Pemeriksaan Kadar Total Cholesterol dalam Serum dengan metoda Liebermann Burchard Danlbesi (III) Chlorida Repository - UNAIR REPOSITORY
PEMERIKSAAN KADAR TOTAL CHOLESTEROL DAL AM SERUM DENGAH METODA LIEBERMANH HJRCHARD DANLBESI<III) CHLORIDA
SKRIPSI DIHJAT UNTUK MEMENUHI SYARAT-SYARAT MENCAPAI GELAR SARJANA FAfMASl PADA FAKULTAS FAi&SASl
UNIVERSITAS AIRLAHGGA 1978
oleh
MUCHLIS DAEMAWAN 306 F.F.
ADLN - Airlangga Digital Library Network
ADLN - Airlangga Digital Library Network
KATA PENGANTAR
Dengan nama Allah Yang Maha Pengasih dan ^aha Pe- nyayang, dengan memanjatkan puji syukur kehadirat fuhan- Yang Maha Esa atas taufiq dan hidayahnya, maka selesai * lah tuges skripsi yang diberikan kepada kami.
Dalam menyelesaikan tugas skripsi ini telah banyak bantuan dan budi baik yang kami terima dari berbagai pihak* Rasa terima kaslh kami ucapkan kepada Almamater kami, -
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga yang telah mendi- dik kami selama Ini.
! Pada kesempatan ini perkenankanlah kami menyampai 1 "I kafi rasa terima kasih dan penghargaan yang se-besar-besar nya kepada pembimbing kami dr*S.P* Edljanto dari bagian**
Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga yang dengan rela hatl telah membimbing kami secara sekaa ma dan memberikan kesempatan yang seluas-luasnya dalam * menggunakan segala fasilitas yang ada pada Laboratorium- Patologl Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Airlang- ga.
Ucapan terima kasih juga kami sampaikan kepada - Bapak &jr*FX Budhianto^ Suhadi, Bapak dr.Siswanto Darmudi- serta seluruh Staff den karyawan bagian Patologi Klinik* Fakultas Ke&okteran Universitas Airlangga yang telah ba^ nyak membantu dalam penjxisunan skripsi ini.. ill
ADLN - Airlangga Digital Library Network
Tele lupa pula kami ucapksn terima kasitx kami kepa- da rekan-rekan mahasiswa serto pthak-pihak loin yang tak dapat koml sebutkan dalara kesempatan ini, yang telah ba* nyak membantu dalara penyusunan skripsi Ini*
Semoga Tuhan Xeng Haha Esa cnelimpahkan rakhraadNya kepada Bapak-Bapak, Ibu-Ibu ssrta rekan-rekan samua seau al dengan araal balk yang teleh diberikan kepada kaai%. Akhirnya kepada Panitis Skripsi yang teleh memeriksa dan menerima skripsi ini, kami ueapkan terima kasih*
Sebagai akhir kata kami berharap semoga skripsi » ini ada pula monf aafcnya Amin»; Surabaya# akhir Mei
1970*
Penyusun*
iv
D4FIAR ISI I Halaman
KA$A PIKGAKTAH .......... ...... Ill
DAF3PAR ISI ............. ............... ........ .. v DAFTAI^ TABEL |Mi i H m • M i • M4 i i i t i • t « « i • H i m t i m ViHil DAFTjlP GAMBAH i>X DAFSAB Xij^PXHAK # # *;* • * • • « . « « * • « t i n • « * » • * • * • » • • • * • • K
PMDAHOliUAR ........ .................. 1 B A B :
X * TXN*J AU AN PU5TAKA I* * * • ■• i •
6 1« Cholesterol dalam darah •
6 2* Motoda pemeriksaan kadar total choleste- rol dalam ssnliB *« * Q a* Motoda iilebermann Burchard ..».**»*** 8
Motoda
B o s l ( X i l )
Chlorids -# • * • # * * * . • 10 Xi* Metoda Kerja •*«#♦*«•• ***•••*!**
12 1« Bah an penelitian **«*••*««•»•»•*****••••• 12
2» Pemeriksaan kadar ............ 13 3* a.Pemerlksaan kadar total cholesterol ~ dalam serum dengan motoda Liebermann -
Burchard • #*..«*«***** ****.•**•*****« * 14 fc.Alat yang dipergunakan 14 c .Pembuatan reagencia . ........... *«*« Ik d.Prosedur pemeriksaan kadar total cho ■- lestorol dalam serum kontrol **«•«••** 15
ADLN - Airlangga Digital Library Network
ADLN - Airlangga Digital Library Network
B A B Halaman
©•Proeedur pemeriksaan kadar total cholesterol dalam serum sampel **•.«*»•*.... **•..... 16 f* a*Pemeriksaan kadar total cholesterol dalam so nun dengan metoda Besi(III) Chlorlda •»*«»•• 16 b.Alat yang dipergunakan • *...... 17 caPembuatan reagensia ... ............. 1? d «Pembuatan kurva absorbs! terhadap/Ranjang ge lombang *.*«•** - .. * .••*.***»*«*,*.. * * . 16
©.Pembuatan kurva baku **"••****.••'.* i • * • 19 f*Prosedur pemeriksaan kadar total cholesterol
20 dalam serum kontrol •.«*<•••*« .
