Uji Aktivitas Antioksidan Pemerangkapan H2O2 dan Uji Total Fenol Pada Fraksi Heksan Daun Sirih (Piper betle L.).

ABSTRAK
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PEMERANGKAPAN H2O2
DAN UJI TOTAL FENOL FRAKSI HEKSAN
DAUN SIRIH (Piper betle L.)

I Kadek A. M, 2011;

Pembimbing I : Teresa Liliana W., S.Si., M.Kes
Pembimbing II: Sri Nadya J. Saanin, dr., M.Kes

Dampak reaktivitas radikal bebas bermacam-macam, mulai dari kerusakan sel
atau jaringan, penyakit autoimun, penyakit degeneratif, hingga kanker. Sistem
antioksidan dalam tubuh manusia memiliki keterbatasan sehingga tidak selamanya
berjalan dengan baik, sementara pembentukan radikal bebas berlangsung terusmenerus. Untuk itulah manusia membutuhkan antioksidan alami seperti yang
terkandung dalam tumbuh-tumbuhan.
Tujuan penelitian untuk mengetahui aktivitas antioksidan fraksi heksan daun
sirih dengan uji pemerangkapan hidrogen peroksida (H2O2) dan uji total fenol.
Desain penelitian eksperimental laboratorik secara in vitro dengan Rancangan
Acak Lengkap (RAL), Pada uji pemerangkapan hidrogen peroksida digunakan
fraksi heksan daun sirih dibandingkan epigalokatekin galat (EGCG) pada 10 level
konsentrasi. Data yang dianalis adalah persentase uji pemerangkapan H2O2

persentase uji total fenol. Analisis data menggunakan ANOVA dilanjutkan Post
Hoc Test metode Tukey dengan tingkat kepercayaan 95%. Sedangkan pada uji
total fenol ditampilkan secara deskriptif menggunakan ekstrak dan fraksi daun
sirih dibandingkan dengan standar EGCG. Berdasarkan nilai absorbansi standar
EGCG dicari persamaan regresi y = a + bx.
Fraksi heksan memiliki aktivitas antioksidan pemerangkapan hidrogen
peroksida dibandingkan dengan EGCG tertinggi pada konsentrasi 19,53 g/mL
sebesar 86,68 %, sedangkan fraksi heksan memiliki total fenol sebesar 215,58
µg/mg ekuivalen EGCG.
Kesimpulan penelitian ini ekstrak dan fraksi daun sirih memiliki aktivitas
antioksidan.
Kata kunci: daun sirih, antioksidan, radikal bebas, H2O2, total fenol

iv

ABSTRACT
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST BY HYDROGEN PEROXIDE (H2O2)
SCAVENGING AND PHENOLIC TOTAL ASSAY IN HEXAN FRACTION
OF BETEL LEAF (Piper betle L.)

I Kadek A. M, 2011;

1st Tutor : Teresa Liliana W., S.Si., M.Kes
2nd Tutor : Sri Nadya J. Saanin, dr., M.Kes

The effect of free radical reactivity of compounds vary, ranging from cell or
tissue damage, autoimmune diseases, degenerative diseases, and cancer.
Antioxidant systems in the human body has limitations that does not run properly,
while the formation of free radicals takes place continuously . For that reason
humans need such as natural antioxidants contained in plants.

This research aims to determine the antioxidant activity of extracts and
fractions of betel leaf with a hydogen peroxide (H2O2) scavenging activity and
total phenol assay.
This research used design experimental laboratory in vitro with a completely
randomized design, On the trapping of hydrogen peroxide test using fraction
hexan of betle leaf compared epigallocatechin gallate (EGCG) on 10 levels of
concentration. Data were analyzed using ANOVA followed Tukey Post Hoc Test
method with 95% confidence level. While in fenol assay shown in descriptive use
betel leaf extract and fractions compared with the standard EGCG. Based on the

standard absorbance value of EGCG sought regression equation y = a + bx.
Hexane fraction have antioxidant H202 scavenging compared EGCG the higest
scavengging at concentration 19,53 g/mL (86,68 % ), while in phenolic total assay
has phenolic total 215,58 µg/mg EGCG equivalen.
conclusions of this research extract and fraction of betel leaf has antioxidant
activity.
Keywords: betel leaf, antioxidants, free radicals, H2O2, phenolic total assay

v

DAFTAR ISI

ABSTRAK .................................................................................................................iv
ABSTACT..................................................................................................................v
KATA PENGANTAR ...............................................................................................vi
DAFTAR ISI ..............................................................................................................viii
DAFTAR TABEL ......................................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR .................................................................................................xii
DAFTAR LAMPIRAN ..............................................................................................xiii

BAB I PENDAHULUAN
1.1

Latar Belakang ...............................................................................................1

1.2

Identifikasi Masalah .......................................................................................2

1.3

Maksud dan Tujuan ........................................................................................2

1.4

Manfaat Penelitian .........................................................................................3

1.5

Kerangka Pemikiran .......................................................................................3

1.6

Hipotesis .........................................................................................................4

1.7

Metodologi .....................................................................................................4

1.8

Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................................5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1

Radikal Bebas.................................................................................................6

2.1.1

Hidrogen Peroksida (H2O2) ............................................................................8

2.2

Antioksidan ....................................................................................................10

2.2.1

Senyawa Polifenolik.......................................................................................12

2.3

Daun Sirih ......................................................................................................14

2.3.1

Toksonomi Daun Sirih ...................................................................................14

2.3.2

Morfologi Daun Sirih .....................................................................................15

2.3.3

Kandungan Kimia Daun Sirih ........................................................................16

2.3.4

Manfaat dan Kegunaan Daun Sirih ................................................................16

viii

ix

BAB III ALAT, BAHAN DAN METODE PENELITIAN
3.1

Bahan, Alat dan Tempat Penelitian ................................................................17

