembuatan media resistensi dalam tabung ........................................ 20

  7. Pembuatan suspensi bakteri uji .......................................................... 20

  8. Orientasi konsentrasi fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis...................................................................................... 21

  9. Uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis dengan metode difusi sumuran ................................... 21 F. Analisis Data ........................................................................................... 22

  BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 23 A. Determinasi dan Pengumpulan Tanaman ................................................ 23 B. Pembuatan Serbuk Simplisia Kulit Buah Manggis ................................. 23 C. Pembuatan Fraksi n-Heksana, Kloroform dan Etanol Kulit Buah Manggis ................................................................................................... 24 D. Identifikasi Bakteri .................................................................................. 25 E. Pembuatan Staphylococcus aureus Resisten Amoksisilin dengan metode adaptif gradual ............................................................................ 26 F. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji ............................................................. 32

  G. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksana, Kloroform dan Etanol Kulit Buah Manggis dengan Metode Difusi Sumuran ............................ 32

  1. Uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana kulit buah manggis dengan metode difusi sumuran ...................................................................... 35

  2. Uji aktivitas antibakteri fraksi kloroform kulit buah manggis dengan metode difusi sumuran ...................................................................... 38

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  3. Uji aktivitas antibakteri fraksi etanol kulit buah manggis dengan metode difusi sumuran ...................................................................... 41

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................ 46 A. Kesimpulan .............................................................................................. 46 B. Saran ........................................................................................................ 46 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 47 LAMPIRAN ....................................................................................................... 49 BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 122

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

DAFTAR TABEL

  Halaman Tabel

  I. Penimbangan bobot tetap fraksi etanol ......................................... 22 Tabel

  II. Hasil penentuan MIC sebelum perlakuan resistensi ..................... 24 Tabel

  III. Hasil penentuan MIC setelah perlakuan resistensi ........................ 27 Tabel

  IV. Diameter zona hambat yang dihasilkan seri konsentrasi fraksi n- heksana, kontrol negatif dan kontrol positif .................................. 31 Tabel

  V. Hasil t-test diameter zona hambat seri konsentrasi fraksi n- heksana, kontrol negatif dan kontrol positif .................................. 32 Tabel

  VI. Diameter zona hambat yang dihasilkan seri konsentrasi fraksi kloroform, kontrol negatif dan kontrol positif .............................. 33 Tabel

  VII. Hasil t-test diameter zona hambat seri konsentrasi fraksi kloroform, kontrol negatif dan kontrol positif .............................. 35 Tabel VIII. Diameter zona hambat yang dihasilkan seri konsentrasi fraksi etanol, kontrol negatif dan kontrol positif ..................................... 37 Tabel

  IX. Hasil t-test diameter zona hambat seri konsentrasi fraksi etanol, kontrol negatif dan kontrol positif ................................................. 38

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

DAFTAR GAMBAR

  Halaman Gambar 1. Buah manggis (Garcinia mangostana L.) ........................................

  9 Gambar 2. Skema fraksinasi serbuk kulit manggis ............................................ 18 Gambar 3. Struktur amoksisilin ......................................................................... 29 Gambar 4. Perlakuan resistensi hari ke-10 ......................................................... 30 Gambar 5. Perbandingan media uji dengan kontrol pertumbuhan dan kontrol media pada penentuan nilai KHM .................................................... 31 Gambar 6. Struktur cefotaxime .......................................................................... 34 Gambar 7. Uji difusi sumuran fraksi kloroform ................................................. 39 Gambar 8. Struktur α-mangostin ........................................................................ 44

  PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Halaman Lampiran

  1. Sertifikat hasil uji Staphylococcus aureus ATCC 25923 ........ 49 Lampiran

  2. Surat pengesahan determinasi tanaman manggis (Garcinia

  mangostana L.) ....................................................................... 50

  Lampiran

  3. Hasil penentuan MIC sebelum perlakuan resistensi ............... 51 Lampiran

  4. Hasil penentuan MIC setelah perlakuan resistensi .................. 52 Lampiran

  5. Proses ekstraksi dan hasil evaporasi ketiga fraksi ................... 53 Lampiran

  6. Seri konsentrasi fraksi ............................................................. 54 Lampiran

  7. Perhitungan konsentrasi amoksisilin perlakuan resistensi dengan metode adaptif gradual ............................................... 55 Lampiran