g.Prosedur pemeriksaan kadar total cholesterol dalam serum compel « 21 HASIL P35ECOBAAK ............... 22 XIX. L. Basil pengamatan dari metoda Liebcrmann Bur - chard ....................... 22 a. Pemeriksaan kadar total cholesterol dalam - serum kontrol 22 b* Pemeriksaan kadar total cholesterol dalam * serum sarapel ......... ***** 25
2* Hasil pengamatan dari metoda Besi{III) Chlo - rida . ............. *........ 25 a* Pembuatan kurva absorbs! terhadap pancang - gelonbang • •••••*•••**«•< •***»••*•*«••**«•• 25
vi
ADLN - Airlangga Digital Library Network
B A B : Halaman
b * Pembuatan kurva baku *«.*...*<.... 2?
X. Perhitungan adanya korclaci linlair(Pear -*
80
30
n) antara koneentrasi dengan absorbs! •• 2* Persamaan garis regressi linialr ......... 33
c. Pemeriksaan kadar total cholesterol dalam se- rum kontrol .«•*••«** * **•»*«« #«. *. **«*#.»«»• . 34 d* Pemeriksaan kadar total cholesterol,dalam se- rum sanpel *. * ... ...... ........... ...... 35
3* Analisa hasil-hasil yang didapat dari dua me- toda k * * * * * * . * . . , . * * 3 9 1« Hasil pengamatan pengamatan dari dua meto- da terhadap serum kontrol .*•*.. 39 2*a«Hasil pengamatan-pengamatan dari dua me * toda terhadap serura eompel
40
.*»•««*.****»• b.Paxred **t** test
40
- ««..#..#•*«*******«•**«•
IV* PEMBICARAAN. .•..*•*«*•#•» ..***.•*• *«•*■<•••••**•• 48 V. KESIMPULAN.... ................... .........
49 VI* saran-saran... ............ .......
30 VII. hihgkasab ......... ........ .... ............ 51
LAMPIRAN ..... ............ *..... ** ... 45 DAJFTAR PUSTAKA ...... ......... ............. ...... 53
Vii
- »**♦•»##*»*«**«*»* 22 21« Htail jp*rhltun£«ifc kftdtar fcafcal Cholo*fc**
21 ? V» Dtftm tcMitJk p « ssb u ktt« n AftMtJPft &$*•«&•*£ *
dua c»to6« *»*•••**••***«**»*•**#****«* /+1 «ill
XX* fia a ll r a t a - r a f c a t i t p a a a ^ a X a a r u a d a H *
« i {X X I ) C h l o r i d a • • * # * * • • • # * * « * * * # * # * * 3 7
9X11* Hmmil p * r h l t i m s * n feadar CtioXaafa** roi dalasft 'sampell 6«rl ata*o6a U#»
3 5
&&% 6*lm aarwkontrol d«ri &*te£« %»i ( X I X } C h i o r i C *
VXX* &4t*i& jjarkittttt^ett fecfte* total Cfcoieafca*
&*a«#l p#di« $p#te &3*etfo$os&trt ********** 33
# r a *
1
Xhifca «m tufc m m fUk Qxm p a r a * » * a n £
50 T im
<mt*ris to»*e»tr**l €*oe*!» *b*or?>»i pad* «*•**•**#•••«*•••**•••
{111
(XIX) Chlorlfi. ............ ......... 26 If*...... p w y p m z t m , nll«i &&#&rt>st $+rhft « d a p f a m j t t a t r a f t i « a a u r u f c w a f c a d o B » « l
d®l> psnjtn* 6©rl «#*©£* J3**i-
t * r b e *
&U«lftb«o*frai
33 I I I * f t a t i X t m r i g * » * t * n
4 « * i u t t o e * * Li « fr « r w ft s n Bu r e t i a r r t
1
r&X <Ul*ss ******** fs&mpei
Lftobtfmro «urchard
m l dti** i#S’Ua kontrol doarl mtatLQ *
I# K#*U U*6*r fc©t«&
Urnlmm
M W V m f A S S L i
ADLN - Airlangga Digital Library Network
- ChlOFldi *M«M<«««t*«**«t*lMt«#*M«ll
- 1
- »**♦•»##*»*«**«*»* 22 21« Htail jp*rhltun£«ifc kftdtar fcafcal Cholo*fc**