3.1.1

Bahan dan Alat Penelitian ..............................................................................17

3.2

Metode Penelitian...........................................................................................17

3.1.2

Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................................17

3.2.1

Desain Penelitian............................................................................................17

3.2.2

Variabel Penelitian .........................................................................................18
3.2.2.1

Definisi Konseptional Variabel .....................................................18

3.2.2.2

Definisi Operasional Variabel .......................................................18

3.2.3

Perhitungan Besar Sampel .............................................................................19

3.2.4

Prosedur Kerja................................................................................................19
3.2.4.1 Pengumpulan Bahan Uji ....................................................................20
3.2.4.2 Pembuatan Bahan Uji.........................................................................20
3.2.4.3 Pelaksanaan Penelitian .......................................................................21
3.2.4.3.1 Uji Aktivitas Pemerangkapan H2O2 ..........................................21
3.2.4.3.2 Uji Total Fenol ..........................................................................21

3.2.5 Metode Analisis ..............................................................................................22

3.2.5.1

Hipotesis Statistik...........................................................................22

3.2.5.2

Kriteria Uji .....................................................................................22

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1

Hasil Penelitian ................................................................................................23

4.1.1 Hasil Uji Pemerangkapan H2O2 ...........................................................................................................23
4.1.2 Hasil Uji Total Fenol ........................................................................................25
4.2

Pembahasan ......................................................................................................26

4.3

Uji Hipotesis.....................................................................................................27

BAB V SIMPULAN DAN SARAN
5.1

Simpulan ..........................................................................................................28

5.1.1 Simpulan Utama ...............................................................................................28
5.1.2 Simpulan Tambahan.........................................................................................28

x

5.2

Saran.................................................................................................................28

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................30
LAMPIRAN ...............................................................................................................32
RIWAYAT HIDUP ....................................................................................................49

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1. Hasil Uji Tukey, Aktivitas Pemerangkapan H2O2 Antar Konsentrasi
pada Fraksi Heksan Daun Sirih dan EGCG Sebagai Standar ....................................24
Tabel 4.2 Hasil Uji Fenol Pada Fraksi Daun Sirih Dalam 1000 g/ml sampel .........26

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Mekanisme Kerusakan Sel dan Pertahanan Tubuh Akibat Radikal
Bebas (The ALS Society, 2000)................................................................................7
Gambar 2.2 Pemutusan Reaksi Autooksidasi oleh Senyawa Polifenol Membentuk
Produk Radikal Nonreaktif (Manach, 2004) ............................................................14
Gambar 2.3 Daun Sirih (Rose Amsil, 2011) ............................................................15
Gambar 3.1 Bagan Ekstrasi dan Fraksionasi Daun Sirih .........................................20
Gambar 4.1 Diagram Batang Pemerangkapan H2O2 Fraksi Heksan Daun sirih
Pada Berbagai Konsentrasi dan EGCG sebagai standar ..........................................23
Gambar 4.3 Persamaan Regresi Linear Standar EGCG ...........................................25

xii

DAFTAR LAMPIRAN

LAMPIRAN 1 UJI PEMERANGKAPAN H2O2 ..................................................................................32
Lampiran 1.1 Hasil Absorbansi Pemerangkapan Radikal Bebas Hidrogen
Peroksida (H2O2) Fraksi Heksan Daun Sirih dan EGCG Sebagai Standar ................32
Lampiran 1.2 Hasil Pemerangkapan Hidrogen Peroksida (H2O2) Fraksi Heksan
Daun Sirih dan EGCG Sebagai Standar .....................................................................33
Lampiran 1.3 Statistik Uji Pemerangkapan H2O2 Fraksi Heksan Daun Sirih dan
EGCG Sebagai Standar .............................................................................................................................................34
LAMPIRAN 2. UJI PEMERANGKAPAN H2O2 .................................................................................40
Lampiran 2.1 Konsentrasi dan Absorbansi Standar EGCG pada Panjang
Gelombang 760 nm pada Uji Total Fenol ..................................................................40
Lampiran 2.2 Absorbansi Fraksi Heksan Daun Sirih pada Uji Total Fenol ..............42
Lampiran 2.3 Hasil Uji Total Fenol pada Fraksi Heksan Daun Sirih ........................43
LAMPIRAN 3. DOKUMENTASI KEGIATAN .......................................................45
Lampiran 3.1 Diagram Alir Ekstraksi Dengan Metode Maserasi ..............................45
Lampiran 3.2 Diagram Alir Fraksionasi ....................................................................46
Lampiran 3.3 Diagram Alir Uji Aktivitas Antoksidan Pemerangkap H2O2 ......................47
Lampiran 3.4 Diagram alir uji total fenol ..................................................................48

xiii

LAMPIRAN

LAMPIRAN 1 UJI PEMERANGKAPAN H2O2
Lampiran 1.1 Hasil Absorbansi Pemerangkapan Radikal Bebas Hidrogen
Peroksida (H2O2) Fraksi Heksan Daun Sirih dan EGCG Sebagai Standar
Agen Antioksidan
Fraksi Daun Sirih
Heksan 1
Fraksi Daun Sirih
Heksan 2
Fraksi Daun Sirih
Heksan 3
Fraksi Daun Sirih
Heksan 4
Fraksi Daun Sirih
Heksan 5
Fraksi Daun Sirih
Heksan 6
Fraksi Daun Sirih
Heksan 7
Fraksi Daun Sirih
Heksan 8
Fraksi Daun Sirih
Heksan 9
Fraksi Daun Sirih
Heksan 10
EGCG