  8. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform dan etanol terhadap Staphylococcus aureus resisten amoksisilin dengan metode difusi sumuran ................................................ 56

  Lampiran

  9. Hasil pengukuran diameter zona hambat fraksi n-heksana, kloroform dan etanol ............................................................... 58 Lampiran 10. Hasil perhitungan statistik zona hambat fraksi n-heksana ...... 59 Lampiran 11. Hasil perhitungan statistik zona hambat fraksi kloroform ...... 82 Lampiran 12. Hasil perhitungan statistik zona hambat fraksi etanol ............. 105

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

INTISARI

Staphylococcus aureus merupakan penyebab penyakit infeksi yang cukup

  mematikan. Pengobatan yang selama ini dilakukan menggunakan antibiotik lini pertama seperti amoksisilin. Namun dalam perkembangannya, telah ditemukan suatu mekanisme resistensi dari S. aureus karena adanya enzim penisilinase yang dapat memecah cincin β-laktam amoksisilin. Manggis diperkenalkan sebagai suatu agen antimikroba baru karena senyawa kandungannya memiliki aktivitas antibakteri yang cukup potensial.

  Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan analisis data menggunakan one way ANOVA dan uji kebermaknaan dengan Post hoc test. Resistensi terhadap amoksisilin diawali dengan penentuan nilai Kadar Hambat Minimum(KHM) sebelum dan sesudah perlakuan resistensi selama satu bulan. Uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis terhadap Staphylococcus aureus resisten amoksisilin dilakukan dengan uji difusi sumuran.

  Hasil penelitian menunjukkan nilai KHM S. aureus terhadap amoksisilin setelah perlakuan resistensi sebesar 16µg/mL, meningkat 160 kali dari nilai KHM awal. Bakteri hasil perlakuan resistensi kemudian digunakan untuk menguji aktivitas antibakteri ketiga fraksi ekstrak kulit buah manggis. Ketiga fraksi menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus resisten amoksisilin. Fraksi n-heksana dan kloroform menunjukkan zona radikal, sedangkan fraksi etanol menunjukkan zona iradikal pada daerah sekitar sumuran.

  Kata kunci : aktivitas antibakteri, kulit buah manggis, Staphylococcus aureus, resistensi amoksisilin

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  

ABSTRACT

Staphylococcus aureus is the cause of deadly infectious disease. The treatment which has been carried out using the first-line antibiotics is amoxicillin.

  But in its development, has found a resistance mechanism of S. aureus due to penicillinase enzymes that can break down the β-lactam ring. Mangosteen is introduced as a new antimicrobial agents because it has so many compounds that considerably potential antibacterial activity.

  This research is purely experimental study using one-way ANOVA and post hoc test as the data analysis. Resistance begins with the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values against amoxicillin before and after resistance treatment for a month. Antibacterial activity test for n-hexane, chloroform and etanol fraction from mangosteen rind against amoxicillin resistant Staphylococcus aureus carried by diffusion test.

  The result showed MIC values of S. aureus against amoxicillin after resistance treatment at 16µg/mL, increased 160 times from the initial MIC values. The bacteria after resistance treatment then used to test the antibacterial activity of the three fractions of mangosteen peel extract. The three fractions showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus resistant amoxicillin. N- hexane and chloroform fraction showed radical zone, while ethanol fraction showed irradical zone around the well.

  Keywords : antibacterial activity, mangosteen rind, Staphylococcus aureus, amoxicillin resistance

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Staphylococcus aureus merupakan bakteri penyebab infeksi yang berat. S.

  

aureus dalam beberapa dekade yang lalu menjadi penyebab infeksi yang cukup

  luas dan menyerang pembuluh darah, kulit, jaringan lunak, dan sampai pneumonia (Lowy, 1998 in Ugwu, 2009). S. aureus juga penyebab kematian yang cukup banyak ditemukan. Infeksi akibat S. aureus dilaporkan sejumlah 170 kasus dalam kurun waktu dua tahun dengan insidensi sebesar 33,9 kasus/100.000/tahun. Tingkat kematiannya juga tinggi, sebesar 19,1 % dalam 28 hari dengan angka kematian populasi per tahun 5,9/100.000 (Jacobsson, 2009).