- ChlOFldi *M«M<«««t*«**«t*lMt«#*M«ll
- 1
<mt*ris to»*e»tr**l €*oe*!» *b*or?>»i pad* «*•**•**#•••«*•••**•••
dua c»to6« *»*•••**••***«**»*•**#****«* /+1 «ill
XX* fia a ll r a t a - r a f c a t i t p a a a ^ a X a a r u a d a H *
« i {X X I ) C h l o r i d a • • * # * * • • • # * * « * * * # * # * * 3 7
9X11* Hmmil p * r h l t i m s * n feadar CtioXaafa** roi dalasft 'sampell 6«rl ata*o6a U#»
3 5
&&% 6*lm aarwkontrol d«ri &*te£« %»i ( X I X } C h i o r i C *
VXX* &4t*i& jjarkittttt^ett fecfte* total Cfcoieafca*
&*a«#l p#di« $p#te &3*etfo$os&trt ********** 33
# r a *
1
Xhifca «m tufc m m fUk Qxm p a r a * » * a n £
50 T im
21 ? V» Dtftm tcMitJk p « ssb u ktt« n AftMtJPft &$*•«&•*£ *
M W V m f A S S L i
{111
(XIX) Chlorlfi. ............ ......... 26 If*...... p w y p m z t m , nll«i &&#&rt>st $+rhft « d a p f a m j t t a t r a f t i « a a u r u f c w a f c a d o B » « l
d®l> psnjtn* 6©rl «#*©£* J3**i-
t * r b e *
&U«lftb«o*frai
33 I I I * f t a t i X t m r i g * » * t * n
4 « * i u t t o e * * Li « fr « r w ft s n Bu r e t i a r r t
1
r&X <Ul*ss ******** fs&mpei
Lftobtfmro «urchard
m l dti** i#S’Ua kontrol doarl mtatLQ *
I# K#*U U*6*r fc©t«&
Urnlmm
ADLN - Airlangga Digital Library Network
ADLN - Airlangga Digital Library Network
M f T M &AIBABOemfecr t itelrcaan 1* Xtirva rat let sbsorbei tsrfceda# jsftD^ang #© ~ lonbang derl Chole&tftrol fcansefttreet XQOmj/
10 0 ol{ 200 300 «g/iOQ ml ..... 28 mg/lQQ&ti
2. £urva tiilsl ohe&rbsi ter&etiep koneentraet-
^ftri Chaleatdvol» podo ptnjang goloabong - §90 Cta 51
3. Kurva bsfeta <5»rl psraeseaeR gori® regreesi -
y # 0f00262 x ~ 0,012 ............. . 36
£x
DAFfAR MIHMg
lampiran i Haldsssn U
Mfltrtboel *tw ..... ....... ».*-.... 45 2* Sebel £feooritl«si*l valuoe of correlation * « coefficient {3?* 0,05) .................... 4 7
ADLN - Airlangga Digital Library Network
ADLN - Airlangga Digital Library Network
1 PENDAHULUAN
Cholesterol akhir-akhir ini banyak dibicarakan di- masyarakat luas dinegara kita* Didalam kesehatan manusia menurut beberapa penyelidik dinya- takan adanya hubungan yang erat antara type hyperlipoprote- inemia dengan konsentrasi cholesterol dal am darah dimaria
N bagai manifestasi dari penyakit diabetes mellitusjhypothy - roidism;obstruktive biliaris;nephritis;pangkreatitis(l,10
20 ).
Dan oleh beberapa penyelidik lainnya terdapat bukti-bukti yang menyokong adanya sangkut paut antara lemak darah dengan penyakit arteriosclerosis(20).
Dengan mengingat hal-hal tersebut diatas penting sekali terutama dokter untuk mengetahui secara tepat dan cepat kadar total cholesterol dalam darah seorang penderi- ta sehingga didalam menentukan diagnosa serta terapinya da- pat secara tepat dan memuaskan. 4uga sudah hampir merupakan hal yang rutin bila seorang pen derita menanyakan berapa tinggi kadar cholesterolnya untuk mencegah hal-hal yang tak diinginkan bterhubungandengan kese- * hatan tubuhnya.