Absorbansi (nm)
Ulangan
1
2
3

Kons

Ratarata

312,5
g/mL
156,25
g/mL
78,125
g/mL

3,920

3,932

3,842

3,898

2.,631

2,617

2,603

2,617

1,325

1,314

1,304

1,314

39 g/mL

0,324

0,307

0,309

0,313

19,53
g/mL

0,097

0,063

0,073

0,078

9,77 g/mL

0,157

0,151

0,145

0,151

4,88 g/mL

0,277

0,.278

0,298

0,284

2,44 g/mL

0,310

0,312

0,323

0,315

1,22 g/mL

0,350

0,402

0,417

0,390

0,61 g/mL

0,398

0,406

0,411

0,405

1,22 g/mL

0,430

0,461

0,452

0,448

32

Lampiran 1.2 Hasil Pemerangkap Hidrogen Peroksida (H2O2) Fraksi Heksan
Daun Sirih dan EGCG Sebagai Standar
Agen Antioksidan
Fraksi Daun Sirih
Heksan 1
Fraksi Daun Sirih
Heksan 2
Fraksi Daun Sirih
Heksan 3
Fraksi Daun Sirih
Heksan 4
Fraksi Daun Sirih
Heksan 5
Fraksi Daun Sirih
Heksan 6
Fraksi Daun Sirih
Heksan 7
Fraksi Daun Sirih
Heksan 8
Fraksi Daun Sirih
Heksan 9
Fraksi Daun Sirih
Heksan 10
EGCG

1

CAT%
Ulangan
2

3

-572.38

-574.44

-559.01

-568.61

-351.29

-348.89

-346.48

-348.89

-127.27

-125.39

-123.67

-125.44

39 g/mL

44.43

47.34

47.00

46.26

19,53
g/mL

83.36

89.19

87.48

86.68

9,77 g/mL

73.07

74.10

75.13

74.10

4,88 g/mL

52.49

52.32

48.89

51.23

2,44 g/mL

46.83

46.48

44.60

45.97

1,22 g/mL

39.97

31.05

28.47

33.16

0,61 g/mL

31.73

30.36

29.50

30.53

1,22 g/mL

56.26

53.10

54.02

54.46

Kons
312,5
g/mL
156,25
g/mL
78,125
g/mL

33

Ratarata

Lampiran 1.3 Statistik Uji Pemerankapan H2O2 Fraksi Heksan Daun Sirih dengan
EGCG Sebagai Standar

Oneway
Descriptives
Persentase Pemerangkapan H2O2
95% Confidence
Interval for Mean
Std.
N

Mean

Std.

Lower

Upper

Deviation Error

Bound

Bound

Minimum Maximum

Heksan 312.50

3 -568.61

8.38

4.84

-589.42

-547.80

-574.44

-559.01

Heksan 156.25

3 -348.89

2.41

1.39

-354.86

-342.91

-351.29

-346.48

Heksan 78.13

3 -125.44

1.80

1.04

-129.92

-120.97

-127.27

-123.67

Heksan 39.06

3

46.26

1.59

.92

42.30

50.21

44.43

47.34

Heksan 19.53

3

86.68

3.00

1.73

79.23

94.12

83.36

89.19

Heksan 9.77

3

74.10

1.03

.59

71.54

76.66

73.07

75.13

Heksan 4.88

3

51.23

2.03

1.17

46.19

56.28

48.89

52.49

Heksan 2.44

3

45.97

1.20

.69

42.99

48.95

44.60

46.83

Heksan 1.22

3

33.16

6.03

3.48

18.17

48.15

28.47

39.97

Heksan 0.61

3

30.53

1.12

.65

27.74

33.32

29.50

31.73

EGCG 1,22

3

54.46

1.63

.94

50.42

58.50

53.10

56.26

33

-56.41

205.56 35.78

-129.30

16.48

-574.44

89.19

Total

Test of Homogeneity of Variances
Persentase Pemerangkapan H2O2
Levene Statistic
5.101

df1

df2
10

Sig.
22

34

.001

35

ANOVA

Persentase Pemerangkapan H2O2
Sum of Squares
Between Groups

Mean Square

1351940.983

10

135194.098

275.326

22

12.515

1352216.310

32

Within Groups
Total

df

F

Sig.

10802.706

.000

Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
95% Confidence Interval
(I) Kelompok

(J) Kelompok

Mean

Std.

Konsentrasi

Konsentrasi

Difference (I-J)

Error

Heksan 312.50

Heksan 156.25

-219.72333* 2.88846

.000

-230.0491

-209.3976

Heksan 78.13

-443.16667* 2.88846

.000

-453.4924

-432.8409

Heksan 39.06

-614.86667* 2.88846

.000

-625.1924

-604.5409

Heksan 19.53

-655.28667* 2.88846

.000

-665.6124

-644.9609

Heksan 9.77

-642.71000* 2.88846

.000

-653.0357

-632.3843

Heksan 4.88

-619.84333* 2.88846

.000

-630.1691

-609.5176

Heksan 2.44

-614.58000* 2.88846

.000

-624.9057

-604.2543

Heksan 1.22

-601.77333* 2.88846

.000

-612.0991

-591.4476

Heksan 0.61

-599.14000* 2.88846

.000

-609.4657

-588.8143

EGCG 1,22

-623.07000* 2.88846

.000

-633.3957

-612.7443

Heksan 312.50

219.72333* 2.88846

.000

209.3976

230.0491

Heksan 78.13

-223.44333* 2.88846

.000

-233.7691

-213.1176

Heksan 39.06

-395.14333* 2.88846

.000

-405.4691

-384.8176

Heksan 19.53

-435.56333* 2.88846

.000

-445.8891

-425.2376

Heksan 9.77

-422.98667* 2.88846

.000

-433.3124

-412.6609

Heksan 4.88

-400.12000* 2.88846

.000

-410.4457

-389.7943

Heksan 2.44

-394.85667* 2.88846

.000

-405.1824

-384.5309

Heksan 1.22

-382.05000* 2.88846

.000

-392.3757

-371.7243

Heksan 0.61

-379.41667* 2.88846

.000

-389.7424

-369.0909

Heksan 156.25

Lower
Sig.