  Pengobatan terhadap penyakit infeksi bakteri yang selama ini digunakan manusia disebut sebagai agen antibakteri atau sering disebut sebagai antibiotik.

  Antibiotik adalah senyawa organik sintetik atau yang terdapat secara alami yang menghambat atau menghancurkan bakteri tertentu, biasanya pada konsentrasi rendah (Brooks, 2007). Masyarakat dewasa ini sering menjadikan antibiotik sebagai rujukan pengobatan bagi penyakit-penyakit yang dialaminya. Penggunaan antibiotik secara tidak tepat di masyarakat sering menimbulkan permasalahan yang baru muncul setelah penggunaan yang kronis.

  Permasalahan yang kini muncul tidak hanya pada pengobatan infeksi, tetapi pada resistensi yang ditimbulkan oleh S. aureus sendiri. Penisilin

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  tetapi ada S. aureus tertentu yang sudah resisten dan prevalensinya meningkat dalam waktu singkat. Resistensi ini telah menjadi pandemik pada tahun 1950-an dan awal 1960-an (DeLeo, 2009).

  Kasus resistensi terhadap pengobatan antibiotik pada pasien tidak serta- merta disebabkan oleh resistensi pasien, tetapi disebabkan juga oleh bakteri itu sendiri. Bakteri ini diserang dan dibunuh oleh antibiotik, namun karena pemejanan yang terlampau sering dan pada jangka waktu yang lama menyebabkan bakteri sudah beradaptasi sehingga antibiotik tidak berefek. Selain dari proses adaptasi, bakteri tertentu juga sudah memiliki mekanisme resistensi terhadap jenis antibiotik tertentu, misalnya Staphylococcus yang resisten terhadap penisilin G menghasilkan β-laktamase yang dapat menghancurkan obat aktif (Brooks, 2007). Resistensi ini kemudian menjadi suatu perhatian khusus untuk dapat menemukan suatu teknik pengobatan baru yang dapat membunuh bakteri resisten.

  Manggis (Garcinia mangostana L.) merupakan salah satu buah tropis yang saat ini banyak dibicarakan dan diteliti khasiatnya. Manggis digunakan secara tradisional sebagai phytomedicine di Asia Tenggara untuk pengobatan trauma, diare, infeksi dan infeksi kulit, serta masalah gastrointestinal (Priya et al., 2010).

  Ekstrak buah manggis memiliki aktivitas antioksidan, antitumor, antialergi, anti-inflamasi, antibakteri, dan antiviral. Senyawa yang berperan di dalamnya adalah xanthone dari kulit buahnya. Senyawa xanthone ditemukan dapat melawan beberapa bakteri, seperti S. aureus, P. aeruginosa, Salmonella

  

typhimurium dan Bacillus subtilis (Chaverri, 2008). Aktivitas antimikroba

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  (antibakteri) yang potensial dari manggis dapat dijadikan suatu agen antimikroba dan terobosan baru untuk terapi S. aureus yang resisten.

  Penelitian sebelumnya menemukan bahwa α-mangostin adalah kandungan senyawa yang cukup besar dalam kulit buah manggis. Kandungan senyawa ini dapat terekstrak secara efektif dalam pelarut dengan kepolaran menengah, atau bisa dikatakan semipolar (Pothitirat, Chomnawang, and Gritsanapan, 2010).

  Proses ekstraksi tersebut dapat dimaksimalkan dengan penggunaan pelarut bertingkat kepolarannya.

  Penelitian ini merupakan uji aktivitas antibakteri dengan penekanan pada bakteri S. aureus yang resisten amoksisilin. Bakteri S. aureus yang sudah dibuat resisten diujikan pada hasil fraksinasi kulit buah manggis. Aktivitas antibakteri ditunjukkan dengan zona hambat pada pertumbuhan di media dengan masa inkubasi 24 jam. Tingkat potensi ditunjukkan dari besar zona hambat dalam difusi sumuran.

1. Rumusan masalah

  a. Berapa Kadar Hambat Minimum (KHM) bakteri Staphylococcus aureus setelah perlakuan resistensi terhadap amoksisilin? b. Apakah fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus resisten amoksisilin?