Untuk membantu pemeriksaan-pemeriksaan rutin da- lam suatu laboratorium klinik sangatlah diinginkan suatu cara pemeriksaan kadar total cholesterol dalam serum darah
2 yang cepat serta masih mempunyai precision(ketelitian) yang baik(3)*
Suatu pemeriksaan dikatakan mempunyai precision(kete-r litian) yang baik apabila hasil pemeriksaan tersebut dilakukan berulang-ulang mempunyai selisih yang kecil*
Dalam kepustakaan banyak kita jumpai cara pe- meriksaan kadar total cholesterol dalam serum(3»6»7» 10,14,16,20) dan pada umumnya fase-fase analisanya
«
sbb: ^s I^strj&si j:
Ekstraksi cholesterol' bebas maupun dalam ben- tuk ester dengan pelarut-pelarut organik misalnyas chloroform
5 asam aeetat glasialjiso-
propanol; Ekstraksi dengan pelarut organik campuran mi-
t
salnya ; chloroform-H^SO^pekat;ethyl asetat - etanoljchlorof®"®^^11©!» etanol-eter« 11:Sagoni fikasi£
Saponifikasi dari cholesterol ester dengan KOH dalam alkohol panas,kemudian cholesterol bebasnya dipresipitasikan baru hasil presipi- tatnya diekstraksi dengan pelarut organik ter- tentu selanjutnya baru direaksikan dengan re- agen warna
ADLN - Airlangga Digital Library Network
ADLN - Airlangga Digital Library Network
III:Isolasi : Baik cholesterol bebas maupun ester dapat dii- solasi dengan cara : ekstraksi ci presipitasi dengan suatu zat tertentu ; kromatografi kolom
5 Penentuan titik akhir ini dapat pula dibagi-
bagi berdasarkan cara penentuannya yaitu3 l*secara gravlmetri 2*secara tetrasi
3«secara kolorimetri ^•secara spektrofotometri*
Pemeriksaan kadar cholesterol paling sering dilakukan secara spektrofotometri dengan mempergunakan metoda reaksi warna Liebermann Burchard (4,6,7*8) . Kemudian pada akhir-akhir ini telah dimulai dipakai metoda reaksi warna. Besi(III)Chlorida dalam lingkungan HgSO^pekat (3,6,10*16,19#20) .
Dalam pemeriksaan kadar total cholesterol dalam serum dari dua metoda tersebut pemeriksaannya, dapat secara pemeriksaan langsung dan dapat juga se- cara tidak langsung*
Pemeriksaan langsung ialah,: pemeriksaan kadar total cholesterol dilakukan tanpa ekstraksi ataupun presi- pitasi dari protein serum*
ADLN - Airlangga Digital Library Network
Pemeriksaan tak langeung ialah ; pemeriksaan kadar to* ted cholectorol dilakuka» dongan ©katrakoi ataupun pre alpltaei dari protein corunj * Ponoriknaun secara epoktro £otoaotri kadar total » cholcetorol dalem aorum dari penelitian kami ini*kaai~ memilih motoda roakoi warn kiobomonn Barchord dari * Herckoteot kit (4) dan metoda roakcl trama Booi(III) ~ Chlorida (19) dari S5ak«B* Metoda roaksl warno Lioboroonn Burehard dari ltor- koteot kit ini spemeriksaannya oecara langsung; caranya nudah ; banyak
dipergunakan dHaboratorium-iafeoratoriua klinik ; tota pl harpanya ralativ aafaal • Sedangkan netoda roakci warna Bosi{XXI) Chlorida* dan Sak*B* ini i pmoz&keaannya cocnra tak lancoung waktu pcraerlkeaan$ rolativ oingkat j barganya rclatlv mwah * Balea ponolitiaa kami inl^kacl Ingin aengotahui * apakah kodua notodo tersobut Gccurccy(kotopatamya) • fcaiiv'tidak baik * Untuk makeud toroobut nacin^nacinc notoda kaai*»
lokukan penoritoaan torhadap eorun kontrol yaitu n cm «*
porgunaitan "lilptd Control*1 Procilipj Bochringer Hannhoin
Boct Gojraaany *
ADLN - Airlangga Digital Library Network
Serum kontrol tersebut mempunyai harga rata-rata choles- terol (x) & 133 mg% dan range pemeriksaan s 110 ** 166 rag# ( 1*2 S D ) *
Serum kontrol ialah suatu serum yang telah diperiksa * berulang-ulang kali kadar total cholesterolnya dengan - pemeriksaan yang telltt dan saksaraa dari metoda dan alat-alat yang terbaik sehingga menghasilkan harga rata- rata total cholesterol(x) dalam serum tersebut dengan - batas-batas pemeriksaan tertentu ( x * 2 S D ) *
Apabila hasil rata-rata pemeriksaan masing-masing* metoda tersebut sama/mendekati harga rata-rata dari se - rrnn kontrol dan juga memenuhi range pemeriksaan *maka - metoda tersebut accuracy(ketepatannya) baik *
Sebaliknya apabila hasil rata-rata pemeriksaan masing - macing metoda tersebut jauh dari harga rata-rata serum - kontrol dan juga tidak memenuhi range pemeriksaan* maka- metoda tersebut accuracy(ketepatannya) tidak baik •
Selanjutnya kami melagukan pemeriksaan kadar to - tal cholesterol dalam serum pasien (penderita) dengan - kedua motoda tersebut s kemudian kami ingin mencoba me ** ngetahui preclsion(ketelitlan) dari kedua motoda terse - but •