Bound

Upper Bound

36

-403.34667* 2.88846

.000

-413.6724

-393.0209

Heksan 312.50

443.16667* 2.88846

.000

432.8409

453.4924

Heksan 156.25

223.44333* 2.88846

.000

213.1176

233.7691

Heksan 39.06

-171.70000* 2.88846

.000

-182.0257

-161.3743

Heksan 19.53

-212.12000* 2.88846

.000

-222.4457

-201.7943

Heksan 9.77

-199.54333* 2.88846

.000

-209.8691

-189.2176

Heksan 4.88

-176.67667* 2.88846

.000

-187.0024

-166.3509

Heksan 2.44

-171.41333* 2.88846

.000

-181.7391

-161.0876

Heksan 1.22

-158.60667* 2.88846

.000

-168.9324

-148.2809

Heksan 0.61

-155.97333* 2.88846

.000

-166.2991

-145.6476

EGCG 1,22

-179.90333* 2.88846

.000

-190.2291

-169.5776

Heksan 312.50

614.86667* 2.88846

.000

604.5409

625.1924

Heksan 156.25

395.14333* 2.88846

.000

384.8176

405.4691

Heksan 78.13

171.70000* 2.88846

.000

161.3743

182.0257

Heksan 19.53

-40.42000* 2.88846

.000

-50.7457

-30.0943

Heksan 9.77

-27.84333* 2.88846

.000

-38.1691

-17.5176

Heksan 4.88

-4.97667 2.88846

.809

-15.3024

5.3491

.28667 2.88846 1.000

-10.0391

10.6124

EGCG 1,22
Heksan 78.13

Heksan 39.06

Heksan 2.44

Heksan 19.53

Heksan 9.77

Heksan 1.22

13.09333* 2.88846

.006

2.7676

23.4191

Heksan 0.61

15.72667* 2.88846

.001

5.4009

26.0524

EGCG 1,22

-8.20333 2.88846

.206

-18.5291

2.1224

Heksan 312.50

655.28667* 2.88846

.000

644.9609

665.6124

Heksan 156.25

435.56333* 2.88846

.000

425.2376

445.8891

Heksan 78.13

212.12000* 2.88846

.000

201.7943

222.4457

Heksan 39.06

40.42000* 2.88846

.000

30.0943

50.7457

Heksan 9.77

12.57667* 2.88846

.009

2.2509

22.9024

Heksan 4.88

35.44333* 2.88846

.000

25.1176

45.7691

Heksan 2.44

40.70667* 2.88846

.000

30.3809

51.0324

Heksan 1.22

53.51333* 2.88846

.000

43.1876

63.8391

Heksan 0.61

56.14667* 2.88846

.000

45.8209

66.4724

EGCG 1,22

32.21667* 2.88846

.000

21.8909

42.5424

642.71000* 2.88846

.000

632.3843

653.0357

Heksan 312.50

37

Heksan 4.88

Heksan 2.44

Heksan 156.25

422.98667* 2.88846

.000

412.6609

433.3124

Heksan 78.13

199.54333* 2.88846

.000

189.2176

209.8691

Heksan 39.06

27.84333* 2.88846

.000

17.5176

38.1691

Heksan 19.53

-12.57667* 2.88846

.009

-22.9024

-2.2509

Heksan 4.88

22.86667* 2.88846

.000

12.5409

33.1924

Heksan 2.44

28.13000* 2.88846

.000

17.8043

38.4557

Heksan 1.22

40.93667* 2.88846

.000

30.6109

51.2624

Heksan 0.61

43.57000* 2.88846

.000

33.2443

53.8957

EGCG 1,22

19.64000* 2.88846

.000

9.3143

29.9657

Heksan 312.50

619.84333* 2.88846

.000

609.5176

630.1691

Heksan 156.25

400.12000* 2.88846

.000

389.7943

410.4457

Heksan 78.13

176.67667* 2.88846

.000

166.3509

187.0024

Heksan 39.06

4.97667 2.88846

.809

-5.3491

15.3024

Heksan 19.53

-35.44333* 2.88846

.000

-45.7691

-25.1176

Heksan 9.77

-22.86667* 2.88846

.000

-33.1924

-12.5409

Heksan 2.44

5.26333 2.88846

.756

-5.0624

15.5891

Heksan 1.22

18.07000* 2.88846

.000

7.7443

28.3957

Heksan 0.61

20.70333* 2.88846

.000

10.3776

31.0291

EGCG 1,22

-3.22667 2.88846

.985

-13.5524

7.0991

Heksan 312.50

614.58000* 2.88846

.000

604.2543

624.9057

Heksan 156.25

394.85667* 2.88846

.000

384.5309

405.1824

Heksan 78.13

171.41333* 2.88846

.000

161.0876

181.7391

-.28667 2.88846 1.000

-10.6124

10.0391

Heksan 39.06

Heksan 1.22

Heksan 19.53

-40.70667* 2.88846

.000

-51.0324

-30.3809

Heksan 9.77

-28.13000* 2.88846

.000

-38.4557

-17.8043

Heksan 4.88

-5.26333 2.88846

.756

-15.5891

5.0624

Heksan 1.22

12.80667* 2.88846

.008

2.4809

23.1324

Heksan 0.61

15.44000* 2.88846

.001

5.1143

25.7657

EGCG 1,22

-8.49000 2.88846

.173

-18.8157

1.8357

Heksan 312.50

601.77333* 2.88846

.000

591.4476

612.0991

Heksan 156.25

382.05000* 2.88846

.000

371.7243

392.3757

Heksan 78.13

158.60667* 2.88846

.000

148.2809

168.9324

38

Heksan 0.61

EGCG 1,22

Heksan 39.06

-13.09333* 2.88846

.006

-23.4191

-2.7676

Heksan 19.53

-53.51333* 2.88846

.000

-63.8391

-43.1876

Heksan 9.77

-40.93667* 2.88846