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  2. Keaslian penelitian

  Sejauh penelusuran penulis, belum ada penelitian sejenis yang pernah dilakukan. Penelitian sebelumnya yang terkait dengan aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dari senyawa tanaman manggis antara lain :

  a. Antioxidant and Antimicrobial Activities of Crude Extracts from Mangosteen (Garcinia mangostana L.) Parts and Some Essential Oils oleh Palakawong et.

  al. (2010).

  b. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.) serta Kandungan Senyawa Aktifnya oleh Putra (2010).

  c. Antimicrobial Activity of Pericarp Extract of Garcinia mangostana Linn. oleh Priya et. al. (2010).

  3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan mampu menambah informasi ilmu pengetahuan yang berguna bagi pengembangan obat antibakteri dari tanaman dan menambah khasanah ilmu pengetahuan mengenai pemanfaatan dan pengembangan aktivitas antibakteri dari tanaman manggis, khususnya kulit buah manggis.

  b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan mampu menambah pengetahuan masyarakat mengenai kegunaan kulit buah manggis yang dapat dikembangkan menjadi antibiotik.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

B. Tujuan Penelitian

  1. Mengetahui Kadar Hambat Minimum (KHM) bakteri Staphylococcus aureus setelah perlakuan resistensi terhadap amoksisilin.

  2. Mengetahui aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis terhadap Staphylococcus aureus resisten amoksisilin.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus temasuk dalam famili Micrococcaceae dan

  merupakan bakteri pyogenic cocci yang dapat menyebabkan infeksi supuratif (infeksi diserai nanah). Bakteri ini berbentuk bulat atau bola dan koloninya seperti anggur sehingga dinamakan Staphylococcus dan dinamakan aureus karena warnanya yang kuning emas seperti matahari (Radji, 2010).

  S. aureus dapat menetap di hidung, kulit dan saluran cerna sebagai flora

  normal. Namun, S. aureus ini juga merupakan bakteri patogen yang dapat menyebabkan penyakit berupa infeksi oportunistik, keracunan makanan pada saluran cerna, renjat toksik, infeksi kulit, scalded skin syndrome dan pneumonia pada saluran napas. S. aureus bersifat Gram-positif anaerob fakultatif penghasil enzim katalase. S. aureus dapat tumbuh karena melakukan respirasi aerob atau fermentasi menghasilkan asam laktat. Bakteri ini dapat tumbuh pada 15-40 C dan NaCl 15% (Radji, 2010). adalah bakteri yang memiliki daya tahan paling kuat dan

  S. aureus

  memiliki faktor virulensi yang cukup banyak. Protein permukaan yang dimilikinya dapat mempermudah kolonisasi pada inang, toksinnya dapat merusak jaringan sel inang sehingga akan memperparah penyakit yang timbul, dan bakteri ini memiliki gen resistensi terhadap antimikroba tertentu sehingga bakteri kebal

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  S. aureus dapat menimbulkan penyakit melalui dua mekanisme, yaitu

  kemampuan untuk memperbanyak diri dan dapat tersebar luas di jaringan serta kemampuan memproduksi enzim dan toksin ekstraseluler. Infeksi yang disebabkan oleh kemampuannya memperbanyak diri menjadi masalah yang cukup signifikan di rumah sakit dan fasilitas kesehatan lainnya karena dapat menyebabkan manifestasi seperti endokarditis, osteomyelitis dan pneumonia (World Health Organization, 2004).

B. Amoksisilin dan Resistensinya

  Penisilin didapatkan dari kapang genus Penicillium. Kelompok antibiotik ini memiliki struktur dasar yang khas dengan adanya cincin tiazolidin melekat pada cincin β-laktam yang membawa gugus amino bebas. Amoksisilin termasuk keluarga penisilin dengan kelebihan pada absorpsinya yang lebih baik dan kadar dalam darah yang lebih tinggi (Brooks, 2007).

  Antibiotik golongan ini dapat teraktivasi melawan bakteri bila terikat di reseptor PBP(Penicillin Binding Protein). Setelah terikat, sintesis peptidoglikan dihambat bersamaan dengan dihambatnya transpeptidase akhir. Adanya inaktivasi inhibitor enzim autolitik pada dinding sel akan menyebabkan perlahan-lahan dinding sel bakteri akan lisis dan menyebabkan kematian bakteri (Brooks, 2007).

  Resistensi antimikroba adalah kemampuan dari mikroba, yaitu bakteri, virus, parasit, atau fungi, untuk tumbuh dengan adanya senyawa kimia (obat) yang secara normal akan membunuh atau menurunkan pertumbuhannya. Bakteri non- resisten berkembang biak dan adanya pemberian obat (senyawa antimikroba)

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  kelompok non-resisten, tetapi dengan adanya pemberian obat tidak menyebabkan bakteri mati dan tetap terus berkembang biak (NIAID, 2009).

  Resistensi bakteri terhadap amoksisilin (dan golongan penisilin lainnya) terbagi dalam beberapa kategori, antara lain :

  1. Produksi β-laktamase yang dapat menghancurkan cincin β-laktam amoksisilin.

  2. Ketiadaan reseptor PBP/perubahan reseptor PBP sehingga amoksisilin tidak dapat diikat.

  3. Aktivasi enzim autolitik dinding sel gagal sehingga hanya terjadi inhibisi tanpa membunuh bakteri.

  4. Tidak dapat menyintesis peptidoglikan karena sintesis dinding sel aktif diperlukan untuk kerja amoksisilin (Brooks, 2007).

  Bakteri yang terbukti resisten terhadap golongan penisilin adalah genus

  

Staphylococcus yang termasuk kategori satu. Staphylococcus dapat menghasilkan

  β-laktamase sehingga pemberian antibiotik golongan penisilin sudah tidak efektif pada beberapa strain (Brooks, 2007).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

C. Buah Manggis (Garcinia mangostana L.)

  Kedudukan tanaman manggis dalam sistematika (taksonomi) tumbuhan berdasarkan Rukmana (2003) diklasifikasikan sebagai berikut.

  Kingdom : Plantae (tumbuh-tumbuhan) Divisi : Spermatophyta (tumbuhan berbiji) Subdivisi : Angiospermae (berbiji tertutup) Kelas : Dicotyledonae (biji berkeping dua) Ordo : Guttiferales Famili : Guttiferae Genus : Garcinia L.

  Spesies : Garcinia mangostana L.

  

Gambar 1. Buah manggis (Garcinia mangostana L.)

  Manggis merupakan pohon hutan. Tinggi dapat mencapai kurang lebih 20 meter. Pertumbuhannya lambat, daun muda muncul 1-2 kali setahun sebab akar sampingnya hanya sedikit. Tanaman manggis dapat hidup pada dataran rendah hingga ketinggian 600 m dpl dengan tipe iklim basah. Kulit kayu dapat digunakan untuk ramuan obat tradisional penyakit perut. Kulit buah mengandung zat kimia

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  Senyawa hasil isolasi G. mangostana menunjukkan ada 14 senyawa kandungan, antara lain : 8-hydroxycudraxanthone, mangostingone [7-methoxy-2- (3-methyl-2-butenyl)-8-(3-methyl-2-oxo-3-butenyl)-1, 3, 6-trihydroxyxanthone],

  cudraxanthone

  G, 8-deoxygartanin, garcimangosone B, garcinone D, garcinone

  E, gartanin , 1-isomangostin, α-mangostin, γ-mangostin, mangostinone , smeathxanthone A dan tovophyllin (Jung, 2006).

D. Ekstraksi

  Ekstraksi merupakan suatu upaya pemisahan senyawa yang diinginkan dari suatu campuran penyusun yang lainnya. Hal yang paling sering dilakukan adalah menggunakan pelarut, tetapi bisa juga dengan cara mekanis. Cara mekanis ini dilakukan dengan pemerasan, atau memberikan gaya tertentu agar senyawa yang diinginkan tadi dapat terpisah dari campurannya (Pudjaatmaka, 2002).

  Menurut Harborne (cit. Dewi, 2010), pada umumnya zat terekstrak yang diinginkan bersifat tidak larut atau larut sedikit dalam suatu pelarut tetapi akan lebih mudah larut dalam pelarut lain. Metode ekstraksi yang tepat akan menghasilkan rendemen yang lebih banyak dan ditentukan oleh sifat kandungan senyawa dan kandungan air dari bahan yang akan diekstrak.