.000

-51.2624

-30.6109

Heksan 4.88

-18.07000* 2.88846

.000

-28.3957

-7.7443

Heksan 2.44

-12.80667* 2.88846

.008

-23.1324

-2.4809

Heksan 0.61

2.63333 2.88846

.997

-7.6924

12.9591

EGCG 1,22

-21.29667* 2.88846

.000

-31.6224

-10.9709

Heksan 312.50

599.14000* 2.88846

.000

588.8143

609.4657

Heksan 156.25

379.41667* 2.88846

.000

369.0909

389.7424

Heksan 78.13

155.97333* 2.88846

.000

145.6476

166.2991

Heksan 39.06

-15.72667* 2.88846

.001

-26.0524

-5.4009

Heksan 19.53

-56.14667* 2.88846

.000

-66.4724

-45.8209

Heksan 9.77

-43.57000* 2.88846

.000

-53.8957

-33.2443

Heksan 4.88

-20.70333* 2.88846

.000

-31.0291

-10.3776

Heksan 2.44

-15.44000* 2.88846

.001

-25.7657

-5.1143

Heksan 1.22

-2.63333 2.88846

.997

-12.9591

7.6924

EGCG 1,22

-23.93000* 2.88846

.000

-34.2557

-13.6043

Heksan 312.50

623.07000* 2.88846

.000

612.7443

633.3957

Heksan 156.25

403.34667* 2.88846

.000

393.0209

413.6724

Heksan 78.13

179.90333* 2.88846

.000

169.5776

190.2291

Heksan 39.06

8.20333 2.88846

.206

-2.1224

18.5291

Heksan 19.53

-32.21667* 2.88846

.000

-42.5424

-21.8909

Heksan 9.77

-19.64000* 2.88846

.000

-29.9657

-9.3143

Heksan 4.88

3.22667 2.88846

.985

-7.0991

13.5524

Heksan 2.44

8.49000 2.88846

.173

-1.8357

18.8157

Heksan 1.22

21.29667* 2.88846

.000

10.9709

31.6224

Heksan 0.61

23.93000* 2.88846

.000

13.6043

34.2557

*. The mean difference is significant at the 0.05 level .

39

Homogeneous Subsets
Persentase Pemerangkapan H2O2
Tukey HSDa
Subset for alpha = 0.05

Kelompok
Konsentrasi

N

1

2

3

4

5

Heksan 312.50

3 -568.61

Heksan 156.25

3

Heksan 78.13

3

Heksan 0.61

3

30.53

Heksan 1.22

3

33.16

Heksan 2.44

3

45.97

Heksan 39.06

3

46.26

Heksan 4.88

3

51.23

EGCG 1,22

3

54.46

Heksan 9.77

3

Heksan 19.53

3

Sig.

6

7

-348.89
-125.44

74.10
86.68
1.000

1.000

1.000

.997

.173

1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.

1.000

LAMPIRAN 2. UJI TOTAL FENOL
Lampiran 2.1 Konsentrasi dan Absorbansi Standar EGCG pada Panjang
Gelombang 760 nm pada Uji Total Fenol
Konsentrasi
(ppm)
100
75
50
25
12,5
6,25

Absorbansi
1
0,466
0,515
0,245
0,134
0,079
0,073

2
0,532
0,482
0,295
0,172
0,085
0,057

Konsentrasi (x)
100
75
50
25
12,5
6,25
Dari data di atas diperoleh persamaan :
y = 0,0048 x + 0,0357

3
0,442
0,405
0,278
0,157
0,092
0,058

Rata-rata
0,473
0,468
0,273
0,154
0,085
0,063

Rata-rata Absorbansi (y)
0,473
0,468
0,273
0,154
0,085
0,063

SUMMARY OUTPUT
Regression Statistics
Multiple R
0.965928
R Square
0.933018
Adjusted R
Square
0.928831
Standard Error 0.046687
Observations
18
ANOVA
df
Regression
Residual
Total

1
16
17

Significance
SS
MS
F
F
0.485776 0.485776 222.8695
8.21E-11
0.034874 0.00218
0.52065

40

41

Coefficients
Intercept
X

0.035745
0.004842

Standard
Error
0.018224
0.000324

t Stat
1.961394
14.92881

Y EGCG=0.035745 + 0.004842 X (μg)
R multiple 0.965
R square
0.933
Y=0.004X+0.035
R square

0.958

P-value

Lower
95%

Upper
95%

0.067475
8.21E-11

-0.00289
0.004154

0.074378
0.005529

Lower
95.0%
-0.00289
0.004154

Lampiran 2.2 Absorbasi Fraksi Heksan Daun Sirih pada Uji Total Fenol
Sampel
Fraksi heksan

1
0,506

Absorbansi (nm)
2
3
0,605
0.562

42

Rata-rata
0.558

Lampiran 2.3 Hasil Uji Total Fenol pada Fraksi Heksan Daun Sirih
Absorbasi Fraksi Heksan Daun Sirih pada Uji Total Fenol
Sampel
Fraksi heksan

1
0,506

Absorbansi (nm)
2
3
0,605
0.562

Rata-rata
0.558

Total fenol fraksi heksan daun sirih diperoleh berdasarkan nilai absorbansi
standar EGCG dicari persamaan regresi y = a+bx, dari nilai absorbansi dan
konsentrasi (lampiran 2.1). y adalah absorbansi sedangkan x adalah konsentrasi
total fenol. Dari standar EGCG diperoleh persamaan :
y = 0,004842 x + 0,035745
–

x1 =

x1 = 97,120
–

x2 =

x2 = 117,566
–

x3 =

x3 = 108,685
x rata-rata =
x rata-rata = 107,791 dalam 500 g/mL sampel
x rata-rata = 107,791 x 2
= 215,58 dalam 1000 g/mL sampel
Hasil Uji Total Fenol pada Fraksi Heksan Daun Sirih dalam 500 g/mL sampel
Sampel
Fraksi heksan