  Maserasi termasuk salah satu metode ekstraksi yang dilakukan dengan merendam bagian tumbuhan dalam pelarut yang sesuai. Perendaman dilakukan selama periode waktu tertentu, mulai dari beberapa jam hingga tiga minggu, sampai senyawa/bagian terlarut dalam pelarut yang digunakan (D’Amelio, 1999).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

E. Uji Aktivitas Antibakteri

  Penentuan sensitivitas bakteri patogen terhadap obat-obatan antimikroba dapat dilakukan dengan salah satu dari dua metode utama : dilusi atau difusi.

  Metode-metode tersebut dapat dilakukan untuk memperkirakan potensi antibiotik dalam sampel maupun sensitivitas mikroorganisme dengan menggunakan organisme uji standar yang tepat dan sampel obat tertentu untuk perbandingan (Brooks, 2007).

  Teknik difusi cakram digunakan oleh sebagian besar peneliti untuk tes rutin aktivitas antimikroba. Sebuah cakram kertas saring diberikan suatu antimikroba dengan konsentrasi dan volume tertentu, dan diletakkan di media agar yang telah diinokulasikan organisme uji. Antimikroba berdifusi dari cakram ke media, lalu menghambat pertumbuhan organisme uji sejauh jarak dari cakram yang menunjukkan sensitivitas organisme uji. Strain yang rentan terhadap antimikroba tersebut dihambat sejauh jarak tertentu dari cakram, sedangkan yang resisten memiliki zona hambat yang lebih kecil (Cheesbrough,2006).

  Teknik dilusi dapat mengukur Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Teknik dilusi dikerjakan dengan cara menambahkan senyawa antimikroba ke dalam media agar atau kaldu (broth). Organisme uji yang telah distandarisasi kemudian ditambahkan. Setelah inkubasi selama satu hari, KHM dinyatakan sebagai konsentrasi terendah antimikroba diperlukan untuk mencegah pertumbuhan yang terlihat sedangkan KBM adalah konsentrasi terendah dari antimikroba yang dapat membunuh bakteri (Cheesbrough,2006).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  Bakteri hanya akan tumbuh di area di mana konsentrasi antibiotik sangat rendah untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Pada akhir masa inkubasi, plate diperiksa adanya inhibisi dari pertumbuhan bakteri dengan mengukur diameter zona hambat di sekeliling kertas cakram (paper disk). Secara umum, zona hambat yang lebih besar mengindikasikan senyawa antibiotik yang lebih aktif melawan bakteri (Lee, 2009).

F. Landasan Teori

  Staphylococcus aureus merupakan penyebab infeksi yang cukup banyak

  dan mendapat perhatian khusus di dunia. S. aureus ini membawa pada suatu insidensi penyakit yang cukup banyak dan mematikan. Penyakit infeksi yang ditimbulkannya antara lain infeksi kulit, diare, masalah pencernaan dan sampai pneumonia. Titik berat pada S. aureus adalah karakteristiknya yang memiliki penisilinase dapat menimbulkan suatu mekanisme resistensi terhadap obat antimikroba lini pertama, khususnya antibiotik golongan β-laktam.

  Manggis telah banyak diteliti sebagai suatu pengobatan yang cukup ampuh melawan berbagai penyakit, salah satunya antibakteri. Banyak penelitian menyebutkan bahwa manggis memiliki aktivitas antibakteri melawan beberapa penyakit, termasuk pada bakteri S. aureus. Manggis potensial untuk dikembangkan sebagai agen antibakteri.

  Pengujian aktivitas antibakteri dilihat data zona hambat yang diperoleh dari pengujian secara difusi sumuran terhadap bakteri S. aureus yang sudah dibuat resisten terhadap antibiotik amoksisilin dengan konsentrasi gradual.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

G. Hipotesis

  1. Kadar hambat minimum (KHM) bakteri Staphylococcus aureus meningkat setelah perlakuan resistensi terhadap amoksisilin.

  2. Fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus resisten amoksisilin.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan

  rancangan penelitian acak lengkap pola satu arah. Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

B. Variabel dan Definisi Operasional

1. Variabel penelitian

  a. Variabel bebas : bakteri S. aureus sebelum dan sesudah perlakuan resistensi amoksisilin dan berbagai kadar fraksi n-heksana, kloroform serta etanol kulit buah manggis (%).

  b. Variabel tergantung : KHM (µg/mL) dan diameter zona hambat pertumbuhan Staphylococcus aureus (mm) setelah perlakuan resistensi.

  c. Variabel pengacau terkendali, yaitu : media penanaman bakteri (MHA), suhu inkubasi (37 C) dan lama inkubasi (24 jam), kepadatan suspensi

  8

  bakteri uji setara dengan larutan standar Mc Farland 0,5 (1,5.10 CFU/mL), diameter sumuran (8 mm).

  d. Variabel pengacau tak terkendali : umur tanaman dan waktu panen tanaman.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

2. Definisi operasional

  a. Fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis adalah fraksi yang dihasilkan dari proses maserasi dengan ketiga pelarut secara berurutan yang berasal dari kulit buah tanaman manggis.

  b. Bakteri resisten adalah bakteri Staphylococcus aureus yang masih bertahan hidup setelah dikulturkan beberapa kali selama satu bulan pada media mengandung amoksisilin di bawah konsentrasi KHM secara adaptif gradual.

  c. Kontrol pelarut dalam penelitian ini adalah DMSO 100% (fraksi n- heksana dan kloroform) dan aquadest steril (fraksi etanol) yang digunakan sebagai pelarut ekstrak serta pembanding.

  d. KHM (Kadar Hambat Minimal) adalah konsentrasi amoksisilin terendah yang masih dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus resisten amoksisilin.

  e. Zona hambat adalah daerah yang menunjukkan adanya penurunan pertumbuhan atau tidak adanya pertumbuhan bakteri Staphylococcus

  aureus di sekitar lubang sumuran, menunjukkan kepekaan mikroba

  terhadap ketiga fraksi kulit buah manggis dan kecepatan berdifusi ketiga fraksi dalam media.

  f. Metode difusi secara sumuran adalah metode yang digunakan untuk mengukur daya hambat ketiga fraksi terhadap Staphylococcus aureus dengan cara mengukur zona hambat pada sekitar sumuran.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

C. Bahan Penelitian

  Kulit buah tanaman manggis diperoleh dari Manukan, Sleman, Yogyakarta, n-heksana (PT. Bratachem), kloroform (PT. Bratachem), etanol 70% (CV. Progo Mulyo), kultur murni Staphylococcus aureus yang didapat dari Balai Kesehatan Yogyakarta, media MHA (Mueller Hinton Agar) dan MHB (Mueller

  8 Hinton Broth ) dari Merck, larutan standar Mc Farland 0,5 (1,5.10 CFU/mL),

  aquadest steril (PT. Otsuka), dimetil sulfoksida (DMSO) dari Merck, amoksisilin injeksi (PT. Phapros) dan cefotaxime injeksi (PT. Phapros).

D. Alat Penelitian

  Oven (Memmert), incubator (Heraeus), autoklaf, Microbiological Safety

Cabinet, shaker (Optima), rotary vacuum evaporator (Buchi Labortechnik AG

  CH-9230), waterbath (Memmert), jangka sorong (Vernier Caliper), timbangan digital, ayakan, kertas saring, tabung reaksi, cawan petri, jarum ose, vortex, pelubang sumuran, mikropipet (Socorex), tabung eppendorf, alat-alat gelas (PYREX, dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta).

E. Tata Cara Penelitian

1. Pengumpulan bahan kulit buah manggis Kulit buah manggis diperoleh dari daerah Manukan, Sleman, Yogyakarta.

  Kriteria kulit buah yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit buah dari buah yang telah matang pohon berwarna merah keunguan.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  2. Pembuatan serbuk simplisia kulit buah manggis

  Kulit buah manggis yang telah dikumpulkan dicuci bersih, kemudian dikeringkan sampai kering dengan ciri kulit buah menjadi keras dan terasa dingin.

  Setelah itu kulit buah diserbuk menggunakan penggiling kopi dan diayak menggunakan ayakan nomor 18.

  3. Pembuatan fraksi n-heksana, kloroform dan etanol kulit buah manggis

  Sebanyak 25 g serbuk kulit buah manggis dimasukkan labu Erlenmeyer dan direndam dalam n-heksana sampai semua serbuk terendam dan terbasahi.