1
97.120

Konsentrasi Total Fenol (g/mg)
2
3
Rata-rata
117.566
108.685
107.791

43

44

Hasil Uji Total Fenol pada Fraksi Heksan Daun Sirih dalam 1000 g/mL sampel
Sampel
Fraksi heksan

1
194,24

Konsentrasi Total Fenol (g/mg)
2
3
Rata-rata
235,13
217,37
215,58

LAMPIRAN 3. DOKUMENTASI KEGIATAN
Lampiran 3.1 Diagram Alir Ekstraksi Dengan Metode Maserasi

1

2

3

3

6

6

1.
2.
3.
4.
5.
6.

5

Daun sirih
Serbuk daun sirih
Serbuk direndam etanol dalam maserator
Etanol ditampung
Filtrat etanol dievaporasi
Ekstrak daun sirih

45

4

Lampiran 3.2 Diagram Alir Fraksionasi

1.
2.
3.
4.
5.

Ekstrak daun sirih
Fraksionasi menggunakan pelarut heksana
Filtrat masing-masing fraksi ditampung
Filtrat masing-masing fraksi dievaporasi
Fraksi heksana

46

Lampiran 3.3 Diagram Alir Uji Aktivitas Antoksidan Pemerangkap H2O2

1

2

3

5

1.
2.
3.

4.
5.

4

Fraksi heksan daun sirih
Fraksi heksan daun sirih dan ditimbang untuk membuat berbagai level
konsentrasi
Ekstrak etanol dan berbagai fraksi daun sirih dilarutkan dalam metanol
dengan konsentrasi 312,5, 156,25, 78,125, 39, 19,53, 9,77, 4,88, 2,44, 1,22,
0,61 µg/mL
Ke dalam eppendorf dimasukkan 0,6 µL H2O2 (2 mM dalam PBS pH 7,4)
dan 1 µL sampel. Blanko PBS tanpa H2O2, kontrol negatif H2O2 tanpa PBS
Aborbansi sampel dibaca menggunakan spektrofotometer dengan panjang
gelombang 230 nm

47

48

Lampiran 3.4 diagram alir uji total fenol

1

3

2

6
1.
2.
3.

4.
5.
6.
7.
8.

5

4

Fraksi heksan daun sirih
Fraksi heksan ditimbang untuk membuat level konsentrasi
EGCG dilarutkan dalam metanol dengan konsentrasi 100, 75, 50, 25; 12,5;
6,25; 3,125; 1,563; 0,781; 0,391 µg/mL sebagai standar. Sampel
ekstrak,fraksi-fraksi ditimbang 500 dan 250 µg/mL
Dalam microplate isi 25 µL sampel (ekstrak, fraksi, standar), 125 µL folin,
100 µL Na2CO3
Inkubasi pada suhu 45– 50 0 C selama 10 menit
Baca absorbansi pada 760 nm
Buat kurva persamaan standard EGCG
Hitung kadar fenol sampel fraksi heksan daun sirih berdasarkan
standard

48

RIWAYAT HIDUP

Nama

: I Kadek Ariarta Mahartama

Nomor Pokok Mahasiswa

: 080140

Tempat dan Tanggal Lahir

: Pidpid 5 September 1989

Alamat

: BTN Sueta Gang Mawar 3 no.105-106 Jl.
Sandubaya, Mataram

Riwayat Pendidikan

:SDN 1 PIDPID
SLTPN 1 ABANG
SMAK SANTO YOSEPH DENPASAR
2008 – sekarang mahasiswa Fakultas
Kedokteran Universitas Kristen Maranatha
Bandung

49

BAB I
PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang

Kondisi lingkungan yang semakin memburuk seperti berlubangnya lapisan
ozon, asap kendaraan bermotor, asap rokok, asap dari industri menyebabkan
makin mudahnya terbentuk radikal bebas yang dapat menyebabkan berbagai
macam masalah kesehatan seperti kanker, aterosklerosis, jantung koroner,
diabetes militus, dan penyakit degeneratif lainnya (Kumalaningsih, 2006).
Dalam tubuh manusia terdapat senyawa antioksidan yang merupakan
pertahanan terhadap radikal bebas. Sistem antioksidan dalam tubuh manusia
memiliki keterbatasan sehingga tidak selamanya berfungsi dengan baik, sementara
pembentukan radikal bebas berlangsung terus-menerus. Untuk itulah diperlukan
antioksidan alami yang terkandung dalam tumbuh-tumbuhan. Antioksidan yang
terkandung dalam tumbuh-tumbuahan antara lain vitamin C, senyawa flavonoid,
senyawa fenolik, dan karotenoid. Menurut Buhler, antioksidan adalah senyawa
yang dapat melindung sel dari kerusakan yang disebabkan oleh Reactive Oxygen
Species (ROS) seperti singlet oksigen maupun superoksida. Ketidakseimbangan
antara antioksidan dan ROS menyebabkan terjadinya stres oksidatif, sehingga
memicu kerusakan sel (Hery Winarsi, 2007).
Negara Indonesia kaya akan bahan alami sumber antioksidan bahan-bahan
tersebut tersedia melimpah sehingga mudah didapat dan murah, salah satunya
daun sirih (Pipper betle L.). Daun sirih banyak terdapat di Indonesia dan
tanaman ini tidak memerlukan penanganan khusus dalam pembudidayaannya.
Daun sirih termasuk tanaman obat yang sering digunakan oleh masyarakat, ini
dikarenakan khasiatnya untuk menghentikan pendarahan, diare, sakit gigi, gatalgatal, bau mulut, bronkhitis, batuk, keputihan dan luka bakar (Abdul Waid, 2011).
Khasiat obat ini dikarenakan senyawa aktif yang dikandungnya terutama adalah
minyak atsiri (Rini Damayati dan Moeljatno, 2003). Komponen utama minyak

1

2

atsiri daun sirih adalah fenol dan senyawa turunanya seperti kavikol,
hidroksikavikol, kavibetol, karvakrol, eugenol, dan allilpirokatekol. Daun sirih
juga mengandung karoten, tiamin, riboflavin, asam nikotinat, vitamin C, tannin,
gula, pati dan asam amino (Rini Damayati dan Moeljatno, 2003).
Berdasarkan manfaat dan kandungan daun sirih diatas perlu penelitian untuk
mengetahui aktivitas antiok dari fraksi heksan daun sirih sehingga bisa
dimanfaatkan sebagai sumber antioksidan alami.
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai
kemampuan daun sirih sebagai bahan alami untuk menangkal radikal bebas
melalui uji pemerangkapan H2O2 dan uji total fenol.

1.2

Identifikasi Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas maka penelitian ini diajukan beberapa
permasalahan sebagai penuntun pelaksanaan penelitian yaitu:


Apakah fraksi heksan daun sirih memiliki kemampuan pemerangkapan
hidrogen peroksida (H2O2).



Apakah fraksi heksan daun sirih memiliki kandungan fenol pada uji total
fenol.

1.3

Maksud dan Tujuan

Maksud dari penelitian ini adalah membuktikan secara ilmiah mengenai
potensi antioksidatif tanaman herbal yang memiliki kandungan antioksidan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas fraksi heksan memiliki
kemampuan merangkap hidrogen peroksida pada uji pemerangkapan H2O2 dan
mengetahui kadungan fenol fraksi heksan pada uji total fenol.

3

1.4

Manfaat Penelitian

Manfaat akademis penelitian ini adalah untuk mengembangkan ilmu
pengetahuan bidang farmakologi serta pemanfaatan bahan alam khususnya daun
sirih.
Manfaat praktis penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi antioksidatif
fraksi heksan daun sirih secara in vitro.

1.5

Kerangka Pemikiran

Antioksidan adalah molekul yang dapat mendonasi elektron sehingga radikal
bebas tersebut menjadi tidak reaktif (Gordon et al., 2001). Ketidakseimbangan
antara antioksidan dan ROS menyebabkan terjadinya stres oksidatif, sehingga
memicu kerusakan sel (Buhler dan Miranda, 2000). Salah satu manfaat dari daun
sirih adalah sebagai antioksidan yang dapat menetralisir radikal bebas, aktivitas
antioksidan daun sirih disebabkan senyawa aktif yang dikandungnya terutama
adalah minyak atsiri. Berdasarkan penelitian menunjukkan bahwa 82,8%
komponen penyusun minyak atsiri daun sirih terdiri dari senyawa- senyawa fenol
dan hanya 18,2% merupakan senyawa non-fenol. Semakin banyak fenol maka
aktivitas antioksidan semakin meningkat (Nuri Andarwulan, 2000). Polifenol
berperan sebagai antioksidan yang menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi
kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas, dan menghambat terjadinya
reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas. Senyawa polifenol berfungsi
sebagai antioksidan dengan menghambat propagasi, yaitu memutus rantai
autooksidasi atau disebut juga chain breaking antioxidants (AH) (Manach, 2004).

4

1.6

Hipotesis

Hipotesis penelitian:


Fraksi heksan daun sirih memiliki kemampuan memerangkap hidrogen
peroksida (H2O2).



1.7

Fraksi heksan daun sirih memiliki kandungan fenol pada uji total fenol.

Metodologi

Penelitian ini menggunakan desain prospektif eksperimental laboratorium
dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) secara in vitro.
Pada uji pemerangkapan H2O2 menggunakan fraksi heksan daun sirih
digunakan 10 level konsentrasi working solution. Konsentrasi yang digunakan
adalah 500 g/mL; 250g/mL; 125 g/mL ; 62,5 g/mL; 31,25 g/mL; 15,625
g/mL; 7,8 g/mL; 3,9 g/mL; 1,9 g/mL dan 0,9 g/mL. Untuk setiap uji
pemerangkapan H2O2, jumlah reagen dan sampel yang diambil berbeda sehingga
didapatkan konsentrasi final yaitu 312,5 g/mL; 156,25 g/mL; 78,13 g/mL; 39
g/mL; 19,53 g/mL; 9,77 g/mL; 4,88 g/mL; 2,44 g/mL; 1,22 g/mL; dan
0,61 g/mL dibandingkan dengan ECGG konsentrasi 1,22 g/mL sebagai standar.
Data dianalisis menggunakan One Way Analysis of Variance (ANOVA)
dilanjutkan Post Hoc Test metode Tukey dengan tingkat kepercayaan 95 %.
Pada uji total fenol penelitian ditampilkan secara deskriptif menggunakan
fraksi heksan daun sirih. Berdasarkan nilai absorbansi standar EGCG dicari
persamaan regresi y = a+bx.

5

1.8

Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilaksanakan di Pusat Penelitian Ilmu Kedokteran, Fakultas
Kedokteran Universitas Kristen Maranatha Bandung. Waktu penelitian adalah
bulan Desember 2010 sampai November 2011.

BAB V
SIMPULAN DAN SARAN

5.1

Simpulan

5.1.1

Simpulan Utama

Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa :


Fraksi heksan daun sirih memiliki kemampuan pemerangkapan hidrogen
peroksida.



5.1.2

Fraksi heksan daun sirih memiliki kandungan fenol pada uji total fenol.