  Setelah serbuk terbasahi, n-heksana ditambahkan sampai setinggi ±1,5-2 cm dari permukaan atas serbuk. Kemudian digojog dengan shaker pada suhu kamar selama 3 jam dengan putaran 160 rpm dan disaring menggunakan kertas saring dan corong Buchner dengan bantuan pompa vakum. Filtrat disimpan sebagai fraksi n-heksana. Proses ekstraksi diulang kembali (remaserasi) sampai semua senyawa terekstrak ditandai dengan pelarut yang mendekati bening. Serbuk kulit manggis dikeringanginkan dari pelarut n-heksana. Setelah kering, serbuk dimasukkan kembali dalam labu Erlenmeyer dan direndam dengan kloroform sampai terbasahi dan terendam. Setelah serbuk terbasahi, kloroform ditambahkan sampai setinggi ±1,5-2 cm dari permukaan atas serbuk. Kemudian digojog dengan

  

shaker pada suhu kamar selama 3 jam dengan putaran 160 rpm dan disaring

menggunakan kertas saring dan corong Burchner dengan bantuan pompa vakum.

  Filtrat disimpan sebagai fraksi kloroform. Proses ekstraksi diulang kembali

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  mendekati bening. Serbuk kulit manggis dikeringanginkan dari pelarut kloroform. Setelah kering, serbuk dimasukkan kembali dalam labu Erlenmeyer dan direndam dengan etanol 70% sampai terbasahi dan terendam. Setelah serbuk terbasahi, etanol 70% ditambahkan sampai setinggi ±1,5-2 cm dari permukaan atas serbuk. Kemudian digojog dengan shaker pada suhu kamar selama 3 jam dengan putaran 160 rpm dan disaring menggunakan kertas saring dan corong Buchner dengan bantuan pompa vakum. Filtrat disimpan sebagai fraksi etanol.

  

Gambar 2. Skema fraksinasi serbuk kulit manggis

  Ketiga filtrat kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan vacuum rotary

  

evaporator sampai berkurang jumlah pelarutnya dengan suhu 50 C untuk fraksi n-

  heksana dan kloroform, 60 C untuk fraksi etanol. Evaporasi kemudian dilanjutkan menggunakan waterbath dengan suhu antara 60-70 C sampai diperoleh bobot

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  tetap, yaitu selisih penimbangan dari dua kali penimbangan berturut-turut setelah pemanasan di atas waterbath selama satu jam tidak lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang.

  

4. Penentuan nilai kadar hambat minimum (KHM) Staphylococcus aureus

sebelum dan sesudah perlakuan resistensi dengan metode dilusi padat

  Media MHA steril cair suhu ± 40-50 C dengan volume tertentu, sesuai konsentrasi akhir amoksisilin yang diinginkan, ditambahkan sejumlah amoksisilin yang telah dilarutkan dalam aquadest steril dan digojog. Kemudian ditambahkan 1 mL suspensi bakteri uji yang telah disetarakan dengan larutan standar Mc Farland 0,5 dan digojog. Selanjutnya, dituang dalam cawan petri steril secara pour plate dan diinkubasi selama 24 jam secara terbalik pada suhu 37

  C. Pertumbuhan bakteri ditandai dengan keruhnya media. Nilai KHM dapat ditentukan dengan membandingkan kejernihan media yang ditambahkan amoksisilin berbagai konsentrasi dengan kontrol media tanpa bakteri dan kontrol pertumbuhan bakteri secara visual. Media uji konsentrasi tertentu yang menunjukkan kejernihan kemudian dilakukan uji penegasan untuk meyakinkan bahwa konsentrasi tersebut adalah KHM. Uji penegasan dilakukan dengan menginokulasikan bakteri dari media uji yang jernih pada media steril yang baru secara streak plate. KHM merupakan konsentrasi terendah yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri, ditunjukkan dengan masih tumbuhnya bakteri pada bekas goresan. Kontrol media dibuat dengan cara menuangkan media MHA steril cair tanpa penambahan bakteri uji pada cawan petri steril dan dibiarkan hingga memadat. Kontrol pertumbuhan dibuat dengan menambahkan 1 mL suspensi bakteri uji pada MHA steril cair suhu

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

  ± 40-50 C dan digojog. Kemudian dituang ke dalam cawan petri steril secara pour plate .

  

5. Pembuatan Staphylococcus aureus resisten amoksisilin dengan metode

adaptif gradual