Simpulan Tambahan

Dari hasi penelitian dapat disimpulkan bahwa :


Fraksi heksan memiliki aktivitas antioksidan pemerangkapan hidrogen
peroksida tertinggi sebesar 86,68 g/mL pada konsentrasi 19,53 g/mL
lebih tinggi dari EGCG konsentrasi 1,22 µg/mg sebagai standar, setara
EGCG pada konsentrasi 39 µg/mg, 4,88 µg/mg dan 2,44 µg/mg sebesar
46, 2%, 51,23% dan 45,9%.



Fraksi heksan daun sirih memiliki aktivitas antioksidan berdasarkan uji
total fenol konsentrasi total fenol ekuivalen EGCG sebesar 215,58 µg/mg.

5.2

Saran


Perlu penelitian lebih lanjut

pengukuran aktivitas antioksidan fraksi

heksan daun sirih menggunakan parameter aktivitas total antioksidan, total
flavonoid, aktivitas pemerangkapan anion superoksidase, pemerangkapan
1,1 –diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), peroksidasi lipid dan nilai
Inhibitory Concentration (IC50) aktivitas antioksidan..


Perlu penelitian lebih lanjut aktivitas antioksidan fraksi daun sirih
dilakukan pada hewan uji.
28

29



Perlu penelitian aktivitas pemerangkapan radikal H2O2 lebih lanjut pada
fraksi heksan daun sirih menggunakan konsentrasi awal yang lebih rendah
dengan kisaran konsentrasi lebih sempit.

DAFTAR PUSTAKA
Abdul Waid. 2011. Dasyatnya Khashiat daun obat di pekarangan. Jakarta: Laksana
Anjang

Yudistira dan Tanto Budi S., 2004, Antioksidan Dalam Buah.
Diunduh
hhtp://www.radarbanjar.com/berita/index.asp?Berita=Kesehata&id.
tanggal 5 Agustus 2010

Arulselvan P., Subramanian S.P. 2007. Beneficial effects of Murraya koenigii leaves on
antioxidant defense system and ultra structural changes of pancreatic beta-cells in
experimental diabetes in rats. Chem Biol Interact. 165 (5) : 155-64
BADAN POM RI. 2010. Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia. Jakarta: BADAN POM RI
Buhler

D.,
Miranda
C.2000.
Antioxidant
Activities
of
flavanoids.
http://lpi.oregonstate.edu/f-w00/flavonoid.html. Diunduh tanggal 14 Februari
2011

Cabrera C., Artacho R., Gimenez R.2006. Beneficial Effects of Green Tea – A Review.
Journal of The American college of Nutrition. 25(2): 77-99
Dinna Sofia. 2005. Antioksidan dan Radikal Bebas. http://www.chemi-is-try.org.
Diunduh tanggal 11 Januari 2011
Diplock, A.T. 1991 “Antioxidant Nutrients and Disease Prevention: an Overview. The
American Journal of Clinical Nutrition. 53: 314-321
Estenbauer, H., M.D. Rothemender dan G. Waeg.1991. Role of Vitamine E in Preventing
the Oxidant of Low Density Lipoprotein. The American Journal of Clinical
Nutrition. 53: 314-321
Ferguson L.F. 2001. Role of plant polyphenol in genomic stability. Mutation Reseach
475; 89-111.
Gordon I. 1994. Functional Food, Food Design, Pharmafood. New York: Champman
dan Hall.
Halliwel B. dan J.M.C. Guteridge. 1991. Free Radical in Biology and Medicine. Oxford:
Claredon Press.
Hery Winarsi. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta : Penerbit
Kanasius. Hal 11-273.
Kemas Ali Hanafiah. 2005. Prinsip Percobaan dan Perancangannya. Bidang Pertanian,
Peternakan, Perikanan, Industri dan Hayati. Edisi 1. Jakarta: Penebar swadaya.
Hal 10-12.

30

31

Kimbrough D.R., Magoun M.A., Langfur M. 1997. A Laboratory Experiment
Investigating Different Aspect of Catalase Activity in an Inguiry – Based
Approach. Journal of Chemical Education. 74(2): 210
Kumalaningsih. 2006. Antioksidan Terong Belanda (Tamarillo). Surabaya: Trubus
Agrisarana. Hal 16
I M. Oka Adi P., Wiwik Susanah R., dan Raditya Yoga. 2009. Isolasi dan Uji Anti radikal
Bebas Minyak Atsiri pada Daun Sirih (Piper betle L.) Secara Spektroskopi Ultra
Violet-tampak. Dalam: Journal Kimia FMIPA Universitas Udayana.1(2): 2

Langseth L. 1995. Oxidant, Antioxidant, and Disease Prevention, Belgium: International
Life Science Institute Press.
Manach, S. 2004. Polyphenols : food sources and bioavability. American Journal Society
for Clinical Nutrion. Vol 79 : 727- 47
Murray R.K., Granner D.K., Mayes P.A, Rodwell V.W. 2003. Enzim Hidroperoksidase
Menggunakan Hidrogen Peroksida atau Peroksida Organi Sebagai Substrat.
Dalam Anna P. Bani, Tiara Sikumbang: Biokimia Harper. Terjemahan Andry
Hartono. Edisi 25. Jakarta: EGC. Hal 122-123
Rini Damayanti M., Mulyono. 2003. Khasiat & Manfaat Daun Sirih Obat Mujarab dari
Masa ke Masa. Jakarta : AgroMedia Pustaka. Hal 1-15
Suradikusuma E. 1989. Kimia Tumbuhan. Bogor : DEPDIKBUD
Syah., Andi Nur Alam. 2006. Taklukkan Penyakit dengan Teh Hijau. Depok : PT.
Agromedia Pustaka
Yoshie Y., Wang W., Hsieh Y.P, Suzuki T. 2002. Compositional Difference of Phenolic
Compounds between two seaweed. Halimeda spp. J. Tokyo Univ. Fish. 88: 21-24

32